艾滋病常用實驗室檢測及臨床意義分析

1、艾滋病常用實驗室檢測艾滋病常用實驗室檢測及臨床意義分析及臨床意義分析 廣西疾病預(yù)防控制中心廣西疾病預(yù)防控制中心 梁富雄梁富雄 2013.42013.4主要內(nèi)容主要內(nèi)容nHIVHIV抗體檢測抗體檢測nCD4CD4檢測檢測n病毒載量檢測病毒載量檢測n實驗室安全防護(hù)實驗室安全防護(hù)HIVHIV抗體抗體- -感感染染成成功功抗抗體體轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)陽陽診診斷斷艾艾滋滋病病死死亡亡- 4-8周周-出出現(xiàn)現(xiàn)癥癥狀狀 2-10 年年 1年年 0.5-2年年 HIV抗體抗體+ 無癥狀無癥狀有癥狀有癥狀HIV抗體抗體+艾滋病艾滋病感染艾滋病毒后的自然發(fā)展過程感染艾滋病毒后的自然發(fā)展過程急性感急性感染期染期潛伏期潛伏期發(fā)病期發(fā)

2、病期艾滋病感染者艾滋病感染者艾滋病患者艾滋病患者窗口期窗口期1234急性感染期急性感染期KINETICS OF VIRAL MARKERS DURING PRIMARY HIV-1 INFECTIONHIV RNAHIV p24 antigenHIV antibodiesHIV感染后血液中核酸、抗原和抗體動態(tài)變化感染后血液中核酸、抗原和抗體動態(tài)變化窗口期暴露天數(shù)檢測域艾滋病實驗室分類艾滋病實驗室分類n篩查實驗室（篩查實驗室（CD4CD4檢測實驗室）檢測實驗室）n確證實驗室（確證實驗室（CD4CD4、病毒載量實驗室、病毒載量實驗室) 中國中國HIVHIV實驗室網(wǎng)絡(luò)實驗室網(wǎng)絡(luò) 國家艾滋病參比實驗室

3、國家艾滋病參比實驗室 中國中國CDCCDC性艾中心性艾中心 艾滋病確認(rèn)中心實驗室艾滋病確認(rèn)中心實驗室 省、市省、市 艾滋病確認(rèn)實驗室艾滋病確認(rèn)實驗室 省、市省、市 艾滋病篩查中心實驗室艾滋病篩查中心實驗室 省、市、州、縣省、市、州、縣 艾滋病篩查實驗室艾滋病篩查實驗室 省、市、州、縣省、市、州、縣 艾滋病檢測點(diǎn)艾滋病檢測點(diǎn) 鄉(xiāng)、鎮(zhèn)鄉(xiāng)、鎮(zhèn)HIVHIV實驗室條件實驗室條件n人員人員: :經(jīng)過專門技術(shù)培訓(xùn)經(jīng)過專門技術(shù)培訓(xùn), ,取得培訓(xùn)合格證取得培訓(xùn)合格證/ /上崗證上崗證; ;n環(huán)境環(huán)境: :功能分區(qū)功能分區(qū), ,符合生物安全二級要求符合生物安全二級要求; ;n儀器設(shè)備儀器設(shè)備: :按要求配備，按要

4、求配備，滿足檢測要求。滿足檢測要求。 實驗室必須經(jīng)過資質(zhì)認(rèn)證實驗室必須經(jīng)過資質(zhì)認(rèn)證/ /驗收！驗收！HIVHIV病原體診斷病原體診斷 HIV HIV抗體檢測抗體檢測 艾滋病病毒抗原檢測（艾滋病病毒抗原檢測（P24P24） HIVHIV核酸檢測核酸檢測 病毒分離病毒分離檢測樣品檢測樣品n血清、血漿血清、血漿n尿液尿液n抗凝全血（抗凝全血（CBCCBC、CD4CD4、VL)VL)nPBMCPBMC（外周血淋巴細(xì)胞）（外周血淋巴細(xì)胞）樣品的采集和處理樣品的采集和處理 一、樣品的采集一、樣品的采集 最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血( (抗凝抗凝血血) )

5、。 唾液或尿液有時也可作為測試樣品。常用樣品的采唾液或尿液有時也可作為測試樣品。常用樣品的采集方法如下：集方法如下： （一）采集樣品應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范及檢測試劑盒要（一）采集樣品應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范及檢測試劑盒要求進(jìn)行。求進(jìn)行。 （二）采集標(biāo)本時應(yīng)注意安全，操作應(yīng)戴雙層手套。建（二）采集標(biāo)本時應(yīng)注意安全，操作應(yīng)戴雙層手套。建議采用真空采血管及蝶形針具，以免直接接觸血液。議采用真空采血管及蝶形針具，以免直接接觸血液。 （三）血清樣品采集：用注射器抽靜脈血（三）血清樣品采集：用注射器抽靜脈血3 35ml5ml，室溫放置，室溫放置1-21-2小時，待血液凝固或用小時，待血液凝固或用3000rpm3

