課件藥品微生物限度檢測技術(shù)

1、 1 12 23 3藥品微生物限度檢查定義藥品微生物限度檢查定義藥品微生物限度檢查意義藥品微生物限度檢查意義藥品微生物限度檢測的內(nèi)容藥品微生物限度檢測的內(nèi)容藥品微生物限度檢查適用劑型藥品微生物限度檢查適用劑型藥品微生物限藥品微生物限度檢測概述度檢測概述微生物限度檢查方法是檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。微生物的種類和數(shù)微生物的種類和數(shù)量必須限制在一定量必須限制在一定的范圍內(nèi)或不得檢的范圍內(nèi)或不得檢出出。部分口服給藥制劑:口服液、酊劑、中藥丸劑、糖漿劑、散劑、特殊部位使用的片劑（口腔帖片、陰道片、陰道泡騰片、外用可溶片） 含中藥原粉、豆豉、神曲、動物組織等口服制劑鼻用制劑

2、洗劑灌腸劑等 非規(guī)定滅菌非規(guī)定滅菌制劑及其原、制劑及其原、輔料輔料確定藥物是否污染或其污染程度，控制藥品的質(zhì)量；確定藥物是否污染或其污染程度，控制藥品的質(zhì)量；保證用藥的有效性和安全性保證用藥的有效性和安全性可作為衡量藥品生產(chǎn)全過程衛(wèi)生水平的根據(jù)之一可作為衡量藥品生產(chǎn)全過程衛(wèi)生水平的根據(jù)之一微生物限度檢查微生物限度檢查微生物總數(shù)檢查微生物總數(shù)檢查控制菌檢查控制菌檢查細菌數(shù)檢查細菌數(shù)檢查霉菌和酵母菌檢查霉菌和酵母菌檢查大腸埃希菌大腸埃希菌大腸菌群大腸菌群沙門菌沙門菌銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌梭菌梭菌白色念珠菌白色念珠菌非全檢，檢查種類與非全檢，檢查種類與劑型、給藥途徑、原

3、劑型、給藥途徑、原料來源等有關(guān)。料來源等有關(guān)。 給藥途徑口服給藥制劑細菌數(shù)每1g不得過1000個。每1ml不得過1000個。霉菌和酵母數(shù)（每1g、1ml或10cm2）不得過100個大腸埃希菌（每1g、1ml或10cm2）不得檢出金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌沙門菌（每10g或10ml）含動物組織（包括提取物）的口服制劑，不得檢出 霉變、長螨 不合格給藥途徑眼部給藥制劑細菌數(shù)每1g或1ml不得過10個霉菌和酵母數(shù)（每1g、1ml或10cm2）不得檢出大腸埃希菌（每1g、1ml或10cm2）不得檢出金黃色葡萄球菌（每1g、1ml或10cm2）不得檢出銅綠假單胞菌（每1g、1ml或10cm2）不得檢出沙

4、門菌 霉變、長螨 不合格給藥途徑給藥途徑直腸給藥制劑直腸給藥制劑細菌數(shù)細菌數(shù)每每1g1g不得過不得過10001000個，每個，每1ml1ml不不得過得過100100個。個。霉菌和酵母數(shù)（每霉菌和酵母數(shù)（每1g1g、1ml1ml或或10cm10cm2 2） 不得過不得過100100個個大腸埃希菌大腸埃希菌（每（每1g1g、1ml1ml或或10cm10cm2 2）不得檢出不得檢出金黃色葡萄球菌（每金黃色葡萄球菌（每1g1g、1ml1ml或或10cm10cm2 2）不得檢出不得檢出銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌（每（每1g1g、1ml1ml或或10cm10cm2 2）不得檢出不得檢出沙門菌沙門菌 霉變、長

