人血漿脂蛋白相關磷脂酶A2培訓講學

1、人血漿人血漿(xujing)(xujing)脂蛋白相關磷脂酶脂蛋白相關磷脂酶A2A2 血管內皮炎癥的獨立危險因子血管內皮炎癥的獨立危險因子 促進動脈促進動脈(dngmi)(dngmi)粥樣硬化（粥樣硬化（ASAS），是新的），是新的ASAS的危險因子的危險因子 能夠獨立預測能夠獨立預測ASAS的風險的風險 心腦血管疾病的提示性指標心腦血管疾病的提示性指標 獨立預測心腦血管栓塞性疾病獨立預測心腦血管栓塞性疾病第一頁，共28頁。1.1.研發(fā)研發(fā)(yn f)(yn f)背景背景1.1 1.1 中國主要中國主要(zhyo)(zhyo)疾病死亡率疾病死亡率男性女性惡性腫瘤心臟病腦血管病呼吸系統(tǒng)疾病來源：

2、2010中國(zhn u)衛(wèi)生統(tǒng)計年鑒第二頁，共28頁。1.2 1.2 美國美國(mi u)(mi u)主要疾病死亡率主要疾病死亡率SourceSource : :National Center for Health Statistics 20National Center for Health Statistics 201010第三頁，共28頁。 心腦血管疾病是造成人類死亡的主要疾病，預防檢測和治療心腦血管疾病一直是全世界醫(yī)學工作者努力不懈的目標。而心腦血管疾病的病理基礎就是(jish)動脈粥樣硬化，那么，動脈粥樣硬化是怎樣形成的呢？第四頁，共28頁。1.3 19761.3 1976年年RR

3、ossRRoss提出提出(t ch)(t ch)了損傷了損傷反應學說反應學說 近年來研究的最大成就是認識到動脈粥樣硬化是一種炎性反應性疾病，炎性細胞及其釋放的產物已經(jīng)被認為是最主要的促動脈粥樣硬化的因素。 在粥樣斑塊形成(xngchng)、進展和最終破裂的過程中均有炎性反應介質的參與。第五頁，共28頁。 因此，尋找一個能夠(nnggu)反應這種動態(tài)變化過程的介質就尤為重要了，目前國際上已經(jīng)把脂蛋白相關磷脂酶A2 （Lipoprotein- Associated Phospholipase A2 Lp-PLA2)作為一種新的炎性反應標志物。第六頁，共28頁。2.作用作用(zuyng)機制及臨床意

4、義機制及臨床意義2.1 作用作用(zuyng)機制機制 2.2 作用作用(zuyng)示意圖示意圖 2.3 臨床意義臨床意義 2.4 目前檢查的局限性目前檢查的局限性 第七頁，共28頁。2.1 作用作用(zuyng)機制機制 脂蛋白相關磷脂酶脂蛋白相關磷脂酶A2，英文簡寫，英文簡寫Lp-PLA2 又稱血小板活化因子乙酰水解酶（又稱血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH） 分子量為分子量為45K Da 由成熟的巨噬細胞和淋巴細胞合成和分泌，并由成熟的巨噬細胞和淋巴細胞合成和分泌，并 受炎性介質的調節(jié)受炎性介質的調節(jié) 80%與低密度脂蛋白（與低密度脂蛋白（LDL）結合）結合 能水解低密度脂蛋白上的

5、氧化卵磷脂，生成促能水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂，生成促 炎物質，因此炎物質，因此(ync)具有促炎癥和促動脈粥樣硬化具有促炎癥和促動脈粥樣硬化的的 作用作用 第八頁，共28頁。Lp-PLALp-PLA2 2水解動脈內水解動脈內膜上的膜上的LDLLDL中的氧化中的氧化卵磷脂（卵磷脂（ox-PCox-PC）溶血卵磷脂（溶血卵磷脂（Lyso-Lyso-PCPC）和游離的氧化）和游離的氧化的脂肪酸（的脂肪酸（ox-FAox-FA）刺激粘附因子和細刺激粘附因子和細胞因子的產生，導胞因子的產生，導致單核細胞向內膜致單核細胞向內膜聚集聚集單核細胞衍生成巨單核細胞衍生成巨噬細胞并吞噬噬細胞并吞噬oxLDL

6、oxLDL變成凋亡的泡沫細變成凋亡的泡沫細胞胞巨噬細胞和泡沫細巨噬細胞和泡沫細胞聚集形成動脈斑胞聚集形成動脈斑塊，產生、釋放更塊，產生、釋放更多的多的Lp-PLALp-PLA2 2至循環(huán)至循環(huán)第九頁，共28頁。血管血管(xugun)內腔內腔氧化氧化(ynghu)的的 LDL內膜內膜介質介質(jizh)粘附因子粘附因子單核細胞單核細胞細胞因子細胞因子斑塊形成斑塊形成泡沫細胞泡沫細胞巨噬細胞巨噬細胞溶血卵磷脂溶血卵磷脂氧化游離脂肪酸氧化游離脂肪酸2.2 2.2 作用示意圖作用示意圖第十頁，共28頁。 穩(wěn)定粥樣斑塊穩(wěn)定粥樣斑塊 Lp-PLA2 含量低含量低 可能有嚴重管腔狹窄可能有嚴重管腔狹窄 較少