6、000rpm離心離心1515分鐘，吸出血清備分鐘，吸出血清備用。用。 （四）抗凝血樣品采集（四）抗凝血樣品采集( (免疫功能免疫功能CD4/CD8CD4/CD8測定、血液常規(guī)測定、血液常規(guī)CBCCBC測定、病毒載量）：用加有抗凝劑（測定、病毒載量）：用加有抗凝劑（K K3 3EDTAEDTA）的真空采血）的真空采血管或試管抽取靜脈血，反復(fù)輕搖，常溫管或試管抽取靜脈血，反復(fù)輕搖，常溫6 6小時以內(nèi)送達(dá)實驗小時以內(nèi)送達(dá)實驗室檢測室檢測CD4/CD8CD4/CD8或或CBCCBC后，再分離血漿和血細(xì)胞備用。后，再分離血漿和血細(xì)胞備用。 （五）血清或血漿樣品應(yīng)存放于（五）血清或血漿樣品應(yīng)存放于-20-

7、20， 短期內(nèi)短期內(nèi)（1 1周）進(jìn)行檢測的樣品可存放于周）進(jìn)行檢測的樣品可存放于2-82-8。 （六）用于抗原和核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品應(yīng)（六）用于抗原和核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品應(yīng)凍存于凍存于-20-20以下，進(jìn)行病毒以下，進(jìn)行病毒 RNARNA檢測的樣品如長期檢測的樣品如長期（3 3個月以上）保存應(yīng)置于個月以上）保存應(yīng)置于-80-80。二、樣品的運(yùn)送二、樣品的運(yùn)送 （一）抗體檢測實驗室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，血（一）抗體檢測實驗室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，血液常規(guī)、液常規(guī)、CD4CD4和病毒載量等要求送抗凝血。樣品應(yīng)置于帶和病毒載量等要求送抗凝血。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有

8、明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的編號蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間。或受檢者姓名、種類和采集時間。 （二）將試管放入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于（二）將試管放入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。消毒處理。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。如果路程較遠(yuǎn)或氣候炎熱，應(yīng)在如果路程較遠(yuǎn)或氣候炎熱，應(yīng)在2-82-8條件下運(yùn)送?？鼓龡l件下運(yùn)送?？鼓涂贵w檢測樣品路程短可常溫送檢。包裝內(nèi)需附有送檢血和抗體檢測樣品路程短可常溫送檢。包裝內(nèi)需附有送檢單。單。 （三）特殊情況下如需對個別樣品進(jìn)行復(fù)測，可以用特快

9、（三）特殊情況下如需對個別樣品進(jìn)行復(fù)測，可以用特快專遞形式投寄，但必須將盛樣品的試管包扎好，保證不會專遞形式投寄，但必須將盛樣品的試管包扎好，保證不會破碎和溢漏。破碎和溢漏。三、樣品的接收三、樣品的接收 （一）含有感染性樣品的包裹必須在具有處理感染源設(shè)備（一）含有感染性樣品的包裹必須在具有處理感染源設(shè)備的實驗室內(nèi)由經(jīng)過培訓(xùn)的工作人員打開，用后的包裹應(yīng)進(jìn)的實驗室內(nèi)由經(jīng)過培訓(xùn)的工作人員打開，用后的包裹應(yīng)進(jìn)行消毒。行消毒。 （二）核對標(biāo)本與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。（二）核對標(biāo)本與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。 （三）檢查樣品的狀況，記錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、（三）檢查樣品的狀況，記

10、錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。血脂過多以及黃疸等情況。 （四）因特殊臨床治療導(dǎo)致自發(fā)熒光的樣品不可用于熒光（四）因特殊臨床治療導(dǎo)致自發(fā)熒光的樣品不可用于熒光方法測試。方法測試。HIVHIV抗體檢測的目的抗體檢測的目的n診斷診斷 確定個體確定個體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。進(jìn)行的體檢等。n血液篩查血液篩查防止輸血傳播防止輸血傳播HIV，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。n監(jiān)測監(jiān)測 了解不同人群了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點(diǎn)人群

11、感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點(diǎn)人群和一般人群。和一般人群。HIVHIV抗體檢測的方法抗體檢測的方法n篩查試驗（包括初篩和復(fù)檢）：酶聯(lián)免疫吸附試驗篩查試驗（包括初篩和復(fù)檢）：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA)ELISA)、化學(xué)發(fā)光試驗、明膠顆粒凝聚試驗（、化學(xué)發(fā)光試驗、明膠顆粒凝聚試驗（PAPA）、免）、免疫滲濾試驗、免疫層析試驗等疫滲濾試驗、免疫層析試驗等n確證試驗：免疫印跡試驗（確證試驗：免疫印跡試驗（WB)WB)、條帶免疫試驗、放射免、條帶免疫試驗、放射免疫沉淀試驗、免疫熒光試驗等。疫沉淀試驗、免疫熒光試驗等。艾滋病抗體確證試驗艾滋病抗體確證試驗 免疫印跡法（免疫印跡法（WBWB）

12、為目前最常用的）為目前最常用的HIVHIV抗體確認(rèn)方法，抗體確認(rèn)方法，被公認(rèn)為判斷被公認(rèn)為判斷HIVHIV感染的黃金方法。感染的黃金方法。艾滋病抗體檢測試劑使用條件艾滋病抗體檢測試劑使用條件 HIVHIV篩查或確認(rèn)試劑必須是篩查或確認(rèn)試劑必須是HIV/1+2HIV/1+2混合型，國家衛(wèi)生混合型，國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)或注冊，經(jīng)過國家醫(yī)藥監(jiān)督管理局批批檢合格，臨部批準(zhǔn)或注冊，經(jīng)過國家醫(yī)藥監(jiān)督管理局批批檢合格，臨床試劑評估優(yōu)良，并且在有效期內(nèi)。床試劑評估優(yōu)良，并且在有效期內(nèi)。檢測要點(diǎn)檢測要點(diǎn)1 1、嚴(yán)格按照試劑說明書操作，不得擅自更改。、嚴(yán)格按照試劑說明書操作，不得擅自更改。2 2、注意防止交叉污染。、注

