lecture染菌的防治實(shí)用教案

1、染菌染菌 什么什么(shn me)是染菌？是染菌？發(fā)酵過(guò)程中除了生產(chǎn)菌以外，還有其它發(fā)酵過(guò)程中除了生產(chǎn)菌以外，還有其它菌生長(zhǎng)繁殖菌生長(zhǎng)繁殖第1頁(yè)/共47頁(yè)第一頁(yè)，共48頁(yè)。 染菌的影響染菌的影響(yngxing)p 發(fā)酵過(guò)程污染雜菌，會(huì)嚴(yán)重的影響生產(chǎn)，是發(fā)酵發(fā)酵過(guò)程污染雜菌，會(huì)嚴(yán)重的影響生產(chǎn)，是發(fā)酵工業(yè)工業(yè)(gngy)的致命傷。的致命傷。p造成大量原材料的浪費(fèi)，在經(jīng)濟(jì)上造成巨大損失造成大量原材料的浪費(fèi)，在經(jīng)濟(jì)上造成巨大損失p擾亂生產(chǎn)秩序，破壞生產(chǎn)計(jì)劃。擾亂生產(chǎn)秩序，破壞生產(chǎn)計(jì)劃。p遇到連續(xù)染菌，特別在找不到染菌原因往往遇到連續(xù)染菌，特別在找不到染菌原因往往 會(huì)影會(huì)影響人們的情緒和生產(chǎn)積極性。響

2、人們的情緒和生產(chǎn)積極性。p 影響產(chǎn)品外觀及內(nèi)在質(zhì)量影響產(chǎn)品外觀及內(nèi)在質(zhì)量第2頁(yè)/共47頁(yè)第二頁(yè)，共48頁(yè)。生產(chǎn)不同的品種，可污染不同種類(lèi)和生產(chǎn)不同的品種，可污染不同種類(lèi)和性質(zhì)的微生物。性質(zhì)的微生物。不同污染時(shí)間不同污染時(shí)間(shjin)，不同污染途，不同污染途徑，污染不同菌量，不同培養(yǎng)基和培徑，污染不同菌量，不同培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件又可產(chǎn)生不同后果養(yǎng)條件又可產(chǎn)生不同后果 染菌對(duì)發(fā)酵染菌對(duì)發(fā)酵(f jio)的影響的影響第3頁(yè)/共47頁(yè)第三頁(yè)，共48頁(yè)。發(fā)酵染菌對(duì)不同發(fā)酵染菌對(duì)不同(b tn)(b tn)品種品種的影響的影響放線菌由于放線菌由于(yuy)生長(zhǎng)的最適生長(zhǎng)的最適pH為為7左右，因此染細(xì)菌為

3、多，而霉菌生長(zhǎng)左右，因此染細(xì)菌為多，而霉菌生長(zhǎng)pH為為5左右，因此染酵母菌為多。左右，因此染酵母菌為多。青霉素發(fā)酵染菌，絕大多數(shù)雜菌都能直接產(chǎn)生青霉素酶，而另一些雜菌則可青霉素發(fā)酵染菌，絕大多數(shù)雜菌都能直接產(chǎn)生青霉素酶，而另一些雜菌則可被青霉素誘導(dǎo)而產(chǎn)生青霉素酶。不論在發(fā)酵前期、中期或后期，染有能產(chǎn)生被青霉素誘導(dǎo)而產(chǎn)生青霉素酶。不論在發(fā)酵前期、中期或后期，染有能產(chǎn)生青霉素酶的雜菌，都能使青霉素迅速破壞。青霉素酶的雜菌，都能使青霉素迅速破壞。不同(b tn)菌不同產(chǎn)品第4頁(yè)/共47頁(yè)第四頁(yè)，共48頁(yè)。鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、卡那霉素等雖不象青霉素發(fā)酵染菌那樣一無(wú)鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、卡那霉素等

4、雖不象青霉素發(fā)酵染菌那樣一無(wú)所得，但也會(huì)造成不同程度的危害。如雜菌大量消耗營(yíng)養(yǎng)干擾生產(chǎn)菌的所得，但也會(huì)造成不同程度的危害。如雜菌大量消耗營(yíng)養(yǎng)干擾生產(chǎn)菌的正常代謝；改變正常代謝；改變pH，降低產(chǎn)量。，降低產(chǎn)量?；尹S霉素、制霉菌素、克念菌素等抗生素抑制霉菌，對(duì)細(xì)菌幾乎灰黃霉素、制霉菌素、克念菌素等抗生素抑制霉菌，對(duì)細(xì)菌幾乎(jh)沒(méi)有抑制和殺滅作用。沒(méi)有抑制和殺滅作用。不同(b tn)產(chǎn)品第5頁(yè)/共47頁(yè)第五頁(yè)，共48頁(yè)。疫苗生產(chǎn)危害很大?，F(xiàn)在疫苗多采用深層培養(yǎng)，這是一類(lèi)不加提純疫苗生產(chǎn)危害很大?，F(xiàn)在疫苗多采用深層培養(yǎng)，這是一類(lèi)不加提純而直接使用的產(chǎn)品，在其深層培養(yǎng)過(guò)程中，一旦污染雜菌，不論死而直

