CD細(xì)胞及分離方法學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1CD細(xì)胞及分離方法細(xì)胞及分離方法第1頁/共22頁第2頁/共22頁第3頁/共22頁第4頁/共22頁第5頁/共22頁分離方法分離方法 細(xì)胞得率細(xì)胞得率 難易程度難易程度 細(xì)胞純度細(xì)胞純度 分離速度分離速度 條件條件熒光激活細(xì)熒光激活細(xì)胞計(jì)數(shù)胞計(jì)數(shù) 少少難難高高慢慢高高免疫磁珠吸免疫磁珠吸附分離附分離 大大易易高高快快經(jīng)濟(jì)經(jīng)濟(jì)細(xì)胞物理特細(xì)胞物理特性分離性分離低低易易低低快快經(jīng)濟(jì)經(jīng)濟(jì)第6頁/共22頁第7頁/共22頁第8頁/共22頁n5.將分離柱移出磁場(chǎng)，加將分離柱移出磁場(chǎng)，加1ml 緩沖緩沖液加壓洗脫，收集液加壓洗脫，收集CD34+細(xì)胞。細(xì)胞。n6.用免疫細(xì)胞化學(xué)和用免疫細(xì)胞化學(xué)和FACS分析

2、分析CD34+細(xì)胞純度細(xì)胞純度第9頁/共22頁第10頁/共22頁n王斌，康自珍，遲占有等。體外培養(yǎng)臍血單個(gè)核細(xì)胞與CD34+富集細(xì)胞。n生物工程學(xué)報(bào)，2002,5(18),343-347.第11頁/共22頁第12頁/共22頁臍血臍血CD34+細(xì)胞的分離結(jié)果細(xì)胞的分離結(jié)果第13頁/共22頁 MNC擴(kuò)增到第擴(kuò)增到第28天，細(xì)胞總數(shù)開始呈下降趨勢(shì)，而另一組則持續(xù)擴(kuò)增天，細(xì)胞總數(shù)開始呈下降趨勢(shì)，而另一組則持續(xù)擴(kuò)增8周。在前周。在前4周中，周中，MNC的擴(kuò)增倍數(shù)遠(yuǎn)低于的擴(kuò)增倍數(shù)遠(yuǎn)低于CD34+富集細(xì)胞富集細(xì)胞第14頁/共22頁 細(xì)胞于半固體培養(yǎng)體系中進(jìn)行集落分析，細(xì)胞于半固體培養(yǎng)體系中進(jìn)行集落分析，MN

3、C的的CFU-GM和和BFU-E集落密度都有上升，下降的過程，而集落密度都有上升，下降的過程，而CD34+富集細(xì)胞集落密度始終呈下降趨勢(shì)，相似的是兩者富集細(xì)胞集落密度始終呈下降趨勢(shì)，相似的是兩者BFU-E到到第第3周就很難檢測(cè)到了。周就很難檢測(cè)到了。集落密度集落密度=集落集落/細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù)第15頁/共22頁總集落數(shù)總集落數(shù)=集落密度集落密度*細(xì)胞總數(shù)細(xì)胞總數(shù) MNC的的CFU-GM和和BFU-E的擴(kuò)增倍數(shù)在的擴(kuò)增倍數(shù)在14天達(dá)到最大值天達(dá)到最大值，然后開始下降。，然后開始下降。CD34+富集細(xì)胞的富集細(xì)胞的CFU-GM第第35天達(dá)到最大天達(dá)到最大值，值， CFU-E在第在第14天達(dá)到最大值。后者的天達(dá)到最大值。后者的CFU-GM最大擴(kuò)增最大擴(kuò)增倍數(shù)遠(yuǎn)大于前者。倍數(shù)遠(yuǎn)大于前者。第16頁/共22頁第17頁/共22頁 顯示，顯示，MNC的的CD34+細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)在第細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)在第14天達(dá)到了天達(dá)到了最大值，隨后開始下降，最大值，隨后開始下降，CD34+富集細(xì)胞則如終呈上升富集細(xì)胞則如終呈上升趨勢(shì)，在第趨勢(shì)，在第35天達(dá)到了最大值。天達(dá)到了最大值。 經(jīng)過體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，由經(jīng)過體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，由CD34+富集細(xì)胞培養(yǎng)所得的富集細(xì)胞培養(yǎng)所得的CD34+細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞總數(shù)和CFU-GM（粒細(xì)胞（粒細(xì)胞-單核細(xì)胞集落生成單核細(xì)