白細(xì)胞計數(shù),血小板計數(shù)

1、白細(xì)胞計數(shù)白細(xì)胞計數(shù) 白細(xì)胞計數(shù)白細(xì)胞計數(shù)陳新科陳新科濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科【目的】【目的】 掌握顯微鏡法白細(xì)胞計數(shù)的方法。【原理】【原理】 采用白細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定的倍數(shù)，同時破壞溶解紅細(xì)胞。將稀釋的血液注入血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算即可求出每升血液中的白細(xì)胞數(shù)量。 目的和原理目的和原理 實驗操作步驟實驗操作步驟1.1.加白細(xì)胞稀釋液加白細(xì)胞稀釋液: : 用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml0.38ml于小試管中。于小試管中。2.2.加血加血: : 用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血20l

2、20l，擦去管外余血，輕輕加至白細(xì)胞，擦去管外余血，輕輕加至白細(xì)胞 稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管2 23 3次，混勻。次，混勻。3.3.充池充池: : 混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募?xì)胞懸液沖入計數(shù)池，室溫下平混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募?xì)胞懸液沖入計數(shù)池，室溫下平放放3 35 5分鐘，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。分鐘，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。4.4.計數(shù)計數(shù): : 用低倍鏡依次計數(shù)用低倍鏡依次計數(shù)4 4個大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。個大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。 改良牛鮑計數(shù)板改良牛鮑計數(shù)板1855年發(fā)明計數(shù)紅細(xì)胞的計數(shù)板 血細(xì)胞計數(shù)板法是最可靠和最經(jīng)典計數(shù)

3、技術(shù)改良Neubauer計數(shù)板1855年發(fā)明計數(shù)紅細(xì)胞的計數(shù)板 血細(xì)胞計數(shù)板法是最可靠和最經(jīng)典計數(shù)技術(shù)改良Neubauer計數(shù)板 改良牛鮑計數(shù)板改良牛鮑計數(shù)板1mm 計算：計算：WBC/L=N/4WBC/L=N/4101010106 620201mm 改良牛鮑計數(shù)板改良牛鮑計數(shù)板數(shù)上不數(shù)下數(shù)上不數(shù)下數(shù)左不數(shù)右數(shù)左不數(shù)右 計算方法計算方法白細(xì)胞/L=N/41010620=N/20109/L N：表示4個大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)。 10：將1個大方格白細(xì)胞數(shù)換算成1l血液內(nèi)白細(xì)胞數(shù) 106： 1L=106l 20：為血液的稀釋倍數(shù)。 注意事項注意事項 1 1稀釋用吸管、微量吸管、改良稀釋用吸管、微

4、量吸管、改良NeubauerNeubauer計數(shù)板使用前需經(jīng)過嚴(yán)格的計數(shù)板使用前需經(jīng)過嚴(yán)格的 校正。校正。 2 2充池時要一次完成，如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液、在計數(shù)板充池時要一次完成，如充液不足、液體外溢、斷續(xù)充液、在計數(shù)板 中產(chǎn)生氣泡、充液后移動蓋玻片等，均會使細(xì)胞分布不均勻，造成中產(chǎn)生氣泡、充液后移動蓋玻片等，均會使細(xì)胞分布不均勻，造成 計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確。 3 3計數(shù)池內(nèi)細(xì)胞分布應(yīng)均勻，一般情況下各大方格間的細(xì)胞數(shù)相差不計數(shù)池內(nèi)細(xì)胞分布應(yīng)均勻，一般情況下各大方格間的細(xì)胞數(shù)相差不 超過超過10%10%。若相差太大，應(yīng)重新充池。若相差太大，應(yīng)重新充池。 4 4計數(shù)大小方格內(nèi)

5、的壓線細(xì)胞時，遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原計數(shù)大小方格內(nèi)的壓線細(xì)胞時，遵循數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原 則。則。 5 5白細(xì)胞數(shù)量過多時，可采用加大稀釋倍數(shù)的方法。白細(xì)胞數(shù)量過少白細(xì)胞數(shù)量過多時，可采用加大稀釋倍數(shù)的方法。白細(xì)胞數(shù)量過少 時，可采用擴大計數(shù)域或減少稀釋倍數(shù)的方法。時，可采用擴大計數(shù)域或減少稀釋倍數(shù)的方法。 6 6白細(xì)胞稀釋液不能破壞有核紅細(xì)胞，它可使白細(xì)胞計數(shù)結(jié)果偏高，白細(xì)胞稀釋液不能破壞有核紅細(xì)胞，它可使白細(xì)胞計數(shù)結(jié)果偏高， 此時應(yīng)計算白細(xì)胞校正值。此時應(yīng)計算白細(xì)胞校正值。白細(xì)胞分類計數(shù)白細(xì)胞分類計數(shù)白細(xì)胞分類計數(shù)白細(xì)胞分類計數(shù)目的和原理目的和原理 【目的】 掌握顯微鏡外周血