5、螨霉變、長螨 不合格不合格檢查檢查環(huán)境環(huán)境和人和人員要員要求求A環(huán)境要求環(huán)境要求: :無菌室內(nèi)進行。背景潔凈度無菌室內(nèi)進行。背景潔凈度10,00010,000級下的局部級下的局部100100級，單向流空氣。級，單向流空氣。 操作人員：衛(wèi)生、著裝符合要求。操作人員：衛(wèi)生、著裝符合要求。 操作要求：嚴格遵守?zé)o菌操作，嚴防污染。操作要求：嚴格遵守?zé)o菌操作，嚴防污染。 方方法法驗驗證證B 由于某些供試品具有抗菌活性，在建由于某些供試品具有抗菌活性，在建立測定方法或原測定法的檢驗條件發(fā)生改立測定方法或原測定法的檢驗條件發(fā)生改變時，可能影響檢驗結(jié)果的準確性，必須變時，可能影響檢驗結(jié)果的準確性，必須對供試品

6、的抑菌活性及測定方法的可靠性對供試品的抑菌活性及測定方法的可靠性進行驗證。進行驗證。正正確確抽抽樣樣C1.1.抽樣方法抽樣方法隨機隨機優(yōu)先抽有疑問樣品優(yōu)先抽有疑問樣品抽樣量：檢測用量的抽樣量：檢測用量的3535倍倍正正確確抽抽樣樣C2.2.檢測用量檢測用量2 2個最小包裝個最小包裝大蜜丸大蜜丸4 4丸丸膜劑膜劑4 4片片3.3.檢測量檢測量半半/ /固體制劑：固體制劑：10g10g液體制劑：液體制劑：10ml10ml膜劑：膜劑：100cm100cm儀器儀器 超凈工作臺、光學(xué)顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、壓超凈工作臺、光學(xué)顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、薄膜過濾裝置、比濁儀等。力蒸汽滅菌器、薄膜過濾裝

7、置、比濁儀等。用具用具 試管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、試管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精密精密pH試紙、濾膜、濾杯、剪刀、鑷子、無菌試紙、濾膜、濾杯、剪刀、鑷子、無菌服、牛皮紙等。服、牛皮紙等。環(huán)境清潔，表面消毒（環(huán)境清潔，表面消毒（ 75%(V/V)乙醇、新乙醇、新潔爾滅潔爾滅(1：1000)溶液或其他適宜消毒溶液）溶液或其他適宜消毒溶液）空氣過濾系統(tǒng)，紫外燈或臭氧空氣消毒儀空氣過濾系統(tǒng)，紫外燈或臭氧空氣消毒儀E環(huán)環(huán)境境準準備備實實驗驗器器具具D培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細菌生長要求。應(yīng)按各培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細菌生長要求。應(yīng)按各種培養(yǎng)基要求準確測定調(diào)節(jié)種培養(yǎng)基要求準確測定調(diào)節(jié)p

8、H值。多數(shù)細菌生值。多數(shù)細菌生長的適宜長的適宜pH值為值為7.27.6。酵母菌霉菌。酵母菌霉菌（6.06.5）。）。培養(yǎng)基的滅菌時間和溫度，應(yīng)按照各種培養(yǎng)基培養(yǎng)基的滅菌時間和溫度，應(yīng)按照各種培養(yǎng)基的規(guī)定進行，以保證滅菌效果及不損失培養(yǎng)基的規(guī)定進行，以保證滅菌效果及不損失培養(yǎng)基的必需營養(yǎng)成分。的必需營養(yǎng)成分。 。濕熱：濕熱：115 121 ，15min30min 物品切勿立即取出置冷處，以免急速冷卻，物品切勿立即取出置冷處，以免急速冷卻，使滅菌物品內(nèi)蒸氣冷凝造成負壓，以致染菌。使滅菌物品內(nèi)蒸氣冷凝造成負壓，以致染菌。干熱：干熱：160 170 ，2h 適于耐高溫的玻璃、陶瓷或金屬器皿的滅菌。適于

9、耐高溫的玻璃、陶瓷或金屬器皿的滅菌。 滅菌程序需要經(jīng)過驗證滅菌程序需要經(jīng)過驗證滅滅菌菌方方式式G培培養(yǎng)養(yǎng)基基F細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)用培養(yǎng)基應(yīng)進行培養(yǎng)基的適用性檢查，成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。菌種大腸埃希菌 CMCC（B）44 102金黃色葡萄球菌CMCC（B） 26 003枯草芽孢桿菌 CMCC（B） 63 501白色念珠菌 CMCC(F) 98 001黑曲霉 CMCC(F) 98 003驗證試驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。菌液制備 細菌新鮮培養(yǎng)物（一般18h24

