X 病毒學總論

1、勤洗手，保持鼻、嘴和口腔的清潔衛(wèi)生，不要共用碗筷、水勤洗手，保持鼻、嘴和口腔的清潔衛(wèi)生，不要共用碗筷、水 杯，打噴嚏和咳嗽要用毛巾掩住口鼻，提倡用小毛巾，每天洗杯，打噴嚏和咳嗽要用毛巾掩住口鼻，提倡用小毛巾，每天洗 凈曬干，盡量不用和不要亂扔紙巾。凈曬干，盡量不用和不要亂扔紙巾。盡量少去人多擁擠的地方和人流聚集的地方。避免身體接觸，盡量少去人多擁擠的地方和人流聚集的地方。避免身體接觸， 包括握手、親吻、共餐等。包括握手、親吻、共餐等。多一些機會到戶外活動，保證睡眠，注意休息，避免勞累。多一些機會到戶外活動，保證睡眠，注意休息，避免勞累。常曬衣被，辦公室和居室勤通風換氣、充足睡眠、戶外鍛煉身常曬

2、衣被，辦公室和居室勤通風換氣、充足睡眠、戶外鍛煉身 體、避免勞累、吃熟食，養(yǎng)成良好的個人衛(wèi)生習慣。體、避免勞累、吃熟食，養(yǎng)成良好的個人衛(wèi)生習慣。天氣不太炎熱，盡量不開或少開空調(diào)，尤其是中央空調(diào)，提倡天氣不太炎熱，盡量不開或少開空調(diào)，尤其是中央空調(diào)，提倡 常開窗戶，自然界新鮮空氣最好。常開窗戶，自然界新鮮空氣最好。出現(xiàn)流感征兆或病癥者，例如有發(fā)燒，要盡早到醫(yī)院發(fā)熱門診出現(xiàn)流感征兆或病癥者，例如有發(fā)燒，要盡早到醫(yī)院發(fā)熱門診 檢查確診。感冒的人在家休息，在沒有明確診斷之前不要出門、檢查確診。感冒的人在家休息，在沒有明確診斷之前不要出門、 上班，限制與其他人接觸，做好個人衛(wèi)生和環(huán)境衛(wèi)生工作。上班，限制

3、與其他人接觸，做好個人衛(wèi)生和環(huán)境衛(wèi)生工作。 預防預防“甲型甲型H1N1流感流感”課程名稱課程名稱：醫(yī)醫(yī)學學微微生生物物學學教學內(nèi)容教學內(nèi)容：病毒學病毒學教學目的教學目的：掌握病毒的基本概念、基本結構、增掌握病毒的基本概念、基本結構、增殖方法及增殖周期、殖方法及增殖周期、干擾現(xiàn)象干擾現(xiàn)象熟悉病毒的化學組成、熟悉病毒的化學組成、病毒的遺傳變異病毒的遺傳變異了解理化因素對病毒的影響，病毒的分類了解理化因素對病毒的影響，病毒的分類方法。方法。教學方法教學方法：理論：理論教學重點、難點、關鍵教學重點、難點、關鍵：病毒的基本結構、增殖方法及增殖周病毒的基本結構、增殖方法及增殖周期和干擾現(xiàn)象期和干擾現(xiàn)象緒緒

4、 論論概述：概述：最早的病毒，是指最早的病毒，是指“有毒有毒”的意思，一切引起傳染的意思，一切引起傳染病的物質。病的物質。自光學顯微鏡問世，確立了原蟲、細菌、真菌后，自光學顯微鏡問世，確立了原蟲、細菌、真菌后，將未觀察到的病毒稱將未觀察到的病毒稱“傳染因子傳染因子”。隨著電子顯微鏡誕生，負染色技術，超薄切片技術隨著電子顯微鏡誕生，負染色技術，超薄切片技術和分子雜交技術的建立，對病毒有更完整的認識。和分子雜交技術的建立，對病毒有更完整的認識。煙草花葉病毒煙草花葉病毒（1892年年)天花病毒天花病毒病毒學概述病毒學概述一、病毒的基本概念一、病毒的基本概念 是一類形體微小，結構簡單（非細是一類形體微

5、小，結構簡單（非細胞結構）、只含有一種類型的核酸、專性胞結構）、只含有一種類型的核酸、專性活細胞寄生、以復制方式繁殖的微生物?；罴毎纳?、以復制方式繁殖的微生物。1 1、病毒（、病毒（VirusVirus）: : 病毒的基本特點病毒的基本特點1個體微?。簜€體微小：測量單位是測量單位是nm。電子顯微鏡下。電子顯微鏡下觀察，可通過細菌濾器。觀察，可通過細菌濾器。2結構簡單：結構簡單：非細胞型微生物，基本結構是非細胞型微生物，基本結構是核心加衣殼，核心內(nèi)只含一種類型核酸。核心加衣殼，核心內(nèi)只含一種類型核酸。3必須在必須在活細胞內(nèi)寄生活細胞內(nèi)寄生，以，以復制方式增殖復制方式增殖4對抗生素不敏感對抗生素

6、不敏感，干擾素可抑制其增殖干擾素可抑制其增殖2 2、病毒體、病毒體( (virionvirion) )： 完整的、成熟的病毒顆粒。具有典完整的、成熟的病毒顆粒。具有典型的形態(tài)結構，并有感染性。型的形態(tài)結構，并有感染性。 如如:有包膜病毒有包膜病毒核衣殼核衣殼病毒體病毒體裸病毒裸病毒核衣殼核衣殼=病毒體病毒體3、亞病毒、亞病毒(subvirus)： 結構比病毒更簡單，不具備病毒結構比病毒更簡單，不具備病毒顆粒，是一種小分子量的顆粒，是一種小分子量的RNARNA或蛋白質或蛋白質的致病因子。的致病因子。1)類病毒類病毒(viroid):植物病毒，植物病毒，250400個核苷酸組成個核苷酸組成2)衛(wèi)星

7、病毒（衛(wèi)星病毒（satellites）：植物致病因子）：植物致病因子3)朊粒朊粒(prion)：正常宿主細胞基因編碼的、構象異：正常宿主細胞基因編碼的、構象異常的傳染性蛋白粒子。常的傳染性蛋白粒子。克克-雅病雅病朊粒朊粒特性病毒細菌濾菌器不能通過能通過結 構非細胞原核細胞細胞壁無有核酸類型DNA或RNADNARNA人工培養(yǎng)不能能增殖方式復制二分裂抗生素無效有效干擾素有效無效二、病毒與細菌的區(qū)別二、病毒與細菌的區(qū)別病毒感染的臨床意義病毒感染的臨床意義1.病毒感染涉及面廣病毒感染涉及面廣,危害極大危害極大,75%-80%的急性傳染病由病毒引起的急性傳染病由病毒引起2.病毒性疾病的傳染性強病毒性疾病

