微生物日常檢測項目

1、微生物日常檢測項目微生物日常檢測項目食品檢測1水質檢測2公共衛(wèi)生3CONTENT Part 01 Life isnt about waiting for the storm to pass. its about learning to dance in the rain. 日常檢測項目菌落總數(shù)GB4789.2-2016大腸菌群GB4789.3-2016 GB/T4789.3-2003 14934-2016（餐具）沙門氏菌GB4789.4-2016金黃色葡萄球菌GB4789.10-2016霉菌+酵母GB4789.15-2016單細胞增生李斯特GB4789.30-2016溶血性鏈球菌GB4789.

2、11-2014志賀氏菌GB4789.5-2012商業(yè)無菌GB4789.26-2013菌落總數(shù)aerobicplatecountYOUR TITLE 定義：食品檢樣經過處理，在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等)培養(yǎng)后，所得每g(mL)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。 菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細菌的種類，所以有時被稱為雜菌數(shù)，需氧菌數(shù)等。 菌落總數(shù)測定是用來判定食品被細菌污染的程度及衛(wèi)生質量，它反映食品在生產過程中是否符合衛(wèi)生要求，以便對被檢樣品做出適當?shù)男l(wèi)生學評價。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標志著食品衛(wèi)生質量的優(yōu)劣。菌落總數(shù)aerobicplatecountYOUR TITLE 樣品的稀釋：

3、固體和半固體樣品:稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內， 8000r/min10000r/min均質1min2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式 均質器拍打1min2min，制成110的樣品勻液。液體樣品:以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶 (瓶內預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成110的樣品勻液。用1mL無菌吸管或微量移液器吸取110樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成110

4、0的樣品勻液。 制備10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 mL 無菌吸管或吸頭。 接種：根據對樣品污染狀況的估計，選擇2個3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在 進行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取 1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。及時將15mL20mL冷卻至46 的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于461恒溫水浴箱 中保溫)傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。菌落總數(shù)aerobicplatecountYOUR TITLE 培養(yǎng)：待瓊脂凝固后，將平板翻轉，361培養(yǎng)48h2h。水產品301培養(yǎng)72h3h。

5、 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層 瓊脂培養(yǎng)基(約4mL)，凝固后翻轉平板，按以上條件進行培養(yǎng)。 計數(shù)：可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應的菌落數(shù)量。菌落計數(shù)以 6菌落形成單位(colony-formingunits，CFU)表示。 選取菌落數(shù)在30CFU300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應采用兩個平板的 平均數(shù)。其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋 度的菌落數(shù);若片

6、狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。 當平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。菌落總數(shù)aerobicplatecountYOUR TITLE 計算：若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平 均值乘以相應稀釋倍數(shù)，作為每g(mL)樣品中菌落總數(shù)結果。 若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內時，按式(1)計算若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數(shù)，其他平板可 記錄為多不可計，結果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。若所有稀

7、釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU300CFU之間，其中一部分小于30CFU 或大于 300CFU 時，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。菌落總數(shù)aerobicplatecountYOUR TITLE 示例：稀釋度稀釋度1:100（第一稀釋度）（第一稀釋度）1:1000（第二稀釋度）（第二稀釋度）結果結果菌落數(shù)（CFU）232，24423，252.4104232，24433，352.510423，2

8、43，22.41031325，1337325，3313.3105325，33115，143.3104l 一個稀釋度在30300之間：N=（232+244）/2100=23800 四舍五入：2.4104l 兩個稀釋度在30300之間：l 兩個稀釋度均30：N=（23+24）/2100=2350 四舍五入：2.4103l 兩個稀釋度均300：N=（325+331）/21000=328000 四舍五入：3.3105l 兩個稀釋度一個300，一個30：N=（325+331）/2100=32800 四舍五入：3.3104大腸菌群ColiformsYOUR TITLE 在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產酸產氣

9、的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。大腸菌群并非細菌學分類命名，而是衛(wèi)生細菌領域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，這些細菌在生化及血清學方面并非完全一致。一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產氣克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。大腸菌群是作為糞便污染指標菌提出來的，主要是以該菌群的檢出情況來表示食品中有否糞便污染。檢測方法：GB4789.3-2016 第一法MPN法 第二法平板計數(shù)法 GB/T4789.3-2003 MPN法大腸菌群ColiformsMPNMPN法：（法：（20162016）稀釋稀釋 同菌落總數(shù)初發(fā)酵試驗初發(fā)酵試驗 每個

10、樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液(液體樣品可以選擇原液)，每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯，每管接種1mL(如接種量超過1mL，則用雙料 LST肉湯)，361培養(yǎng)24h2h，觀察倒管內是否有氣泡產生，24h2h產氣者進行復發(fā)酵試驗(證實試驗)，如未 產氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h2h，產氣者進行復發(fā)酵試驗。未產氣者為大腸菌群陰性。 復發(fā)酵試驗復發(fā)酵試驗( (證實試驗證實試驗) ) 用接種環(huán)從產氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)管中，361培養(yǎng)48h2h，觀察產氣情況。產氣者，計為大腸菌群陽性管。報告報告 按以上確證的大腸菌群BGLB陽性管

11、數(shù)，檢索 MPN 表(見附錄B)，報告每g(mL)樣品中大腸菌群的MPN值大腸菌群Coliforms大腸菌群ColiformsMPNMPN法：（法：（20032003）乳糖發(fā)酵試驗乳糖發(fā)酵試驗 將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內，接種量在1 mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1 mL及1 mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管，置36C士1C溫箱內，培養(yǎng)24 h士2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產氣者，則按下列程序進行。分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) 將產氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36士1溫箱內，培養(yǎng)18h24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏

12、染色和證實試驗。證實試驗證實試驗 在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1個2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36士1培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24h士2h，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。大腸菌群ColiformsMPN法：（2003）大腸菌群ColiformsMPN法：2003 2016對比20032003（MPN/100gMPN/100g，mlml）20162016（MPN/gMPN/g，mlml）乳糖膽鹽發(fā)酵管(24h)月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯(24h，48h)EMB分離/革蘭氏染色鏡檢/乳糖發(fā)酵管(24h)煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)

13、管（48h)乳糖膽鹽發(fā)酵管LSTBGLBEMB大腸菌群Coliforms平板計數(shù)法：平板計數(shù)法：20162016 稀釋：稀釋：同菌落總數(shù) 培養(yǎng)：培養(yǎng)：及時將15mL20mL融化并恒溫至46的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)約傾注于每個平皿中。小心旋轉平皿，將培養(yǎng)基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3mL4mLVRBA 覆蓋平板表層。翻轉平板，置于361培養(yǎng)18h24h 菌落選擇：菌落選擇：選取菌落數(shù)在15CFU150CFU之間的平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落 (如菌落直徑較典型菌落小)。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm或更大，最低稀釋度平板低

14、于15CFU的記錄具體菌落數(shù)。 證實試驗：證實試驗：從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，少于10個菌落的挑取全部典型和可疑菌落。分別移種于BGLB肉湯管內，361培養(yǎng)24h48h，觀察產氣情況。凡BGLB肉湯管產氣， 即可報告為大腸菌群陽性。大腸菌群Coliforms平板計數(shù)法：平板計數(shù)法：20162016 大腸菌群平板計數(shù)的報告：大腸菌群平板計數(shù)的報告：經最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以計數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每 g(mL)樣品中大腸菌群數(shù)。例:10-4樣品稀釋液1mL，在 VRBA 平板上有100個典型和可疑菌落，挑 取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有

15、6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為:1006/10104/g(mL)= 6.0105CFU/g(mL)。若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。大腸菌群Coliforms餐具：餐具：14934-201614934-2016沙門氏菌Salmonella 1885年沙門氏等在霍亂流行時分離到豬霍亂沙門氏菌，故定名為沙門氏菌屬。沙門氏菌屬有的專對人類致病，有的只對動物致病，也有對人和動物都致病。沙門氏菌病是指由各種類型沙門氏菌所引起的對人類、家畜以及野生禽獸不同形式的總稱。感染沙門氏菌的人或帶菌者的糞便污染食品，可使人發(fā)生食物中毒。據統(tǒng)計在世界各國的種類細菌

16、性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。我國內陸地區(qū)也以沙門氏菌為首位。 沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌。已發(fā)現(xiàn)的近一千種（或菌株）。按其抗原成分，可沙門氏菌分為甲、乙、丙、丁、戊等基本菌組。其中與人體疾病有關的主要有甲組的副傷寒甲桿菌，乙組的副傷寒乙桿菌和鼠傷寒桿菌，丙組的副傷寒丙桿菌和豬霍亂桿菌，丁組的傷寒桿菌和腸炎桿菌等。除傷寒桿菌、副傷寒甲桿菌和副傷寒乙桿菌引起人類的疾病外，大多數(shù)僅能目引起家畜、鼠類和禽類等動物的疾病，但有時也可污染人類的食物而引起食物中毒。 沙門氏菌在水中不易繁殖，但可生存2-3周，冰箱中可生存3-4個月，在自然環(huán)境的糞便中可存活1-2個月

17、。沙門氏菌最適繁殖溫度為37，在20以上即能大量繁殖，因此，低溫儲存食品是一項重要預防措施。沙門氏菌SalmonellaGB4789.4-2016 預增菌預增菌 無菌操作稱取25g(mL)樣品，置于盛有225mLBPW 的無菌均質杯或合適容器內，以8000r/min 10000r/min均質1 min2 min，或置于盛有225 mLBPW 的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1min2min。若樣品為液態(tài)，不需要均質，振蕩混勻。如需調整 pH，用1 mol/mL無菌NaOH或HCl調pH至6.80.2。無菌操作將樣品轉至500mL錐形瓶或其他合適容器內(如均質杯本身具有無 孔蓋，可不轉移樣品)

18、，如使用均質袋，可直接進行培養(yǎng)，于36 1 培養(yǎng)8h18h。 如為冷凍產品，應在45 以下不超過15min，或2 5 不超過18h解凍。 增菌增菌 輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1mL，轉種于10mLTTB 內，于42 1 培養(yǎng)18h24h。 同時，另取1mL，轉種于10mLSC內，于36 1 培養(yǎng)18h24h。 分離分離 分別用直徑3mm的接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個 XLD瓊脂平板(或 HE 瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板)，于361分別培養(yǎng)40h48h(BS瓊脂平板)或18h24h (XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板)，觀察各個平板上生

19、長的菌落，各個平板 上的菌落特征見表1。沙門氏菌Salmonella沙門氏菌Salmonella生化鑒定試驗沙門氏菌Salmonella血清學鑒定血清學鑒定 檢查培養(yǎng)物有無自凝性檢查培養(yǎng)物有無自凝性 一般采用1.2%1.5%瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗用的抗原。首先排除自凝集反應，在潔凈的 玻片上滴加一滴生理鹽水，將待試培養(yǎng)物混合于生理鹽水滴內，使成為均一性的混濁懸液，將玻片輕輕 搖動30s60s，在黑色背景下觀察反應(必要時用放大鏡觀察)，若出現(xiàn)可見的菌體凝集，即認為有自凝性，反之無自凝性。對無自凝的培養(yǎng)物參照下面方法進行血清學鑒定。 多價菌體抗原多價菌體抗原(O)鑒定鑒定 在玻片上劃出2個約

