第十章甾體激素類藥物的分析

1、基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲C20C21ABCD12345678910111213141516171819分類：分類：甾體激素甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素OHOOHOCH2OHHHH腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素氫化可的松氫化可的松OHOOHOHFHOCH3OHCH3腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素醋酸地塞米松醋酸地塞米松OOHHHHOCH3雄性激素雄性激素丙酸睪酮丙酸睪酮OOHHHHO蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸諾龍苯丙酸諾龍COHHHCH3O孕激素孕激素黃體酮黃體酮CHOHHHOHCH雌

2、激素雌激素炔雌醇炔雌醇一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 1. 腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素2. 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素3. 孕激素孕激素4. 雌激素雌激素二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)甾體激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl（母核）（母核）(二二) 官能團(tuán)的反應(yīng)官能團(tuán)的反應(yīng)腎上腺腎上腺皮質(zhì)激皮質(zhì)激素藥物素藥物呈色呈色四氮唑鹽四氮唑鹽OH1 C17 醇酮基醇酮基還原性還原性A. 呈色反應(yīng)呈色反應(yīng)腎上腎上腺皮腺皮質(zhì)激質(zhì)激素藥素藥物物Cu2O橙紅色橙紅色堿性堿性酒石酸銅酒石酸銅B. 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)Ag黑色

3、黑色氨制硝酸銀氨制硝酸銀甾酮類甾酮類激素藥激素藥物物呈色呈色羰基試劑羰基試劑2. C3酮基和酮基和C20酮基酮基常用的羰基試劑：常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼OOHNCONHNH2HClCONHNOHN異煙腙（黃色）異煙腙（黃色）睪酮睪酮OCCH3O2NCONHNH2HCl黃體酮黃體酮CONHNCCH3NHNOCNN異煙雙腙（黃色）異煙雙腙（黃色）具有甲酮具有甲酮基或活潑基或活潑亞甲基的亞甲基的甾體激素甾體激素類藥物類藥物呈色呈色亞硝基鐵氰化納亞硝基鐵氰化納間二硝基酚間二硝基酚芳香醛芳香醛3. 甲酮基甲酮基黃體酮黃體酮藍(lán)紫色藍(lán)紫色亞硝基鐵亞硝基

4、鐵 氰化納氰化納其他甾體其他甾體淡橙色淡橙色不顯色不顯色COCH3O黃體酮黃體酮 NOCNFe OHH2O2+-4Fe5CNNOCHCOO有機(jī)氟有機(jī)氟F有機(jī)破壞有機(jī)破壞有機(jī)氯有機(jī)氯Cl4. 有機(jī)鹵素有機(jī)鹵素茜素氟藍(lán)茜素氟藍(lán) 硝酸亞鈰硝酸亞鈰硝酸硝酸硝酸銀硝酸銀AgCl 呈色呈色 OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOH茜素氟藍(lán)茜素氟藍(lán)OOOHOCH2NCH2COOCeCH2COOFOHF- Ce雌激素雌激素類藥物類藥物紅色偶紅色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸5. 酚羥基酚羥基含炔基含炔基的甾體的甾體激素激素銀鹽沉淀銀鹽沉淀硝酸銀硝酸銀6. 乙炔基乙炔基RCCHAgNO3RCCAg

5、炔雌醇炔雌醇OHCCHHOOHCCAgHO白白3AgNO 黃黃體體酮酮雙雙酮酮肟肟黃黃體體酮酮鹽鹽酸酸羥羥胺胺 .p .m 苯苯甲甲酸酸酯酯炔炔雌雌醇醇苯苯甲甲酰酰氯氯KOH .p .m (三三) 制備衍生物測(cè)定制備衍生物測(cè)定m.p. .p .m 睪睪丸丸素素丙丙酸酸睪睪酮酮醇醇制制KOH鹽鹽酸酸氨氨基基脲脲苯苯丙丙酸酸諾諾龍龍 分分解解約約 .p .m縮氨基脲衍生物縮氨基脲衍生物-3-酮酮 240nm苯環(huán)苯環(huán) 280nmOCCC CCCCCC （五）（五） UV法法（七）（七） TLC法法 主要用于甾體激素類藥物主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別制劑的鑒別 方法：對(duì)照品法方法：對(duì)照品法 要求供