10、h，白念24h48h ，黑曲霉 57天 ），用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml 含菌數(shù)50cfu100cfu的菌懸液 （黑曲霉用含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液）菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若保存在2 8可以在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2 8，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。培養(yǎng)基接種 金黃色葡萄球菌2個平皿營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 大腸埃希菌2個平皿 枯草芽孢桿菌2個個皿 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 白色念珠菌2個平皿 黑典霉2個平皿酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：白色念珠菌2個平皿結(jié)果判定 若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培

11、養(yǎng)基上的菌落一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。檢查菌檢查菌培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間培養(yǎng)時間細菌數(shù)細菌數(shù)營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂303035353 days3 days真菌數(shù)真菌數(shù)玫瑰紅鈉瓊脂玫瑰紅鈉瓊脂232328285 days5 days酵母菌數(shù)酵母菌數(shù)酵母浸出粉胨葡酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂萄糖瓊脂232328285 days5 days控制菌控制菌細菌：細菌：30303535真菌：真菌：23232828培培養(yǎng)養(yǎng)條條件件H供試品檢出控制菌或其它致病菌時，按一次檢供試品檢出控制菌或其它致病菌時，按一次檢出結(jié)果為準，不再復(fù)試。出結(jié)果為準，不再復(fù)試。 供試品的細菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)其中任何

12、一供試品的細菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)其中任何一項不符合該品種項下的規(guī)定，應(yīng)從同一批樣品項不符合該品種項下的規(guī)定，應(yīng)從同一批樣品中隨機抽樣，獨立復(fù)試兩次，以中隨機抽樣，獨立復(fù)試兩次，以3 3次結(jié)果的平均次結(jié)果的平均值報告菌數(shù)。值報告菌數(shù)。 供試品的細菌數(shù)、霉菌和酵母數(shù)及控制菌三項供試品的細菌數(shù)、霉菌和酵母數(shù)及控制菌三項檢驗結(jié)果均符合該品種項下的規(guī)定，判供試品檢驗結(jié)果均符合該品種項下的規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若其中任何一項不符合該品種項下符合規(guī)定；若其中任何一項不符合該品種項下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定。的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定。 結(jié)結(jié)果果判判斷斷I24細菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)檢查細菌數(shù)、霉菌和酵母菌

13、數(shù)檢查1.1.平皿法平皿法數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)處理處理混合平板混合平板的制備的制備細 菌 、 真細 菌 、 真菌的培養(yǎng)菌的培養(yǎng)檢查結(jié)果、檢查結(jié)果、觀察與計數(shù)觀察與計數(shù)供試液供試液的制備的制備書寫檢驗書寫檢驗記錄單記錄單1.1.平皿法平皿法1010-2-21010-2-21010-2-21010-2-21010-3-31010-3-31010-3-31010-3-3倒置培養(yǎng)倒置培養(yǎng)3d3d營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基30353035玫 瑰 紅 鈉玫 瑰 紅 鈉瓊 脂 培 養(yǎng)瓊 脂 培 養(yǎng)基基倒置培養(yǎng)倒置培養(yǎng)5d5d23282328 對照對照對照對照對照對照對照對照1.0ml1.0ml9.0ml9.0ml 稀

14、釋液稀釋液10g/ml 10g/ml 供試品供試品 9.0ml9.0ml1010-2-21010-1-11.0ml1.0ml 9.0ml9.0ml1010-3-31.0ml1.0ml1010-1-11010-1-11010-1-11010-1-11010倍遞增稀釋法倍遞增稀釋法10g10g或或10ml10ml 供試品供試品 10101 1供試液供試液取相當(dāng)于取相當(dāng)于1g1g或或1ml1ml供試液用濾膜過濾、供試液用濾膜過濾、沖洗沖洗取下濾膜，菌面朝取下濾膜，菌面朝上放培養(yǎng)基上培養(yǎng)上放培養(yǎng)基上培養(yǎng)結(jié)果觀察結(jié)果觀察 與計數(shù)與計數(shù)數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)處理處理書 寫 檢 驗書 寫 檢 驗記錄單記錄單2.2.薄膜過