5、接使用的產(chǎn)品，在其深層培養(yǎng)過(guò)程中，一旦污染雜菌，不論死菌、活菌或內(nèi)外毒素，都應(yīng)全部廢棄。因此，發(fā)酵罐容積菌、活菌或內(nèi)外毒素，都應(yīng)全部廢棄。因此，發(fā)酵罐容積(rngj)越越大，污染雜菌后的損失也越大。大，污染雜菌后的損失也越大。不同(b tn)產(chǎn)品第6頁(yè)/共47頁(yè)第六頁(yè)，共48頁(yè)。污染不同種類(lèi)和性質(zhì)污染不同種類(lèi)和性質(zhì)(xngzh)(xngzh)的微生物的影響的微生物的影響（1）污染噬菌體）污染噬菌體 噬菌體的感染力很強(qiáng)，傳播蔓延迅速噬菌體的感染力很強(qiáng)，傳播蔓延迅速(xn s)，也較防治，故危害極，也較防治，故危害極大。污染噬菌體后，可使發(fā)酵產(chǎn)量大幅度下降，嚴(yán)重的造成斷種，大。污染噬菌體后，可使發(fā)

6、酵產(chǎn)量大幅度下降，嚴(yán)重的造成斷種，被迫停產(chǎn)。被迫停產(chǎn)。第7頁(yè)/共47頁(yè)第七頁(yè)，共48頁(yè)。（2）污染其它雜菌）污染其它雜菌 有些雜菌會(huì)使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生大量泡沫，即使添加消泡劑也無(wú)法控有些雜菌會(huì)使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生大量泡沫，即使添加消泡劑也無(wú)法控制逃液，影響發(fā)酵制逃液，影響發(fā)酵(f jio)過(guò)程的通氣攪拌。過(guò)程的通氣攪拌。有的雜菌會(huì)使發(fā)酵有的雜菌會(huì)使發(fā)酵(f jio)液發(fā)臭、發(fā)酸，致使液發(fā)臭、發(fā)酸，致使pH下降，使不耐酸的下降，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。特別是染芽孢桿菌，由于芽孢耐熱，不易殺死，往往一次產(chǎn)品破壞。特別是染芽孢桿菌，由于芽孢耐熱，不易殺死，往往一次染菌后會(huì)反復(fù)染菌。染菌后會(huì)反復(fù)染菌。 第8頁(yè)/

7、共47頁(yè)第八頁(yè)，共48頁(yè)。染菌時(shí)間對(duì)發(fā)酵染菌時(shí)間對(duì)發(fā)酵(f jio)(f jio)的影響的影響污染時(shí)間是指用無(wú)菌檢測(cè)方法污染時(shí)間是指用無(wú)菌檢測(cè)方法(fngf)確準(zhǔn)的污染時(shí)間，不是雜菌竄入培養(yǎng)液的確準(zhǔn)的污染時(shí)間，不是雜菌竄入培養(yǎng)液的時(shí)間。時(shí)間。雜菌進(jìn)入培養(yǎng)液后，需有足夠的生長(zhǎng)、繁殖的時(shí)間才能顯現(xiàn)出來(lái)，顯現(xiàn)的時(shí)間又雜菌進(jìn)入培養(yǎng)液后，需有足夠的生長(zhǎng)、繁殖的時(shí)間才能顯現(xiàn)出來(lái)，顯現(xiàn)的時(shí)間又與污染菌量有關(guān)。污染的菌量多，顯現(xiàn)染菌所需的時(shí)間就短，污染菌量少，顯現(xiàn)與污染菌量有關(guān)。污染的菌量多，顯現(xiàn)染菌所需的時(shí)間就短，污染菌量少，顯現(xiàn)染菌的時(shí)間就長(zhǎng)。染菌的時(shí)間就長(zhǎng)。第9頁(yè)/共47頁(yè)第九頁(yè)，共48頁(yè)。（1）種子(

8、zhng zi)培養(yǎng)期染菌由于接種量較小，生產(chǎn)菌生長(zhǎng)一開(kāi)始不占優(yōu)勢(shì)，而且培養(yǎng)液中幾乎由于接種量較小，生產(chǎn)菌生長(zhǎng)一開(kāi)始不占優(yōu)勢(shì)，而且培養(yǎng)液中幾乎沒(méi)有沒(méi)有(mi yu)抗生素（產(chǎn)物）或只有很少抗生素（產(chǎn)物）。因而抗生素（產(chǎn)物）或只有很少抗生素（產(chǎn)物）。因而它防御雜菌能力低，容易污染雜菌。如在此階段染菌，應(yīng)將培養(yǎng)液它防御雜菌能力低，容易污染雜菌。如在此階段染菌，應(yīng)將培養(yǎng)液全部廢棄。全部廢棄。第10頁(yè)/共47頁(yè)第十頁(yè)，共48頁(yè)。（2）發(fā)酵）發(fā)酵(f jio)前期染菌前期染菌發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。原因原因 發(fā)酵前期菌量不很多，與雜菌沒(méi)有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)；且還未合成產(chǎn)物（抗生