8、的傳染性強,傳播迅速傳播迅速,傳播途徑廣泛傳播途徑廣泛3.病毒性疾病并發(fā)癥復雜病毒性疾病并發(fā)癥復雜,后遺癥嚴后遺癥嚴重重,死亡率高死亡率高4.由于對抗生素無效由于對抗生素無效,故治療有效藥故治療有效藥物較少物較少5.由于體積微小和嚴格的活細胞內(nèi)由于體積微小和嚴格的活細胞內(nèi)寄生寄生,故診斷困難故診斷困難病毒的基本性狀病毒的基本性狀一、病毒的基本性狀一、病毒的基本性狀（一）體積微?。ㄒ唬w積微小 (1)測量單位：納米（測量單位：納米（nm） （2）可通過濾菌器）可通過濾菌器（3）大多用電子顯微鏡觀察）大多用電子顯微鏡觀察(4)根據(jù)大小根據(jù)大小大型病毒大型病毒300200100nm如痘病毒如痘病毒中

9、型病毒中型病毒50250nm如流感病毒、人類免疫缺如流感病毒、人類免疫缺陷病毒陷病毒、皰疹病毒等、皰疹病毒等小型病毒小型病毒20-50nm左右左右如脊髓灰質炎病毒如脊髓灰質炎病毒1、葡萄球菌、葡萄球菌1000nm2、立克次體、立克次體450nm3、衣原體、衣原體390nm4、痘苗病毒、痘苗病毒300230nm5、大腸埃希菌噬菌體、大腸埃希菌噬菌體6595nm(頭部頭部)12100nm(尾部尾部)6、流感病毒、流感病毒100nm7、腺病毒、腺病毒70nm8、乙腦病毒、乙腦病毒40nm9、脊髓灰質炎病毒、脊髓灰質炎病毒30nm3、測定病毒大小的方法、測定病毒大小的方法電子顯微鏡電子顯微鏡超濾膜法超

10、濾膜法超速離心法超速離心法等等二、病毒的形態(tài)二、病毒的形態(tài)球形球形流感病毒流感病毒桿形桿形煙草花葉病煙草花葉病絲狀絲狀流感病毒流感病毒彈形彈形狂犬病毒狂犬病毒磚形磚形痘類病毒痘類病毒蝌蚪形蝌蚪形噬菌體病毒噬菌體病毒l形態(tài)：球形、桿狀或絲狀、彈狀、形態(tài)：球形、桿狀或絲狀、彈狀、磚形、蝌蚪形磚形、蝌蚪形，也有復合狀也有復合狀病毒的結構病毒的結構基本結構基本結構核衣殼（核衣殼（nucleocapsid）（病毒體）（病毒體）病毒病毒核心（核心（core）衣殼（衣殼（capsid）輔助結構輔助結構包膜（包膜（envelope）二、病毒的結構和化學組成及功能二、病毒的結構和化學組成及功能1、病毒核心（、病

11、毒核心（core）:核酸核酸-DNA或或RNA感染性核酸感染性核酸:某些病毒的某些病毒的單股正鏈單股正鏈RNA具有具有信使信使RNA的作用，去除蛋白衣殼后仍可復制出子代病毒體，這種的作用，去除蛋白衣殼后仍可復制出子代病毒體，這種核酸稱為感染性核酸。核酸稱為感染性核酸。感染性比病毒體弱，因易受核酸酶破壞感染性比病毒體弱，因易受核酸酶破壞感染范圍比病毒體廣，因不受受體限制感染范圍比病毒體廣，因不受受體限制分類分類DNA病毒：病毒：HBV、HSVRNA病毒：病毒：HAV、流感病毒、流感病毒逆轉錄病毒：逆轉錄病毒：HIV* * 病毒體的核酸由雙股或單股病毒體的核酸由雙股或單股DNADNA或或 RNAR

12、NA分子構成，為病毒的基因組，分子構成，為病毒的基因組， 蘊藏著病毒的全部遺傳信息蘊藏著病毒的全部遺傳信息 *可控制病毒的復制增殖可控制病毒的復制增殖 * * 是病毒遺傳變異的物質基礎是病毒遺傳變異的物質基礎 * * 決定病毒對宿主細胞的感染性和感染決定病毒對宿主細胞的感染性和感染 類型類型 病毒核酸功能2、病毒衣殼（capsid）l螺旋對稱型螺旋對稱型（如：正、副黏病毒及彈狀病毒）如：正、副黏病毒及彈狀病毒）有包膜螺旋對稱病毒 病毒核酸為盤旋伸展狀，殼微粒則沿著盤病毒核酸為盤旋伸展狀，殼微粒則沿著盤旋的核酸鏈呈螺旋形排列，似玉米棒上玉米旋的核酸鏈呈螺旋形排列，似玉米棒上玉米粒的排列。病毒外觀

13、呈桿狀粒的排列。病毒外觀呈桿狀l2020面體立體對稱型面體立體對稱型（如：大多數(shù)球狀病毒）（如：大多數(shù)球狀病毒） 病毒核酸高度盤繞于病毒體病毒核酸高度盤繞于病毒體的核心，衣殼圍繞在外面，殼的核心，衣殼圍繞在外面，殼微粒大多排列成微粒大多排列成2020面體立體對面體立體對稱，稱，2020面體的每個面都呈等邊面體的每個面都呈等邊三角形。整個病毒外觀呈球形，三角形。整個病毒外觀呈球形，如腺病毒如腺病毒 l復合對稱型：復合對稱型：既有立體對稱又有螺旋對稱既有立體對稱又有螺旋對稱l( (如：痘病毒和噬菌體）如：痘病毒和噬菌體） 其頭部為其頭部為2020面體立體面體立體對稱的球形，尾部為螺對稱的球形，尾部

14、為螺旋對稱的桿形旋對稱的桿形 l是病毒從宿主細胞內(nèi)出芽釋放時從宿主細胞獲是病毒從宿主細胞內(nèi)出芽釋放時從宿主細胞獲得的包繞在病毒核衣殼外面的雙層膜得的包繞在病毒核衣殼外面的雙層膜l主要成分是蛋白質、多糖及脂類主要成分是蛋白質、多糖及脂類l有包膜的病毒以有包膜的病毒以“出芽出芽”方式釋放方式釋放l包膜子?；虼掏毁x予病毒特殊功能，包膜子?；虼掏毁x予病毒特殊功能，如如血凝素血凝素（HAHA）和）和神經(jīng)氨酸酶神經(jīng)氨酸酶（NANA）l有包膜病毒對脂溶劑（如乙醚、氯仿）有包膜病毒對脂溶劑（如乙醚、氯仿）敏感，能滅活病毒，乙醚常用于鑒定敏感，能滅活病毒，乙醚常用于鑒定病毒有無包膜病毒有無包膜l功能功能維護病毒

15、體結構的完整性維護病毒體結構的完整性具有與宿主細胞膜親和及融合的性具有與宿主細胞膜親和及融合的性能，起到輔助病毒感染的作用能，起到輔助病毒感染的作用具有病毒抗原的特異性具有病毒抗原的特異性三、病毒的增殖三、病毒的增殖（一）病毒增殖的方式（一）病毒增殖的方式復制復制 dsDNA病毒復制示意圖病毒復制示意圖通過病毒體表面的配體蛋白與易感細胞表通過病毒體表面的配體蛋白與易感細胞表面特異性受體相結合面特異性受體相結合,故其結合具有特異故其結合具有特異性和不可逆性性和不可逆性隨機碰撞或離子間的吸引隨機碰撞或離子間的吸引 例：例：HIV病毒病毒吸附吸附第二階段，稱真正吸附，需生第二階段，稱真正吸附，需生理