20、1cm2cm 的區(qū)域，挑取1環(huán)待測菌，各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部， 在其中一個區(qū)域下部加1滴多價菌體(O)抗血清，在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水，作為對照。再用 無菌的接種環(huán)或針分別將兩個區(qū)域內的菌苔研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1min，并對著黑暗背 景進行觀察，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反應。O 血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的(如 2%3%)培養(yǎng)基上再檢查;如果是由于 Vi抗原的存在而阻止了 O 凝集反應時，可挑取菌苔于1mL生 理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。 多價鞭毛抗原多價鞭毛抗原(H)鑒定鑒定 操作同上。H 抗原發(fā)育不良時，將菌株接種在0.55%0.

21、65%半固體瓊脂平板的中央，待菌落 蔓延生長時，在其邊緣部分取菌檢查;或將菌株通過接種裝有0.3%0.4%半固體瓊脂的小玻管1次 2次，自遠端取菌培養(yǎng)后再檢查.沙門氏菌Salmonella金黃色葡萄球菌檢驗Staphylococcusaureus 金黃色葡萄球菌是人類的一種重要病原菌，引起許多嚴重感染。典型的金黃色葡萄球菌為球形，直徑0.8m左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽孢、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。是一種不利于人體的細菌。 金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因此，食品受其污染的機會很多。美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄

22、球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，中國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。 流行病學一般有如下特點：季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。 傳播途徑一般來說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產生了腸毒素

23、，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r，對肉體其他部位的污染。金黃色葡萄球菌檢驗Staphylococcusaureus第一法第一法 金黃色葡萄球菌定性檢驗金黃色葡萄球菌定性檢驗 樣品的處理樣品的處理 稱取25g樣品放入盛有225 mL7.5%氯化鈉肉湯無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打 1 min 2min。若樣品為液態(tài)，吸取25mL樣品至盛有225mL7.5%氯化鈉肉湯的無菌錐形瓶(瓶內可預置適 當數(shù)量的無菌玻璃珠)中，振蕩混勻。 增菌增菌 將上述樣品勻液于36 1 培養(yǎng)18h24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁 生長。 分離分離

24、 將增菌后的培養(yǎng)物，分別劃線接種到 Baird-Parker平板和血平板，血平板361培養(yǎng)18h 24h。Baird-Parker平板36 1 培養(yǎng)24h48h。 初步鑒定初步鑒定 金黃色葡萄球菌在 Baird-Parker平板上呈圓形，表面光滑、凸起、濕潤、菌落直徑為2mm3mm， 顏色呈灰黑色至黑色，有光澤，常有淺色(非白色)的邊緣，周圍繞以不透明圈(沉淀)，其外常有一清晰 帶。當用接種針觸及菌落時具有黃油樣黏稠感。有時可見到不分解脂肪的菌株，除沒有不透明圈和清 晰帶外，其他外觀基本相同。從長期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落，其黑色常較典型菌落淺些， 且外觀可能較粗糙，質地較干燥。在血平

25、板上，形成菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色(有時為白色)，菌落周圍可見完全透明溶血圈。挑取上述可疑菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。金黃色葡萄球菌檢驗Staphylococcusaureus第一法第一法 金黃色葡萄球菌定性檢驗金黃色葡萄球菌定性檢驗 確證鑒定確證鑒定染色鏡檢染色鏡檢 金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列呈葡萄球狀，無芽胞，無莢膜，直徑約為 0.5m1m。血漿凝固酶試驗血漿凝固酶試驗 挑取Baird-Parker平板或血平板上至少5個可疑菌落(小于5個全選)，分別接 種到5mLBHI和營養(yǎng)瓊脂小斜面，36 1 培養(yǎng)18h24h。取新鮮配制兔血漿0.5mL，放入小試管中

26、，再加入BHI培養(yǎng)物0.2 mL0.3 mL，振蕩搖勻，置 36 1 溫箱或水浴箱內，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固(即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn) 凝塊)或凝固體積大于原體積的一半，被判定為陽性結果。同時以血漿凝固酶試驗陽性和陰性葡萄球菌 菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對照。也可用商品化的試劑，按說明書操作，進行血漿凝固酶試驗。 結果如可疑，挑取營養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5mLBHI，36 1 培養(yǎng)18h48h，重復試驗。金黃色葡萄球菌檢驗Staphylococcusaureus第一法第一法 金黃色葡萄球菌定性檢驗金黃色葡萄球菌定性檢驗金黃色葡萄球菌檢驗Staphylococcusaureus第二法第

27、二法 金黃色葡萄球菌平板計數(shù)法金黃色葡萄球菌平板計數(shù)法 稀釋稀釋 同菌落總數(shù)同菌落總數(shù) 樣品的接種樣品的接種 根據對樣品污染狀況的估計，選擇2個3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在進 行10倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取1mL樣品勻液以0.3mL、0.3mL、0.4mL接種量分別加入三塊 Baird-Parker平板，然后用無菌涂布棒涂布整個平板，注意不要觸及平板邊緣。使用前，如 Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25 50的培養(yǎng)箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。 培養(yǎng)培養(yǎng) 在通常情況下，涂布后，將平板靜置10min，如樣液不易吸收，可將平板放在培養(yǎng)箱36 1