9、素）或產(chǎn)生很發(fā)酵前期菌量不很多，與雜菌沒(méi)有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)；且還未合成產(chǎn)物（抗生素）或產(chǎn)生很少，抵御雜菌能力弱。少，抵御雜菌能力弱。在這個(gè)時(shí)期要特別警惕以制止染菌的發(fā)生。在這個(gè)時(shí)期要特別警惕以制止染菌的發(fā)生。染菌措施染菌措施 可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補(bǔ)料量，用酸堿調(diào)可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補(bǔ)料量，用酸堿調(diào)pH值，縮短值，縮短(sudun)培養(yǎng)周培養(yǎng)周期等措施予以補(bǔ)救。如果前期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補(bǔ)加一些營(yíng)期等措施予以補(bǔ)救。如果前期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補(bǔ)加一些營(yíng)養(yǎng)，重新接種再用。養(yǎng)，重新接種再用。第11頁(yè)/共47頁(yè)第十一頁(yè)，共48頁(yè)。（3）發(fā)酵(f jio)中

10、期染菌 發(fā)酵中期染菌會(huì)嚴(yán)重干擾產(chǎn)生菌的代謝。雜菌大量產(chǎn)酸，培養(yǎng)液發(fā)酵中期染菌會(huì)嚴(yán)重干擾產(chǎn)生菌的代謝。雜菌大量產(chǎn)酸，培養(yǎng)液pH下降；糖、下降；糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時(shí)甚至?xí)挂旬a(chǎn)生氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時(shí)甚至?xí)挂旬a(chǎn)生的產(chǎn)物分解。有時(shí)也會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大量泡沫。的產(chǎn)物分解。有時(shí)也會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大量泡沫。措施措施 降溫培養(yǎng)，減少補(bǔ)料，密切注意代謝變化情況。如果發(fā)酵單位到達(dá)一定降溫培養(yǎng)，減少補(bǔ)料，密切注意代謝變化情況。如果發(fā)酵單位到達(dá)一定水平可以水平可以(ky)提前放罐，或者抗生素生產(chǎn)中可以提前放罐，或者抗生素生產(chǎn)中可以(

11、ky)將高單位的發(fā)酵液輸送將高單位的發(fā)酵液輸送一部分到染菌罐，抑制雜菌。一部分到染菌罐，抑制雜菌。第12頁(yè)/共47頁(yè)第十二頁(yè)，共48頁(yè)。（4）發(fā)酵）發(fā)酵(f jio)后期染菌后期染菌發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特別是抗生素，對(duì)雜菌有一定的抑制或殺滅能力。發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特別是抗生素，對(duì)雜菌有一定的抑制或殺滅能力。因此如果染菌不多，對(duì)生產(chǎn)影響因此如果染菌不多，對(duì)生產(chǎn)影響(yngxing)不大。如果染菌嚴(yán)重，又破壞性較大，可以不大。如果染菌嚴(yán)重，又破壞性較大，可以提前放罐。提前放罐。第13頁(yè)/共47頁(yè)第十三頁(yè)，共48頁(yè)。 發(fā)酵發(fā)酵(f jio)染菌對(duì)提煉和產(chǎn)品質(zhì)量的影響染菌

12、對(duì)提煉和產(chǎn)品質(zhì)量的影響1 1、發(fā)酵染菌對(duì)過(guò)濾、發(fā)酵染菌對(duì)過(guò)濾(gul)(gul)的的影響影響染菌的發(fā)酵液一般發(fā)粘，菌體大多數(shù)自溶，所以在發(fā)酵液過(guò)濾時(shí)不染菌的發(fā)酵液一般發(fā)粘，菌體大多數(shù)自溶，所以在發(fā)酵液過(guò)濾時(shí)不能或很難形成濾餅，導(dǎo)致過(guò)濾困難。即使能或很難形成濾餅，導(dǎo)致過(guò)濾困難。即使(jsh)采取加熱、冷卻、采取加熱、冷卻、添加助濾劑等措施，使部分蛋白質(zhì)凝聚，但效果并不理想。添加助濾劑等措施，使部分蛋白質(zhì)凝聚，但效果并不理想。第14頁(yè)/共47頁(yè)第十四頁(yè)，共48頁(yè)。污染雜菌的種類(lèi)對(duì)過(guò)濾的影響程度有差異，如污染霉菌時(shí)，影污染雜菌的種類(lèi)對(duì)過(guò)濾的影響程度有差異，如污染霉菌時(shí)，影響較小，而污染細(xì)菌時(shí)很難過(guò)濾