15、濾法薄膜過濾法2829303132陰性對照： 取供試品微生物限度檢查相應(yīng)的溶劑和稀釋液同法操作，陰性對照不得長菌結(jié)果判斷細菌總數(shù)真菌總數(shù)符合藥典該品種項下限度規(guī)定符合藥典該品種項下限度規(guī)定判定藥物的細菌、判定藥物的細菌、真菌總數(shù)檢驗合格真菌總數(shù)檢驗合格否則因從同一批次產(chǎn)品中重新抽樣，獨立復(fù)試否則因從同一批次產(chǎn)品中重新抽樣，獨立復(fù)試三次，以三次結(jié)果的平均值報告菌數(shù)三次，以三次結(jié)果的平均值報告菌數(shù)3.3.操作注意事項操作注意事項1.1.盡量使菌細胞分散開，使每個菌細胞生成盡量使菌細胞分散開，使每個菌細胞生成一個菌落，否則將會導(dǎo)致重大的技術(shù)誤差。一個菌落，否則將會導(dǎo)致重大的技術(shù)誤差。 2.2.為防止

16、細菌增殖及產(chǎn)生菌苔，制為防止細菌增殖及產(chǎn)生菌苔，制成供試液后，應(yīng)盡快稀釋，注皿。成供試液后，應(yīng)盡快稀釋，注皿。一般稀釋后應(yīng)在一般稀釋后應(yīng)在1 1小時內(nèi)操作完畢。小時內(nèi)操作完畢。 363.3.操作注意事項操作注意事項3.3.使用吸量管時，應(yīng)小心沿管壁加入，不使用吸量管時，應(yīng)小心沿管壁加入，不用觸及管內(nèi)溶液，以防吸管尖端外側(cè)黏附用觸及管內(nèi)溶液，以防吸管尖端外側(cè)黏附的溶液混入其中。的溶液混入其中。 4.4.注意抑菌現(xiàn)象。由于防腐劑未被中和，往注意抑菌現(xiàn)象。由于防腐劑未被中和，往往使平板計數(shù)結(jié)果受影響，如低稀釋時菌落往使平板計數(shù)結(jié)果受影響，如低稀釋時菌落少。而高釋釋度時菌落數(shù)反而增大。遇此情少。而高釋

17、釋度時菌落數(shù)反而增大。遇此情況應(yīng)重復(fù)檢驗，以確定是防腐劑影響還是操況應(yīng)重復(fù)檢驗，以確定是防腐劑影響還是操作技術(shù)誤差。作技術(shù)誤差。 3.3.操作注意事項操作注意事項5.5.為檢查和控制滅菌效果，應(yīng)做空白對照，為檢查和控制滅菌效果，應(yīng)做空白對照，以檢驗所使用的物品是否徹底滅菌及檢驗過以檢驗所使用的物品是否徹底滅菌及檢驗過程是否無菌操作。程是否無菌操作。 6.6.為便于區(qū)別藥品中的顆粒與菌落，可在為便于區(qū)別藥品中的顆粒與菌落，可在每每100mL 100mL 營養(yǎng)瓊脂中加入營養(yǎng)瓊脂中加入1mL0.51mL0.5的的TTC TTC 溶液，如有細菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，溶液，如有細菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅

18、色，而藥品的顆粒顏色無變化。而藥品的顆粒顏色無變化。4.4.菌落計數(shù)及報告方法菌落計數(shù)及報告方法宜選取細菌、酵母菌平均菌落數(shù)小于宜選取細菌、酵母菌平均菌落數(shù)小于300 cfu300 cfu、霉菌平均、霉菌平均菌落數(shù)小于菌落數(shù)小于100 cfu100 cfu的稀釋級，作為菌數(shù)報告（取兩位有效的稀釋級，作為菌數(shù)報告（取兩位有效數(shù)字）的依據(jù)。數(shù)字）的依據(jù)。（1 1）以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告）以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告1g1g，1ml1ml供試品中所含的菌數(shù)。供試品中所含的菌數(shù)。（2 2）如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級）如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋

19、級的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于1 1時，以時，以1 1乘以最低乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。 （1 1）陰性對照陰性對照試驗：取稀釋液試驗：取稀釋液10ml10ml按相應(yīng)按相應(yīng)供試品控制菌檢查法檢查，應(yīng)無菌生長。供試品控制菌檢查法檢查，應(yīng)無菌生長。（2 2）陽性對照陽性對照試驗：供試品試驗：供試品+10100CFU +10100CFU 陽陽性對照菌，應(yīng)檢出相應(yīng)的陽性對照菌。性對照菌，應(yīng)檢出相應(yīng)的陽性對照菌。 （3 3）供試品供試品控制菌檢查：依相應(yīng)的檢查方控制菌檢查：依相應(yīng)的檢查方法進行。法進行。 供試品供試品增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)分離培

20、養(yǎng)分離培養(yǎng)純培養(yǎng)純培養(yǎng)染色鏡檢染色鏡檢生化反應(yīng)試驗生化反應(yīng)試驗報告結(jié)果報告結(jié)果1.1.增菌培養(yǎng)目增菌培養(yǎng)目的的由于藥品在生產(chǎn)過程中，常受到由于藥品在生產(chǎn)過程中，常受到加熱、干燥等加工步驟的影響，加熱、干燥等加工步驟的影響，藥品中污染的藥品中污染的微生物微生物可可能能受到損受到損傷或呈休眠狀態(tài)，先進行增菌，傷或呈休眠狀態(tài)，先進行增菌，以修復(fù)受損細菌，恢復(fù)其生長繁以修復(fù)受損細菌，恢復(fù)其生長繁殖能力，使菌體數(shù)增加，提高檢殖能力，使菌體數(shù)增加，提高檢出率出率，避免出現(xiàn)漏檢。避免出現(xiàn)漏檢。2.2.分離培分離培養(yǎng)目的養(yǎng)目的經(jīng)增殖培養(yǎng)后經(jīng)增殖培養(yǎng)后, ,被檢菌大被檢菌大量繁殖，同時其他一些量繁殖，同時其他一

21、些雜菌也出現(xiàn)增殖。因此雜菌也出現(xiàn)增殖。因此分離培養(yǎng)能使目的菌從分離培養(yǎng)能使目的菌從混合菌中分離出來?；旌暇蟹蛛x出來。3.3.純培養(yǎng)目的純培養(yǎng)目的大量增殖被檢菌，用于大量增殖被檢菌，用于后面的進一步檢驗。后面的進一步檢驗。4.4.染色鏡染色鏡檢目的檢目的初步鑒定，觀察細菌的初步鑒定，觀察細菌的形態(tài)大小。形態(tài)大小。5.5.生化試驗生化試驗?zāi)康哪康淖罱K的鑒定依據(jù)，最終的鑒定依據(jù)，結(jié)合染色鏡檢得出結(jié)合染色鏡檢得出實驗結(jié)果，填寫檢實驗結(jié)果，填寫檢驗報告。驗報告。大腸埃希菌大腸埃希菌 俗稱大腸桿菌，屬腸桿俗稱大腸桿菌，屬腸桿菌科埃希菌屬，菌科埃希菌屬，革蘭陰性桿革蘭陰性桿菌，兼性厭氧菌，能發(fā)酵多菌，兼性

22、厭氧菌，能發(fā)酵多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。大腸埃希菌檢查意義大腸埃希菌檢查意義 大腸埃希菌為條件致病菌，當(dāng)人體免疫力低下或大腸埃希菌為條件致病菌，當(dāng)人體免疫力低下或是侵入腸外組織、器官，可引起腸外感染，乃至敗是侵入腸外組織、器官，可引起腸外感染，乃至敗血癥。也可隨人和動物的糞便排出體外，污染環(huán)境，血癥。也可隨人和動物的糞便排出體外，污染環(huán)境，一旦食品、藥品、水等物品中檢出該菌，說明已受一旦食品、藥品、水等物品中檢出該菌，說明已受糞便污染，可能存在其他腸道致病菌和寄生蟲卵，糞便污染，可能存在其他腸道致病菌和寄生蟲卵，人們飲用或服用它們則可能引起消化道傳染病。人們飲用或服用它們則可能引起消化道傳