28、培養(yǎng)1h;等樣品勻液吸收后翻轉平板，倒置后于36 1 培養(yǎng)24h48h。 典型菌落計數(shù)和確認典型菌落計數(shù)和確認 金黃色葡萄球菌在 Baird-Parker平板上呈圓形，表面光滑、凸起、濕潤、菌落直徑為2 mm 3mm，顏色呈灰黑色至黑色，有光澤，常有淺色(非白色)的邊緣，周圍繞以不透明圈(沉淀)，其外常有一 清晰帶。當用接種針觸及菌落時具有黃油樣黏稠感。有時可見到不分解脂肪的菌株，除沒有不透明圈和清晰帶外，其他外觀基本相同。從長期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落，其黑色常較典型菌落淺 些，且外觀可能較粗糙，質地較干燥。 選擇有典型的金黃色葡萄球菌菌落的平板，且同一稀釋度3個平板所有菌落數(shù)合計在

29、20CFU 200CFU 之間的平板，計數(shù)典型菌落數(shù) 初步鑒定初步鑒定 同第一法同第一法 確證鑒定確證鑒定 同第一法同第一法金黃色葡萄球菌檢驗Staphylococcusaureus第二法第二法 金黃色葡萄球菌平板計數(shù)法金黃色葡萄球菌平板計數(shù)法 計算計算若只有一個稀釋度平板的典型菌落數(shù)在20CFU200CFU 之間，計數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落，按式(1)計算。 若最低稀釋度平板的典型菌落數(shù)小于20CFU，計數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落，按式(1)計算。 若某一稀釋度平板的典型菌落數(shù)大于200CFU，但下一稀釋度平板上沒有典型菌落，計數(shù)該稀釋 度平板上的典型菌落，按式(1)計算。 若某一 稀 釋

30、度 板的典型菌落數(shù)大于200CFU，而下一 稀釋度平板上雖有典型菌落但不在20CFU200CFU 范圍內，應計數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落，按式(1)計算。 若2個連續(xù)稀釋度的平板典型菌落數(shù)均在20CFU200CFU 之間，按式(2)計算。式中: T 樣品中金黃色葡萄球菌菌落數(shù); A1第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))典型菌落的總數(shù);B1 第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))鑒定為陽性的菌落數(shù); C1 第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))用于鑒定試驗的菌落數(shù); A2 第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))典型菌落的總數(shù);B2 第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))鑒定為陽性的菌落數(shù);C2 第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))用于鑒定試驗的菌落數(shù); 1.1計算系數(shù);d

31、稀釋因子(第一稀釋度)。式中: T 樣品中金黃色葡萄球菌菌落數(shù);A 某一稀釋度典型菌落的總數(shù); B 某一稀釋度鑒定為陽性的菌落數(shù);C 某一稀釋度用于鑒定試驗的菌落數(shù); d 稀釋因子。 稀釋度稀釋度1:10（第一稀釋度）（第一稀釋度）1:100（第二稀釋度）（第二稀釋度）鑒定試驗的菌鑒定試驗的菌落數(shù)落數(shù)鑒定為陽性鑒定為陽性的菌落數(shù)的菌落數(shù)計算計算菌落數(shù)（CFU）2，3，517，20，23 （60）54604/51008，9，12 （29）35，37，42 （114）5/53/4（293/5+1144/5）/（1.110）金黃色葡萄球菌檢驗Staphylococcusaureus第三法第三法 金黃

32、色葡萄球菌金黃色葡萄球菌MPNMPN法法 MPN/g(mL)金黃色葡萄球菌檢驗StaphylococcusaureusB-PB-P平板平板血平板血平板霉菌和酵母oulds and yeasts)l 霉菌是真菌的一種，其特點是菌絲體較發(fā)達，無較大的子實體。同其他真菌一樣，也有細胞壁，寄生或腐生方式生存。霉菌有的使食品轉變?yōu)橛卸疚镔|，有的可能在食品中產生毒素，即霉菌毒素。自從發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素以來，霉菌與霉菌毒素對食品的污染日益引起重視。對人體健康造成的危害極大，主要表現(xiàn)為慢性中毒、致癌、致畸、致突變作用。l 霉菌毒素對人和畜禽主要毒性表現(xiàn)在神經和內分泌紊亂、免疫抑制、致癌致畸、肝腎損傷、繁殖障礙等。

33、雞天生對霉菌毒素敏感，飼料中較低的毒素含量就會造成雞群大量死亡。霉菌毒素對蛋雞的影響集中表現(xiàn)在:卵巢和輸卵管萎縮，產蛋量下降，產畸形蛋;采食量減少、生產性能下降、飼料報酬降低;種蛋的孵化率降低。不同霉菌毒素對蛋雞造成的危害有所區(qū)別。在已經知道的霉菌毒素中對蛋雞影響及毒害作用較大的有麥角毒素、單端孢霉毒素、腐馬毒素、玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素等。霉菌和酵母oulds and yeasts) 稀稀釋釋 同菌落總數(shù) 接種接種 同菌落總數(shù) 培養(yǎng)培養(yǎng) 及時將20 mL25 mL冷卻至46的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂(可放置于46士1恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。置水平

34、臺面待培養(yǎng)基完全凝固。瓊脂凝固后，正置平板，置28士1培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄培養(yǎng)至第5d的結果。 菌落計數(shù)菌落計數(shù) 用肉眼觀察，必要時可用放大鏡或低倍鏡，記錄稀釋倍數(shù)和相應的霉菌和酵母菌落數(shù)。以菌落形成單位(colony-forming units，CFU)表示。選取菌落數(shù)在10 CFU150 CFU的平板，根據菌落形態(tài)分別計數(shù)霉菌和酵母。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記為菌落蔓延。 結果結果 同菌落總數(shù)單核細胞增生李斯特氏菌Listeria monocytogenes 是一種兼性厭氧細菌，為李斯特菌癥的病原體。李斯特菌是革蘭氏陽性菌，屬厚壁菌門，取名自約瑟夫李斯特。它主要以食物為傳染媒介，是

