第二章提取分離方法

1、第二章第二章中藥化學(xué)成分的一般研究方中藥化學(xué)成分的一般研究方法法第一節(jié) 中藥化學(xué)成分及生物合成簡介v一、中藥化學(xué)成分類型簡介一、中藥化學(xué)成分類型簡介v1 1、糖類、糖類單糖、低聚糖、多糖大多屬于水溶性成分。單糖、低聚糖、多糖大多屬于水溶性成分。v2 2、苷類、苷類糖和非糖物質(zhì)通過糖的端基糖和非糖物質(zhì)通過糖的端基C C原子鏈接而成的原子鏈接而成的化合物。化合物。v 苷苷 苷元苷元 苷多親水苷多親水 苷元偏親脂苷元偏親脂OOHOHOHOHOOHOHOHv3、醌類醌類分子中具有醌式結(jié)構(gòu)的化合物分子中具有醌式結(jié)構(gòu)的化合物v 萘醌類萘醌類v分子含酚羥基，有一定酸性，可溶于堿水。分子含酚羥基，有一定酸性，

2、可溶于堿水。v4 4、苯丙素類苯丙素類含有含有C C6 6C C3 3骨架的化合物骨架的化合物v（1 1）香豆素：香豆素：鄰羥基桂皮酸形成的酯，分子多含酚羥基，鄰羥基桂皮酸形成的酯，分子多含酚羥基，偏親水性偏親水性 （2）木脂素木脂素：具有：具有2個個C6C3骨架的衍生物骨架的衍生物 OOOHOOOHv5、黃酮、黃酮具有具有C6C3 C6骨架的衍生物骨架的衍生物 異牡荊素異牡荊素v多含酚羥基，顯酸性，可溶于堿水。多含酚羥基，顯酸性，可溶于堿水。v6、萜和揮發(fā)油、萜和揮發(fā)油分子式符合（分子式符合（C5H8）n通式的化合物。通式的化合物。v 薄荷醇薄荷醇 龍腦龍腦v揮發(fā)油有揮發(fā)性，可隨水蒸汽蒸餾。

3、揮發(fā)油有揮發(fā)性，可隨水蒸汽蒸餾。OOOHglcOHOHOHOHv7、生物堿生物堿含含N有機化合物，有堿性，可溶于酸有機化合物，有堿性，可溶于酸水。水。v8、甾體類化合物甾體類化合物含甾體母核的化合物。含甾體母核的化合物。龍膽堿龍膽堿NOOOHOHOOOv9、三萜化合物三萜化合物基本骨架由基本骨架由30個個C組成。組成。v10、鞣質(zhì)鞣質(zhì)復(fù)雜的多元酚類化合物總稱。復(fù)雜的多元酚類化合物總稱。 沒食子酸沒食子酸 逆沒食子酸逆沒食子酸v屬于水溶性成分。屬于水溶性成分。CH3CH3CH3CH3CH3HHHCH3CH3CH3HOHOHOHOHCOOHOOOOOHOHOHOH二、各類中藥化學(xué)成分的主要的生物合

4、成途徑二、各類中藥化學(xué)成分的主要的生物合成途徑v類型分類類型分類vC2單位（單位（CH3COOH）：脂肪酸、酚酸、苯醌、等）：脂肪酸、酚酸、苯醌、等聚酮類聚酮類vC5單位（異戊二烯）：萜類、甾類單位（異戊二烯）：萜類、甾類vC6單位單位 ：香豆素、木脂素等苯丙素類化合物：香豆素、木脂素等苯丙素類化合物 v氨基酸：如生物堿類氨基酸：如生物堿類v復(fù)合單位：由上述單位復(fù)合構(gòu)成復(fù)合單位：由上述單位復(fù)合構(gòu)成v（一）醋酸（一）醋酸 丙二酸途徑丙二酸途徑 （AAMA途徑）途徑）v產(chǎn)物：脂肪酸、酚類、蒽醌等產(chǎn)物：脂肪酸、酚類、蒽醌等v 1、脂肪酸、脂肪酸 v 飽和脂肪酸飽和脂肪酸AAMA途徑途徑 (乙酰丙二酸