13、意防止交叉污染。3 3、嚴(yán)格遵守實驗室操作規(guī)程。、嚴(yán)格遵守實驗室操作規(guī)程。4 4、認(rèn)真做好實驗記錄。、認(rèn)真做好實驗記錄。HIVHIV抗體檢測結(jié)果及結(jié)論抗體檢測結(jié)果及結(jié)論 HIVHIV抗體篩查結(jié)果陰性反應(yīng)可做抗體篩查結(jié)果陰性反應(yīng)可做HIVHIV抗體陰性報告，抗體陰性報告，篩查試驗呈陽性反應(yīng)，可出具篩查試驗呈陽性反應(yīng)，可出具“HIVHIV抗體待復(fù)查抗體待復(fù)查”報告，報告，不能出不能出HIVHIV抗體陽性報告抗體陽性報告。篩查陽性反應(yīng)或可疑陽性反應(yīng)。篩查陽性反應(yīng)或可疑陽性反應(yīng)不能作最終報告通知被檢測者，對個體診斷來說不能作最終報告通知被檢測者，對個體診斷來說, ,只有經(jīng)只有經(jīng)過確證試驗，結(jié)果陽性才可

14、做過確證試驗，結(jié)果陽性才可做HIVHIV抗體陽性報告?？贵w陽性報告。檢測程序及流程圖檢測程序及流程圖1 1、篩查檢測、篩查檢測 驗收標(biāo)本，用篩查試劑進(jìn)行檢測，如呈陰性反應(yīng)，報告驗收標(biāo)本，用篩查試劑進(jìn)行檢測，如呈陰性反應(yīng)，報告HIVHIV抗體陰性；對呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本，須進(jìn)行重復(fù)檢測?？贵w陰性；對呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本，須進(jìn)行重復(fù)檢測。2 2、重復(fù)檢測、重復(fù)檢測 對篩查呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本用原有試劑和另外一種不同原理對篩查呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑重復(fù)檢測?；虿煌瑥S家的試劑重復(fù)檢測。HIVHIV抗體篩查檢測流程抗體篩查檢測流程 HIVHIV抗體確證抗體確證 1 1、常用的確

15、證實驗方法是免疫印跡法（、常用的確證實驗方法是免疫印跡法（WBWB）。）。 2 2、免疫印跡試劑有、免疫印跡試劑有HIV-1/2HIV-1/2混合型和單一型。一般先用混合型和單一型。一般先用HIV-1/2HIV-1/2混合型試劑進(jìn)行檢測，如果呈陰性反應(yīng)，則報告混合型試劑進(jìn)行檢測，如果呈陰性反應(yīng)，則報告HIVHIV抗體陰性，如果呈陽性反應(yīng)，則報告抗體陰性，如果呈陽性反應(yīng)，則報告HIV-1HIV-1抗體陽性，抗體陽性，如果不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，則判為如果不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，則判為HIVHIV抗體不確定。如果出現(xiàn)抗體不確定。如果出現(xiàn)HIV-2HIV-2型的特異性指示條帶，還需要用型的特異性指示條帶，還需要用H

16、IV-2HIV-2型免疫印跡型免疫印跡試劑再做單一的試劑再做單一的HIV-2HIV-2型抗體確認(rèn)試驗，呈陰性反應(yīng)，報型抗體確認(rèn)試驗，呈陰性反應(yīng)，報告告HIV-2HIV-2抗體陰性；呈陽性反應(yīng)的則報告抗體陰性；呈陽性反應(yīng)的則報告HIV-2HIV-2抗體血清抗體血清學(xué)陽性。學(xué)陽性。HIVHIV抗體確證檢測流程抗體確證檢測流程檢測結(jié)果的報告和處理檢測結(jié)果的報告和處理 HIVHIV抗體篩查：抗體篩查： 篩查實驗呈陰性反應(yīng)出具篩查實驗呈陰性反應(yīng)出具HIVHIV抗體陰性報告，如果近抗體陰性報告，如果近期有高危行為，如性亂、注射毒品等，或有急性流感樣期有高危行為，如性亂、注射毒品等，或有急性流感樣癥狀等情況

17、，為排除癥狀等情況，為排除“窗口期窗口期”的可能，建議的可能，建議2323個月個月以后再做抗體檢測。以后再做抗體檢測。 篩查實驗呈陽性反應(yīng)，可出具篩查實驗呈陽性反應(yīng)，可出具“HIVHIV抗體待復(fù)查抗體待復(fù)查”報告，報告，不能出陽性報告。不能出陽性報告。HIVHIV抗體篩查呈陽性的處理抗體篩查呈陽性的處理 （1 1）填寫）填寫HIVHIV抗體篩查陽性送檢單抗體篩查陽性送檢單 （2 2）盡可能重新采集受檢者的血樣。）盡可能重新采集受檢者的血樣。 （3 3）將二份血樣（或僅原血樣）連同）將二份血樣（或僅原血樣）連同HIVHIV抗體篩查陽性送抗體篩查陽性送檢單一并送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實驗室，再轉(zhuǎn)送艾滋

