動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課用

1、會(huì)計(jì)學(xué)1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課用1、簡述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用2、對(duì)比說出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的學(xué)習(xí)目標(biāo)：復(fù)習(xí)：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)技術(shù)、 植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程閱讀“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程”并思考： 1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？ 特點(diǎn)是什么？ 2、為什么要對(duì)取出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？ 3、用胰蛋白酶對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？ 4、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為

2、什么？ 5、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？ 6、簡述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程：原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) 1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？ 從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和繁殖。 原理是細(xì)胞增殖 （有絲分裂） 。聚焦一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程那么什么是接觸抑制？接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。 2、為什么要對(duì)取

3、出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？ 分散的單個(gè)細(xì)胞容易攝取所需的營養(yǎng)，排出代謝廢物；而用大塊組織培養(yǎng)時(shí)，內(nèi)部細(xì)胞的營養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難。 一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程 3、用胰蛋白酶對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？ 細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)（膠原纖維）。 胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當(dāng)pH大于6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pH為7.28.4。多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.27.4。 一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程4、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？ 胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白外，長時(shí)間的作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，對(duì)細(xì)胞有損傷作用，

4、因此必須控制好胰蛋白酶的消化時(shí)間。 一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程 5、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官，它們的細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，容易培養(yǎng)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程6、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無限傳代細(xì)胞系單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)一般傳至10代直至50代就不能再分裂了，這時(shí)細(xì)胞核內(nèi)遺傳物質(zhì)未發(fā)生變化，形成的細(xì)胞群傳代培養(yǎng)過程中有個(gè)別細(xì)胞傳至50代以后，由于遺傳物質(zhì)改變，失去控制，成為無限增

5、殖的不死的癌癥細(xì)胞，形成的細(xì)胞群 7、什么是原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)？為什么要進(jìn)行傳代培養(yǎng)？原代培養(yǎng)： 取材（動(dòng)物組織） 細(xì)胞分散初次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)： 培養(yǎng)的細(xì)胞細(xì)胞分散繼續(xù)培養(yǎng)進(jìn)行傳代培養(yǎng)的原因： 接觸抑制一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程8、傳代培養(yǎng)中，第10代細(xì)胞與第50代以后細(xì)胞的主要區(qū)別是什么？ 細(xì)胞癌變,失去接觸抑制特性。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程 9、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否象植物組織培養(yǎng)那樣獲得克隆個(gè)體？需要誘導(dǎo)其脫分化的過程嗎？ 不可以，因?yàn)楦叨确只膭?dòng)物細(xì)胞的全能性受到抑制。 不需要誘導(dǎo)其脫分化。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程過程：從動(dòng)物機(jī)體中取出組織 剪碎 加胰蛋白酶 細(xì)胞游離 加培養(yǎng)液 將細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶內(nèi) 培養(yǎng)（

6、12天換一次培養(yǎng)液） 細(xì)胞貼壁生長 長成單層細(xì)胞取材（動(dòng)物組織） 細(xì)胞分散初次培養(yǎng)培養(yǎng)的細(xì)胞細(xì)胞分散繼續(xù)培養(yǎng) 細(xì)胞株： 從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，能傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化。 細(xì)胞系： 傳到40-50代后有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，帶有癌變的特點(diǎn)，可能在培養(yǎng)條件下無限制的傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。保證細(xì)胞順利的生長增殖思考：動(dòng)物血清的作用？主要是：提供有利于細(xì)胞生長增殖所需的激素、生長因子或提供合成培養(yǎng)基所缺乏的營養(yǎng)物質(zhì)等。 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點(diǎn)是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動(dòng)物

7、血清動(dòng)物體細(xì)胞大都生活在液體的環(huán)境植物組織培養(yǎng)呢？無機(jī)鹽、蔗糖 、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、植物激素成分比較：三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用 1、獲得細(xì)胞產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)生物制品病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等 2、獲得燒傷病人植皮所需的細(xì)胞 3、獲得細(xì)胞用于檢測有毒物質(zhì) 4、為治療及預(yù)防疾病提供理論依據(jù)。四、植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖培養(yǎng)基狀態(tài)培養(yǎng)基狀態(tài) 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有培養(yǎng)基特有成分成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素 葡萄糖葡萄糖 動(dòng)物血清動(dòng)物血清培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)

8、結(jié)果植物體植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株無病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白泌蛋白1、說出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程？2、簡述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件？3、說出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用？4、對(duì)比說出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的你達(dá)到學(xué)習(xí)目標(biāo)了嗎？ 1.用動(dòng)、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是 A都需用培養(yǎng)箱 B都須用液體培養(yǎng)基 C都要在無菌條件下進(jìn)行 D都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性C鞏固練習(xí)：外界條件適宜，植物細(xì)胞不需要。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般需要培養(yǎng)箱。 2、下列屬于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)主要區(qū)別的是 A.培養(yǎng)基成分

9、不同 B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行 C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能 D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株A 3、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是A.動(dòng)物細(xì)胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)D愈傷組織條件適宜可以傳代培養(yǎng)不分化。 4、細(xì)胞株的特點(diǎn)是A遺傳物質(zhì)沒有改變，可以無限傳代B遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，不可無限傳代C遺傳物質(zhì)沒有改變，不可無限傳代D遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，且有癌變特點(diǎn)，可以無限傳代 5、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為: A原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng) C細(xì)胞株 D細(xì)胞系CD6、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞

10、大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 A.容易產(chǎn)生各種變異 B.具有更強(qiáng)的全能性 C.取材十分方便 D.分裂增殖的能力強(qiáng)D 7.（09江蘇）下圖是一個(gè)新生小鼠的肝臟小塊培養(yǎng)裝置示意圖。請回答下列問題。 （1）肝臟切成小薄片，這有利于肝臟細(xì)胞 。 （2）氣室中充入5C02：氣體的主要作用是 。 （3）培養(yǎng)液中添加抗生素是為了抑制細(xì)菌生長，但要注意選擇抗生素的 ，以保證抗生素對(duì)肝臟無害。吸收氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)、排出代謝廢物維持培養(yǎng)液適宜的pH種類和劑量08年寧夏卷回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題： 在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面 時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分

11、裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的 。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是 ，要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是 。 隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn) 的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成 細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性 ，細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量 。相互接觸單層胰蛋白酶衰老甚至死亡接觸抑制不死性降低減少檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到 期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在 條件下保存細(xì)胞，因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中 的活性降低，細(xì)胞的 速率降低。給患者移植經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因?yàn)闄C(jī)體把移植的皮膚組織當(dāng)作 進(jìn)行攻擊。中冷凍酶新陳代謝抗原 那么什么是接觸抑制？接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。 2、為什么要對(duì)取出的