5、酯途徑：縮合乙酰丙二酸酯途徑：縮合 、還原、還原 ) 不飽和脂肪酸不飽和脂肪酸 氧化成羥基衍生物氧化成羥基衍生物 （ 脫水而成脫水而成 ）v（注：（注：ATP：三磷酸腺苷：三磷酸腺苷 ADP：二磷酸腺苷）：二磷酸腺苷）v2、酚類、酚類 AAMA途徑：只有縮合途徑：只有縮合v3、醌類、醌類 在在 AAMA途徑中由多酮環(huán)合成各種醌類和聚酮類途徑中由多酮環(huán)合成各種醌類和聚酮類v（二）甲戊二羥酸途徑（二）甲戊二羥酸途徑（ MVAMVA）v產(chǎn)物產(chǎn)物 萜類、甾體類萜類、甾體類vMVA MVA 頭頭尾尾 DMPDMP（焦磷酸二甲烯丙酯）（焦磷酸二甲烯丙酯） v IPP (IPP (焦磷酸異戊烯酯焦磷酸異戊烯

6、酯) ) v氧化、還原、脫羧、縮合、重排氧化、還原、脫羧、縮合、重排v 反式角鯊烯反式角鯊烯 三萜、甾類三萜、甾類v（三）莽草酸途徑（桂皮酸途徑（三）莽草酸途徑（桂皮酸途徑 ）v產(chǎn)物產(chǎn)物v具有具有C6-C3 骨架的苯丙素衍生物：香豆骨架的苯丙素衍生物：香豆 素、木質(zhì)素、木脂素等素、木質(zhì)素、木脂素等v具有具有 C6-C3-C6 骨架的衍生物：黃酮類骨架的衍生物：黃酮類v前體前體 苯丙氨酸苯丙氨酸 v（四）氨基酸途徑（四）氨基酸途徑 （aa途徑）v產(chǎn)物產(chǎn)物 生物堿生物堿 v前體前體 烏氨酸烏氨酸 、賴氨酸、賴氨酸脂肪胺脂肪胺 （TCA循環(huán)中循環(huán)中酮酸還原氨）酮酸還原氨） v苯丙氨酸、酪氨酸苯丙氨酸

7、、酪氨酸 、色氨酸、色氨酸 芳香族生物堿芳香族生物堿（莽草酸途徑）（莽草酸途徑）（五）復(fù)合途徑（五）復(fù)合途徑v1、AAMA途徑途徑 莽草酸途徑莽草酸途徑v2、AAMA途徑途徑 MVA途徑途徑v3、aa MVA途徑途徑v4、aa AAMA途徑途徑v5、aa 莽草酸途徑莽草酸途徑第二節(jié)第二節(jié) 中藥化學(xué)成分的提取分離方法中藥化學(xué)成分的提取分離方法 一、中藥有效成分的提取方法一、中藥有效成分的提取方法（一）溶劑提取法（一）溶劑提取法v依據(jù)：化學(xué)成分的溶解性（極性）v關(guān)鍵：提取溶劑的選擇v溶劑的選擇原則：相似相溶的原則，價廉、易得、無毒、安全等。v提取方法：浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)回流提

8、取法。 提取溶劑提取溶劑 性能特點性能特點 適宜提取成分適宜提取成分 提取方法提取方法強極性溶劑 溶解范圍廣（酸水、堿水） 生物堿鹽 穿透能力強 苷類 價廉易得、安全 糅質(zhì) 煎煮法 糖類 滲漉法 水 有些脂溶性成分溶解不完全 氨基酸 （酸水） 有些苷類成分的酶解 蛋白質(zhì) 水提液易發(fā)霉、變質(zhì) 水溶性雜質(zhì)多，過濾困難 沸點高，濃縮困難常用提取溶劑性能特點 提取溶劑提取溶劑 性能特點性能特點 適宜提取成分適宜提取成分 提取方法提取方法 除去多糖、 溶解范圍廣（不同濃度乙醇） 蛋白質(zhì)外 滲濾法（稀醇） 水溶性雜質(zhì)溶出少 的大多數(shù) 浸漬法 乙醇 可抑制酶的活性 化學(xué)成分 回流法 提取液不易發(fā)霉、變質(zhì) 均