18、病確檢單一并送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實驗室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認(rèn)實驗室，或直接送確認(rèn)實驗室確認(rèn)。認(rèn)實驗室，或直接送確認(rèn)實驗室確認(rèn)。 （4 4）篩查中心實驗室應(yīng)盡快進(jìn)行復(fù)測。）篩查中心實驗室應(yīng)盡快進(jìn)行復(fù)測。 （5 5）做好檢測后咨詢。）做好檢測后咨詢。 HIVHIV抗體確證結(jié)果報告抗體確證結(jié)果報告 1 1、 HIVHIV抗體陽性應(yīng)出具抗體陽性應(yīng)出具HIVHIV抗體陽性確認(rèn)報告，并按相關(guān)抗體陽性確認(rèn)報告，并按相關(guān)規(guī)定做好咨詢、保密和報告工作規(guī)定做好咨詢、保密和報告工作; ; 2 2、HIVHIV抗體陰性應(yīng)出具抗體陰性應(yīng)出具HIVHIV抗體陰性確認(rèn)報告，如果近期抗體陰性確認(rèn)報告，如果近期有高危行為，如性亂、

19、注射毒品等，或有急性流感樣癥狀有高危行為，如性亂、注射毒品等，或有急性流感樣癥狀等情況，為排除等情況，為排除“窗口期窗口期”的可能，建議的可能，建議1 1個月以后再做個月以后再做抗體檢測抗體檢測; ;抗體確證不確定結(jié)果抗體確證不確定結(jié)果 HIV HIV抗體不確定出具抗體不確定出具HIVHIV抗體不確定確認(rèn)報告，在抗體不確定確認(rèn)報告，在備注中應(yīng)注明備注中應(yīng)注明“1 1個月后復(fù)查個月后復(fù)查”。 1 1、隨訪：每、隨訪：每1 1個月一次，連續(xù)個月一次，連續(xù)2 2次，共次，共2 2個月。個月。2 2、做好檢測后咨詢。、做好檢測后咨詢。全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2009版全國艾滋病檢測

20、技術(shù)規(guī)范2009版實驗室記錄要求實驗室記錄要求1 1、標(biāo)本的登記、標(biāo)本的登記 收到標(biāo)本后，及時登記有關(guān)參數(shù)，包括受檢者姓名或收到標(biāo)本后，及時登記有關(guān)參數(shù)，包括受檢者姓名或代號、試管編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類代號、試管編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗結(jié)果、送檢日期、報告日期、備注別、檢驗結(jié)果、送檢日期、報告日期、備注 ( ( 必要時記錄必要時記錄通信地址通信地址 ) )等。等。2 2、實驗原始記錄表實驗原始記錄表 應(yīng)按實驗要求，設(shè)計操作的原始記錄表，標(biāo)明空白對應(yīng)按實驗要求，設(shè)計操作的原始記錄表，標(biāo)明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，照、陽性對

21、照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實驗人員加樣。要注明試劑盒來源、測定方法、便于指導(dǎo)實驗人員加樣。要注明試劑盒來源、測定方法、批號、有效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期。批號、有效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期。3 3、HIV HIV 陽性標(biāo)本的保存記錄陽性標(biāo)本的保存記錄 記錄記錄HIVHIV陽性標(biāo)本的儲存量、儲存溫度、儲存起始時陽性標(biāo)本的儲存量、儲存溫度、儲存起始時間以及標(biāo)本保管人姓名。間以及標(biāo)本保管人姓名。4 4、文件存檔、文件存檔 實驗原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、檢測記錄表、標(biāo)本登實驗原始記錄表、打印數(shù)據(jù)、檢測記錄表、標(biāo)本登記、標(biāo)本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄等

22、都記、標(biāo)本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄等都應(yīng)該妥善存檔保存應(yīng)該妥善存檔保存1515年以上。最好同時使用計算機(jī)保年以上。最好同時使用計算機(jī)保存各種文件和記錄。存各種文件和記錄。HIVHIV感染產(chǎn)婦所生兒童感染產(chǎn)婦所生兒童HIVHIV抗體抗體檢測策略及流程檢測策略及流程 適用范圍適用范圍 HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒；已滿18個月的嬰幼兒，其母親HIV感染狀態(tài)不詳，兒童出現(xiàn)HIV相關(guān)臨床表現(xiàn)，臨床懷疑HIV感染的兒童。HIVHIV感染產(chǎn)婦所生兒童感染產(chǎn)婦所生兒童HIVHIV抗體抗體檢測策略及流程檢測策略及流程 檢測程序及結(jié)果報告檢測程序及結(jié)果報告 嬰兒滿嬰兒滿1212個月進(jìn)行第一次個月進(jìn)行第一次

23、HIVHIV抗體檢測。使用兩種不同原理或不抗體檢測。使用兩種不同原理或不同廠家篩查試劑進(jìn)行抗體檢測，兩種篩查試劑檢測結(jié)果均為陰性反應(yīng)，同廠家篩查試劑進(jìn)行抗體檢測，兩種篩查試劑檢測結(jié)果均為陰性反應(yīng)，報告報告“HIVHIV抗體陰性（）抗體陰性（）”，可排除感染。檢測結(jié)果出現(xiàn)陽性反應(yīng)，可排除感染。檢測結(jié)果出現(xiàn)陽性反應(yīng)（一種為陰性反應(yīng)一種為陽性反應(yīng)或兩種均呈陽性反應(yīng)），不能排除（一種為陰性反應(yīng)一種為陽性反應(yīng)或兩種均呈陽性反應(yīng)），不能排除感染，應(yīng)繼續(xù)追蹤隨訪，至兒童滿感染，應(yīng)繼續(xù)追蹤隨訪，至兒童滿1818個月時再次進(jìn)行個月時再次進(jìn)行HIVHIV抗體檢測。抗體檢測。HIVHIV感染產(chǎn)婦所生兒童感染產(chǎn)婦所生