23、染病。書寫檢驗書寫檢驗記錄單記錄單雙陽或雙陰性雙陽或雙陰性增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試液的液的制備制備檢查檢查結(jié)果結(jié)果判斷判斷配培配培養(yǎng)基養(yǎng)基和稀和稀釋液釋液靛基質(zhì)試驗靛基質(zhì)試驗熒光檢查熒光檢查一陰一陰一陽一陽分分離離純純化化最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷大腸埃希菌檢查流程圖大腸埃希菌檢查流程圖膽鹽乳糖膽鹽乳糖藍白螢光藍白螢光玫瑰紅色液面玫瑰紅色液面EMBEMB瓊脂瓊脂/ /麥麥康凱瓊脂康凱瓊脂菌落特征菌落特征革蘭染色、鏡檢革蘭染色、鏡檢 生化試驗生化試驗: :乳糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵試驗、試驗、IMViCIMViC試驗試驗MUGMUG培養(yǎng)基培養(yǎng)基 366nm366nm紫外燈紫外燈EMB瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基靛基

24、質(zhì)試驗靛基質(zhì)試驗紫黑色紫黑色金屬光金屬光澤澤玫瑰紅玫瑰紅色液面色液面大腸埃希菌大腸埃希菌產(chǎn)氣桿菌產(chǎn)氣桿菌 I M Vi C I M Vi C試驗試驗 大腸埃希菌大腸埃希菌 +(+(或或- -） + - -+ - - 產(chǎn)氣桿菌產(chǎn)氣桿菌 - - + +- - + +大腸埃希菌檢查結(jié)果報告大腸埃希菌檢查結(jié)果報告檢出大腸檢出大腸埃希菌埃希菌MUGMUG陽性，靛基質(zhì)陽性陽性，靛基質(zhì)陽性MUGMUG陽性，靛基質(zhì)陰性，陽性，靛基質(zhì)陰性，IMViCIMViC為，為，G G- -MUGMUG陰性，靛基質(zhì)陽性，陰性，靛基質(zhì)陽性，IMViCIMViC為，為，G G- -大腸菌群大腸菌群 大腸菌群是指大腸菌群是指37

25、37生長時生長時能能發(fā)酵乳糖發(fā)酵乳糖，在，在24h24h內(nèi)內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭陰性無芽胞需氧及兼性的革蘭陰性無芽胞需氧及兼性厭氧桿菌。厭氧桿菌。大腸菌群檢查意義大腸菌群檢查意義 大腸菌群主要存在于溫血動物糞便中，隨大腸菌群主要存在于溫血動物糞便中，隨糞便排出體外后可直接污染藥品，若產(chǎn)品中糞便排出體外后可直接污染藥品，若產(chǎn)品中檢出該菌群，表明該產(chǎn)品受到糞便污染，可檢出該菌群，表明該產(chǎn)品受到糞便污染，可能存在腸道致病菌并引起疾病，以此作為糞能存在腸道致病菌并引起疾病，以此作為糞便指示菌比大腸埃希菌更具廣泛衛(wèi)生學(xué)意義，便指示菌比大腸埃希菌更具廣泛衛(wèi)生學(xué)意義，是評價化妝品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。是

26、評價化妝品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣書寫檢驗書寫檢驗記錄單記錄單不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試液的液的制備制備配培配培養(yǎng)基養(yǎng)基和稀和稀釋液釋液檢查檢查結(jié)果結(jié)果判斷判斷30-3530-3518-24h18-24h分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)乳糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵驗證試驗驗證試驗最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷30-3530-3524-48h24-48h特特征征菌菌落落36361 1 1824h1824h膽鹽乳糖發(fā)酵管膽鹽乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)氣：氣泡紫黑色紫黑色/ /桃桃紅色紅色大腸菌群檢查流程圖大腸菌群檢查流程圖EMBEMB瓊脂