9、可 連續(xù)回流法 大部分可回收利用 但有揮發(fā)性、易燃燒 甲醇 溶解特點與乙醇相似，但有毒 丙酮 溶解性能同乙醇，但沸點低、易揮發(fā)，作為提取溶劑不常用； 但對色素溶解性能好，在分離、精制時常用。 親水性有機溶劑（和水可任意混溶）常用提取溶劑性能特點 提取溶劑提取溶劑 性能特點性能特點 適宜提取成分適宜提取成分 提取方法提取方法 對化合物溶解選擇性較強;水溶性雜質(zhì)少、易純化 ; 游離生物堿 回流法揮發(fā)性大、易燃燒、有毒 ; 苷元 連續(xù)回流法價格昂貴，對提取設(shè)備要求高; 某些苷類穿透力較弱，提取時間長;作為提取溶劑不常用。 如:乙醚 bp. 35，極易燃 氯仿 bp. 61、d 1. 480，不易燃，

10、毒性大,對生物堿溶解性好 苯 bp. 80.1，毒性大 石油醚 沸程 3060、6090、90120 脫脂、脫色常用 于甲醇、乙醇不能任意混溶。親脂親脂性有性有機溶劑機溶劑常用提取溶劑性能特點v（二）水蒸氣蒸餾法（二）水蒸氣蒸餾法v適用于揮發(fā)性成分（主要是揮發(fā)油）的提?。ㄈ┒趸汲R界流體萃取技術(shù)（三）二氧化碳超臨界流體萃取技術(shù)（COCO2 2 - SFE - SFE）超臨界流體萃取技術(shù)超臨界流體萃取技術(shù)：以超臨界流體作為萃取介質(zhì)的一種提取新技術(shù)。超臨界流體超臨界流體：處于臨界溫度（Tc）、臨界壓力（Pc）以上，介于氣體與液體之間的流體。特點特點：具有液體和氣體的雙重特性。如：密度與液體近

11、似黏度與氣體近似，對很多物質(zhì)有很強的溶解能力，擴散系數(shù)是液體的100倍（不及氣體）中藥提取常用的超臨界流體 CO2的優(yōu)點：v 1. 臨界溫度（Tc=31.4）接近室溫, 熱敏成分穩(wěn)定。v 2. 臨界壓力（Pc=7.37 MPa）不太高, 易操作。v 3. 本身呈惰性，與化合物不反應(yīng)。v 4. 價格便宜。超臨界流體萃取中藥成分的主要優(yōu)點：v 1. 可以在接近室溫下工作，防止熱敏成分的破壞或逸散。v 2. 萃取過程幾乎不用有機溶劑，萃取物中無溶劑殘留，對環(huán)境無污染。v 3. 提取效率高，節(jié)約能耗。二 、中藥化學(xué)成分分離與精制方法 分離依據(jù)分離依據(jù) 分離方法分離方法 分離原理或特點分離原理或特點 二

12、相萃取法 分配系數(shù)（K）差異 逆流分溶法（CCD） 液滴逆流色譜法（DCCC） 高速逆流色譜法（HSCCC） 液-液分配柱色譜 正相色譜和反相色譜 加壓液相色譜法 正相色譜和反相色譜 快速色譜 低壓液相色譜（LPLC） 中壓液相色譜（MPLC） 高壓(效)液相色譜法（HPLC） 分配系數(shù)（分配系數(shù)（K）差異）差異 溶劑沉淀法溶劑沉淀法:1.水提醇沉法（水/醇法） 除去多糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)2.醇提水沉法（醇/水法） 除去樹脂、葉綠素等脂溶性雜質(zhì)3.醇/醚（丙酮）法 皂苷的純化（除去脂溶性雜質(zhì)）4.酸/堿法 生物堿的分離純化 5.堿/酸法 酸性成分（如苷元）的分離純化試劑沉淀法試劑沉淀法:1.