24、兒童HIVHIV抗體抗體檢測策略及流程檢測策略及流程 檢測程序及結(jié)果報告檢測程序及結(jié)果報告 嬰兒滿嬰兒滿1818個月時應(yīng)再次進(jìn)行個月時應(yīng)再次進(jìn)行HIVHIV抗體檢測。使用兩種抗體檢測。使用兩種不同原理或不同廠家篩查試劑進(jìn)行抗體檢測。兩種篩查試不同原理或不同廠家篩查試劑進(jìn)行抗體檢測。兩種篩查試劑的檢測結(jié)果均為陰性反應(yīng)，報告劑的檢測結(jié)果均為陰性反應(yīng)，報告“HIVHIV抗體陰性抗體陰性（）（）”，可排除感染。檢測出現(xiàn)陽性反應(yīng)（一種為陰性，可排除感染。檢測出現(xiàn)陽性反應(yīng)（一種為陰性反應(yīng)一種為陽性反應(yīng)或兩種均呈陽性反應(yīng)），進(jìn)一步進(jìn)行反應(yīng)一種為陽性反應(yīng)或兩種均呈陽性反應(yīng)），進(jìn)一步進(jìn)行確證試驗，根據(jù)確證試驗的

25、結(jié)果判斷是否感染確證試驗，根據(jù)確證試驗的結(jié)果判斷是否感染HIV HIV 。HIVHIV感染產(chǎn)婦所生兒童感染產(chǎn)婦所生兒童HIVHIV抗體抗體檢測策略及流程檢測策略及流程 檢測程序及結(jié)果報告檢測程序及結(jié)果報告 在發(fā)放檢測報告的同時上報疫情；在發(fā)放檢測報告的同時上報疫情； 做好檢測后咨詢。做好檢測后咨詢。全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2009版免疫功能（免疫功能（CD4/CD8CD4/CD8）的檢測）的檢測T T淋巴細(xì)胞分類淋巴細(xì)胞分類 在在T T淋巴細(xì)胞分類中，淋巴細(xì)胞分類中，CD4CD4代表代表T T輔助細(xì)胞而輔助細(xì)胞而CD8CD8代代表表T T抑制細(xì)胞和抑制細(xì)胞和T T殺傷細(xì)胞。

26、殺傷細(xì)胞。CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞是淋巴細(xì)胞是HIVHIV感染感染的主要靶細(xì)胞，也是免疫反應(yīng)的中心細(xì)胞；的主要靶細(xì)胞，也是免疫反應(yīng)的中心細(xì)胞；CD8+TCD8+T淋巴淋巴細(xì)胞是免疫反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞。細(xì)胞是免疫反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞。T T淋巴細(xì)胞分類淋巴細(xì)胞分類 正常人的正常人的CDCD4 4+ +T T淋巴細(xì)胞約占總的淋巴細(xì)胞約占總的T T淋巴細(xì)胞的淋巴細(xì)胞的65%65%，CDCD8 8+ +T T淋巴細(xì)胞約占淋巴細(xì)胞約占35%35%。人體感染了。人體感染了HIVHIV后，涉及的主要后，涉及的主要病理過程就是免疫系統(tǒng)的損害，主要表現(xiàn)為：病理過程就是免疫系統(tǒng)的損害，主要表現(xiàn)為：CDCD4 4+ +T

27、 T淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞的丟失，絕對數(shù)量的減少，同時胞的丟失，絕對數(shù)量的減少，同時CDCD8 8+ +T T淋巴細(xì)胞數(shù)量增加，淋巴細(xì)胞數(shù)量增加，CDCD4 4和和CDCD8 8的比例失調(diào)。因此的比例失調(diào)。因此CDCD4 4+ +T T淋巴細(xì)胞計數(shù)作為直接測淋巴細(xì)胞計數(shù)作為直接測定免疫功能的方法，是提供定免疫功能的方法，是提供HIVHIV感染病人免疫系統(tǒng)損害狀感染病人免疫系統(tǒng)損害狀況最明確的指標(biāo)。況最明確的指標(biāo)。 CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞正常值淋巴細(xì)胞正常值 CD4 CD4：410-1590/mm410-1590/mm3 3 CD8 CD8：190-1140/mm190-1140/mm3 3 CD

28、4/CD8 CD4/CD8：1 1CDCD4 4+ +T T淋巴細(xì)胞計數(shù)淋巴細(xì)胞計數(shù)意義意義 是艾滋病疾病分期、確定診斷、制定抗病毒治療和預(yù)是艾滋病疾病分期、確定診斷、制定抗病毒治療和預(yù)防機(jī)會性感染方案的標(biāo)準(zhǔn)實驗室指標(biāo)，也是與病毒載量相防機(jī)會性感染方案的標(biāo)準(zhǔn)實驗室指標(biāo)，也是與病毒載量相配合預(yù)測疾病進(jìn)程的可靠指標(biāo)。配合預(yù)測疾病進(jìn)程的可靠指標(biāo)。CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞檢測意義淋巴細(xì)胞檢測意義1 1、用于、用于HIVHIV感染者的疾病分期：凡感染者的疾病分期：凡CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞200/mm200/mm3 3或或CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞的百分比淋巴細(xì)胞的百分比14%14%的