16、溫度理溫度0-4具有特異性，嗜組織特性具有特異性，嗜組織特性具有不可逆性具有不可逆性是研究抗病毒藥物的著手點是研究抗病毒藥物的著手點l吞飲吞飲l無包膜病毒無包膜病毒被宿主細胞吞噬，進入胞內(nèi)被宿主細胞吞噬，進入胞內(nèi)l融合融合l直接穿入直接穿入:微小病毒微小病毒l有包膜病毒有包膜病毒的包膜與宿主細胞膜直接融的包膜與宿主細胞膜直接融合，病毒核衣殼進入細胞合，病毒核衣殼進入細胞l在細胞溶酶體酶的作用下，脫去在細胞溶酶體酶的作用下，脫去衣殼蛋白釋放病毒核酸衣殼蛋白釋放病毒核酸l早期蛋白合成早期蛋白合成階段階段轉錄、翻譯而產(chǎn)生病毒生物合成中必需的酶轉錄、翻譯而產(chǎn)生病毒生物合成中必需的酶類及某些抑制或阻斷細

17、胞核酸和蛋白質合成類及某些抑制或阻斷細胞核酸和蛋白質合成的的非結構蛋白非結構蛋白l晚期蛋白合成晚期蛋白合成階段階段復制病毒核酸，轉錄、翻譯而產(chǎn)生病毒的復制病毒核酸，轉錄、翻譯而產(chǎn)生病毒的結結構蛋白構蛋白各病毒隱蔽期長短不一，如脊灰病毒各病毒隱蔽期長短不一，如脊灰病毒為為3 34 4小時，而腺病毒為小時，而腺病毒為16161818小時。小時。l隱蔽期隱蔽期生物合成階段用電鏡方法在細胞查不到完生物合成階段用電鏡方法在細胞查不到完整病毒，用血清學方法也測不到病毒抗原整病毒，用血清學方法也測不到病毒抗原(1)DNA病毒的生物合成病毒的生物合成以病毒以病毒DNA為模板為模板 依賴依賴DNA的的RNA聚合

18、酶聚合酶 轉錄出早期轉錄出早期mRNA 翻譯合成病毒早期蛋白質翻譯合成病毒早期蛋白質 以親代以親代DNA為模板為模板復制出大量子代病毒核酸復制出大量子代病毒核酸 以子代病毒核酸為模板以子代病毒核酸為模板 轉錄出晚期轉錄出晚期mRNA 翻譯合成病毒晚期蛋白質翻譯合成病毒晚期蛋白質 DNA多聚酶多聚酶功能蛋白功能蛋白結構蛋白結構蛋白包膜蛋白包膜蛋白衣殼蛋白衣殼蛋白(2)RNA病毒的生物合成病毒的生物合成正鏈正鏈RNA負鏈負鏈RNA正鏈正鏈RNA蛋白質蛋白質負鏈負鏈RNA正鏈正鏈RNA蛋白質蛋白質正鏈正鏈RNA具有具有mRNA功能功能轉錄合成病毒早期蛋白質轉錄合成病毒早期蛋白質 翻譯合成病毒晚期蛋白

19、質翻譯合成病毒晚期蛋白質 (3)逆轉錄病毒的生物合成逆轉錄病毒的生物合成以病毒以病毒RNA為模板為模板 逆轉錄酶逆轉錄酶轉錄出互補轉錄出互補DNA 形成形成RNA:DNA雜交中間體雜交中間體 形成雙股形成雙股DNA,整合在宿主細胞整合在宿主細胞DNA中中 復制出病毒復制出病毒RNA,再按再按RNA復制方式進行復制方式進行 先形成空心衣殼，核酸從衣殼裂隙進先形成空心衣殼，核酸從衣殼裂隙進入形成核衣殼入形成核衣殼l無包膜病毒無包膜病毒l有包膜病毒有包膜病毒 核衣殼與細胞的膜系統(tǒng)（漿膜或核膜）核衣殼與細胞的膜系統(tǒng)（漿膜或核膜） 結合形成包膜結合形成包膜l裝配的部位裝配的部位除痘病毒外，除痘病毒外，D

20、NADNA病毒病毒均在均在細胞核細胞核內(nèi)裝配內(nèi)裝配RNARNA病毒病毒與痘病毒則在與痘病毒則在細胞漿細胞漿內(nèi)裝配內(nèi)裝配l無包膜病毒無包膜病毒均以破胞方式釋放均以破胞方式釋放l有包膜的病毒有包膜的病毒以出芽方式釋放到細胞外以出芽方式釋放到細胞外通常細胞不死亡，仍能繼續(xù)分裂增殖通常細胞不死亡，仍能繼續(xù)分裂增殖l從感染細胞直接進入正常細胞從感染細胞直接進入正常細胞病毒復制周期病毒復制周期1、頓挫感染（、頓挫感染（abortive infection)： 不能為病毒復制提供相應不能為病毒復制提供相應的酶、能量及必要成分的細胞的酶、能量及必要成分的細胞。 能為病毒復制提供相應的酶、能為病毒復制提供相應的

21、酶、 能量及必要成分的細胞。能量及必要成分的細胞。非容納細胞非容納細胞(:non-permissive cell)容納細胞容納細胞( (permissive cell) : :2 2、缺陷病毒、缺陷病毒( (defective virusdefective virus) )：3、缺陷性干擾顆粒、缺陷性干擾顆粒（defective interfering particle,DIP）: 為核酸部分缺損或被宿主為核酸部分缺損或被宿主DNA片段片段替換后復制產(chǎn)生的一類亞基因組的缺失替換后復制產(chǎn)生的一類亞基因組的缺失突變體突變體,基因組比完整病毒小，在依賴基因組比完整病毒小，在依賴同源完整病毒復制時同源

22、完整病毒復制時,速度比完整病毒速度比完整病毒快快,感染占優(yōu)勢感染占優(yōu)勢,從而可干擾完整病毒從而可干擾完整病毒復制復制( (三三) )干擾現(xiàn)象干擾現(xiàn)象( (interferenceinterference) )：可競爭或破壞細胞表面的受體而干擾后者的吸附可競爭或破壞細胞表面的受體而干擾后者的吸附 類型：異種干擾、同種干擾、同種異型干擾。類型：異種干擾、同種干擾、同種異型干擾。第三節(jié)第三節(jié)病毒的遺傳變異病毒的遺傳變異1.毒力變異：毒力變異：一一.病毒性狀的變異病毒性狀的變異*病毒的毒力可在自然界感染的宿主中病毒的毒力可在自然界感染的宿主中逐漸下降，使同一病毒具有不同毒株逐漸下降，使同一病毒具有不同

23、毒株*病毒的毒力在實驗動物體內(nèi)連續(xù)傳代病毒的毒力在實驗動物體內(nèi)連續(xù)傳代后逐漸下降，用于制備疫苗后逐漸下降，用于制備疫苗2.抗原變異：抗原變異：有的病毒抗原極不穩(wěn)定，易發(fā)生變異有的病毒抗原極不穩(wěn)定，易發(fā)生變異而產(chǎn)生新的毒株，導致傳染病流行而產(chǎn)生新的毒株，導致傳染病流行3.條件致死突變株條件致死突變株(conditional-lethal mutant)指病毒突變后在特定條件下能生長，指病毒突變后在特定條件下能生長，而在原來條件下不能繁殖而被致死的病毒而在原來條件下不能繁殖而被致死的病毒株。株。溫度敏感溫度敏感性突變株性突變株(temperatant-sensitive mutant,ts)28-

