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文檔簡介
1、多發(fā)性骨髓瘤的實(shí)驗(yàn)室檢測多發(fā)性骨髓瘤的實(shí)驗(yàn)室檢測北京朝陽醫(yī)院西區(qū) 檢驗(yàn)科2016.04.14多發(fā)性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM) MM是一種惡性漿細(xì)胞病,其腫瘤細(xì)胞起源于骨髓中的漿細(xì)胞,而漿細(xì)胞是B淋巴細(xì)胞發(fā)育到最終功能階段的細(xì)胞。 發(fā)病率占所有腫瘤的12% ,血液腫瘤的10% 常見于中、老年人(50-70歲居多,40歲以下少見)。臨床表現(xiàn)n骨痛、病理性骨折:最常見最常見n腎功能受損、腎衰n貧血n血鈣水平異常n免疫功能失調(diào),感染n心、腦臟器微循環(huán)障礙,心腦血管病變多發(fā)性骨髓瘤的現(xiàn)狀就診晚就診晚2/3 確診時(shí)已達(dá)中晚期骨折骨折預(yù)后差預(yù)后差增加負(fù)擔(dān)增加負(fù)擔(dān)感染發(fā)生率高感染發(fā)生率高
2、腎臟病變不可逆腎臟病變不可逆重視實(shí)驗(yàn)診斷重視實(shí)驗(yàn)診斷早發(fā)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn) 早治療早治療誤診率誤診率高高1/3非血液科首診MM的實(shí)驗(yàn)室診斷 常規(guī)檢查 生化檢查 骨髓檢查 M蛋白鑒定 分型診斷 免疫分型 漿細(xì)胞標(biāo)記指數(shù) 染色體測定 基因異常檢測 IL-6檢測 影像學(xué)檢查常規(guī)檢查血常規(guī):Wbc 減少、貧血、Plt 減低血沉: 加快 紅細(xì)胞呈緡錢樣排列血液生化檢查血清鈣磷和堿性磷酸酶:增高血清2微球蛋白:增高腎功能:BUN、Cr升高血液流變學(xué)檢查:血清粘滯度增加CRP:升高高尿酸血癥血清總蛋白、白蛋白LDH增高骨髓檢查骨穿:骨髓原、幼漿細(xì)胞(骨髓瘤細(xì)胞)明顯增多。骨髓瘤 細(xì)胞在骨髓內(nèi)呈彌漫性分布,或灶性、斑片
3、狀分布。 需要多次多部位穿刺,以免漏診數(shù)量:國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)為漿細(xì)胞15%,并有異常漿細(xì)胞或組織活檢證 實(shí)。國外最低標(biāo)準(zhǔn)為異常漿細(xì)胞10%或組織活檢證實(shí) 形態(tài):細(xì)胞漿呈灰藍(lán)色,可見多核(2-3個(gè)核),核仁1-4 個(gè),初漿區(qū)消失,胞漿內(nèi)可有少數(shù)嗜苯胺藍(lán)顆粒,偶 見嗜酸性球狀包涵體或大小不等的空泡。核染色質(zhì)疏 松,有時(shí)凝集成大塊,但不呈車輪狀排列 多發(fā)性骨髓瘤血象多發(fā)性骨髓瘤血象 多發(fā)性骨髓瘤骨髓象多發(fā)性骨髓瘤骨髓象(漿細(xì)胞樣骨髓瘤細(xì)胞)多發(fā)性骨髓瘤骨髓象多發(fā)性骨髓瘤骨髓象血M蛋白鑒定 M蛋白是單克隆漿細(xì)胞增殖產(chǎn)生的均一蛋白。 MM常為單株漿細(xì)胞的前體細(xì)胞惡性增生,形成龐大的單克隆漿細(xì)胞群,此種漿細(xì)胞可分