35、最致命的食源性病原體之一。 李斯特菌在環(huán)境中無處不在，在絕大多數(shù)食品中都能找到李斯特菌。肉類、蛋類、禽類、海產品、乳制品、蔬菜等都已被證實是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒嚴重的可引起血液和腦組織感染，很多國家都已經采取措施來控制食品中的李斯特菌，并制定了相應的標準。 特點分布廣：存在于土壤、水域(地表水、污水、廢水)、昆蟲、植物、蔬菜、魚、鳥、野生動物、家禽。生存環(huán)境可塑性大：能在2-42下生存(也有報道0能緩慢生長 )能在冰箱冷藏室內較長時間生長繁殖。適應范圍大：酸性、堿性條件下都適應。帶菌較高的食品有：牛奶和乳制品；肉類(特別是牛肉)；蔬菜；沙拉；海產品；冰淇凌等。單核細胞增生李斯特氏菌L

36、isteria monocytogenes 本標準第一法適用于食品中單核細胞增生李斯特氏菌的定性檢驗; 第二法適用于單核細胞增生李 斯特氏菌含量較高的食品中單核細胞增生李斯特氏菌的計數(shù); 第三法適用于單核細胞增生李斯特氏菌 含量較低(100CFU/g)而雜菌含量較高的食品中單核細胞增生李斯特氏菌的計數(shù)，特別是牛奶、水以 及含干擾菌落計數(shù)的顆粒物質的食品。單核細胞增生李斯特氏菌Listeria monocytogenes 增菌增菌 以無菌操作取樣品25g(mL)加入到含有225mLLB1 增菌液的均質袋中，在拍擊式均質器上連續(xù) 均質1min2min;或放入盛有225mLLB1 增菌液的均質杯中，

37、8000r/min10000r/min均質 1min2min。于30 1 培養(yǎng)24h2h，移取0.1mL，轉種于10mLLB2 增菌液內，于30 1 培養(yǎng)24h2h。 分離分離 取 LB2 二次增菌液劃線接種于李斯特氏菌顯色平板和 PALCAM 瓊脂平板，于36 1 培養(yǎng) 24h48h，觀察各個平板上生長的菌落。典型菌落在 PALCAM 瓊脂平板上為小的圓形灰綠色菌落， 周圍有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷;在李斯特氏菌顯色平板上的菌落特征，參照產品說明進行 判定。 初篩初篩 自選擇性瓊脂平板 上 分 別 挑 取 3 個 5 個 典 型 或 可 疑 菌 落，分 別 接 種 木 糖、鼠 李 糖

38、 發(fā) 酵 管，于 36 1 培養(yǎng)24h2h，同時在 TSA-YE平板上劃線，于361培養(yǎng)18h24h，然后選擇木糖陰性、鼠李糖陽性的純培養(yǎng)物繼續(xù)進行鑒定。 鑒定鑒定第一法 單核細胞增生李斯特氏菌定性檢驗單核細胞增生李斯特氏菌Listeria monocytogenes第一法 單核細胞增生李斯特氏菌定性檢驗李斯特顯色平板PALCAM平板單核細胞增生李斯特氏菌Listeria monocytogenes單核細胞增生李斯特氏菌Listeria monocytogenes 樣品的稀釋樣品的稀釋 以無菌操作稱取樣品25g(mL),放入盛有225mL 緩沖蛋白胨水或無添加劑的 LB肉湯的無菌 均質袋內(或

39、均質杯)內,在拍擊式均質器上連續(xù)均質1min2min或以8000r/min10000r/min均 質1min2min。液體樣品,振蕩混勻,制成110的樣品勻液。 用1mL無菌吸管或微量移液器吸取110樣品勻液1mL,沿管壁緩慢注于盛有9mL緩沖蛋白胨水或無添加劑的LB肉湯的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支1mL無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成1100 的樣品勻液。按以上操作程序,制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次,換用1支1mL無菌吸管或吸頭。 樣品的接種樣品的接種 根據對樣品污染狀況的估計,選擇2個3個適宜連續(xù)稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液

40、), 每個稀釋度的樣品勻液分別吸取1mL以0.3mL、0.3mL、0.4mL的接種量分別加入3塊李斯特氏菌顯色平板,用無菌 L 棒涂布整個平板,注意不要觸及平板邊緣。使用前,如瓊脂平板表面有水珠,可放 在25 50 的培養(yǎng)箱里干燥,直到平板表面的水珠消失。 培養(yǎng)培養(yǎng) 在通常情況下,涂布后,將平板靜置10min,如樣液不易吸收,可將平板放在培養(yǎng)箱361培養(yǎng)1h;等樣品勻液吸收后翻轉平皿,倒置于培養(yǎng)箱,361培養(yǎng)24h48h。第二法第二法 單核細胞增生李斯特氏菌平板計數(shù)法單核細胞增生李斯特氏菌平板計數(shù)法單核細胞增生李斯特氏菌Listeria monocytogenes 典型菌落計數(shù)和確認典型菌落計