6、白細(xì)胞分類計數(shù)的方法及各種白細(xì)胞的正常形態(tài)。 【原理】 將血液制成細(xì)胞分布均勻的血涂片，用瑞氏染液染色，根據(jù)各類細(xì)胞的形態(tài)特點和顏色差異將白細(xì)胞區(qū)別并進(jìn)行計數(shù)。通常分類100個白細(xì)胞，計算得出各種白細(xì)胞所占的百分率。血涂片制作血涂片制作載玻片載玻片推片推片血液血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄取決于速度和角度：快、大薄取決于速度和角度：快、大( (厚厚) )。慢、?。ū。┞?、?。ū。┮粡垵M意的血涂片應(yīng)厚薄均勻一張滿意的血涂片應(yīng)厚薄均勻 頭頭 體體 尾鮮明尾鮮明涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭部寫上姓名和編號部寫上姓名和編號B 123血

7、涂片染色血涂片染色勿沖洗再加瑞氏染色勿沖洗再加瑞氏染色液液5-85-8滴后將滴后將液和液和液充分混允靜置液充分混允靜置1010分鐘分鐘直接流水沖洗直接流水沖洗3-53-5分鐘分鐘（切勿先倒掉染液）（切勿先倒掉染液）涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡分類計數(shù)分類計數(shù)100100個白細(xì)胞個白細(xì)胞B123B123涂片干燥后加瑞氏染色涂片干燥后加瑞氏染色液液5-85-8滴滴覆蓋整個血膜覆蓋整個血膜1 1分鐘分鐘血涂片的觀察血涂片的觀察B123B123外周血中白細(xì)胞形態(tài)外周血中白細(xì)胞形態(tài)白細(xì)胞白細(xì)胞中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞單核

8、細(xì)胞外周血中白細(xì)胞形態(tài)外周血中白細(xì)胞形態(tài)中性粒細(xì)胞桿狀核中性粒細(xì)胞分葉核外周血中白細(xì)胞形態(tài)外周血中白細(xì)胞形態(tài)嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞外周血中白細(xì)胞形態(tài)外周血中白細(xì)胞形態(tài)淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)目的和原理目的和原理 【目的】 掌握嗜酸性粒細(xì)胞直接計數(shù)的方法。 【原理】 用嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液，將血液稀釋一定倍數(shù)，使大部分的紅細(xì)胞和其他白細(xì)胞破壞，并使嗜酸性粒細(xì)胞著色。將稀釋的細(xì)胞懸液滴入血細(xì)胞計數(shù)板，計數(shù)一定體積內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，經(jīng)過換算得出每升血液中的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。 器材與試劑器材與試劑【器材】 同白細(xì)胞計數(shù)【試劑】嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液為

9、低滲溶液，可使紅、白細(xì)胞溶解破裂，而嗜酸性細(xì)胞對低滲抵抗大，故能保存。1、伊紅丙酮稀釋液：20g/L伊紅：使嗜酸性顆粒著色丙酮：保護(hù)嗜酸性粒細(xì)胞蒸餾水 本試劑新鮮效果好，最好一周配一次。2、溴甲酚紫稀釋液：（低滲溶液） 溴甲酚紫：指示劑，著藍(lán)色 蒸餾水 實驗操作步驟實驗操作步驟1.1.加加嗜酸性粒嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液細(xì)胞稀釋液: : 用吸管吸取用吸管吸取嗜酸性粒嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液細(xì)胞稀釋液0.38ml0.38ml于小試管中。于小試管中。2.2.加血加血: : 用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血20l20l，擦去管外余血，輕輕加至稀釋液，擦去管外余血，輕輕加至稀釋液底部，再輕

10、吸上清液清洗吸管底部，再輕吸上清液清洗吸管2 23 3次，混勻。次，混勻。3.3.充池充池: : 混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募?xì)胞懸液沖入計數(shù)池，室溫下平混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募?xì)胞懸液沖入計數(shù)池，室溫下平放放3 35 5分鐘，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。分鐘，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。4.4.計數(shù)計數(shù): : 用低倍鏡依次計數(shù)兩邊計數(shù)池四角和中央五個大方格（共計十個大方格）用低倍鏡依次計數(shù)兩邊計數(shù)池四角和中央五個大方格（共計十個大方格）的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。5 5. .計算計算: : 細(xì)胞細(xì)胞/L=N/10/L=N/101010202010106 6=0.02N