4、泌大量結(jié)構(gòu)均一的免疫球蛋白或肽鏈亞單位,臨床上稱之為單克隆免疫球蛋白(monoclonal proteins, M蛋白)血清蛋白電泳(SPEP):M蛋白形成異常濃集帶,位于 區(qū)內(nèi),或 、2 區(qū)內(nèi)可見一窄底的高峰。由于尿液可以濃縮許多倍,因此檢查游離輕鏈時(shí)尿蛋白電泳(UPEP)比SPEP靈敏。80%的MM患者可發(fā)現(xiàn)M蛋白AlbAlb1122白蛋白白蛋白11抗胰抗胰蛋白酶蛋白酶觸珠蛋觸珠蛋白白轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白IgGIgG前白蛋前白蛋白白11酸性酸性糖蛋白糖蛋白銅藍(lán)蛋銅藍(lán)蛋白白C3aC3a、C3bC3bCRPCRP11脂脂蛋白蛋白抗糜蛋白抗糜蛋白酶酶22巨巨球蛋白球蛋白IgAIgA、IgMIgM、I
5、gDIgD、纖維、纖維蛋白原、蛋白原、11脂蛋白、脂蛋白、血凝素血凝素瓊脂糖凝膠電泳原理-+蛋白加樣位置陰極 陽極0-+-電場作用力正常的電泳圖譜 出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白的電泳圖譜出現(xiàn)在a2區(qū)域的單克隆免疫球蛋白炎癥癥狀腎病綜合征出現(xiàn)游離輕鏈出現(xiàn)在 b 區(qū)域的單克隆免疫球蛋白游離輕鏈病檢測結(jié)果闡述電泳的結(jié)果是以%的形式給出的, 但是對(duì)于臨床診斷, 結(jié)果必須要以濃度的形式給出g/LM蛋白的診斷標(biāo)準(zhǔn)IgG35g/LIgA 20g/LIgM 15g/LIgD 2.0g/LIgE 2.0g/L本-周蛋白陽性1.0g/24h 蛋白濃度出現(xiàn)異常時(shí),必須要進(jìn)行其它的補(bǔ)充檢測免疫固定電泳免疫固定電泳M蛋白?蛋白
6、?什么類型?什么類型?為什么要做免疫固定電泳在血清蛋白電泳時(shí),檢測到異常條帶的出現(xiàn),或者是某一個(gè)條帶的蛋白出現(xiàn)異常增加 電泳結(jié)果顯示為低免疫球蛋白血癥, 或者免疫球蛋白定量結(jié)果顯示可能是游離輕鏈病 尿蛋白檢測結(jié)果異常(檢測到單克隆游離輕鏈),查看患者是否做過血清蛋白電泳,如果有必要需要進(jìn)行血清的免疫固定電泳 什么情況下必須要進(jìn)行免疫固定電泳檢測? 免疫固定電泳l一種電泳加沉淀反應(yīng)技術(shù)。l可用于各種蛋白質(zhì)的鑒定。l將血清直接加于電泳后蛋白質(zhì)區(qū)帶表面, 抗原與對(duì)應(yīng)抗體直接發(fā)生沉淀反應(yīng),形成的復(fù)合物嵌于固相支持物中。 血清免疫固定電泳ELP 泳道泳道: 固定液固定液G 泳道:泳道: 抗抗 IgG 重