27、瓊脂/ /麥康麥康凱瓊脂平板凱瓊脂平板各供試品量的檢出結(jié)果各供試品量的檢出結(jié)果最可能的大腸菌群數(shù)最可能的大腸菌群數(shù)N N（個（個/g/g或或mlml）1.0g1.0g或或1.0ml1.0ml0.1g0.1g或或0.1ml0.1ml0.01g0.01g或或0.01ml0.01ml+ + + +10102 2+ + +- -1010N N 10102 2+ +- - -1 1N N1010- - - -1 1大腸菌群檢查結(jié)果報告大腸菌群大腸菌群檢查結(jié)果報告大腸菌群MPNMPN表表沙門菌沙門菌 沙門菌是指一群寄生于人沙門菌是指一群寄生于人類和動物腸道內(nèi)的類和動物腸道內(nèi)的革蘭陰性兼革蘭陰性兼性厭氧桿菌

28、性厭氧桿菌，不發(fā)酵乳糖和蔗，不發(fā)酵乳糖和蔗糖，發(fā)酵葡萄糖和甘露醇。糖，發(fā)酵葡萄糖和甘露醇。沙門菌檢查意義沙門菌檢查意義 沙門菌是腸桿菌科的重要致病沙門菌是腸桿菌科的重要致病菌，可隨糞便或帶菌者接觸污染藥菌，可隨糞便或帶菌者接觸污染藥品原輔料、制藥用水、設(shè)備、半成品原輔料、制藥用水、設(shè)備、半成品、成品，尤其是動物臟器為原料品、成品，尤其是動物臟器為原料的藥物，服用后有引起人類傷寒、的藥物，服用后有引起人類傷寒、副傷寒、急性腸炎即敗血癥等疾病副傷寒、急性腸炎即敗血癥等疾病的危險。的危險。58沙門菌檢查流程圖沙門菌檢查流程圖 靛基質(zhì)試驗靛基質(zhì)試驗 脲酶試驗脲酶試驗生化試驗生化試驗 氰化鉀試驗氰化鉀試

29、驗 賴氨酸脫羧酶試驗賴氨酸脫羧酶試驗 動力試驗動力試驗 血清學(xué)凝聚試驗血清學(xué)凝聚試驗有特征菌落有特征菌落三糖鐵瓊?cè)氰F瓊脂培養(yǎng)基脂培養(yǎng)基穿刺接種穿刺接種最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試液的液的制備制備書寫檢驗書寫檢驗記錄單記錄單分分離離純純化化無菌落或無特征菌落無菌落或無特征菌落配培配培養(yǎng)基養(yǎng)基和稀和稀釋液釋液預(yù)預(yù)增增菌菌營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)肉湯四硫磺酸鈉四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基亮綠培養(yǎng)基SSSS瓊脂瓊脂麥康凱瓊脂麥康凱瓊脂黑色黑色半透明半透明初步鑒別初步鑒別四硫磺酸鈉亮綠四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基培養(yǎng)基SS培養(yǎng)基培養(yǎng)基黑色黑色菌落菌落麥康凱培麥康凱培養(yǎng)基養(yǎng)基半透明半透明菌落菌落三糖鐵斜面三糖鐵

30、斜面疑似菌落疑似菌落賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基紫色紫色半固體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基半固體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基血清血清凝集凝集沙門菌檢查結(jié)果報告沙門菌檢查結(jié)果報告檢出沙門菌檢出沙門菌革蘭陰性桿菌革蘭陰性桿菌三糖鐵反應(yīng)及生化反應(yīng)符合沙門菌屬反應(yīng)三糖鐵反應(yīng)及生化反應(yīng)符合沙門菌屬反應(yīng)血清凝集試驗陽性反應(yīng)血清凝集試驗陽性反應(yīng)銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌屬于假銅綠假單胞菌屬于假單胞菌屬，為單胞菌屬，為革蘭氏陰性革蘭氏陰性桿菌，桿菌，氧化酶陽性氧化酶陽性，能產(chǎn)，能產(chǎn)生生綠膿菌素綠膿菌素。此外還能。此外還能液液化明膠，還原硝酸鹽化明膠，還原硝酸鹽為亞為亞硝酸鹽，在硝酸鹽，在424211條條件下能生長。件