13、。由于過(guò)濾困難，過(guò)濾時(shí)間拉響較小，而污染細(xì)菌時(shí)很難過(guò)濾。由于過(guò)濾困難，過(guò)濾時(shí)間拉長(zhǎng)，影響發(fā)酵液儲(chǔ)罐和過(guò)濾設(shè)備長(zhǎng)，影響發(fā)酵液儲(chǔ)罐和過(guò)濾設(shè)備(shbi)的周轉(zhuǎn)使用，破壞了的周轉(zhuǎn)使用，破壞了生產(chǎn)平衡。染菌發(fā)酵液還會(huì)因過(guò)濾困難而大幅度降低過(guò)濾收率，生產(chǎn)平衡。染菌發(fā)酵液還會(huì)因過(guò)濾困難而大幅度降低過(guò)濾收率，直接影響提煉總收率。直接影響提煉總收率。第15頁(yè)/共47頁(yè)第十五頁(yè)，共48頁(yè)。2、發(fā)酵染菌對(duì)提煉(tlin)的影響染菌發(fā)酵液中含有比正常發(fā)酵液更多的水溶性蛋白和其它雜質(zhì)。染菌發(fā)酵液中含有比正常發(fā)酵液更多的水溶性蛋白和其它雜質(zhì)。采用有機(jī)溶劑萃取的提煉工藝，則極易發(fā)生乳化，很難使水相和溶劑相分離，影響進(jìn)一步

14、采用有機(jī)溶劑萃取的提煉工藝，則極易發(fā)生乳化，很難使水相和溶劑相分離，影響進(jìn)一步提純。提純。采用直接用離子交換樹(shù)脂的提取采用直接用離子交換樹(shù)脂的提取(tq)工藝，如鏈霉素、慶大霉素，染菌后大量雜菌黏附工藝，如鏈霉素、慶大霉素，染菌后大量雜菌黏附在離子交換樹(shù)脂表面，或被離子交換樹(shù)脂吸附，大大降低離子交換樹(shù)脂的交換容量，而且在離子交換樹(shù)脂表面，或被離子交換樹(shù)脂吸附，大大降低離子交換樹(shù)脂的交換容量，而且有的雜菌很難用水沖洗干凈，洗脫時(shí)與產(chǎn)物一起進(jìn)入洗脫液，影響進(jìn)一步提純。有的雜菌很難用水沖洗干凈，洗脫時(shí)與產(chǎn)物一起進(jìn)入洗脫液，影響進(jìn)一步提純。第16頁(yè)/共47頁(yè)第十六頁(yè)，共48頁(yè)。 染菌的原因染菌的原因(

15、yunyn)（一）發(fā)酵（一）發(fā)酵(f jio)染菌率計(jì)算基準(zhǔn)染菌率計(jì)算基準(zhǔn)總?cè)揪手敢荒臧l(fā)酵總?cè)揪手敢荒臧l(fā)酵(f jio)染菌的批（次）數(shù)與總投料批（次）數(shù)之比的染菌的批（次）數(shù)與總投料批（次）數(shù)之比的百分率。染菌批次數(shù)應(yīng)包括染菌后培養(yǎng)基經(jīng)重新滅菌，又再次染菌的批次數(shù)百分率。染菌批次數(shù)應(yīng)包括染菌后培養(yǎng)基經(jīng)重新滅菌，又再次染菌的批次數(shù)在內(nèi)。這是習(xí)慣的計(jì)算方法，也是我國(guó)的統(tǒng)一計(jì)算方法。在內(nèi)。這是習(xí)慣的計(jì)算方法，也是我國(guó)的統(tǒng)一計(jì)算方法?？?cè)揪士側(cè)揪?=%100*總總投投料料批批（次次）數(shù)數(shù)發(fā)發(fā)酵酵染染菌菌批批（次次）數(shù)數(shù)第17頁(yè)/共47頁(yè)第十七頁(yè)，共48頁(yè)。（二）染菌原因（二）染菌原因 造成染

16、菌的因素很多，但總結(jié)幾十年的經(jīng)驗(yàn)，造成染菌的因素很多，但總結(jié)幾十年的經(jīng)驗(yàn)，對(duì)絕大部分罐批染菌的原因是比較清楚的，但在對(duì)絕大部分罐批染菌的原因是比較清楚的，但在實(shí)際生產(chǎn)中發(fā)酵染菌率仍比較高，可以說(shuō)產(chǎn)生這實(shí)際生產(chǎn)中發(fā)酵染菌率仍比較高，可以說(shuō)產(chǎn)生這種現(xiàn)象大多數(shù)是由于工作中種現(xiàn)象大多數(shù)是由于工作中“明知故犯明知故犯”“”“不負(fù)不負(fù)責(zé)任責(zé)任”和和“僥幸心理僥幸心理”所造成的。例如，滅菌的所造成的。例如，滅菌的蒸汽壓不足蒸汽壓不足(bz)不能滅菌；設(shè)備有滲漏不能進(jìn)不能滅菌；設(shè)備有滲漏不能進(jìn)罐等等都是眾所周知的，但因?yàn)橛袃e幸心理還是罐等等都是眾所周知的，但因?yàn)橛袃e幸心理還是照樣滅菌，進(jìn)罐，結(jié)果以污染雜菌而告