29、的HIVHIV感染者可歸入艾滋病。感染者可歸入艾滋病。 CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞檢測意義淋巴細(xì)胞檢測意義 2 2、判斷判斷HIVHIV感染者的臨床合并癥（各種機(jī)會性感染與感染者的臨床合并癥（各種機(jī)會性感染與CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞的相關(guān)性），如淋巴細(xì)胞的相關(guān)性），如CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞200/ mm200/ mm3 3時，時，很容易發(fā)生卡氏肺囊蟲肺炎；而巨細(xì)胞病毒感染和鳥分支桿很容易發(fā)生卡氏肺囊蟲肺炎；而巨細(xì)胞病毒感染和鳥分支桿菌感染常發(fā)生于菌感染常發(fā)生于CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞50/mm50/mm3 3的病人，極少見于的病人，極少見于CD4+TCD4+T淋

30、巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞100/mm100/mm3 3的病人。的病人。CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞檢測意義淋巴細(xì)胞檢測意義3 3、 幫助確定抗幫助確定抗HIVHIV藥物治療及機(jī)會性感染預(yù)防性治療的適應(yīng)藥物治療及機(jī)會性感染預(yù)防性治療的適應(yīng)癥，例如，當(dāng)癥，例如，當(dāng)CD4+TCD4+T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞200/ mm200/ mm3 3時，應(yīng)給予抗卡氏時，應(yīng)給予抗卡氏肺囊蟲肺炎的預(yù)防性治療；肺囊蟲肺炎的預(yù)防性治療； 4 4、抗、抗HIVHIV藥物療效的重要判斷指標(biāo)。藥物療效的重要判斷指標(biāo)。成人及青少年艾滋病分期標(biāo)準(zhǔn)成人及青少年艾滋病分期標(biāo)準(zhǔn)（美國（美國CDC.1993CDC.1993）CD4+T細(xì)胞細(xì)胞臨床階段

31、臨床階段A 無癥狀或急性無癥狀或急性HIV感染感染或持續(xù)性全身淋巴結(jié)腫大或持續(xù)性全身淋巴結(jié)腫大B 出現(xiàn)癥狀，出現(xiàn)癥狀，不是不是A或或CC 艾滋病指征性癥艾滋病指征性癥狀狀500/ul（29%）A1B1C1200-499/ul（14-28%）A2B2C2200/ul（14%）A3B3C3CD4200/ulCD410001000）提示感染發(fā)生的可能性非常大。）提示感染發(fā)生的可能性非常大。2 2、窗口期輔助診斷、窗口期輔助診斷n在窗口期抗原峰出現(xiàn)前后通常出現(xiàn)一個病毒載量的高峰，在窗口期抗原峰出現(xiàn)前后通常出現(xiàn)一個病毒載量的高峰，通常此高峰高于發(fā)病時的血漿病毒水平，早期病毒通常此高峰高于發(fā)病時的血漿病毒

32、水平，早期病毒RNARNA測測定具有特殊的意義。定具有特殊的意義。n目前國際上正在嘗試使用這種檢測對采供血樣品進(jìn)行多個目前國際上正在嘗試使用這種檢測對采供血樣品進(jìn)行多個樣品混合后的樣品混合后的RNARNA檢測以降低窗口期傳播的殘余危險度。檢測以降低窗口期傳播的殘余危險度。3 3、病程監(jiān)控、病程監(jiān)控n由于由于HIVHIV感染發(fā)生后病毒載量的變化具有一定規(guī)律，并且感染發(fā)生后病毒載量的變化具有一定規(guī)律，并且這種變化與疾病的進(jìn)程有著密切的相關(guān)性。這種變化與疾病的進(jìn)程有著密切的相關(guān)性。n通常在感染后無癥狀期內(nèi)發(fā)生的臨床癥狀很難與通常在感染后無癥狀期內(nèi)發(fā)生的臨床癥狀很難與AIDSAIDS發(fā)病發(fā)病時的癥狀區(qū)

33、別，病毒載量測定可以幫助醫(yī)生判斷一個剛發(fā)時的癥狀區(qū)別，病毒載量測定可以幫助醫(yī)生判斷一個剛發(fā)生的癥狀是否與生的癥狀是否與HIVHIV感染有關(guān)。感染有關(guān)。4 4、指導(dǎo)治療方案及療效測定、指導(dǎo)治療方案及療效測定n并非在任何情況下感染者都應(yīng)并非在任何情況下感染者都應(yīng)該進(jìn)行抗病毒治療，這不但是該進(jìn)行抗病毒治療，這不但是經(jīng)濟(jì)上的原因，更重要的是在經(jīng)濟(jì)上的原因，更重要的是在于抗病毒藥物的副作用和療效。于抗病毒藥物的副作用和療效。通常在病毒載量達(dá)到一定水平通常在病毒載量達(dá)到一定水平后（如后（如35000-5000035000-50000拷貝拷貝/ /毫升）毫升）才具有良好的效果。才具有良好的效果。n只有通過治