41、數(shù)和確認單核細胞增生李斯特氏菌在李斯特氏菌顯色平板上的菌落特征以產品說明為準。 選擇有典型單核細胞增生李斯特氏菌菌落的平板,且同一稀釋度3個平板所有菌落數(shù)合計在15CFU150CFU之間的平板,計數(shù)典型菌落數(shù)。如果: 鑒定鑒定 從典型菌落中任選5個菌落(小于5 個全選),分別按第一法鑒定第二法第二法 單核細胞增生李斯特氏菌平板計數(shù)法單核細胞增生李斯特氏菌平板計數(shù)法菌落菌落 30-30030-300大腸大腸 15-15015-150金葡金葡 20-20020-200霉菌霉菌 10-15010-150李斯特李斯特 15-15015-150a) 只有一個稀釋度的平板菌落數(shù)在15CFU150CFU之間

42、且有典型菌落,計數(shù)該稀釋度平板 上的典型菌落; b) 所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于15CFU且有典型菌落,應計數(shù)最低稀釋度平板上的典型菌落;c) 某一稀釋度的平板菌落數(shù)大于150CFU 且有典型菌落,但下一稀釋度平板上沒有典型菌落, 應計數(shù)該稀釋度平板上的典型菌落; d) 所有稀釋度的平板菌落數(shù)大于150CFU 且有典型菌落,應計數(shù)最高稀釋度平板上的典型 菌落; e) 所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在15CFU150CFU 之間且有典型菌落,其中一部分小于15CFU 或大于150CFU 時,應計數(shù)最接近15CFU 或150CFU 的稀釋度平板上的典型菌落。 以上按式(1)計算。 f) 2個連續(xù)稀釋

43、度的平板菌落數(shù)均在15CFU150CFU 之間,按式(2)計算。單核細胞增生李斯特氏菌Listeria monocytogenes單核細胞增生李斯特氏菌Listeria monocytogenes第三法第三法 單核細胞增生李斯特氏菌單核細胞增生李斯特氏菌MPNMPN計數(shù)法計數(shù)法 MPN/g(mL)型溶血性鏈球菌（Streptococcus）溶血性鏈球菌又稱沙培林,對熱和化學清毒劑均敏感，常引起扁桃體、咽部、中耳等感染。亦為腎盂腎炎、產褥熱、猩紅熱的病原體。鏈球菌呈球形或橢圓形，直徑0.6-1.0m，呈鏈狀排列，長短不一，從4-8個至20-30個菌細胞組成不等，鏈的長短與細菌的種類及生長環(huán)境有關

44、。在液體培養(yǎng)基中易呈長鏈，固體培養(yǎng)基中溶血性鏈球菌常呈短鏈，由于鏈球菌能產生脫鏈酶，所以正常情況下鏈球菌的鏈不能無限制的延長。多數(shù)菌株在血清肉湯中培養(yǎng)2-4h易形成透明質酸的莢膜，繼續(xù)培養(yǎng)后消失。該菌不形成芽胞，無鞭毛，易被普通的堿性染料著色，革蘭氏陽性，老齡培養(yǎng)或被中性粒細胞吞噬后，轉為革蘭氏陰性。型溶血性鏈球菌（Streptococcus） 根據鏈球菌在血液培養(yǎng)基上生長繁殖后是否溶血及其溶血性質分為三類。 -溶血性鏈球菌(-hemolytic streptococcus):菌落周圍有1-2mm寬的草綠色溶血環(huán)，環(huán)內紅細胞未溶解，血紅蛋白變成綠色這類鏈球菌亦稱為草綠色鏈球菌，也稱甲型溶血。此

45、類細菌致病力不強，多為條件致病菌。在人類呼吸道及腸道中有型溶血鏈球菌正常寄生，但有時也可引起亞急性心內膜炎等癥。 -溶血性鏈球菌(-hemolytic streptococcus):菌落周圍形成一個2-4mm寬、界限分明、完全透明的無色溶血環(huán)，也稱乙型溶血，因而這類菌亦稱為溶血性鏈球菌，該菌的致病力強，常引起人類和動物的多種疾病。具體用途是用于研究和質量控制。能夠產生型溶血的化（或A群鏈球（Streptococcus pyogenes）和無乳（或B群）鏈球菌（Streptococcus agalactiae）。 -溶血鏈球菌(-streptococcus):不產生溶血素，菌落周圍無溶血環(huán)，也稱

46、為丙型或不溶血性鏈球菌(Streptococcus non-hemolytics)，該菌無致病性，常存在于乳類和糞便中，偶爾也引起感染。型溶血性鏈球菌（Streptococcus） 樣品處理及增菌樣品處理及增菌 按無菌操作稱取檢樣 25 g（mL），加入盛有 225 mL mTSB 的均質袋中，用拍擊式均質器均質 1 min2 min；或加入盛有 225 mL mTSB 的均質杯中，以 8000 r/min10000 r/min 均質 1 min2 min。若樣品為液態(tài)，振蕩均勻即可。36 1 培養(yǎng) 18 h24 h。 分離分離 將將增菌液劃線接種于哥倫比亞 CNA 血瓊脂平板，36 1 厭氧

47、培養(yǎng) 18 h24 h，觀察菌落形態(tài)。溶血性鏈球菌在哥倫比亞 CNA 血瓊脂平板上的典型菌落形態(tài)為直徑約 2 mm3 mm，灰白色、半透明、光滑、表面突起、圓形、邊緣整齊，并產生 型溶血。 分純培養(yǎng)分純培養(yǎng) 挑取 5 個（如小于 5 個則全選）可疑菌落分別接種哥倫比亞血瓊脂平板和 TSB 增菌液， 36 1 培養(yǎng) 18 h24 h。 革蘭氏染色鏡檢革蘭氏染色鏡檢 挑取可疑菌落染色鏡檢。 型溶血性鏈球菌為革蘭氏染色陽性，球形或卵圓形，常排列成短鏈狀。 觸酶試驗觸酶試驗 挑取可疑菌落于潔凈的載玻片上，滴加適量 3%過氧化氫溶液，立即產生氣泡者為陽性。 型溶血性鏈球菌觸酶為陰性。志賀氏菌(Shige