17、終?，F(xiàn)將照樣滅菌，進(jìn)罐，結(jié)果以污染雜菌而告終。現(xiàn)將我們收集到的國(guó)內(nèi)外幾家抗生素工廠發(fā)酵染菌原我們收集到的國(guó)內(nèi)外幾家抗生素工廠發(fā)酵染菌原因列于下：因列于下：第18頁(yè)/共47頁(yè)第十八頁(yè)，共48頁(yè)。日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來(lái)抗生素發(fā)酵染菌原因分析日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來(lái)抗生素發(fā)酵染菌原因分析 項(xiàng)目項(xiàng)目(xingm) (xingm) 百分率百分率% %種子帶菌或懷疑種子帶菌種子帶菌或懷疑種子帶菌 接種時(shí)罐壓跌零接種時(shí)罐壓跌零 培養(yǎng)基滅菌不透培養(yǎng)基滅菌不透 總空氣系統(tǒng)有菌總空氣系統(tǒng)有菌 泡沫冒頂泡沫冒頂 夾套穿孔夾套穿孔 盤(pán)管穿孔盤(pán)管穿孔 接種管穿孔接種管穿孔 閥門(mén)滲漏閥門(mén)滲漏 攪拌軸密封滲漏

18、攪拌軸密封滲漏 罐蓋漏罐蓋漏 其它設(shè)備滲漏其它設(shè)備滲漏 操作原因操作原因 原因不明原因不明 第19頁(yè)/共47頁(yè)第十九頁(yè)，共48頁(yè)。上海第三制藥廠染菌原因分析上海第三制藥廠染菌原因分析 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率% %種子帶菌種子帶菌 盤(pán)管盤(pán)管(pn (pn un)un)穿孔穿孔 閥門(mén)滲漏閥門(mén)滲漏 空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有菌 管理不善管理不善 其它其它 原因不明原因不明 第20頁(yè)/共47頁(yè)第二十頁(yè)，共48頁(yè)。管理不善而染菌的有管理不善而染菌的有3131個(gè)罐批，占經(jīng)分析有下表所列原因：個(gè)罐批，占經(jīng)分析有下表所列原因： 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率% %進(jìn)罐前未做設(shè)備嚴(yán)密度檢查進(jìn)罐前未做設(shè)備嚴(yán)密度檢查 接種違反

19、操作規(guī)程接種違反操作規(guī)程 檢修質(zhì)量檢修質(zhì)量(zhling)(zhling)缺乏驗(yàn)收制度缺乏驗(yàn)收制度 操作不熟練操作不熟練 配料違反工藝規(guī)程配料違反工藝規(guī)程 調(diào)度不當(dāng)調(diào)度不當(dāng) 第21頁(yè)/共47頁(yè)第二十一頁(yè)，共48頁(yè)。第四制藥廠鏈霉素發(fā)酵染菌原因分析第四制藥廠鏈霉素發(fā)酵染菌原因分析(fnx)(fnx) 項(xiàng)目項(xiàng)目 百分率百分率% %外界帶入雜菌（取樣、補(bǔ)料）外界帶入雜菌（取樣、補(bǔ)料） 設(shè)備穿孔設(shè)備穿孔 空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有菌 停電罐壓跌零停電罐壓跌零 接種接種 蒸汽壓力不足或蒸汽量不足蒸汽壓力不足或蒸汽量不足 管理問(wèn)題管理問(wèn)題 7.80 7.80 操作違反規(guī)程操作違反規(guī)程 種子帶菌種子帶菌 原因不

20、明原因不明 第22頁(yè)/共47頁(yè)第二十二頁(yè)，共48頁(yè)。造成染菌的主要(zhyo)原因總結(jié)1 1、設(shè)備、設(shè)備(shbi)(shbi)滲漏滲漏 設(shè)備滲漏包括夾套穿孔設(shè)備滲漏包括夾套穿孔(chunkng)、盤(pán)管穿孔、盤(pán)管穿孔(chunkng)、接種管穿、接種管穿孔孔(chunkng)、閥門(mén)滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏等。從日、閥門(mén)滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏等。從日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所對(duì)染菌原因分析發(fā)現(xiàn)，這類(lèi)染菌占，上海三廠的本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所對(duì)染菌原因分析發(fā)現(xiàn)，這類(lèi)染菌占，上海三廠的分析這類(lèi)染菌為。所以說(shuō)加強(qiáng)設(shè)備本身及附屬零部件的嚴(yán)密度檢查，對(duì)制分析這類(lèi)染菌為。所以說(shuō)加強(qiáng)設(shè)備本

21、身及附屬零部件的嚴(yán)密度檢查，對(duì)制服染菌是極其主要的，也是重要的。服染菌是極其主要的，也是重要的。第23頁(yè)/共47頁(yè)第二十三頁(yè)，共48頁(yè)。2 2、空氣、空氣(kngq)(kngq)帶菌帶菌從日本工業(yè)技術(shù)院和上海第四制藥廠分析空氣帶菌而造成的染菌分別為和從日本工業(yè)技術(shù)院和上海第四制藥廠分析空氣帶菌而造成的染菌分別為和 26%。國(guó)內(nèi)外空氣除菌技術(shù)雖已有較大改善，但仍然沒(méi)有使染菌率降低到理。國(guó)內(nèi)外空氣除菌技術(shù)雖已有較大改善，但仍然沒(méi)有使染菌率降低到理想的程度。因?yàn)橄氲某潭?。因?yàn)?yn wi)空氣除菌系統(tǒng)較為復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不慎便會(huì)導(dǎo)空氣除菌系統(tǒng)較為復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不慎便會(huì)導(dǎo)致空氣除菌失敗。致空氣除