6、試品溶液所顯主斑要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的點(diǎn)的顏色顏色和和位置位置與對(duì)照品溶液與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。的主斑點(diǎn)相同。（八）（八） HPLC法法 主要用于甾體激素類藥物主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）德軟膏、醋酸氟輕松軟膏） 方法：對(duì)照品法方法：對(duì)照品法 要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的的色譜圖中，供試品峰的tR與與對(duì)照品峰的對(duì)照品峰的tR一致。一致。三、三、 雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查（一）其他甾體（一）其他甾體 定義定義 與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱為甾體化合物都稱為“其他甾

7、體其他甾體” 特點(diǎn)特點(diǎn) （1）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì) （2）結(jié)構(gòu)類似）結(jié)構(gòu)類似2. 來(lái)源來(lái)源 原料、中間體、異構(gòu)體、原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物降解產(chǎn)物4. 方法（具有一定分離能力）方法（具有一定分離能力） TLC法（高低濃度對(duì)比法）法（高低濃度對(duì)比法） HPLC法（類似高低濃度對(duì)比法）法（類似高低濃度對(duì)比法）（1）TLC法（高低濃度對(duì)比法）法（高低濃度對(duì)比法） 判定方法：判定方法：v 規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目v 規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色（2）HPLC法（高低濃度對(duì)比法）法（高低濃度對(duì)比法） 判定方法：判定方法：v 規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目v 規(guī)定雜質(zhì)

8、峰面積規(guī)定雜質(zhì)峰面積（二）游離磷酸（二）游離磷酸地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉氫化可的松磷酸鈉氫化可的松磷酸鈉倍他米松磷酸鈉倍他米松磷酸鈉氫化潑尼松磷酸鈉氫化潑尼松磷酸鈉對(duì)照品法對(duì)照品法原理：原理： OnHMoOPHPOHPOMoOH還原還原鉬藍(lán)鉬藍(lán)對(duì)對(duì)照照液液供供試試液液對(duì)對(duì)樣樣還還原原鉬鉬酸酸銨銨AAnm 方法：方法：（四）雌酮（四）雌酮原理原理 Zimmermann反應(yīng)反應(yīng)紫紫紅紅色色間間二二硝硝基基苯苯堿性堿性KOH乙醇乙醇OCCH2高純度高純度OHONO2NO2硒硒四、四、來(lái)源來(lái)源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脫氫脫氫原理原理nmA環(huán)環(huán)己己烷烷苯苯并并苯

9、苯硒硒二二唑唑二二氨氨基基萘萘 ,Se, .pH SeSe鹽酸羥胺鹽酸羥胺氧瓶燃燒氧瓶燃燒方法方法四、含量測(cè)定四、含量測(cè)定（一）（一）UV法法-3-酮酮 240nm（）腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 苯環(huán)苯環(huán) 280nm（）雌激素雌激素（二）反應(yīng)分光光度法（二）反應(yīng)分光光度法1. 適用于非分光光度活性藥物適用于非分光光度活性藥物2. 使待測(cè)組分光譜位移，避免干擾使待測(cè)組分光譜位移，避免干擾3. 增加測(cè)定靈敏度增加測(cè)定靈敏度4. 增加選擇性增加選擇性弱、非分弱、非分光光度活光光度活性藥物性藥物強(qiáng)分光強(qiáng)分光光度活光度活性藥物性藥物化學(xué)反應(yīng)化學(xué)反

