瓊脂糖凝膠電泳

1、 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳一、實驗原理瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，可以形成具瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，可以形成具有剛性的濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的有剛性的濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。濃度。DNADNA分子在堿性緩沖液中帶負電荷，在外加電場作分子在堿性緩沖液中帶負電荷，在外加電場作用下向正極泳動。用下向正極泳動。DNADNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應與分分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應與分子篩效應。不同子篩效應。不同DNADNA的分子量大小及構型不同，電的分子量大小及構型不同，電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。泳時的泳動率就不同，從而分出不

2、同的區(qū)帶。二、實驗目的 通過此實驗操作，掌握瓊脂糖凝膠通過此實驗操作，掌握瓊脂糖凝膠電泳分離電泳分離DNADNA的原理和技術。的原理和技術。植物基因組植物基因組DNA電泳儀，電泳槽，電子天平，移液器，槍頭，電泳儀，電泳槽，電子天平，移液器，槍頭，微波爐，紫外透射檢測儀等。微波爐，紫外透射檢測儀等。 瓊脂糖，瓊脂糖，1 1TAETAE電泳緩沖液，溴化乙錠（電泳緩沖液，溴化乙錠（EBEB），），6 6載樣緩沖液載樣緩沖液 ： 0.25% 0.25%溴酚藍溴酚藍 ，0.25%0.25%二甲苯青二甲苯青 ，40%40%蔗糖水溶液蔗糖水溶液; ; 0.25% 0.25%溴酚藍溴酚藍 ，0.25%0.25

3、%二甲苯青二甲苯青 ，30%30%甘油水溶液甘油水溶液三、實驗材料、器具及藥品三、實驗材料、器具及藥品(一)制膠1.1.準備好凝膠成型器，插入成型梳。準備好凝膠成型器，插入成型梳。2.2.將將0.8g0.8g瓊脂糖加至瓊脂糖加至100 ml 1100 ml 1TAETAE緩沖液中，搖勻。在緩沖液中，搖勻。在微波爐中加熱至瓊脂糖完全熔化，冷卻至微波爐中加熱至瓊脂糖完全熔化，冷卻至6060以下。以下。3.3.加入加入5ul5ul溴化乙錠（終濃度溴化乙錠（終濃度0.5ug/ ml 0.5ug/ ml ）至熔化的瓊脂）至熔化的瓊脂糖液中混勻，注意避免出現氣泡。糖液中混勻，注意避免出現氣泡。 4.4.將

4、冷卻的將冷卻的瓊脂糖倒入凝膠成型器瓊脂糖倒入凝膠成型器，制備凝膠。，制備凝膠。四、實驗步驟（二）電泳1.待膠變硬，直到它呈乳白狀且不透明（約待膠變硬，直到它呈乳白狀且不透明（約2020分鐘），小分鐘），小心垂直向上拔出梳子，將凝膠置入電泳槽中，加心垂直向上拔出梳子，將凝膠置入電泳槽中，加1 1TAETAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠1-2mm1-2mm。2.2.用移液器吸取用移液器吸取2l 2l 的的6 6載樣緩沖液于封口膜上，再加載樣緩沖液于封口膜上，再加入入5l5l樣品，混勻后，樣品，混勻后，小心加入點樣孔小心加入點樣孔。 3.3.接通電源，調節(jié)電壓至接通電源，調節(jié)電壓

5、至4-5V/cm4-5V/cm，DNADNA從負極移到正極。從負極移到正極。電泳時間電泳時間30306060分鐘。分鐘。4. 4. 電泳結束，關掉電源。電泳結束，關掉電源。1. 1. 將電泳完畢的瓊脂糖凝膠置于自動成像系統(tǒng)將電泳完畢的瓊脂糖凝膠置于自動成像系統(tǒng) 的平臺中間；的平臺中間；2. 2. 開通紫外光，可見到發(fā)出熒光的開通紫外光，可見到發(fā)出熒光的DNADNA條帶，在條帶，在 電腦中觀察圖像；電腦中觀察圖像；3. 3. 關上紫外光電源，在電腦中編輯和保存圖像；關上紫外光電源，在電腦中編輯和保存圖像；4. 4. 根據圖像判斷結果。根據圖像判斷結果。五、結果分析五、結果分析 圖圖1 1 玉米基因組玉米基因組DNA1%DNA1%瓊脂凝膠電泳圖瓊脂凝膠電泳圖 圖圖2 2 PCRPCR產物瓊脂凝膠電泳圖產物