13、鈣、鋇、鉛鹽沉淀法 酸性成分的分離2.生物堿沉淀試劑沉淀法 生物堿的分離純化3.結(jié)晶及重結(jié)晶 化合物的進(jìn)一步精制溶解度差異溶解度差異中藥化學(xué)成分分離與精制方法物理吸附（表面吸附）特點物理吸附（表面吸附）特點: 無選擇性、吸附可逆、可快速進(jìn)行，應(yīng)用較多 如: 硅膠 極性吸附劑 氧化鋁 極性吸附劑 吸附性差別 活性炭 非極性吸附劑化學(xué)吸附的特點化學(xué)吸附的特點: 有選擇性、吸附牢固或不可逆、洗脫難，應(yīng)用少。 如: 堿性氧化鋁 對酚酸類（黃酮、蒽醌）的吸附強 酸性硅膠 對生物堿的吸附強吸附性差別吸附性差別 中藥化學(xué)成分分離與精制方法半化學(xué)吸附的特點半化學(xué)吸附的特點：吸附力介于上述二者之間，較弱。 如:

14、 聚酰胺 （氫鍵吸附） 大孔吸附樹脂吸附原理（范德華引力或產(chǎn)生氫鍵） 分子篩原理（本身多孔性結(jié)構(gòu)的性質(zhì)決定的）吸附性差別吸附性差別 中藥化學(xué)成分分離與精制方法中藥化學(xué)成分分離與精制方法透析法 (半透膜膜孔的分子篩作用)凝膠濾過法 (三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的分子篩作用) 超濾法 (分子大小不同引 起的擴散速度的差別) 超速離心法 (溶質(zhì)在超速 離心作用下沉降性的差別) 蛋白質(zhì)的脫鹽精制 蛋白、多糖的分離及 小分子化合物的分離 大分子化合物精制分離 同上。 分子大小差別分子大小差別 中藥化學(xué)成分分離與精制方法中藥化學(xué)成分分離與精制方法 陽離子交換樹脂 離子交換樹脂法 陰離子交換樹脂 應(yīng)用：用于氨基酸、生物堿

15、、有機酸的分離） 離解程度不同離解程度不同中藥化學(xué)成分分離與精制方法中藥化學(xué)成分分離與精制方法常用色譜分離方法介紹常用色譜分離方法介紹 吸附色譜吸附色譜吸附劑吸附劑 分離原理分離原理 吸附規(guī)律吸附規(guī)律 應(yīng)用應(yīng)用 硅膠 吸附原理 弱酸性、極性吸附劑 廣泛（酸、堿及 化合物極性越大、 中性成分均可） 吸附能力強（難洗脫） 溶劑極性越小，吸附力越強 氧化鋁 吸附原理 堿性、極性吸附劑 堿性、中性成分 吸附規(guī)律同上 （ 酸性成分與鋁絡(luò)合）活性炭 吸附原理 非極性吸附劑 從稀水溶液中富集微量物 吸附規(guī)律與上相反 脫色（脂溶性色素） 吸附劑吸附劑 分離原理分離原理 吸附規(guī)律吸附規(guī)律 應(yīng)用應(yīng)用 聚酰胺 氫鍵