34、療后病毒水平的檢只有通過治療后病毒水平的檢測才能確定治療是否有效，通測才能確定治療是否有效，通常治療后病毒水平降低常治療后病毒水平降低50%50%才被才被認(rèn)為臨床有效。認(rèn)為臨床有效。5 5、預(yù)測疾病進(jìn)程、預(yù)測疾病進(jìn)程nHIVHIV疾病進(jìn)程與病毒載量的關(guān)系疾病進(jìn)程與病毒載量的關(guān)系十分密切，觀察感染者病毒十分密切，觀察感染者病毒RNARNA水平可大致預(yù)測其發(fā)病的可能。水平可大致預(yù)測其發(fā)病的可能。如右圖所示，病毒載量與如右圖所示，病毒載量與6 6年發(fā)年發(fā)病率的關(guān)系為：病率的關(guān)系為： 5003000030000時則為時則為80%80%。兩種方法檢測病毒載量兩種方法檢測病毒載量（一）（一）RT-PCRR

35、T-PCR（二）（二）NASBA EasyQNASBA EasyQ病毒載量檢測樣品要求病毒載量檢測樣品要求n血漿血漿n樣品量約樣品量約1 1毫升毫升n樣品要求保存低溫保存（樣品要求保存低溫保存（-20-20以下）以下）n冷凍運(yùn)輸冷凍運(yùn)輸實驗室網(wǎng)絡(luò)實驗室網(wǎng)絡(luò)n自治區(qū)自治區(qū)CDC確證中心實驗室確證中心實驗室n柳州市柳州市CDC確證實驗室確證實驗室n梧州市梧州市CDC確證實驗室確證實驗室n賀州市賀州市CDC確證實驗室確證實驗室n龍?zhí)夺t(yī)院確證實驗室龍?zhí)夺t(yī)院確證實驗室n桂林市桂林市CDC確證實驗室確證實驗室3.12105低于最低檢測限（400拷貝/毫升）高于最高檢測限（7.5105拷貝/毫升）RT-PC

36、RRT-PCR病毒載量結(jié)果的報告三種情況病毒載量結(jié)果的報告三種情況n具體的一個數(shù)值（該值在具體的一個數(shù)值（該值在400- 7.5400- 7.510105 5拷貝拷貝/ /毫升）毫升）n低于最低檢測限（低于最低檢測限（400400拷貝拷貝/ /毫升）毫升）n高于最高檢測限（高于最高檢測限（7.57.510105 5拷貝拷貝/ /毫升）毫升）1.6105低于最低檢測限（50拷貝/毫升）高于最高檢測限（3.0106拷貝/毫升）NASBANASBAEASYQEASYQ病毒載量結(jié)果報告的三種情況病毒載量結(jié)果報告的三種情況n具體的一個數(shù)值（該值在具體的一個數(shù)值（該值在50 3.050 3.010106

37、6拷貝拷貝/ /毫升）毫升）n低于最低檢測限（低于最低檢測限（5050拷貝拷貝/ /毫升）毫升）n高于最高檢測限（高于最高檢測限（3.03.010106 6拷貝拷貝/ /毫升）毫升）注意事項注意事項1 1、不同檢測方法的結(jié)果不能直接比較，必須轉(zhuǎn)、不同檢測方法的結(jié)果不能直接比較，必須轉(zhuǎn)化為國際單位化為國際單位注意事項注意事項2 2、檢測結(jié)果低于最低檢測限不能排除、檢測結(jié)果低于最低檢測限不能排除HIVHIV感染感染3 3、病毒載量結(jié)果低于、病毒載量結(jié)果低于1000copies/ml1000copies/ml不進(jìn)行耐藥檢測，只有大不進(jìn)行耐藥檢測，只有大于于1000copies/ml1000copie

38、s/ml的病人才做耐藥檢測。的病人才做耐藥檢測。艾滋病檢測實驗室安全防護(hù)艾滋病檢測實驗室安全防護(hù)一、建立安全制度一、建立安全制度（一）實驗室的設(shè)備、建筑和設(shè)施的安全性應(yīng)通過專家（一）實驗室的設(shè)備、建筑和設(shè)施的安全性應(yīng)通過專家的評審。的評審。（二）建立安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，該程序應(yīng)適用于現(xiàn)有的（二）建立安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，該程序應(yīng)適用于現(xiàn)有的實驗條件，并與實驗室其他規(guī)章制度一致。實驗條件，并與實驗室其他規(guī)章制度一致。（三）無論是否發(fā)生意外事故，每年都要對安全標(biāo)準(zhǔn)操（三）無論是否發(fā)生意外事故，每年都要對安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序及其實施情況進(jìn)行檢查。作程序及其實施情況進(jìn)行檢查。（四）制定意外事故處理預(yù)案。建立意外

39、事故的登記和（四）制定意外事故處理預(yù)案。建立意外事故的登記和報告制度。報告制度。二、人員管理和培訓(xùn)二、人員管理和培訓(xùn)（一）人員管理（一）人員管理 1 1、實驗室主任應(yīng)了解所有工作人員。在安排工作區(qū)域時，、實驗室主任應(yīng)了解所有工作人員。在安排工作區(qū)域時，要根據(jù)人員的工作種類和所涉及的生物材料，對實驗室要根據(jù)人員的工作種類和所涉及的生物材料，對實驗室環(huán)境做安全檢查。環(huán)境做安全檢查。 2 2、新調(diào)入人員、外來合作、進(jìn)修和學(xué)習(xí)的人員在進(jìn)入實、新調(diào)入人員、外來合作、進(jìn)修和學(xué)習(xí)的人員在進(jìn)入實驗室之前必須經(jīng)過實驗室主任的批準(zhǔn)。非實驗室人員和驗室之前必須經(jīng)過實驗室主任的批準(zhǔn)。非實驗室人員和物品不得進(jìn)入實驗室。