22、菌失敗。第24頁(yè)/共47頁(yè)第二十四頁(yè)，共48頁(yè)。3、種子(zhng zi)帶菌種子帶菌又分為種子本身帶菌和種子培養(yǎng)過(guò)程中染菌。加強(qiáng)種種子帶菌又分為種子本身帶菌和種子培養(yǎng)過(guò)程中染菌。加強(qiáng)種子管理，嚴(yán)格無(wú)菌操作，種子本身帶菌是可以克服子管理，嚴(yán)格無(wú)菌操作，種子本身帶菌是可以克服(kf)的。的。種子培養(yǎng)過(guò)程染菌與發(fā)酵一樣有許多因素造成。種子培養(yǎng)過(guò)程染菌與發(fā)酵一樣有許多因素造成。第25頁(yè)/共47頁(yè)第二十五頁(yè)，共48頁(yè)。4 4、滅菌、滅菌(mi jn)(mi jn)不徹底不徹底滅菌技術(shù)的好壞與滅菌質(zhì)量很有關(guān)系滅菌技術(shù)的好壞與滅菌質(zhì)量很有關(guān)系蒸汽通入培養(yǎng)基，升溫快慢、保溫時(shí)間蒸汽通入培養(yǎng)基，升溫快慢、保溫

23、時(shí)間產(chǎn)生過(guò)多泡沫產(chǎn)生過(guò)多泡沫蒸汽總壓是否達(dá)到要求標(biāo)準(zhǔn)蒸汽總壓是否達(dá)到要求標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境中的雜菌數(shù)量因季節(jié)而有很大差別。如上海第四制藥廠在卡那霉素生產(chǎn)環(huán)境中的雜菌數(shù)量因季節(jié)而有很大差別。如上海第四制藥廠在卡那霉素生產(chǎn)中，于炎熱的夏季將連續(xù)滅菌預(yù)熱至中，于炎熱的夏季將連續(xù)滅菌預(yù)熱至800C的培養(yǎng)基采樣培養(yǎng)，可發(fā)現(xiàn)的培養(yǎng)基采樣培養(yǎng)，可發(fā)現(xiàn)(fxin)無(wú)法計(jì)數(shù)的大量的芽孢桿菌；而在冬季取樣的培養(yǎng)中，則僅發(fā)現(xiàn)無(wú)法計(jì)數(shù)的大量的芽孢桿菌；而在冬季取樣的培養(yǎng)中，則僅發(fā)現(xiàn)(fxin)23個(gè)芽孢桿菌。故染菌率因季節(jié)不同而發(fā)生明顯變化。個(gè)芽孢桿菌。故染菌率因季節(jié)不同而發(fā)生明顯變化。第26頁(yè)/共47頁(yè)第二十六頁(yè)，共48頁(yè)。

24、l原材料儲(chǔ)存和保管，如液胨、玉米漿、母液糖等有機(jī)原料原材料儲(chǔ)存和保管，如液胨、玉米漿、母液糖等有機(jī)原料雜菌雜菌的數(shù)量的數(shù)量l發(fā)酵罐、培養(yǎng)基配制罐等設(shè)備的清洗質(zhì)量發(fā)酵罐、培養(yǎng)基配制罐等設(shè)備的清洗質(zhì)量有無(wú)有無(wú)(yu w)滅菌滅菌的死角的死角l對(duì)減少或避免染菌仍然是十分必要的。對(duì)減少或避免染菌仍然是十分必要的。 第27頁(yè)/共47頁(yè)第二十七頁(yè)，共48頁(yè)。5 5、技術(shù)管理、技術(shù)管理(gunl)(gunl)不善不善技術(shù)管理就是技術(shù)管理就是(jish)要對(duì)發(fā)酵每個(gè)環(huán)節(jié)嚴(yán)格控制，發(fā)酵中稍有不要對(duì)發(fā)酵每個(gè)環(huán)節(jié)嚴(yán)格控制，發(fā)酵中稍有不慎就可能染菌，所以不能有僥幸心理而放松管理慎就可能染菌，所以不能有僥幸心理而放松管

25、理第28頁(yè)/共47頁(yè)第二十八頁(yè)，共48頁(yè)。三、無(wú)菌狀況三、無(wú)菌狀況(zhungkung)的的檢測(cè)檢測(cè)1 1、環(huán)境無(wú)菌的檢查、環(huán)境無(wú)菌的檢查(jinch)(jinch)塵埃粒子檢測(cè)塵埃粒子檢測(cè)無(wú)菌平板檢測(cè)無(wú)菌平板檢測(cè)第29頁(yè)/共47頁(yè)第二十九頁(yè)，共48頁(yè)。2 2、種子及發(fā)酵液無(wú)菌狀況、種子及發(fā)酵液無(wú)菌狀況(zhungkung)(zhungkung)檢測(cè)檢測(cè)酚紅肉湯培養(yǎng)基檢測(cè)(jin c)平板劃線顯微鏡觀察第30頁(yè)/共47頁(yè)第三十頁(yè)，共48頁(yè)。四、染菌情況(qngkung)分析染菌的原因有多種，對(duì)于實(shí)際情況如何(rh)分析呢？1、單罐染菌不是系統(tǒng)問(wèn)題，而是該罐本身(bnshn)的問(wèn)題。如種子帶菌、