16、吸附 酚羥基數(shù)目多，吸附力強 能形成分子內(nèi)氫鍵者，吸 黃酮、蒽醌的分離 附力下降 母核芳香化程度高者，吸 附力增強，水（介質(zhì)）中 除鞣質(zhì) 吸附力強，水洗脫力弱 大孔吸附樹脂 吸附原理 非極性化合物易被非極性 樹脂吸附 糖與苷的分離 分子篩原理 溶劑中溶解度增大，吸附 力下降 （從水提液富集苷 非極性樹脂，極性小的溶 劑洗脫力強 生物堿的精制常用色譜分離方法介紹常用色譜分離方法介紹 類類 型型 固定相固定相 流動相流動相 應(yīng)應(yīng) 用用正相色譜 水 BAW系統(tǒng) 極性、中極性物質(zhì)分離（以PPC為例）反相色譜 ODS 20.2 105 1mg左右制備用高壓液相色譜（HPLC） 5mg中壓液相色譜 ( M

17、PLC ) 5.0520.2 105 100mg低壓液相色譜 ( LPLC ) 10mg 類類 型型 原原 理理 溶脹溶劑溶脹溶劑 應(yīng)應(yīng) 用用葡聚糖凝膠 分子篩（大?。?水 多糖、多肽、（Sephadex G） 蛋白質(zhì)分離 羥丙基葡聚糖凝膠 分子篩（糖苷） 水、極性有機溶劑 適于不同類型（SephadexLH-20）吸附原理（苷元） 或二者的混合溶劑 化合物分離葡聚糖凝膠色譜葡聚糖凝膠色譜 離子交換吸附樹脂離子交換吸附樹脂樹脂類型樹脂類型 原原 理理 應(yīng)應(yīng) 用用陽離子交換樹脂 離子交換 從酸水溶液中 吸附堿性成分（生物堿） 強酸性（R-SO3-H+） （陽離子） （除去酸性、中性成分）弱酸性（

18、-COO-H+）陰離子交換樹脂 離子交換 從堿水溶液中 吸附酸性成分（有機酸）強堿性（RN+(CH3)3CI-） （陰離子） （除去堿性、中性成分）弱堿性 (伯、仲、叔胺) 第三節(jié)、中藥有效成分化學(xué)結(jié)構(gòu)的研究方法第三節(jié)、中藥有效成分化學(xué)結(jié)構(gòu)的研究方法（一）化合物純度的判定方法（一）化合物純度的判定方法v1結(jié)晶均勻、一致。v2熔點明確、敏銳（0.51.0）。v3TLC (PPC):三種以上不同展開劑展開，均呈現(xiàn)單一斑點。v4HPLC、GC也可以用于化合物純度的判斷。（二）四大光譜在結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用（二）四大光譜在結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用v紫外 可見光譜（UV -VIS） 共軛體系特征v分子中電子躍遷（從

19、基態(tài)至激發(fā)態(tài)）。其中，n-*、-* 躍遷可因吸收紫外光及可見光所引起，吸收光譜將出現(xiàn)在光的紫外區(qū)和可見區(qū)（200700nm）。 200nm 400 700nm 紫外區(qū)（UV） 可見區(qū)（VIS） 應(yīng)用：應(yīng)用：v推斷化合物的骨架類型 共軛系統(tǒng)v取代基團(tuán)的推斷 如：加入診斷試劑推斷黃酮的取代模式（類型、數(shù)目、排列方式）v用于含量測定（以最大吸收波長作為檢測波長進(jìn)行含量測定）（三）四大光譜在結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用（三）四大光譜在結(jié)構(gòu)測定中的應(yīng)用紅外光譜紅外光譜（IR）分子中價鍵的伸縮及彎曲振動所引起的吸收而測得的吸收圖譜，稱為紅外光譜。4000 3600 3000 1500 1000 625cm-1特征頻率

20、區(qū) 指紋區(qū) 特征官能團(tuán)的鑒別 化合物真?zhèn)蔚蔫b別 羥基（酚羥基、醇羥基） 36003200 cm-1 游離羥基 3600 cm-1 氫鍵締合羥基 34003200 cm-1 羰基 16001800 cm-1酮 1710 cm-1酯 17101735 cm-1芳環(huán) 1600、1580、1500cm-1 有23個峰 雙鍵 16201680 cm-1 兩個化合物完全相同的條件 1、 特征區(qū)完全吻合 2、 指紋區(qū)也需完全一致 紅外光譜紅外光譜（IR）1H-NMR（核磁共振氫譜）v信息參數(shù)：化學(xué)位移（）、峰面積、峰裂分v（s 、d、t、q、m）及偶合常數(shù)（）（1）化學(xué)位移（ppm）: v 與1H核所處的化

