常用試劑的配方

1、一.常用貯液與溶液1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白

2、完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20?；蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。8mol/L乙酸鉀（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加

3、水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2&

4、#183;6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。10mg/mlRnase（無DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用

5、1mol/L的TrisHCl調(diào)pH至7.5，于-20貯存。（配制過程中要戴手套）5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。100三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，

6、用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。100×Denhardt試劑（Denhardt's regent）成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（組分V）水 2g2g2g加水至總體積為100ml依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20貯存。10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standard DNA lig

7、ase buffer）（粘端、平端連接）成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）0.5mg/ml BSA（組分V）（可選）水 5ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液1ml 1mol/L 貯液200ul 100 mmol/L 貯液50ul 1 mmol/L 貯液0.5ml 10 mg/mL 貯液2.25ml將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以購(gòu)買到100mmo

8、l/L純dNTPs貯液，-80可貯存至少6個(gè)月。10mmol/L dNTP混合液成分及終濃度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 貯液2ul 100 mmol/L dCTP 貯液2ul 100 mmol/L dGTP 貯液2ul 100 mmol/L dTTP 貯液12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及終濃度配制10ml溶液各成分的用量質(zhì)量濃度為20聚乙二醇2.5mol/L 氯化鈉水 20g50ml 5 mol/L 氯化鈉 或 14.6g

9、 固體氯化鈉補(bǔ)足100ml 加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。20×SSC成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 檸檬酸三鈉（二水）3mol/L 氯化鈉水 88.2g175.3g補(bǔ)足1L 溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEP

10、C處理Tris緩沖液。甲酰胺（deionized formamide）直接購(gòu)買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphate buffer）按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液

11、:溶解142g于足量水中使終體積為1L。1mol/L 磷酸二氫鈉（ml）1mol/L 磷酸氫二鈉（ml）最終pH值877850815775735685625565510450390330280 123150185225265315375435490550610670720 6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于懸浮和貯存DNA）成分及終濃度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.

12、0）98.8ml Tris緩沖液（Tris-HCl buffer）將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。濃鹽酸的體積（ml）pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2 二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris堿1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.

13、5 mol/L EDTA（pH 8.0）補(bǔ)足1L 5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液成分及終濃度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris堿445 mmol/L 硼酸鹽10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）補(bǔ)足1L 染料1溴酚藍(lán)（bromophenol blue）加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙錠（ethidium bromide）小心稱取1g

14、溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4貯存。凝膠上樣液（gel loading solutions）6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氫氧化鈉6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400型）0.15溴甲酚綠0.25二甲苯青FF水 300ul 10N 氫氧化鈉120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg補(bǔ)足到10ml 6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚藍(lán)0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDT

15、A15聚蔗糖（400型）水 1.5ml 1溴酚藍(lán)1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g補(bǔ)足到10ml 6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.25溴酚藍(lán)0.25二甲苯青FF15聚蔗糖（400型）水 2.5ml 1溴酚藍(lán)2.5ml 1二甲苯青FF1.5g 補(bǔ)足到10ml 6×甘油凝膠上樣液（4貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚藍(lán)0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50甘油水 1.5ml 1溴酚藍(lán)1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/

16、L EDTA（pH8.0）3ml 3.9ml 6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.15溴酚藍(lán)0.15二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水 1.5ml 1溴酚藍(lán)1.5ml 1二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g 補(bǔ)足到10ml 10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）成分及終濃度配制10ml溶液各成分用量0.2溴酚藍(lán)0.2二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1SDS50甘油 水 20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 SDS5ml補(bǔ)足到

17、10ml 三.常用培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化鈉10g如果需要用1N NaOH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。SOB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化鈉0.5g1 mol/L 氯化鉀2.5ml用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。SOC培養(yǎng)基成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1m

18、ol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌）。TB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60，再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌）。2×YT培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化鈉4ml如果需要用1N NaOH（1ml

19、）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。YPD培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因?yàn)閅PD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。四.常用抗生素氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以2