48、lla)增菌增菌 以無菌操作取檢樣 25 g（mL），加入裝有滅菌 225 mL 志賀氏菌增菌肉湯的均質杯，用旋轉刀片式均質器以 8 000 r/min10000r/min 均質；或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質袋中，用拍擊式均質器連續(xù)均質1 min2 min，液體樣品振蕩混勻即可。于41.5 ，厭氧培養(yǎng)16 h20h。 分離分離 取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上，于 36 1 培養(yǎng) 20 h24 h，觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)。宋內氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)

49、至 48 h 再進行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見表 1。志賀氏菌(Shigella)初步生化試驗初步生化試驗 自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，分別接種TSI、半固體和營養(yǎng)瓊脂斜面各一管，置36 1 培養(yǎng)20 h24 h，分別觀察結果。凡是三糖鐵瓊脂中斜面產堿、底層產酸（發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，蔗糖）、不產氣（福氏志賀氏菌6型可產生少量氣體）、不產硫化氫、半固體管中無動力的菌株，挑取其已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌苔，進行生化試驗和血清學分型。生化試驗及附加生化試驗生化試驗及附加生化試驗 生化試驗生化試驗 用已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌苔，進行生化試驗，即

50、-半乳糖苷酶、尿素、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解試驗。除宋內氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌 13 型的鳥氨酸陽性;宋內氏菌和痢疾志賀氏菌 1 型，鮑氏志賀氏菌 13 型的-半乳糖苷酶為陽性以外，其余生化試驗志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結果。另外由于福氏志賀氏菌 6 型的生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌相似，必要時還需加做靛基質、甘露醇、棉子糖、甘油試驗，也可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗，應為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化反應不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集，仍不得判定為志賀氏菌屬。志賀氏菌屬生化特性見表 2。志賀氏菌(Shigella)志賀氏菌(Shige

51、lla)附加生化實驗由于某些不活潑的大腸埃希氏菌（anaerogenic E.coli）、A-D（Alkalescens-D isparbiotypes 堿性-異型）菌的部分生化特征與志賀氏菌相似，并能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集；因此前面生化實驗符合志賀氏菌屬生化特性的培養(yǎng)物還需另加葡萄糖胺、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(36培養(yǎng)24 h48 h)。志賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、A-D 菌的生化特性區(qū)別見表 3。志賀氏菌(Shigella)血清學鑒定血清學鑒定抗原的準備抗原的準備 志賀氏菌屬沒有動力，所以沒有鞭毛抗原。志賀氏菌屬主要有菌體（O）抗原。菌體 O 抗原又可分為型和群的特異性抗

52、原。一般采用 1.2%1.5%瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗用的抗原。凝集反應凝集反應 在玻片上劃出 2 個約 1cm2cm 的區(qū)域，挑取一環(huán)待測菌，各放1/2 環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個區(qū)域下部加 1 滴抗血清，在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水，作為對照。再用無菌的接種環(huán)或針分別將兩個區(qū)域內的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1 min，并對著黑色背景進行觀察，如果抗血清中出現(xiàn)凝結成塊的顆粒，而且生理鹽水中沒有發(fā)生自凝現(xiàn)象，那么凝集反應為陽性。如果生理鹽水中出現(xiàn)凝集，視作為自凝。這時，應挑取同一培養(yǎng)基上的其他菌落繼續(xù)進行試驗。如果待測菌的生化特征符合志賀氏菌屬生化特征，而其血清學試驗為陰

53、性的話，則按以上注1進行試驗注1：一些志賀氏菌如果因為 K 抗原的存在而不出現(xiàn)凝集反應時，可挑取菌苔于 1 mL 生理鹽水做成濃菌液，100 煮沸15 min60 min 去除 K 抗原后再檢查。注 2：D 群志賀氏菌既可能是光滑型菌株也可能是粗糙型菌株，與其他志賀氏菌群抗原不存在交叉反應。與腸桿菌科不同，宋內氏志賀氏菌粗糙型菌株不一定會自凝。宋內氏志賀氏菌沒有 K 抗原。志賀氏菌(Shigella)志賀氏菌(Shigella)志賀氏菌(Shigella)商業(yè)無菌 商業(yè)無菌指不含危害公共健康的致病菌和毒素;不含任何在產品儲存、運輸及銷售期間能繁殖的微生物;在產品有效期內保持質量穩(wěn)定和良好的商業(yè)

54、價值。 罐頭食品經過適度的殺菌后，不含有致病性微生物，也不含有在通常溫度下能在其中繁殖的非致病性微生物。l罐頭第九大類l乳制品第五大類l蛋制品第十九大類商業(yè)無菌l 罐頭：畜禽肉類罐頭、水產動物類罐頭、水果類罐頭、蔬菜類蔬菜類罐頭罐頭、食用菌罐頭、其他罐頭全部檢測商業(yè)無菌全部檢測商業(yè)無菌蔬菜類罐頭番茄罐頭霉菌檢測（4789.15-2016第二法）l 乳制品：液體乳（滅菌乳、調制乳）、其他乳制品（煉乳、奶油） 調制乳：限采用滅菌工藝生產的調制乳檢測 煉乳：限淡煉乳和調制淡煉乳檢測 奶油：限以罐頭工藝或超高溫瞬時滅菌工藝加工的稀奶油產品檢測。l 蛋制品：再制蛋、其他類限以罐頭食品加工工藝生產的產品檢