24、35條件下能增殖，稱容許條件下能增殖，稱容許性溫度性溫度37-40 37-40 條件下不能增殖，稱非條件下不能增殖，稱非溶許性溫度溶許性溫度某些野生型毒株在兩種溫度條件下均能增殖某些野生型毒株在兩種溫度條件下均能增殖4.宿主范圍突變株宿主范圍突變株(host-range mutant,hr)狂犬病毒自然界中的野毒株狂犬病毒自然界中的野毒株形成固定毒株形成固定毒株突變突變適于家兔顱內(nèi)增殖適于家兔顱內(nèi)增殖制備疫苗制備疫苗連續(xù)傳代連續(xù)傳代二二.病毒變異的機制病毒變異的機制1.基因突變基因突變突變突變自發(fā)突變自發(fā)突變誘發(fā)突變：誘發(fā)突變：如溫度、射線、亞硝酸鹽等如溫度、射線、亞硝酸鹽等2.基因重組（基因

25、重組（geng recombination）(1)活病毒間的重組活病毒間的重組(2)滅活病毒間的重組滅活病毒間的重組兩種活病毒感染同一機體或細胞時，可兩種活病毒感染同一機體或細胞時，可產(chǎn)生基因重組而產(chǎn)生新毒株產(chǎn)生基因重組而產(chǎn)生新毒株N0H0+N1H1N0H1兩種或多種不同的滅活病毒感染同一細兩種或多種不同的滅活病毒感染同一細胞時，本不能增殖的病毒可產(chǎn)生感染性的病毒胞時，本不能增殖的病毒可產(chǎn)生感染性的病毒后代后代,稱多重復活稱多重復活.(3)死病毒與活病毒間的重組死病毒與活病毒間的重組一種病毒和一種有關系的滅一種病毒和一種有關系的滅活病毒之間可發(fā)生基因重組，稱交活病毒之間可發(fā)生基因重組，稱交叉復

26、活叉復活活病毒與滅活病毒之間（交叉復活）活病毒與滅活病毒之間（交叉復活）A3株（流行株）株（流行株）新新A3抗原抗原雞胚中增殖不良雞胚中增殖不良A1株（非流行株）株（非流行株）舊舊A1抗原抗原雞胚中生長良好雞胚中生長良好雞胚中共同培養(yǎng)雞胚中共同培養(yǎng)重組體（理想疫苗）重組體（理想疫苗）有有A3抗原抗原雞胚中生長良好雞胚中生長良好UV滅活滅活3、基因整合（、基因整合（gene integration）在病毒感染宿主細胞的過程中，有時病在病毒感染宿主細胞的過程中，有時病毒基因組中的毒基因組中的DNA片段可插入到宿主染色體片段可插入到宿主染色體DNA中，這種病毒基因組與細胞基因組的重中，這種病毒基因組

27、與細胞基因組的重組過程稱為基因整合組過程稱為基因整合整合可引起宿主細胞基因改變整合可引起宿主細胞基因改變細胞遺傳性改變細胞遺傳性改變細胞轉化細胞轉化個別可發(fā)生細胞惡化個別可發(fā)生細胞惡化腫瘤腫瘤4、病毒基因產(chǎn)物的相互作用、病毒基因產(chǎn)物的相互作用包括互補、表型混合與核殼轉移等，產(chǎn)包括互補、表型混合與核殼轉移等，產(chǎn)生子代病毒的表型變異生子代病毒的表型變異互補互補：一種病毒為另一種病毒提供本身不能合成，但又是必需的：一種病毒為另一種病毒提供本身不能合成，但又是必需的基因產(chǎn)物，而使其在混合感染的細胞內(nèi)得以繁殖?；虍a(chǎn)物，而使其在混合感染的細胞內(nèi)得以繁殖。輔助病毒與缺陷病毒之間輔助病毒與缺陷病毒之間活病毒

28、與死病毒之間活病毒與死病毒之間兩個不同的缺陷病毒之間兩個不同的缺陷病毒之間加強：加強：一種病毒與另一種非殺細胞病毒同時感染細胞，后者能增一種病毒與另一種非殺細胞病毒同時感染細胞，后者能增加前一種病毒復制產(chǎn)量的現(xiàn)象（極個別病毒之間）加前一種病毒復制產(chǎn)量的現(xiàn)象（極個別病毒之間）如：如：I型副流感病毒為水泡性口炎病毒的加強病毒。型副流感病毒為水泡性口炎病毒的加強病毒。表型混合表型混合鑲嵌包膜或衣殼鑲嵌包膜或衣殼表型交換表型交換衣殼誤配衣殼誤配遺傳物質不改變，而只有遺傳物質不改變，而只有基因產(chǎn)物的交換，傳代后基因產(chǎn)物的交換，傳代后恢復親代表型?；謴陀H代表型。四、理化因素對病毒的影響四、理化因素對病毒的

29、影響物理因素化學因素1.分類的依據(jù)：分類的依據(jù)：核酸類型和結構核酸類型和結構病毒體的性狀和大小病毒體的性狀和大小衣殼對稱性和殼粒數(shù)目衣殼對稱性和殼粒數(shù)目有無包膜有無包膜對理化因素的敏感性對理化因素的敏感性抗原性抗原性生物學特性生物學特性2.病毒分類系統(tǒng)病毒分類系統(tǒng)國際病毒分類系統(tǒng)采用目（國際病毒分類系統(tǒng)采用目（order）、科）、科(family)、亞科、亞科(subfamily)、屬、屬(genus)、種、種(species)分類單元。分類單元。常用核酸類型分類常用核酸類型分類lDNAviruslRNAvirusl反轉錄病毒反轉錄病毒依傳播方式和感染部位分類依傳播方式和感染部位分類1蟲媒病毒

30、蟲媒病毒2腸道病毒腸道病毒3呼吸道病毒呼吸道病毒4肝炎病毒肝炎病毒5性傳播病毒性傳播病毒非尋常病毒或非尋常病毒或亞病毒亞病毒(subviruses)是一類比是一類比病毒病毒更簡單，僅具有某種核酸更簡單，僅具有某種核酸不具有蛋白質，或僅具有蛋白質而不具有不具有蛋白質，或僅具有蛋白質而不具有核酸，能夠侵染動植物的微小病原體。核酸，能夠侵染動植物的微小病原體。l類病毒類病毒l朊粒朊粒l衛(wèi)星病毒衛(wèi)星病毒1.類病毒類病毒l是一類能感染某些是一類能感染某些植物植物而致病的單鏈閉合環(huán)狀的而致病的單鏈閉合環(huán)狀的RNA分子分子；l所有的類病毒所有的類病毒RNA沒有沒有mRNA活性，不編碼任何活性，不編碼任何多肽