7、鏈抗血清重鏈抗血清A 泳道:泳道: 抗抗 IgA 重鏈抗血清重鏈抗血清M 泳道:泳道: 抗抗 IgM 重鏈抗血清重鏈抗血清K 泳道:泳道: 抗抗 輕鏈抗血清輕鏈抗血清L 泳道:泳道: 抗抗 輕鏈抗血清輕鏈抗血清儀器:儀器: Sebia 瓊脂糖凝膠電泳儀瓊脂糖凝膠電泳儀 試劑:免疫固定電泳試劑試劑:免疫固定電泳試劑靈敏度:靈敏度:125mg/L正常血清確認(rèn)確認(rèn)IgM 型型M蛋白蛋白血清蛋白免疫固定電泳應(yīng)用舉例 (1)IF在在 區(qū)區(qū) 發(fā)現(xiàn)疑似發(fā)現(xiàn)疑似M蛋白蛋白 確認(rèn)確認(rèn)IgM + IgM 型型 雙克隆雙克隆M蛋白蛋白在在 區(qū)發(fā)現(xiàn)疑似區(qū)發(fā)現(xiàn)疑似雙克隆雙克隆M蛋白蛋白IF血清蛋白免疫固定電泳應(yīng)用舉例
8、(2)IgG Lambda型型M蛋白蛋白單克隆單克隆M蛋白出現(xiàn)在蛋白出現(xiàn)在Alpha2-Beta區(qū)帶區(qū)帶 血清蛋白免疫固定電泳應(yīng)用舉例 (3)* 纖維蛋白原纖維蛋白原,嚴(yán)格避免血漿標(biāo)本,嚴(yán)格避免血漿標(biāo)本血清蛋白免疫固定電泳應(yīng)用舉例 (4)寡克隆免疫球蛋白電泳圖譜寡克隆免疫球蛋白電泳圖譜多條(2)窄的條帶,通常比較微弱。由于個(gè)別免疫球蛋白克隆增生。 Ig G型寡克隆電泳圖譜型寡克隆電泳圖譜IF血清蛋白免疫固定電泳應(yīng)用 特殊情況寡克隆條帶在以下情況時(shí)常會(huì)出現(xiàn) : 骨髓或者器官移植治療引起的免疫缺陷 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 干燥綜合癥 紅斑狼瘡*自體免疫疾病 病毒: HIV,病毒性肝炎, EBV, CMV 細(xì)
9、菌和寄生蟲感染: 腦膜炎, 腦炎*感染引起的 免疫缺陷血清蛋白免疫固定電泳特殊病例免疫固定結(jié)果顯示為單獨(dú)的免疫固定結(jié)果顯示為單獨(dú)的 成分成分尿蛋白檢測尿蛋白檢測 尿常規(guī):蛋白尿、血尿、管型尿尿常規(guī):蛋白尿、血尿、管型尿 尿蛋白:尿液中出現(xiàn)的自由輕鏈即本尿蛋白:尿液中出現(xiàn)的自由輕鏈即本- -周蛋白周蛋白本周氏蛋白 1844年Henry Bence Jones 在一個(gè)骨髓瘤患者中發(fā)現(xiàn) 一種具有性質(zhì)的蛋白 4060發(fā)生沉淀,加熱煮沸時(shí)溶解,冷卻后又沉淀 輕鏈二聚體 大多數(shù)尿中有本周氏蛋白漿細(xì)胞增生癥漿細(xì)胞增生癥影響影響血液中出現(xiàn)游離輕鏈血液中出現(xiàn)游離輕鏈尿液中出現(xiàn)起因起因結(jié)果結(jié)果骨髓瘤巨球蛋白血癥CLL慢性白血病MGUS.腎小管損傷淀粉樣病變輕鏈沉淀病本周氏蛋白正常免疫球蛋白的合成 18分鐘10分鐘漿細(xì)胞一條重鏈一條輕鏈組合一分子免疫球蛋白過剩輕鏈腎小球?yàn)V過10%在腎小管分解代謝80%重吸收10%隨尿排出異常免疫球蛋白的合成 18分鐘10分鐘惡變的漿細(xì)胞一種重鏈一種輕鏈組合單克隆免疫球蛋白大量過剩輕鏈腎小球?yàn)V過腎毒性、異常沉積腎毒性、異常沉積本周氏蛋白陽性患者 多表現(xiàn)為腎臟損害為慢性腎炎 輕鏈有3種形式出現(xiàn)在血清或尿中 正常的輕鏈過剩 慢性肝病、紅斑狼瘡等多克隆增殖性疾病 伴隨輕鏈 單一輕鏈1.是一種檢測體內(nèi)是否存在克隆性漿細(xì)胞的高度敏感的方法通過免疫比濁法
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