21、學(xué)環(huán)境（1H核周圍的電子云密度）有關(guān)v 電子云密度大，處于高場，值小v 電子云密度小，處于低場，值大1H-NMR（核磁共振氫譜）（核磁共振氫譜）0.9-C-CH3 1.8-C=C-CH32.1-COCH3 3.0-NCH3 3.7-OCH3 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0-COOH -CHO Ar-H -C=C-H 常見結(jié)構(gòu)的化學(xué)位移大致范圍常見結(jié)構(gòu)的化學(xué)位移大致范圍（要求熟記）（要求熟記） (ppm) 推斷化合物的結(jié)構(gòu)（含1H核基團(tuán)的結(jié)構(gòu)） （二）峰面積（二）峰面積: 磁等同質(zhì)子的數(shù)目磁等同質(zhì)子的數(shù)目 用積分曲線面積（高度）表示用積分曲線面積（高度）表示磁不等同兩個或兩組

22、1H核在一定距離內(nèi)相互自旋偶合干擾，發(fā)生的分裂所表現(xiàn)出的不同裂分 符合 n+1 規(guī)律 ( n = 磁等同質(zhì)子的數(shù)目 ) 用偶合常數(shù)（J）表示 峰裂分的數(shù)目 峰裂分的距離 不同系統(tǒng)偶合常數(shù) (J Hz) 大小s 單峰 d 雙峰 t 三重峰 q 四重峰 m 多重峰 芳環(huán) J鄰610Hz；J間 03Hz ；J對01Hz 雙鍵 J順711 Hz；J反1218 Hz飽和烴類相鄰碳原子上質(zhì)子偶合常數(shù)的大小與兩個氫原子之間的立體夾角有關(guān)： =60O J = 24 Hz =180 O J = 910 Hz 環(huán)己烷及其類似物相鄰碳原子上質(zhì)子的偶合常數(shù)： Jaa 1013Hz ( =180 O )；Jae 25H

23、z ( =60 O ) Jee 25Hz ( =60 O )（三）峰裂分及偶和常數(shù)（三）峰裂分及偶和常數(shù)1H-NMR核磁核磁共振輔助技術(shù)共振輔助技術(shù)v（1）重氫 (D2O) 交換 推斷活潑質(zhì)子（羥基）的存在與否。v（2）核增益效應(yīng)（NOE）：指在核磁共振中選擇性照射一種質(zhì)子使其飽和，則與該質(zhì)子在立體空間位置上接近的另一或數(shù)個質(zhì)子信號強度增高的現(xiàn)象。v（3）溶劑位移：苯誘導(dǎo)位移 由于溶劑分子（苯）的接近，對化合物將發(fā)生不同的屏蔽及去屏蔽作用，使質(zhì)子化學(xué)位移發(fā)生變化的現(xiàn)象。13C-NMR（ 核磁共振碳譜核磁共振碳譜 ）vFT-NMR: 即脈沖傅里葉變換核磁共振。其裝置原理為采用強的脈沖照射使分子中

24、所有的13C 核同時發(fā)生共振，生成在馳豫期內(nèi)表現(xiàn)為指數(shù)形式衰減的正弦波信號（自由誘導(dǎo)衰減；FID），再經(jīng)傅里葉變換即成為正常的NMR 信號。隨著脈沖掃描次數(shù)的增加及計算機的累加計算，13C 信號將不斷得到增強，噪音則越來越弱。經(jīng)過若干次的掃描及累加計算，最后即得到一張好的NMR譜。 由于該裝置的出現(xiàn)及計算機的引入，才使得13C-NMR用于有機化合物結(jié)構(gòu)研究成為可能。v信息參數(shù)：化學(xué)位移（C）、異核偶合常數(shù)（JCH）、馳豫時間（T1） 不同 13C 核C大小與13C 核所處的化學(xué)環(huán)境（周圍電子云密度）有關(guān) 用于13C 核類型的推斷 ( C ppm ) 150220( c=o) 200 150 1