31、，它的復制是借助寄主的多肽，它的復制是借助寄主的RNA聚合酶聚合酶的催的催化，在細胞核中進行的化，在細胞核中進行的RNA到到RNA的直接轉錄。的直接轉錄。2.朊病毒朊病毒(Virino)亦稱蛋白侵染因子亦稱蛋白侵染因子l是一種比病毒小、僅含有疏水的具有侵染性的是一種比病毒小、僅含有疏水的具有侵染性的蛋蛋白質分子白質分子；l許多致命的哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)機能退化癥均許多致命的哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)機能退化癥均與朊病毒有關與朊病毒有關，如人的，如人的庫魯病、克雅氏癥庫魯病、克雅氏癥、致、致死性家族失眠癥和動物的羊瘙癢病死性家族失眠癥和動物的羊瘙癢病、瘋牛病、瘋牛病、貓海綿狀腦病等。貓海綿狀腦病等。3

32、.衛(wèi)星病毒（衛(wèi)星病毒（satellites）-為單鏈共價閉合環(huán)狀為單鏈共價閉合環(huán)狀RNA分子分子l一類可編碼自身衣殼蛋白；一類可編碼自身衣殼蛋白；l另一類不能編碼自身衣殼蛋白。另一類不能編碼自身衣殼蛋白。課程名稱課程名稱：醫(yī)醫(yī)學學微微生生物物學學教學內(nèi)容教學內(nèi)容：病病毒毒性性感感染染與與致致病病機機制制教學目的教學目的：掌握病毒的傳播方式掌握病毒的傳播方式;包涵體的概念包涵體的概念;病毒感染類型病毒感染類型熟悉病毒致病機理熟悉病毒致病機理了解抗病毒免疫了解抗病毒免疫;體液與細胞免疫的體液與細胞免疫的作用及特點作用及特點教學方法教學方法：理論：理論教學重點、難點、關鍵教學重點、難點、關鍵：病毒的

33、傳播方式及感染類型病毒的傳播方式及感染類型;病毒致病機理病毒致病機理病毒性感染病毒性感染病毒感染的含義病毒感染的含義:病毒侵入機體并在體內(nèi)細胞中增殖的過程病毒侵入機體并在體內(nèi)細胞中增殖的過程病毒與機體、病毒與易感細胞相互作用的病毒與機體、病毒與易感細胞相互作用的過程過程病毒感染常因病毒種類、機體狀態(tài)不同而病毒感染常因病毒種類、機體狀態(tài)不同而產(chǎn)生輕重不一的損傷或產(chǎn)生病毒性疾病產(chǎn)生輕重不一的損傷或產(chǎn)生病毒性疾病*病毒感染與病毒性疾病是兩個相關但又不病毒感染與病毒性疾病是兩個相關但又不同的概念同的概念一、病毒感染的一、病毒感染的傳播方式傳播方式1.水平傳播水平傳播(horizontal transm

34、ission)：病毒在人群個體間的傳播。病毒在人群個體間的傳播。 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒主要通過主要通過:呼吸道傳播呼吸道傳播流感病毒流感病毒消化道傳播消化道傳播甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒泌尿生殖道泌尿生殖道破損的皮膚破損的皮膚血液傳播血液傳播狂犬病毒狂犬病毒型皰疹病毒型皰疹病毒2.垂直傳播垂直傳播(vertical transmission)：病毒經(jīng)胎盤或產(chǎn)道由親代傳播病毒經(jīng)胎盤或產(chǎn)道由親代傳播給子代的方式。給子代的方式。 胎盤傳播：風疹病毒、巨細胞病毒、人類胎盤傳播：風疹病毒、巨細胞病毒、人類免疫缺陷病毒等。免疫缺陷病毒等。產(chǎn)道傳播：巨細胞病毒、乙型肝炎病毒、產(chǎn)道傳播：巨細胞病毒、乙型肝炎

35、病毒、單純皰疹病毒等。單純皰疹病毒等。 垂直感染后果垂直感染后果流產(chǎn)流產(chǎn)早產(chǎn)早產(chǎn)先天感染先天感染(congenital infection)先天畸形先天畸形死胎死胎二二.病毒的傳播途徑病毒的傳播途徑在自然條件下在自然條件下,病毒入侵的三大重病毒入侵的三大重要門戶要門戶:呼吸道、消化道、皮膚呼吸道、消化道、皮膚三三.病毒在宿主體內(nèi)的播散病毒在宿主體內(nèi)的播散局部播散局部播散:局限于侵入門戶附近組織局限于侵入門戶附近組織,也可向全身播散也可向全身播散血液播散血液播散:病毒在局部增殖后病毒在局部增殖后,入血經(jīng)入血經(jīng)血液擴散引起病毒血癥血液擴散引起病毒血癥神經(jīng)播散神經(jīng)播散:病毒感染外周組織病毒感染外周組

36、織,經(jīng)神經(jīng)經(jīng)神經(jīng)纖維傳入中樞神經(jīng)系統(tǒng)纖維傳入中樞神經(jīng)系統(tǒng),又又稱向中性流動稱向中性流動二、病毒感染的致病機制二、病毒感染的致病機制 ( (一一) )病毒對細胞的直接作用病毒對細胞的直接作用 1.殺細胞效應殺細胞效應(cytocidal effect)： 病毒在宿主細胞內(nèi)復制完畢，在很短病毒在宿主細胞內(nèi)復制完畢，在很短的時間內(nèi)，一次釋放出大量子代病毒，的時間內(nèi)，一次釋放出大量子代病毒，細細胞被裂解死亡；也稱細胞病變作用胞被裂解死亡；也稱細胞病變作用(cytopathic effect,CPE) 如：如：脊髓灰質炎病毒、腺病毒脊髓灰質炎病毒、腺病毒正常細胞正常細胞CPE機制是：機制是： 感染機體的

37、免疫力（細胞免疫）較弱感染機體的免疫力（細胞免疫）較弱病毒快速大量復制，大量消耗細胞自身病毒快速大量復制，大量消耗細胞自身成分，阻斷細胞合成代謝。成分，阻斷細胞合成代謝。引起細胞溶酶體膜通透性增高，釋放引起細胞溶酶體膜通透性增高，釋放其中的水解酶引起細胞自溶其中的水解酶引起細胞自溶對宿主細胞器的損傷對宿主細胞器的損傷病毒多為無包膜病毒多為無包膜,毒力較強的毒株毒力較強的毒株2.穩(wěn)定狀態(tài)感染穩(wěn)定狀態(tài)感染(steady state infection) 有些病毒在宿主細胞內(nèi)增殖過程中，對有些病毒在宿主細胞內(nèi)增殖過程中，對細胞代謝、溶酶體膜影響不大，以出芽方式細胞代謝、溶酶體膜影響不大，以出芽方式釋

38、放病毒，過程緩慢，病變較輕、細胞暫時釋放病毒，過程緩慢，病變較輕、細胞暫時也不會出現(xiàn)溶解和死亡。也不會出現(xiàn)溶解和死亡。常見于包膜病毒，如：麻疹病毒。常見于包膜病毒，如：麻疹病毒。 可通過融合蛋白可通過融合蛋白,引起細胞融合，形引起細胞融合，形成成多核巨細胞多核巨細胞(2)細胞膜表面出現(xiàn)病毒編碼的抗原細胞膜表面出現(xiàn)病毒編碼的抗原,可可成為機體細胞免疫、體液免疫攻擊成為機體細胞免疫、體液免疫攻擊的靶細胞的靶細胞3.包涵體包涵體(inclusion body)形成形成包涵體：包涵體： 指宿主細胞受指宿主細胞受V感染后，在感染后，在細胞核或細胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小數(shù)量不等，細胞核或細胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小數(shù)量不等，形