26、培養(yǎng)基滅菌不徹底、罐有滲漏、分過(guò)濾器失效第31頁(yè)/共47頁(yè)第三十一頁(yè)，共48頁(yè)。2、多罐染菌系統(tǒng)問(wèn)題，如空氣過(guò)濾系統(tǒng)有問(wèn)題，特別是總過(guò)濾器長(zhǎng)期沒(méi)有(mi yu)檢查，可能受潮失效；移種或補(bǔ)料的分配站有滲漏或滅菌不徹底3、前期染菌種子帶菌、培養(yǎng)基滅菌(mi jn)不徹底第32頁(yè)/共47頁(yè)第三十二頁(yè)，共48頁(yè)。4、中后期染菌補(bǔ)料的料液滅菌不徹底(chd)或補(bǔ)料管道、閥門(mén)滲漏，一般不會(huì)是種子問(wèn)題第33頁(yè)/共47頁(yè)第三十三頁(yè)，共48頁(yè)。五、染菌的防止五、染菌的防止(fngzh)1 1、防止、防止(fngzh)(fngzh)種子帶菌種子帶菌l制備種子時(shí)對(duì)沙土管及搖瓶嚴(yán)格加以控制。l沙土制備時(shí)要多次間歇滅

27、菌l注意(zh y)接種時(shí)的無(wú)菌操作l子瓶、母瓶的移種和培養(yǎng)l無(wú)菌室和搖床間都要保持清潔。無(wú)菌室內(nèi)要供給恒溫恒濕的無(wú)菌空氣，還要裝紫外燈用以滅菌，或用化學(xué)藥品滅菌。第34頁(yè)/共47頁(yè)第三十四頁(yè)，共48頁(yè)。無(wú)菌室要求無(wú)菌室要求(yoqi)在無(wú)菌室中裝有紫外燈，打開(kāi)紫外燈，照半小時(shí)，關(guān)燈后15分鐘再接種。用消毒藥水如新潔而滅配成1/1000濃度擦桌子、拖地，開(kāi)啟(kiq)超凈臺(tái)的通風(fēng)，接種時(shí)必須在超凈臺(tái)上操作，超凈臺(tái)裝有一臺(tái)鼓風(fēng)機(jī)，進(jìn)風(fēng)口有一粗過(guò)濾器，出風(fēng)口有高效過(guò)濾器，保證無(wú)菌風(fēng)從超凈臺(tái)吹出，外界有菌空氣不可能進(jìn)入接種區(qū)域，保證無(wú)菌條件。接種人員必須穿好無(wú)菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干凈。第3

28、5頁(yè)/共47頁(yè)第三十五頁(yè)，共48頁(yè)。第36頁(yè)/共47頁(yè)第三十六頁(yè)，共48頁(yè)。2 2、防止、防止(fngzh)(fngzh)設(shè)備滲漏設(shè)備滲漏發(fā)酵發(fā)酵(f jio)(f jio)設(shè)備及附件由于化學(xué)腐蝕、電化學(xué)腐蝕，物料與設(shè)備摩擦造成設(shè)備及附件由于化學(xué)腐蝕、電化學(xué)腐蝕，物料與設(shè)備摩擦造成機(jī)械磨損以及加工制作不良等原因會(huì)導(dǎo)致設(shè)備及附件滲漏。機(jī)械磨損以及加工制作不良等原因會(huì)導(dǎo)致設(shè)備及附件滲漏。設(shè)備上一旦滲漏，就會(huì)造成染菌，例如冷卻盤(pán)管、夾套穿孔滲漏，有菌的冷卻設(shè)備上一旦滲漏，就會(huì)造成染菌，例如冷卻盤(pán)管、夾套穿孔滲漏，有菌的冷卻水便會(huì)通過(guò)漏孔而進(jìn)入發(fā)酵水便會(huì)通過(guò)漏孔而進(jìn)入發(fā)酵(f jio)(f jio)罐

29、中招致染菌。閥門(mén)滲漏也會(huì)使帶菌的罐中招致染菌。閥門(mén)滲漏也會(huì)使帶菌的空氣或水進(jìn)入發(fā)酵空氣或水進(jìn)入發(fā)酵(f jio)(f jio)罐而造成染菌。罐而造成染菌。設(shè)備上的漏隙如果肉眼能看見(jiàn)，容易發(fā)現(xiàn)，也容易治理；但有的微小泄漏，肉設(shè)備上的漏隙如果肉眼能看見(jiàn)，容易發(fā)現(xiàn)，也容易治理；但有的微小泄漏，肉眼看不見(jiàn)，必須通過(guò)一定的試漏方法才能發(fā)現(xiàn)眼看不見(jiàn)，必須通過(guò)一定的試漏方法才能發(fā)現(xiàn) 。第37頁(yè)/共47頁(yè)第三十七頁(yè)，共48頁(yè)。試漏方法可采用水壓試漏法。即被測(cè)設(shè)備的出口處裝上壓力表，將水壓入設(shè)備，試漏方法可采用水壓試漏法。即被測(cè)設(shè)備的出口處裝上壓力表，將水壓入設(shè)備，待設(shè)備中壓力上升待設(shè)備中壓力上升(shngsh