25、00 50 0 c=c Ar 5080 (c-o) 飽和碳原子（060） 主要結(jié)構(gòu)13C 核C的大致范圍 ( 要求熟記 ) （1）化學(xué)位移：大致范圍（）化學(xué)位移：大致范圍（C）0200ppm常用常用13C- NMR測定技術(shù)及其特征測定技術(shù)及其特征 v(1)質(zhì)子寬帶去偶（BBO）: 也叫全氫去偶（COM）、噪音去偶。采用寬頻電磁輻射照射所有1H核使之飽和后測得的13C- NMR譜（即去掉所有氫核對碳核的偶合影響）。特征：圖譜簡化，每個碳原子都為單峰，互不重疊。方便于判斷碳信號的化學(xué)位移。伯、仲、叔碳峰增強，季碳為弱峰（照射1H核產(chǎn)生NOE效應(yīng)）無法區(qū)別碳上連接的1H核數(shù)目。（2）偏共振去偶：（此

26、法現(xiàn)已基本上被）偏共振去偶：（此法現(xiàn)已基本上被DEPT所替代）所替代）僅保留直接與碳原子相連1H核對碳的偶合J 1CH（即去掉氫核對碳核的遠(yuǎn)程偶合J 2CH J 3CH） 伯（-CH3) 四重峰 （q）仲（-CH2-) 三重峰 ( t ) 叔（-CH-) 雙峰 ( d ) 季（-C-） 單峰 ( s ) 碳核（伯、仲、叔、季）類型的判斷 特征（3）DEPT (無畸變極化轉(zhuǎn)移增強法無畸變極化轉(zhuǎn)移增強法) ：（為（為13C- NMR譜的一種常規(guī)測定方法）譜的一種常規(guī)測定方法） 系通過改變照射1 H核的脈沖寬度（或設(shè)定不同的馳豫時間）使不同類型13C信號在譜圖上呈單峰，并分別呈現(xiàn)正向峰或倒置峰 脈沖

27、寬度脈沖寬度 峰的特征峰的特征=450 CH3 CH2 CH ( 代表正向峰)=900 CH =1350 CH3 CH CH2 （ 代表倒置峰） 可用于區(qū)別伯（CH3）、仲（CH2）、叔（CH）碳信號與質(zhì)子寬帶去偶譜比較，還可以確定季碳（-C-）信號 二維核磁共振譜（二維核磁共振譜（2D-NMR譜）譜） 質(zhì)譜質(zhì)譜（MS）:v1確定分子量（高分辨質(zhì)譜 可將分子量精確到小數(shù)點后三位）, 計算分子式。v2提供其他結(jié)構(gòu)信息。如黃酮類，依碎片離子峰可以確定A-環(huán), B-環(huán)的取代模式。v3與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較用于化合物的鑒別（相同條件下，其裂解是符合一定規(guī)律的）。v4依裂解特征及碎片離子 推定或復(fù)核未知化合物分子的部分結(jié)構(gòu)。 質(zhì)譜主要離子源的電離方式及特點質(zhì)譜主要離子源的電離方式及特點 （1）電子轟擊質(zhì)譜（）電子轟擊質(zhì)譜（EI-MS）：）：目前常用。但對于熱敏成分及難于氣化的成分（醇、糖苷、部分羧酸等）大分子物質(zhì)（多糖、肽類）難以氣化 測不到分子離子峰亦無法測得分子量 電離新方法 （樣品不必加熱氣化而直接電離） 化合物乙酰化或三甲基硅烷化（TMS化）制成熱穩(wěn)定性好的揮發(fā)性衍生物進(jìn)行測定 質(zhì)譜主要離子源的電離方式及特點質(zhì)譜