39、態(tài)不一，染色異常的團塊樣結構形態(tài)不一，染色異常的團塊樣結構 為占位性病變，可幫助診斷為占位性病變，可幫助診斷內(nèi)基小體內(nèi)基小體:狂犬病毒在易感動物和人的狂犬病毒在易感動物和人的中樞神經(jīng)細胞中增殖時中樞神經(jīng)細胞中增殖時,可在細胞質內(nèi)可在細胞質內(nèi)形成嗜酸性包形成嗜酸性包涵涵體稱之為體稱之為Negri body內(nèi)基小體內(nèi)基小體4.細胞凋亡細胞凋亡: 有些病毒感染細胞后，病毒可有些病毒感染細胞后，病毒可直接或由病毒編碼蛋白間接作為誘導因子直接或由病毒編碼蛋白間接作為誘導因子誘發(fā)細胞凋亡。誘發(fā)細胞凋亡。5.基因整合與轉化基因整合與轉化: 病毒的核酸全部或部分結合到宿主細病毒的核酸全部或部分結合到宿主細胞染

40、色體胞染色體DNA中中,易導致宿主細胞轉化易導致宿主細胞轉化,可可促進細胞增殖促進細胞增殖,使細胞形態(tài)發(fā)生變化使細胞形態(tài)發(fā)生變化,失去失去接觸性抑制接觸性抑制,而出現(xiàn)成堆生長而出現(xiàn)成堆生長。(二二)病毒對機體的致病作用病毒對機體的致病作用1.病毒對組織器官的親嗜性與損傷病毒對組織器官的親嗜性與損傷親嗜性親嗜性:病毒入侵機體感染細胞具病毒入侵機體感染細胞具有一定的選擇性有一定的選擇性組織損傷組織損傷:由于病毒在細胞內(nèi)復制由于病毒在細胞內(nèi)復制使細胞結構受損或功能障使細胞結構受損或功能障礙礙;病毒蛋白導致的組織器病毒蛋白導致的組織器官炎癥反應官炎癥反應2.免疫病理作用免疫病理作用1)體液免疫病理作用

41、：體液免疫病理作用：病毒抗原出現(xiàn)于宿主細胞表面病毒抗原出現(xiàn)于宿主細胞表面與抗體結合與抗體結合激活補體激活補體宿主細胞被破壞宿主細胞被破壞 病毒抗原病毒抗原+抗體抗體 IC IC沉積導致組織器官損傷沉積導致組織器官損傷（如：關節(jié)滑膜、肺、血管壁等）（如：關節(jié)滑膜、肺、血管壁等）2)細胞免疫病理作用：細胞免疫病理作用： 病毒蛋白與宿主蛋白有共同的抗病毒蛋白與宿主蛋白有共同的抗 原決定簇原決定簇 病毒感染造成細胞免疫功能紊亂病毒感染造成細胞免疫功能紊亂3.致炎性細胞因子的病理作用致炎性細胞因子的病理作用炎性細胞因子炎性細胞因子(INF-r、IL-1等）等）代謝紊亂代謝紊亂活化活化血管活化因子血管活化

42、因子休克、休克、DIC、甚至死亡、甚至死亡4.病毒感染引起的免疫抑制病毒感染引起的免疫抑制eg:AIDSl病毒編碼特異性抑制免疫反應蛋白質實病毒編碼特異性抑制免疫反應蛋白質實現(xiàn)免疫逃逸現(xiàn)免疫逃逸l病毒通過逃避免疫防御、防止免疫激活病毒通過逃避免疫防御、防止免疫激活或阻止免疫應答實現(xiàn)免疫逃避或阻止免疫應答實現(xiàn)免疫逃避l病毒形成合胞體在細胞間傳播從而逃避病毒形成合胞體在細胞間傳播從而逃避抗體作用抗體作用三、病毒感染的類型三、病毒感染的類型（一）、隱性感染（一）、隱性感染(inapparent viral infection) 病毒進入機體后，不引起臨床癥狀病毒進入機體后，不引起臨床癥狀的感染。也稱

43、的感染。也稱亞臨床感染亞臨床感染（如：脊灰（如：脊灰V感染）感染）特點： 不出現(xiàn)或出現(xiàn)輕微臨床癥狀不出現(xiàn)或出現(xiàn)輕微臨床癥狀可向體外排病毒可向體外排病毒 機體可通過這樣的方式產(chǎn)生機體可通過這樣的方式產(chǎn)生免疫力免疫力機體免疫力強、病毒的毒力弱，量少。機體免疫力強、病毒的毒力弱，量少。（二）、顯性感染（二）、顯性感染 (apparent viral infection) 病毒進入機體，到達靶細胞后大病毒進入機體，到達靶細胞后大量增殖，使細胞損傷，致使機體出現(xiàn)量增殖，使細胞損傷，致使機體出現(xiàn)臨床癥狀的感染。臨床癥狀的感染。 1.急性病毒感染急性病毒感染(acute viral infection) 病

44、毒在宿主細胞內(nèi)大量增殖，引病毒在宿主細胞內(nèi)大量增殖，引起細胞破壞、死亡，機體出現(xiàn)典型的起細胞破壞、死亡，機體出現(xiàn)典型的臨床癥狀。臨床癥狀。（如：甲肝）（如：甲肝） 特點：特點： 潛伏期短，病期短潛伏期短，病期短有非常典型的發(fā)病過程有非常典型的發(fā)病過程 急性感染后機體內(nèi)不存在病毒急性感染后機體內(nèi)不存在病毒,可建可建立特異性免疫力。立特異性免疫力。2.持續(xù)性病毒感染持續(xù)性病毒感染(persistent viral infection) 病毒在宿主體內(nèi)持續(xù)存在數(shù)月至數(shù)病毒在宿主體內(nèi)持續(xù)存在數(shù)月至數(shù)十年，甚至終生。但不一定持續(xù)增殖和十年，甚至終生。但不一定持續(xù)增殖和持續(xù)引起癥狀。持續(xù)引起癥狀。原因原因

45、:(1)抗體免疫力低下抗體免疫力低下,無力清除病毒無力清除病毒(2)病毒抗原性弱病毒抗原性弱,難以激發(fā)產(chǎn)生免疫應答難以激發(fā)產(chǎn)生免疫應答(3)病毒存在于受保護的部位或發(fā)生突變病毒存在于受保護的部位或發(fā)生突變 (4)病毒基因整合病毒基因整合,與細胞長期共存與細胞長期共存慢性感染慢性感染(chronic infection) 經(jīng)急性或隱性感染后，病毒持續(xù)存在經(jīng)急性或隱性感染后，病毒持續(xù)存在于機體血液或組織中，經(jīng)常或間斷地排于機體血液或組織中，經(jīng)常或間斷地排出體外；發(fā)病進展緩慢。出體外；發(fā)病進展緩慢。 （如：慢性乙肝）（如：慢性乙肝）特點：特點： 病程長，可出現(xiàn)臨床癥狀病程長，可出現(xiàn)臨床癥狀 可經(jīng)常，

