基金答辯-朱毅

1、立項領(lǐng)域：非感染性炎癥相關(guān)性疾病的發(fā)病機(jī)制 Glass & Witztum: Cell, 104:503-506, 2003 脂代謝紊亂 = AS早期改變+炎性反應(yīng) 內(nèi)皮激活* Zhu et al: ATVB, 1998 Yuan et al: BBA, 2001AP-1c-Junc-JunAP-1* Liao et al: Endothel, 1999* 責(zé)任作者責(zé)任作者* Zhu et al: Atheros, 1999* Zhu et al: BBA, 1997 Lin, Zhu et al: Atheros, 1996target genes(e.g. VCAM, ICAM)Monoc

2、yte Recruitment* Zhu et al: ATVB, 2000* Zhu et al: BBA, 1999MEK4JNKMEKKMEK3p38ATF-2c-JunRaf-1ERK1/2MEK1/2c-Fos* Zhu et al: ATVB, 2001RasRasCaveolin-1(-)Caveolae50-100nm大小形狀的細(xì)胞表面小凹富含膽固醇及各種磷脂積極參與膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)和信號傳導(dǎo) Cav-1 是其結(jié)構(gòu)蛋白，又是膽固醇結(jié)合蛋白血管內(nèi)皮細(xì)胞富含caveolae結(jié)構(gòu)和高表達(dá)Cav-1Couet et al. Adv Drug Deliv Rev. 2001;49:223-3

3、5. Cohen et al. Physiol Rev. 2004;84:1341-79.Razani B, Lisanti MP. Exp Cell Res. 2001;271:36-44.* Zhu et al. Biochim Biophys Acta. 2003;1635:117-26. RhoAStress fiber formationRhoAROCK-1eNOSNO.argininecitrullineCaveolaeeNOSNormal EndotheliumNormal EndotheliumLumenSubendothelial spaceECCholesterol Acc

4、umulationCHLCav-1?HDLApoA-IPCCPLDLDysfunctional EndotheliumDysfunctional EndotheliumDisturbed flowCHLCav-1?Cholesterol AccumulationHDLApoA-IPCCPXLDLLDLoxLDL* Liao et al: ATVB, 22:127-132, 2002* Zeng et al: J Biol Chem 279:48801-7, 2004* Zhu et al: Cardiovasc Res, 68:425-432, 2005 (editorial 68:353-3

5、54) Frank at al：Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2004;24:98-105Cav-1敲除減少動脈粥樣硬化斑塊形成Millan at al：Nat Cell Biol. 2006;8:113-23內(nèi)皮細(xì)胞的張力纖維和caveolae促進(jìn)ICAM-1介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞穿過內(nèi)皮向內(nèi)膜下遷移 炎癥和高脂血癥在引起內(nèi)皮功能異常和動脈粥樣硬化發(fā)病中具有交叉和協(xié)同作用，內(nèi)皮細(xì)胞膜亞結(jié)構(gòu)caveolae是二者共同作用的中心環(huán)節(jié)。炎癥高脂血癥內(nèi)皮細(xì)胞膜caveolae內(nèi)皮細(xì)胞激活內(nèi)皮細(xì)胞脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)異常白細(xì)胞黏附、遷移內(nèi)膜下脂質(zhì)沉積動脈粥樣硬化發(fā)病在炎癥和高脂的刺激下，內(nèi)

6、皮細(xì)胞 caveolae對白細(xì)胞黏附、內(nèi)膜下遷移和脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的調(diào)節(jié)及其作用機(jī)制？CytokineLPSLDLICAM-1VCAM-1高脂oxLDL膽固醇炎癥在炎癥和高脂狀態(tài)下內(nèi)皮功能異常是否與 eNOS 向 caveolae 轉(zhuǎn)位和與Cav-1蛋白結(jié)合有關(guān)？eNOS activated by Calcium-Calmodulin complexcaveolaeNO.L-arginineeNOSeNOSeNOS inactivated by Cav-1 BindingcaveolaeeNOSeNOSCalciumCalmodulin高脂炎癥炎癥和高脂通過哪些重要的蛋白分子移入或移出caveolae