11、=0.02N10109 9/L/L注意事項注意事項1凡造成白細(xì)胞計數(shù)誤差的因素，嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)時均 應(yīng)注意。2計數(shù)應(yīng)在60min內(nèi)完成，因時間太長，嗜酸性粒細(xì)胞會被 逐漸溶解，造成結(jié)果偏低。3血液加入稀釋液后應(yīng)立即混勻，否則易致血液凝固和細(xì) 胞聚集。因嗜酸性粒細(xì)胞易于破碎，振蕩不宜太猛烈。 若使用含甘油的稀釋液，因甘油造成液體黏稠度增加， 可增加振蕩次數(shù)、延長振蕩混勻時間。4嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)最好固定時間，以排除日間生理變化 的影響。5注意與殘留的中性粒細(xì)胞相區(qū)別，以免造成結(jié)果偏高。6如果嗜酸性粒細(xì)胞被破壞，可適當(dāng)增加試劑中乙醇、丙 酮等保護(hù)劑的用量；如果中性粒細(xì)胞破壞不全，則可適 當(dāng)減少其用

12、量。血小板計數(shù)血小板計數(shù)血小板計數(shù)血小板計數(shù)目的和原理目的和原理 【目的】 掌握血小板的顯微鏡目視計數(shù)方法。 【原理】 血液經(jīng)稀釋液按一定比例稀釋和破壞紅 細(xì)胞后，滴入血細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)，在顯微鏡下計數(shù) 一定范圍內(nèi)的血小板數(shù)量，經(jīng)過換算求出每升血 液中血小板的數(shù)量。 實驗操作步驟實驗操作步驟1.1.加加血小板血小板稀釋液稀釋液: : 用吸管吸取用吸管吸取血小板血小板稀釋液稀釋液0.38ml0.38ml于小試管中。于小試管中。2.2.加血加血: : 用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血用清潔干燥微量吸管吸取抗凝血20l20l，擦去管外余血，輕輕加至稀釋液，擦去管外余血，輕輕加至稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸

13、管底部，再輕吸上清液清洗吸管2 23 3次，混勻。次，混勻。3.3.充池充池: : 混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募?xì)胞懸液沖入計數(shù)池，室溫下平混勻后用微量吸管將完全變?yōu)樽睾稚募?xì)胞懸液沖入計數(shù)池，室溫下平放放10101 15 5分鐘，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。分鐘，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計數(shù)。4.4.計數(shù)計數(shù): : 用高倍鏡依次計數(shù)中央大方格內(nèi)用高倍鏡依次計數(shù)中央大方格內(nèi)4 4角和正中角和正中5 5個中方格內(nèi)的血小板數(shù)。個中方格內(nèi)的血小板數(shù)。5 5. .計算計算: : 血小板血小板/L=N/L=N5 5101010106 620=N20=N10109 9/L/L注意事項注意事項 1要定期

14、檢查稀釋液的質(zhì)量，檢測前應(yīng)先作稀釋液空白計數(shù)，計數(shù)值 為零時方可充液計數(shù)。草酸銨稀釋液要清潔，無細(xì)菌、塵埃等污染。 存放時間較長后應(yīng)過濾后再使用。 2毛細(xì)血管采血時，針刺應(yīng)達(dá)3mm深，使血液流暢。拭去第1滴血后立 即采血，以防血小板聚集和破壞。如果同時做白細(xì)胞和血小板計數(shù) 時，應(yīng)先采血做血小板計數(shù)。 3血液加入血小板稀釋液內(nèi)要充分混勻，必須輕輕搖動標(biāo)本2min或200 次以上，但不可過度振蕩，以免導(dǎo)致血小板破壞、聚集或有氣泡， 引起計數(shù)誤差。 4血小板懸液充入計數(shù)池內(nèi)需要靜置1015min，使血小板完全下沉 后再計數(shù)。但應(yīng)注意保持濕度，避免水分蒸發(fā)而影響計數(shù)結(jié)果。血 小板如成簇分布，應(yīng)重新采血復(fù)查。溶血欠佳時，應(yīng)更換稀釋液或 用200倍稀釋法計數(shù)整個中間大方格內(nèi)的全部血小板數(shù)，最后計算出 每升血液中的血小板數(shù)量。 注意事項注意事項5計數(shù)時光線不可太強，注意