31、下能生長。銅綠假單胞菌檢查意義銅綠假單胞菌檢查意義 銅綠假單胞菌在特殊情銅綠假單胞菌在特殊情況下可引起皮膚化膿感染、況下可引起皮膚化膿感染、泌尿道感染、中耳炎等。外泌尿道感染、中耳炎等。外傷及燒傷患者感染后最易引傷及燒傷患者感染后最易引起化膿，并引起敗血癥。為起化膿，并引起敗血癥。為保證消費者安全，化妝品中保證消費者安全，化妝品中不得檢出銅綠假單胞菌。不得檢出銅綠假單胞菌。最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試液的液的制備制備書寫檢驗書寫檢驗記錄單記錄單分分離離純純化化無菌落或無特征菌落無菌落或無特征菌落配培配培養(yǎng)基養(yǎng)基和稀和稀釋液釋液革蘭染色、鏡檢革蘭染色、鏡檢 氧化酶試驗氧化酶試

32、驗 綠膿菌素試驗綠膿菌素試驗生化試驗生化試驗 硝酸鹽還原試驗硝酸鹽還原試驗 4242生長試驗生長試驗 明膠液化試驗明膠液化試驗銅綠假單胞菌檢查流程圖銅綠假單胞菌檢查流程圖膽鹽乳糖培養(yǎng)基膽鹽乳糖培養(yǎng)基十六烷三甲基十六烷三甲基溴化銨瓊脂溴化銨瓊脂30-3530-351824h1824h30-3530-351824h1824h特征菌落特征菌落灰白色、扁平、灰白色、扁平、周圍有水溶性周圍有水溶性藍綠色素藍綠色素十六烷三甲基溴化銨平板十六烷三甲基溴化銨平板膽鹽乳糖培養(yǎng)基膽鹽乳糖培養(yǎng)基黃綠色黃綠色菌膜菌膜灰白色灰白色濕潤濕潤氧化酶試驗氧化酶試驗粉紅粉紅/紫紅色紫紅色綠膿菌素試驗綠膿菌素試驗鹽酸層呈粉紫色鹽

33、酸層呈粉紫色氯仿層呈藍綠色氯仿層呈藍綠色硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗N2明膠液化明膠液化試驗試驗明膠培養(yǎng)基（高層）明膠培養(yǎng)基（高層）明膠液化明膠液化銅綠假單胞菌檢查結(jié)果報告銅綠假單胞菌檢查結(jié)果報告 被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，經(jīng)證實為革被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，經(jīng)證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗皆為蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗皆為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝胞菌；如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和酸鹽還原產(chǎn)氣和4242生長試驗三者皆為陽性生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣

34、品中檢出銅綠假單胞菌。時，仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌 金黃色葡萄球菌為金黃色葡萄球菌為革蘭氏革蘭氏陽性球菌陽性球菌，呈葡萄狀排列，無，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。血漿凝固酶陽性。金黃色葡萄球菌檢查意義金黃色葡萄球菌檢查意義 金黃色葡萄球菌在外界分金黃色葡萄球菌在外界分布較廣，抵抗力也較強，能引布較廣，抵抗力也較強，能引起人體局部化臟性病灶，嚴重起人體局部化臟性病灶，嚴重時可導(dǎo)致敗血癥，因此化妝品時可導(dǎo)致敗血癥，因此化妝品中檢驗金黃色葡萄球菌有重要中檢驗金黃色葡萄球菌有重要意義。意義。革蘭染色、鏡檢革蘭染色、鏡檢 生化試驗生化試驗: :血漿凝固酶試驗血漿凝固酶試驗最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試品的品的處理處理書寫檢驗書寫檢驗記錄單記錄單分分離離純純化化無菌落或無特征菌落無菌落或無特征菌落配培配培養(yǎng)基養(yǎng)基和稀和稀釋液釋液30-3530-3530-3530-35營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或亞碲酸鈉肉湯或亞碲酸鈉肉湯18-24h18-24h卵黃氯化鈉或甘卵黃氯化鈉或甘露醇氯化鈉瓊脂露醇氯化鈉瓊脂24