46、間隙性地排病毒可經(jīng)常，間隙性地排病毒 病情不是進行發(fā)展病情不是進行發(fā)展 潛伏感染潛伏感染(latent infection) 經(jīng)急性或隱性感染后，病毒潛伏在組織經(jīng)急性或隱性感染后，病毒潛伏在組織或細胞內(nèi)，不進行增殖；在某些條件作用或細胞內(nèi)，不進行增殖；在某些條件作用下，病毒可被激活，大量繁殖，引起與下，病毒可被激活，大量繁殖，引起與 初初次癥狀極為相似的或截然不同的病變。次癥狀極為相似的或截然不同的病變。（如：皰疹（如：皰疹V V感染）感染）特點：特點： 潛伏期無癥狀潛伏期無癥狀潛伏期不排病毒潛伏期不排病毒潛伏期查不到病毒潛伏期查不到病毒慢發(fā)病毒感染慢發(fā)病毒感染(slow viral infe

47、ction) 經(jīng)顯性或隱性感染后，病毒有很長經(jīng)顯性或隱性感染后，病毒有很長的潛伏期，此時機體無癥狀，也分離不的潛伏期，此時機體無癥狀，也分離不出病毒；以后出現(xiàn)慢性、進行性疾病，出病毒；以后出現(xiàn)慢性、進行性疾病，常導致死亡常導致死亡。 如：艾滋病如：艾滋病;瘋牛病瘋牛病 特點：特點： 潛伏期長潛伏期長不向體外排病毒不向體外排病毒病情呈進行性加重，常導致死亡病情呈進行性加重，常導致死亡急性病毒感染的遲發(fā)并發(fā)癥急性病毒感染的遲發(fā)并發(fā)癥(deleyed complication after acute viral infection) 經(jīng)急性感染后，經(jīng)急性感染后，1年或數(shù)年，發(fā)生致年或數(shù)年，發(fā)生致死性

48、并發(fā)癥。死性并發(fā)癥。如：麻疹如：麻疹V感染后導致感染后導致亞急性硬化性全腦炎（亞急性硬化性全腦炎（SSPE)四、病毒與腫瘤四、病毒與腫瘤如：如：I型人型人T淋巴細胞白血病病毒淋巴細胞白血病病毒HTLV-I成人成人T淋巴細胞瘤（白血病）。淋巴細胞瘤（白血?。?。人乳頭狀瘤病毒人乳頭狀瘤病毒皮膚癌皮膚癌EB病毒病毒鼻咽癌鼻咽癌乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒肝癌肝癌抗病毒免疫抗病毒免疫 一、一、非特異免疫非特異免疫干擾素和干擾素和NK細胞起主要作用。細胞起主要作用。 （一）干擾素（一）干擾素（interferor,IFN） 概念：概念： 是病毒或其他干擾素誘生劑是病毒或其他干擾素誘生劑刺激細胞所產(chǎn)生的一類分

49、泌性蛋白，刺激細胞所產(chǎn)生的一類分泌性蛋白，具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學活性。種生物學活性。 誘生劑：誘生劑： 病毒病毒、人工合成的雙鏈人工合成的雙鏈RNA誘誘生作用最強生作用最強,細菌內(nèi)毒素、原蟲等也可誘細菌內(nèi)毒素、原蟲等也可誘導細胞產(chǎn)生導細胞產(chǎn)生IFN1種類及種類及合成細胞合成細胞IFN-人白細胞人白細胞IFN-人成纖維細胞人成纖維細胞IFN-T淋巴細胞淋巴細胞II型型 I型型抗病毒抗病毒+免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)+抗病毒抗病毒+免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)+2、干擾素抗病毒的作用機制、干擾素抗病毒的作用機制IFN不能直接滅活病毒不能直接滅活病毒，而是通，而是通過誘導

50、鄰近宿主細胞合成抗病毒蛋白過誘導鄰近宿主細胞合成抗病毒蛋白發(fā)揮抗病毒效應（抑制病毒復制發(fā)揮抗病毒效應（抑制病毒復制）。）。3、IFN抗病毒作用的特點：抗病毒作用的特點：（1）間接性：）間接性： （2）抑制性：）抑制性： （3）廣譜性：）廣譜性：對多數(shù)病毒均有抑制作用對多數(shù)病毒均有抑制作用 （4）種屬特異性：）種屬特異性：對同種細胞活性最高對同種細胞活性最高（5）發(fā)揮作用迅速：）發(fā)揮作用迅速：感染后幾小時即發(fā)揮作用感染后幾小時即發(fā)揮作用 （二）（二）NK細胞細胞能非特異殺傷受病毒感染的細胞，在能非特異殺傷受病毒感染的細胞，在感染早期發(fā)揮重要的作用。感染早期發(fā)揮重要的作用?？赏ㄟ^多種途徑被活化，其

51、中可通過多種途徑被活化，其中IFN-對對NK細胞的激活作用尤為重要。細胞的激活作用尤為重要。二特異性免疫二特異性免疫 （一）體液免疫（一）體液免疫中和性抗體可中和游離的病毒體，主中和性抗體可中和游離的病毒體，主要對再次入侵的病毒體有預防作用。要對再次入侵的病毒體有預防作用。中和抗體和非中和抗體也可通過調(diào)理中和抗體和非中和抗體也可通過調(diào)理作用增強吞噬細胞吞噬殺滅病毒的能力。作用增強吞噬細胞吞噬殺滅病毒的能力?？贵w的抗病毒作用抗體的抗病毒作用作用對象作用對象 作用方式作用方式 作用機制作用機制 游離病毒游離病毒抗體單獨抗體單獨阻止病毒吸附和侵入細胞；與病毒形成免疫阻止病毒吸附和侵入細胞；與病毒形成

52、免疫復合物；被巨噬細胞吞噬；阻止病毒脫殼復合物；被巨噬細胞吞噬；阻止病毒脫殼 抗體抗體+ +補體補體裂解包膜病毒裂解包膜病毒溶解病毒溶解病毒感染細胞感染細胞 抗體抗體+ +補體補體 病毒感染細胞溶解病毒感染細胞溶解發(fā)揮調(diào)理作用發(fā)揮調(diào)理作用 抗體與病毒感染抗體與病毒感染細胞結合細胞結合 發(fā)生發(fā)生ADCC ADCC （二）細胞免疫（二）細胞免疫感染細胞內(nèi)病毒的清除，主要依賴于感染細胞內(nèi)病毒的清除，主要依賴于細胞免疫。細胞免疫。 構成病毒特異性細胞免疫反應的主要構成病毒特異性細胞免疫反應的主要效應因素是：效應因素是：CD8+CTL和和CD4+Th1細胞。細胞。 1CD8+ +CTL能特異性殺傷病毒感

53、染的靶細胞，能特異性殺傷病毒感染的靶細胞，阻斷病毒在細胞內(nèi)復制，是終止病毒感阻斷病毒在細胞內(nèi)復制，是終止病毒感染的主要免疫機制。染的主要免疫機制。還可通過分泌多種細胞因子，如還可通過分泌多種細胞因子，如IFN-、TNF等而發(fā)揮抗病毒作用。等而發(fā)揮抗病毒作用。2CD4+Th1細胞細胞活化活化CD4+Th1細胞分泌多種細胞因細胞分泌多種細胞因子如子如IFN-、TNF等，通過激活巨噬細胞等，通過激活巨噬細胞和和NK細胞；誘發(fā)炎癥反應；促進細胞；誘發(fā)炎癥反應；促進CTL的的增殖和分化等增殖和分化等 課程名稱課程名稱：醫(yī)醫(yī)學學微微生生物物學學教學內(nèi)容教學內(nèi)容： 教學目的教學目的：掌握掌握臨床病毒標本的采