10、應(yīng) 腎上腺皮質(zhì)激素類腎上腺皮質(zhì)激素類C17 -醇酮基醇酮基強(qiáng)還原性強(qiáng)還原性1. 原理原理有有色色甲甲瓚瓚四四氮氮唑唑鹽鹽醇醇酮酮基基 COH -還原還原四氮唑比色法四氮唑比色法醛醛基基酮酮甾甾基基甲甲酸酸衍衍生生物物醇醇酮酮基基 eO羧羧酸酸衍衍生生物物羥羥基基 OH-分子重排分子重排OOHHOHCOHOCOHHCNNNNOCH3HCNNNNOCH3雙甲瓚（暗藍(lán)）雙甲瓚（暗藍(lán)）nmmax525 2. 方法方法ChP TTC（RT） BP TTC（RT）USP BT對(duì)照品法對(duì)照品法 氫氧化四甲基銨氫氧化四甲基銨對(duì)照液對(duì)照液供試液供試液ATTC4045暗暗3. 討論討論（1） 基團(tuán)對(duì)反應(yīng)速度的影響

11、基團(tuán)對(duì)反應(yīng)速度的影響C11= O C11OHC21OH C21-酯酯C16無(wú)論何種取代基無(wú)論何種取代基（2） 溶劑、水分的影響溶劑、水分的影響含水量含水量5%含水含水10%A10%含水含水30%幾無(wú)反應(yīng)幾無(wú)反應(yīng) 無(wú)醛無(wú)水乙醇無(wú)醛無(wú)水乙醇醛醛 A 無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇（3） O2與光線的影響與光線的影響反應(yīng)過(guò)程反應(yīng)過(guò)程反應(yīng)產(chǎn)物反應(yīng)產(chǎn)物怕光怕光避光、快速避光、快速O2影響影響顏色強(qiáng)顏色強(qiáng)度和穩(wěn)度和穩(wěn)定性定性隔絕空氣、隔絕空氣、 快速、充快速、充N2（4）堿的種類及加入順序）堿的種類及加入順序反應(yīng)應(yīng)在強(qiáng)堿性（反應(yīng)應(yīng)在強(qiáng)堿性（pH13.75）條件下進(jìn)行條件下進(jìn)行以以氫氧化四甲基銨氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳的

12、結(jié)果最佳堿堿試試液液四四氮氮唑唑鹽鹽皮皮質(zhì)質(zhì)激激素素溶溶液液加入順序：加入順序：（5） 溫度與時(shí)間溫度與時(shí)間t甲瓚分解甲瓚分解%ChP 25 4045BP 30 1h4. 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 缺點(diǎn)缺點(diǎn) 影響因素太多影響因素太多 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 測(cè)定結(jié)果能指示藥品測(cè)定結(jié)果能指示藥品 的穩(wěn)定性（氧化及降的穩(wěn)定性（氧化及降 解產(chǎn)物無(wú)此反應(yīng)）解產(chǎn)物無(wú)此反應(yīng)）腎上腺皮質(zhì)激素、腎上腺皮質(zhì)激素、 雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素C3酮基酮基1. 原理原理異異煙煙腙腙（黃黃）酮酮基基異異煙煙肼肼 CHCl（縮合）（縮合）異煙肼比色法異煙肼比色法CONHNOHN異煙腙（黃色）異煙腙（黃色）2. 方法方法 異異煙煙肼肼?lián)]揮去去乙乙醇醇對(duì)對(duì)照照液液供供試試液液A CHCl暗暗45對(duì)照品法對(duì)照品法3.討論討論反應(yīng)速度反應(yīng)速度（1）C3= O C17= O 、 C20= O C11= O 不反應(yīng)不反應(yīng)反應(yīng)專屬性反應(yīng)專屬性 C3酮基酮基（2）溶劑的選擇）溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇甲醇、乙醇無(wú)水甲醇無(wú)水甲醇無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇（3）水分、）水分、O2與光線的影響與光線的影響含水量含水量腙水解腙