40、物品不得進(jìn)入實驗室。 3 3、嚴(yán)格執(zhí)行實驗室工作人員年度采血檢測、嚴(yán)格執(zhí)行實驗室工作人員年度采血檢測HIVHIV抗體和備抗體和備案制度，工作人員血清應(yīng)長期保留。案制度，工作人員血清應(yīng)長期保留。（二）培訓(xùn)（二）培訓(xùn) 1 1、所有工作人員必須經(jīng)過、所有工作人員必須經(jīng)過HIVHIV檢測技術(shù)和實驗室安全培檢測技術(shù)和實驗室安全培訓(xùn)，包括上崗培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，并接受實驗室管理人員的監(jiān)訓(xùn)，包括上崗培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，并接受實驗室管理人員的監(jiān)督。實驗室的安全責(zé)任人要對工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé)，督。實驗室的安全責(zé)任人要對工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé)，所有工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和他人的安全。所有工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和他人的安全。 2

41、 2、必須告知新上崗人員實驗室工作的潛在危險，進(jìn)行安、必須告知新上崗人員實驗室工作的潛在危險，進(jìn)行安全教育，直至有能力后方可單獨(dú)工作。全教育，直至有能力后方可單獨(dú)工作。三、安全保障措施三、安全保障措施（一）個人保健（一）個人保健 1 1、高標(biāo)準(zhǔn)的個人保健對于減少感染的危險性很重要。、高標(biāo)準(zhǔn)的個人保健對于減少感染的危險性很重要。皮膚受損、患病都會增加感染的危險。皮膚的傷口和擦皮膚受損、患病都會增加感染的危險。皮膚的傷口和擦傷都應(yīng)以防水敷料覆蓋。傷都應(yīng)以防水敷料覆蓋。 2 2、進(jìn)實驗室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以、進(jìn)實驗室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。免刺破手套。 3 3

42、、進(jìn)入實驗室應(yīng)穿隔離衣，戴手套。如果接觸物傳染、進(jìn)入實驗室應(yīng)穿隔離衣，戴手套。如果接觸物傳染危險性大，則應(yīng)戴雙層手套和防護(hù)眼鏡。危險性大，則應(yīng)戴雙層手套和防護(hù)眼鏡。 4 4、脫去隔離衣，離開實驗室前必須洗手。、脫去隔離衣，離開實驗室前必須洗手。 5 5、嚴(yán)禁在艾滋病檢測實驗室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化、嚴(yán)禁在艾滋病檢測實驗室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。妝。（二）帶入和帶出實驗室的物品（二）帶入和帶出實驗室的物品 1 1、對所有帶入實驗室的物品都應(yīng)進(jìn)行檢查。含有測試樣品的、對所有帶入實驗室的物品都應(yīng)進(jìn)行檢查。含有測試樣品的包裹應(yīng)在安全柜或其他適當(dāng)?shù)难b置內(nèi)打開。包裹應(yīng)在安全柜或其他適當(dāng)?shù)难b置內(nèi)打開。 2

43、 2、將、將HIVHIV測試樣品轉(zhuǎn)送其他實驗室時，應(yīng)防止對人員和環(huán)境的測試樣品轉(zhuǎn)送其他實驗室時，應(yīng)防止對人員和環(huán)境的污染。護(hù)送樣品的人應(yīng)明確接收地點(diǎn)和接收人，實驗室負(fù)責(zé)人污染。護(hù)送樣品的人應(yīng)明確接收地點(diǎn)和接收人，實驗室負(fù)責(zé)人或其指定的人員應(yīng)及時確認(rèn)樣本已送達(dá)指定的實驗室，被轉(zhuǎn)入或其指定的人員應(yīng)及時確認(rèn)樣本已送達(dá)指定的實驗室，被轉(zhuǎn)入安全位置并得到妥善處理。安全位置并得到妥善處理。 3 3、污染或可能造成污染的材料在帶出實驗室前應(yīng)進(jìn)行消毒。、污染或可能造成污染的材料在帶出實驗室前應(yīng)進(jìn)行消毒。（三）減少利器的使用（三）減少利器的使用 1 1、盡量避免在實驗室使用針頭、刀片等利器，如果必、盡量避免在實

44、驗室使用針頭、刀片等利器，如果必須使用在處理或清洗時，應(yīng)采取措施防止刺傷或劃傷，須使用在處理或清洗時，應(yīng)采取措施防止刺傷或劃傷，并應(yīng)對用過的物品進(jìn)行消毒處理。并應(yīng)對用過的物品進(jìn)行消毒處理。 2 2、最好不使用玻璃制品。、最好不使用玻璃制品。 3 3、盡量使用安全針具采血，如蝶形真空針，自毀性針、盡量使用安全針具采血，如蝶形真空針，自毀性針具等，以降低直接接觸血液和刺傷的危險性。具等，以降低直接接觸血液和刺傷的危險性。. .應(yīng)將用應(yīng)將用過的針頭直接放入堅固的容器內(nèi)，消毒后廢棄。過的針頭直接放入堅固的容器內(nèi)，消毒后廢棄。（四）（四）HIVHIV消毒方法消毒方法 實驗室常用物品的消毒方法如下：實驗室常用物品的消毒方法如下：1 1、廢棄物缸：、廢棄物缸：10%10%（v/vv/v）次氯酸鈉（含）次氯酸鈉（含1010，000 mg/L000 mg/L有效有效氯）。氯）。2 2、生物安全柜工作臺面和儀器表面：、生物安全柜工作臺面和儀器表面：70%70%乙醇。