55、測GB4789.26-2013 食品微生物學檢驗 商業(yè)無菌檢驗商業(yè)無菌 1樣品準備 2稱重 3保溫 4開啟 5留樣 6感官檢查 7pH測定 8涂片染色鏡檢 9結果判定商業(yè)無菌樣品準備品準備 去除表面標簽，在包裝容器表面用防水的油性記號筆做好標記，并記錄容器、編號、產品性狀、泄漏情況、是否有小孔或銹蝕、壓痕、膨脹及其他異常情況。稱重稱重 1 kg 及以下的包裝物精確到 1 g，1 kg 以上的包裝物精確到 2 g，10 kg 以上的包裝物精確到 10 g，并記錄。 保溫保溫 每個批次取 1 個樣品置 2 5 冰箱保存作為對照，將其余樣品在 36 1 下保溫 10 d。保溫過程中應每天檢查，如有膨

56、脹或泄漏現(xiàn)象，應立即剔出，開啟檢查。保溫結束時，再次稱重并記錄，比較保溫前后樣品重量有無變化。如有變輕，表明樣品發(fā)生泄漏。將所有包裝物置于室溫直至開啟檢查。開啟開啟 如有膨脹的樣品，則將樣品先置于 2 5 冰箱內冷藏數(shù)小時后開啟。如有膨用冷水和洗滌劑清洗待檢樣品的光滑面。水沖洗后用無菌毛巾擦干。以含 4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面 15 min 后用無菌毛巾擦干，在密閉罩內點燃至表面殘余的碘乙醇溶液全部燃燒完。膨脹樣品以及采用易燃包裝材料包裝的樣品不能灼燒，以含 4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面 30min 后用無菌毛巾擦干。在超凈工作臺或百級潔凈實驗室中開啟。帶湯汁的樣品開啟前應適當振搖。使用

57、無菌開罐器在消毒后的罐頭光滑面開啟一個適當大小的口，開罐時不得傷及卷邊結構，每一個罐頭單獨使用一個開罐器，不得交叉使用。如樣品為軟包裝，可以使用滅菌剪刀開啟，不得損壞接口處。立即在開口上方嗅聞氣味，并記錄。注：嚴重膨脹樣品可能會發(fā)生爆炸，噴出有毒物?？梢圆扇≡谂蛎洏悠飞仙w一條滅菌毛巾或者用一個無菌漏斗倒扣在樣品上等預防措施來防止這類危險的發(fā)生。商業(yè)無菌樣品準備品準備 去除表面標簽，在包裝容器表面用防水的油性記號筆做好標記，并記錄容器、編號、產品性狀、泄漏情況、是否有小孔或銹蝕、壓痕、膨脹及其他異常情況。稱重稱重 1 kg 及以下的包裝物精確到 1 g，1 kg 以上的包裝物精確到 2 g，10

58、 kg 以上的包裝物精確到 10 g，并記錄。 保溫保溫 每個批次取 1 個樣品置 2 5 冰箱保存作為對照，將其余樣品在 36 1 下保溫 10 d。保溫過程中應每天檢查，如有膨脹或泄漏現(xiàn)象，應立即剔出，開啟檢查。保溫結束時，再次稱重并記錄，比較保溫前后樣品重量有無變化。如有變輕，表明樣品發(fā)生泄漏。將所有包裝物置于室溫直至開啟檢查。開啟開啟 如有膨脹的樣品，則將樣品先置于 2 5 冰箱內冷藏數(shù)小時后開啟。如有膨用冷水和洗滌劑清洗待檢樣品的光滑面。水沖洗后用無菌毛巾擦干。以含 4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面 15 min 后用無菌毛巾擦干，在密閉罩內點燃至表面殘余的碘乙醇溶液全部燃燒完。膨脹樣

59、品以及采用易燃包裝材料包裝的樣品不能灼燒，以含 4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面 30min 后用無菌毛巾擦干。在超凈工作臺或百級潔凈實驗室中開啟。帶湯汁的樣品開啟前應適當振搖。使用無菌開罐器在消毒后的罐頭光滑面開啟一個適當大小的口，開罐時不得傷及卷邊結構，每一個罐頭單獨使用一個開罐器，不得交叉使用。如樣品為軟包裝，可以使用滅菌剪刀開啟，不得損壞接口處。立即在開口上方嗅聞氣味，并記錄。注：嚴重膨脹樣品可能會發(fā)生爆炸，噴出有毒物?？梢圆扇≡谂蛎洏悠飞仙w一條滅菌毛巾或者用一個無菌漏斗倒扣在樣品上等預防措施來防止這類危險的發(fā)生。商業(yè)無菌留樣留樣 開啟后，用滅菌吸管或其他適當工具以無菌操作取出內容物至少

60、 30 mL（g）至滅菌容器內，保存2 5 冰箱中，在需要時可用于進一步試驗，待該批樣品得出檢驗結論后可棄去。開啟后的樣品可進行適當?shù)谋４?，以備日后容器檢查時使用。感官檢查感官檢查 在光線充足、空氣清潔無異味的檢驗室中，將樣品內容物傾入白色搪瓷盤內，對產品的組織、形態(tài)、色澤和氣味等進行觀察和嗅聞，按壓食品檢查產品性狀，鑒別食品有無腐敗變質的跡象，同時觀察包裝容器內部和外部的情況，并記錄。pH測定 樣品處理 測定 液態(tài)制品混勻備用，有固相和液相的制品則取混勻的液相部分備用。 對于稠厚或半稠厚制品以及難以從中分出汁液的制品（如：糖漿、果醬、果凍、油脂等），取一部分樣品在均質器或研缽中研磨，如果研磨