30、ng)(shngshng)到要求壓力，關(guān)閉進(jìn)出水，看壓力有否下到要求壓力，關(guān)閉進(jìn)出水，看壓力有否下降。壓力下降則有滲漏。但有些滲漏很小，看不出何處漏水，可以用稀堿溶液降。壓力下降則有滲漏。但有些滲漏很小，看不出何處漏水，可以用稀堿溶液壓入設(shè)備，然后用蘸有酚酞的紗布揩，只要酚酞能變紅處即為滲漏處。壓入設(shè)備，然后用蘸有酚酞的紗布揩，只要酚酞能變紅處即為滲漏處。 閥門(mén)滲漏可以用集氣桶來(lái)試漏。方法是先在集氣桶中裝滿(mǎn)水，然后關(guān)閉所閥門(mén)滲漏可以用集氣桶來(lái)試漏。方法是先在集氣桶中裝滿(mǎn)水，然后關(guān)閉所有閥門(mén)，向發(fā)酵罐中通入空氣，使罐壓上升有閥門(mén)，向發(fā)酵罐中通入空氣，使罐壓上升(shngshng)(shngshn

31、g)到要求壓力，一到要求壓力，一般一公斤以上。由于集氣桶連通各管道，觀察哪根管子冒泡，即這根管子的閥般一公斤以上。由于集氣桶連通各管道，觀察哪根管子冒泡，即這根管子的閥門(mén)漏氣。門(mén)漏氣。第38頁(yè)/共47頁(yè)第三十八頁(yè)，共48頁(yè)。3 3、防止培養(yǎng)基滅菌、防止培養(yǎng)基滅菌(mi jn)(mi jn)不徹不徹底底培養(yǎng)基滅菌(mi jn)方法高壓蒸汽滅菌(mi jn)分批滅菌(mi jn) 1210C，30分鐘連續(xù)滅菌(mi jn) 罐溫1251300C，3045分鐘第39頁(yè)/共47頁(yè)第三十九頁(yè)，共48頁(yè)。5 5、發(fā)酵、發(fā)酵(f jio)(f jio)染菌后的措施染菌后的措施l染菌后的培養(yǎng)基必須滅菌后才可放

32、下水道。滅菌方法：可通蒸汽滅菌，也可加入過(guò)氧乙酸等化學(xué)(huxu)滅菌劑攪拌半小時(shí)，才放下水道。否則由于各罐的管道相通，會(huì)造成其它罐的染菌，而且直接放下水道也會(huì)造成空氣的污染而導(dǎo)致其它罐批染菌。l凡染菌的罐要找染菌的原因，對(duì)癥下藥，該罐也要徹底清洗，進(jìn)行空罐消毒，才可進(jìn)罐。l染菌厲害時(shí)，車(chē)間環(huán)境要用石灰消毒，空氣用甲醛熏蒸。特別，若染噬菌體，空氣必須用甲醛蒸汽消毒。第40頁(yè)/共47頁(yè)第四十頁(yè)，共48頁(yè)。四、染噬菌體的防治四、染噬菌體的防治(fngzh)（一）染噬菌體對(duì)發(fā)酵（一）染噬菌體對(duì)發(fā)酵(f jio)的的影響影響發(fā)酵過(guò)程中如果受噬菌體的侵染，一般發(fā)生溶菌，隨之出現(xiàn)發(fā)酵遲緩或停止，而且受噬菌體感染后，往往會(huì)反復(fù)連續(xù)感染，使生產(chǎn)無(wú)法進(jìn)行，甚至使種子(zhng zi)全部喪失。第41頁(yè)/共47頁(yè)第四十一頁(yè)，共48頁(yè)。染噬菌體表現(xiàn)為：1、鏡檢可發(fā)現(xiàn)菌體數(shù)量明顯減少，菌體不規(guī)則，嚴(yán)重時(shí)完全看不到菌體，且是在短時(shí)間內(nèi)菌體自溶。2、發(fā)酵pH值逐漸上升，48小時(shí)之內(nèi)可達(dá)以上，不再下降。3、發(fā)酵液殘?zhí)歉?，有刺激臭味，粘度大，泡沫多?、生產(chǎn)量甚少或增長(zhǎng)(zngzhng)緩慢或停止有無(wú)染噬菌體，根本的要做噬菌斑檢驗(yàn)第42頁(yè)/共47頁(yè)第四十二頁(yè)，共48頁(yè)。（二）產(chǎn)生（二）產(chǎn)生(chnshng)噬菌體噬菌體的原因的原因通常在工廠投產(chǎn)初期并不感到噬菌