7、，進(jìn)而引起內(nèi)皮細(xì)胞功能的異常？處理組處理組對照組對照組caveolaecaveolae處理組處理組對照組對照組新的差異蛋白新的差異蛋白內(nèi)皮細(xì)胞CaveolaeSR-BISR-BICD36CD36ICAM-1ICAM-1VCAM-1VCAM-1eNOS蛋白質(zhì)組學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)運(yùn)用 caveolae 差減蛋白質(zhì)組學(xué)，分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)手段，綜合研究炎癥和膽固醇對內(nèi)皮功能、粘附因子、脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等環(huán)節(jié)的影響及其機(jī)制揭示 caveolae 及Cav-1蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞激活和動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中的作用，以及炎癥和脂質(zhì)代謝紊亂對其的影響初步闡明在內(nèi)皮細(xì)胞中炎性反應(yīng)和脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)異常之間的相互作用及其分子機(jī)制對

8、今后干預(yù)動脈粥樣硬化的藥物篩選提供重要理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù) 炎癥高脂IL-1b、ox-LDLLDL、膽固醇人血管內(nèi)皮細(xì)胞分離提純分離提純 caveolaecaveolae 膜結(jié)構(gòu)膜結(jié)構(gòu)研究內(nèi)容研究內(nèi)容 1 1脂質(zhì)攝取, 膽固醇外流脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白CD36, SRB-1CD36, SRB-1研究內(nèi)容研究內(nèi)容 2 2白細(xì)胞黏附、遷移內(nèi)皮激活標(biāo)志內(nèi)皮激活標(biāo)志VCAM-1, ICAM-1VCAM-1, ICAM-1研究內(nèi)容研究內(nèi)容 3 3eNOS磷酸化NO產(chǎn)生內(nèi)皮功能異常內(nèi)皮功能異常eNOSeNOS研究內(nèi)容研究內(nèi)容 4 4caveolae定位及功能分析功能蛋白質(zhì)組學(xué)功能蛋白質(zhì)組學(xué)受調(diào)節(jié)的新蛋

9、白受調(diào)節(jié)的新蛋白研究內(nèi)容研究內(nèi)容 5 5高脂、炎癥在高脂、炎癥在Cav-1Cav-1敲敲除小鼠的作用除小鼠的作用CtrlCHLpH3 10pH3 10進(jìn)一步研究證實(shí)：膽固醇促進(jìn)ATPS-向細(xì)胞膜 caveolae 轉(zhuǎn)位機(jī)制： 通過ATPS-與Cav-1的結(jié)合及細(xì)胞骨架的介導(dǎo)意義：ATPS-膜轉(zhuǎn)位參與細(xì)胞外ATP釋放與AMPK活化Wang, T.K.，Chen, Z., Wang, X., Shyy J., Zhu, Y.* (2006) Cholesterol Loading Increases the Translocation of ATP Synthase b Chain into Me

10、mbrane Caveolae in Vascular Endothelial Cells (revised)Cav-1Ctrl50100M200Cav-1 siRNA (pmol/L)Cav-1-siRNA transfection in HUVEC Cy3-pGL2-siRNA transfection1.我們的科學(xué)假說得到基本驗(yàn)證，為內(nèi)皮功能異常和動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制提出新的理論。2. 基本闡明所研究的黏附因子，脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在炎癥和高脂狀態(tài)下膜caveolae轉(zhuǎn)位及其意義。3. 發(fā)現(xiàn)新的caveolae相關(guān)的炎性和脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，為藥物治療提供新的靶點(diǎn)。研究成果將以多篇原創(chuàng)性論文形式發(fā)表，

11、其中有2-3篇IF7的論文。在國際學(xué)術(shù)會議上交流，產(chǎn)生并申報1-2 項專利。培養(yǎng)多名博士研究生及博士后研究人員。 提出“內(nèi)皮細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)caveolae是炎癥和高脂血癥引起動脈粥樣硬化發(fā)病的共同靶點(diǎn)和協(xié)同作用的中心環(huán)節(jié)”的科學(xué)假說 首先利用細(xì)胞膜亞結(jié)構(gòu)caveolae功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究炎癥及膽固醇的協(xié)同作用 運(yùn)用系統(tǒng)研究和重點(diǎn)突出的研究模式，綜合解析caveolae相關(guān)蛋白的轉(zhuǎn)位及其意義 首次運(yùn)用Cav-1-/-小鼠模型，在高脂和炎癥共同作用下研究caveolae相關(guān)蛋白在主動脈內(nèi)膜中的變化 技術(shù)創(chuàng)新：提取小鼠主動脈內(nèi)膜中的caveolae結(jié)構(gòu)并進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究朱毅，46歲，教授，博士生導(dǎo)師主