54、集、送檢原則、臨床病毒標本的采集、送檢原則、病毒的分離培育、病毒的分離培育、干擾素的概念及作用特點干擾素的概念及作用特點熟悉病毒的檢驗程序、常用血清學試驗熟悉病毒的檢驗程序、常用血清學試驗的原理的原理了解病毒學檢查在臨床診斷中的重要性了解病毒學檢查在臨床診斷中的重要性教學方法教學方法：理論：理論教學重點、難點、關鍵教學重點、難點、關鍵：常用血清學試驗的原理常用血清學試驗的原理;第二節(jié)第二節(jié)病毒學診斷病毒學診斷病毒感染的實驗室診斷方法檢材的采集與送檢檢材的采集與送檢 病毒性疾病通常采集血液、鼻咽分泌液、病毒性疾病通常采集血液、鼻咽分泌液、咯痰、糞便、腦脊液、皰疹內(nèi)容物、活檢咯痰、糞便、腦脊液、皰

55、疹內(nèi)容物、活檢組織或尸檢組織等。供分離病毒、檢出核組織或尸檢組織等。供分離病毒、檢出核酸及抗原的標本的，要求：酸及抗原的標本的，要求：盡早采取盡早采取 在發(fā)病初期（急性期）采取，較易檢出在發(fā)病初期（急性期）采取，較易檢出病毒，越遲陽性率越低。病毒，越遲陽性率越低。部位適宜部位適宜 由感染部位采取，如呼吸道感染采取鼻由感染部位采取，如呼吸道感染采取鼻咽洗漱液或咯痰；腸道感染采取糞便；腦咽洗漱液或咯痰；腸道感染采取糞便；腦內(nèi)感染采取腦脊液；皮膚感染采取病灶組內(nèi)感染采取腦脊液；皮膚感染采取病灶組織；有病毒血癥時采取血液?？?；有病毒血癥時采取血液。冷藏速送冷藏速送 病毒離活體后在室溫下很易死亡，故采病

56、毒離活體后在室溫下很易死亡，故采得檢材應盡快送檢。得檢材應盡快送檢。 將檢材放入裝有將檢材放入裝有冰塊或干冰冰塊或干冰的空器內(nèi)送檢的空器內(nèi)送檢 病變組織則應保存于病變組織則應保存于50%50%的甘油緩沖鹽水的甘油緩沖鹽水中中 污染檢材，如鼻咽分泌液、糞便等應加入污染檢材，如鼻咽分泌液、糞便等應加入青霉素、鏈霉素或慶大毒素等青霉素、鏈霉素或慶大毒素等抗生素抗生素，以，以免雜菌污染細胞或雞胚，而影響病毒分離。免雜菌污染細胞或雞胚，而影響病毒分離。組織組織 組織塊組織塊 分散的單個細胞分散的單個細胞 單層細胞單層細胞 剪碎剪碎 培養(yǎng)基培養(yǎng)基蛋白酶蛋白酶(2)(2)二倍體細胞培養(yǎng)二倍體細胞培養(yǎng)特點：特

57、點：對多種病毒敏感對多種病毒敏感 不帶異種蛋白不帶異種蛋白( (人源性人源性) ) 不帶病毒不帶病毒，無致瘤潛能，無致瘤潛能 可傳可傳5050代左右代左右(3) (3) 傳代細胞培養(yǎng)傳代細胞培養(yǎng) 通常是由癌細胞或二倍體細胞突變通常是由癌細胞或二倍體細胞突變而來，染色體數(shù)為非整倍體，細胞生長而來，染色體數(shù)為非整倍體，細胞生長迅速，可無限傳代迅速，可無限傳代病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標：病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標：1、細胞的變化、細胞的變化（1）細胞病變效應（）細胞病變效應（cytopathic effect，CPE）細胞腫脹、變圓、聚集壞死、溶解或脫落細胞腫脹、變圓、聚集壞死、溶解或脫落（2）形成

58、多核巨細胞或稱融合細胞）形成多核巨細胞或稱融合細胞如：麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸如：麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒道合胞病毒（3）形成包涵體（）形成包涵體（inclusion body）如：狂犬病毒、麻疹病毒如：狂犬病毒、麻疹病毒2、紅細胞吸附（、紅細胞吸附（hemadsorption，HAd）流感或副流感病毒等感染細胞后，細胞流感或副流感病毒等感染細胞后，細胞膜上出現(xiàn)了血凝素（膜上出現(xiàn)了血凝素（HA）具有吸附脊椎動物）具有吸附脊椎動物紅細胞的能力稱紅細胞吸附紅細胞的能力稱紅細胞吸附3、干擾現(xiàn)象（、干擾現(xiàn)象（interference）4、細胞代謝的改變、細胞代謝的改變?nèi)纾号囵B(yǎng)液如：培養(yǎng)液

59、PH值的改變；細胞代謝變慢值的改變；細胞代謝變慢1、50%組織細胞感染量（組織細胞感染量（TCID50）以感染細胞以感染細胞50%出現(xiàn)出現(xiàn)CPE的最高病毒的最高病毒稀釋度為判定依據(jù)計算稀釋度為判定依據(jù)計算TCID50判斷病毒感染性和毒力判斷病毒感染性和毒力2、紅細胞凝集試驗：能使紅細胞發(fā)生中等、紅細胞凝集試驗：能使紅細胞發(fā)生中等度凝集的最高病毒稀釋度。度凝集的最高病毒稀釋度。可半定量的檢測病毒的含量可半定量的檢測病毒的含量3、空斑形成試驗：、空斑形成試驗：病毒稀釋液病毒稀釋液接種接種單層細胞單層細胞培養(yǎng)培養(yǎng)CPE形成形成肉眼可見的空斑肉眼可見的空斑1個空斑即個空斑即1個空斑形成單位（個空斑形成

60、單位（PFU）計算空斑數(shù)可推算出活病毒的數(shù)量計算空斑數(shù)可推算出活病毒的數(shù)量(二二)、動物試驗、動物試驗最原始的病毒分離培養(yǎng)方法最原始的病毒分離培養(yǎng)方法 常用小白鼠、田鼠、豚鼠、家兔及猴等常用小白鼠、田鼠、豚鼠、家兔及猴等 可接種鼻內(nèi)、皮內(nèi)、腦內(nèi)、皮下、腹腔可接種鼻內(nèi)、皮內(nèi)、腦內(nèi)、皮下、腹腔或靜脈或靜脈 :用敏感動物適當接種途徑用敏感動物適當接種途徑,模擬病模擬病毒自然感染動物毒自然感染動物,動物可出現(xiàn)與人相似的臨動物可出現(xiàn)與人相似的臨床表現(xiàn)床表現(xiàn),便于直接觀察便于直接觀察.優(yōu)點優(yōu)點缺點缺點:(1)動物有明顯個體差異動物有明顯個體差異(2)動物體內(nèi)有潛在病毒感染動物體內(nèi)有潛在病毒感染(3)動物管