12、要學(xué)習(xí)及工作經(jīng)歷：1983、1986 先后在西安醫(yī)科大學(xué)獲醫(yī)學(xué)學(xué)士、醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位1993 在瑞士洛桑大學(xué)醫(yī)學(xué)院獲醫(yī)學(xué)博士學(xué)位 1993-1995 美國紐約醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)病理系，博士后1996-2003 美國加州大學(xué)（UCR）生物醫(yī)學(xué)系，博士后、研究助理教授 （Research Assistant Professor，1998年）2003- 至今北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部生理學(xué)與病理生理學(xué)系 教授2004-至今系副主任、教育部分子心血管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室核心成員北京大學(xué)糖尿病中心副主任目前承擔(dān)的科研基金：2004 年獲國家自然科學(xué)基金面上項目（30470631）2005 年獲教育部“創(chuàng)新團(tuán)隊”基金2005 年獲國家自然

13、科學(xué)基金面上項目（30570713） 申請者在申請者在SCISCI雜志上發(fā)表論文雜志上發(fā)表論文3030余篇，與本項目有關(guān)文章余篇，與本項目有關(guān)文章( (* *責(zé)任作者）責(zé)任作者）: :Zhu, Y.,* Lin, J.H-C., Liao, HL., Friedli, O., Verna, L., Marten, N.W., Straus, D.S., Stemerman, M.B. Low-density lipoprotein induces transcription factor activator protein-1(AP-1) in human endothelial cells.

14、 Arterio Thromb Vasc Biol 18: 473-480, 1998. Zhu, Y.,* Liao, HL., Wang, N., Friedli, O., Verna, L., Stemerman, M.B. Low-Density Lipoprotein Activates Jun N-terminal Kinase (JNK) in Human Endothelial Cells. BBA Mol Cell Biol L 1436:557-564, 1999. Zhu, Y.,* Liao, HL., Lin, J.H-C, Verna, L., Stemerman,

15、 M.B. Low-density lipoprotein Augments Interleukin-1-induced Vascular Adhesion Molecule expression in Human Endothelial Cells. Atherosclerosis 144:357-365, 1999. Zhu, Y.,* Liao, HL., Wang, N., Yuan,Y., Ma, K-S., Verna, L., Stemerman, M.B. Lipoprotein promotes caveolin-1 and Ras translocation to cave

16、olae: role of cholesterol in endothelial signaling. Arterio Thromb Vasc Biol 20:2465-2470, 2000 Zhu, Y.,* Liao, HL., Wang, N., Ma, K-S., Verna, L., Shyy, J.Y-J., Chien, S., Stemerman, M.B. Low-density lipoprotein-activated p38 in endothelial cells is mediated by Ras. Arterio Thromb Vasc Biol 21:1159

17、-1164, 2001 Liao, H.L., Langmann, T., Schmitz, G., Zhu, Y.* Native LDL transcriptionaly upregulates ATP-binding cassette transporter-1 in human vascular endothelial cells. Arterio Thromb Vasc Biol 22:127-132, 2002 Zhu, Y.,* Liao, H.L., Yuan, Y., Verna, L., Stemerman, M.B. Low density lipoprotein ind

18、uces eNOS translocation to membrane caveolae via stress fibers. BBA Mol Cell Biol L 1635:117-126, 2003. Liu, Y., Zhu, Y., Rannou, F., Lee, T-S., Formentin, K., Zeng, L., Yuan, X., Wang, N., Chien, S., Forman, B.M., Shyy, J. Y-J. Laminar Flow Activates Peroxisome Proliferator-Activator Receptor g in

19、Vascular Endothelial Cells. Circulation 110:1128-1133, 2004. Lee, T-S., Chang, C.C., Zhu, Y., Shyy J. Y-J. Simvastatin Induces Heme Oxygenase-1: A Novel Mechanism of Vessel Protection. Circulation 110:1296-1302, 2004. Zeng, L., Liao, H.L., Liu, Y., Zhu, M.J., Wang, X., Stemerman, M.B. Zhu, Y.,* Shyy, J. Y-J. SREBP2 down-regulates ABCA1: a novel role of SREBP in regulating cholesterol metabolism. J. Biol Chem 279:48801-48807, 2004. Zhu, Y.,* Liao, H., Xie, XF., Yuan, Y., Lee, T-S., Wang, N., Wang, X., Shyy, J.Y-J., Stemerman, MB. Oxidized LDL downregulates ATP-binding cassette transporter-1 i