7、的炎癥較少的炎癥(ynzhng)細胞細胞 不穩(wěn)定粥樣斑塊不穩(wěn)定粥樣斑塊 Lp-PLA2 含量高含量高 可能輕微的管腔狹窄可能輕微的管腔狹窄 大量的炎癥大量的炎癥(ynzhng)細胞細胞Source： Davidson MH, Jones PH. Am J Card Suppl 2008第十一頁，共28頁。穩(wěn)定粥樣斑塊穩(wěn)定粥樣斑塊斑塊破裂形成血栓斑塊破裂形成血栓不穩(wěn)定粥樣斑塊不穩(wěn)定粥樣斑塊粥樣斑塊早期粥樣斑塊早期(zoq)Source： Davidson MH, Jones PH. Am J Card Suppl 2008第十二頁，共28頁。 動脈粥樣硬化的炎癥發(fā)展到嚴重程度(chngd)，將要

8、或者已經(jīng)出現(xiàn)向血管內腔破裂時，Lp-PLA2將會被大量釋放入血液，致使其血液內的水平會大幅增高，因此Lp-PLA2在血液中的濃度就能夠反映動脈粥樣斑塊的炎癥程度(chngd)。第十三頁，共28頁。2.3 2.3 臨床意義臨床意義 通過檢測血液中的Lp-PLA2,可以有效地了解動脈粥樣硬化(ynghu)斑塊的炎癥程度及其穩(wěn)定性。這樣就可預警心肌梗死和腦血栓的發(fā)生，對預防心腦血管突發(fā)事件具有相當重要的意義。 臨床意義： 1、預測心腦血管栓塞性疾病的發(fā)生。 2、判斷心腦血管栓塞性疾病的轉歸。第十四頁，共28頁。 2.4 2.4 目前目前(mqin)(mqin)臨床檢測都存在著一定的局限臨床檢測都存在

9、著一定的局限 （1）血管造影，可以顯示血管的狹窄程度，）血管造影，可以顯示血管的狹窄程度，但這是一種有創(chuàng)性檢查，不適用于普檢、但這是一種有創(chuàng)性檢查，不適用于普檢、預防和監(jiān)測。預防和監(jiān)測。 （2）許多的血液生化檢測，比如膽固醇與）許多的血液生化檢測，比如膽固醇與低密度脂蛋白升高，體內低密度脂蛋白升高，體內(t ni)脂質代謝脂質代謝異常，還是無法預警動脈粥樣斑塊的炎癥異常，還是無法預警動脈粥樣斑塊的炎癥程度，對判斷爆發(fā)心腦血管意外危險性的程度，對判斷爆發(fā)心腦血管意外危險性的特異性不好。特異性不好。第十五頁，共28頁。（3 3）各種心肌酶的檢測，這些酶是發(fā)生了心肌梗死以）各種心肌酶的檢測，這些酶是

10、發(fā)生了心肌梗死以后才出現(xiàn)的指標異常，因而也失去了預防和監(jiān)測意義。后才出現(xiàn)的指標異常，因而也失去了預防和監(jiān)測意義。（4 4）CRPCRP在各種急性炎癥時出現(xiàn)，其升高幅度與感染在各種急性炎癥時出現(xiàn)，其升高幅度與感染的程度呈正相關的程度呈正相關 ，對于動脈粥樣硬化炎癥缺乏特異性。，對于動脈粥樣硬化炎癥缺乏特異性。只有只有Lp-PLA2Lp-PLA2的檢測能直接準確的反映血管內膜的炎癥的檢測能直接準確的反映血管內膜的炎癥程度，也就是動脈粥樣硬化的嚴重程度，并且它是動程度，也就是動脈粥樣硬化的嚴重程度，并且它是動態(tài)態(tài)(dngti)(dngti)的變化。的變化。第十六頁，共28頁。3.3.醫(yī)學醫(yī)學(yxu

11、)(yxu)評價評價3.1 3.1 醫(yī)學正常值醫(yī)學正常值根據(jù)臨床試驗數(shù)據(jù)與統(tǒng)計學分析根據(jù)臨床試驗數(shù)據(jù)與統(tǒng)計學分析(fnx)(fnx)，對，對照組照組Lp-PLA2(ng/ml)Lp-PLA2(ng/ml)檢測數(shù)據(jù)為正態(tài)分布，檢測數(shù)據(jù)為正態(tài)分布，在在a=0.05a=0.05檢驗水準下，制定單側檢驗水準下，制定單側95%95%醫(yī)學正醫(yī)學正常值為常值為175 ng/ml175 ng/ml。依據(jù)這個正常值，檢測靈敏度為依據(jù)這個正常值，檢測靈敏度為93.40%93.40%，特，特異度為異度為92.8%92.8%，準確度為，準確度為97.0%97.0%。第十七頁，共28頁。3.2 3.2 產品產品(chn

12、pn)(chnpn)評價評價 產品(chnpn)是中國首家，國內第一個上市產品(chnpn)，也是國家863高科技成果。第十八頁，共28頁。 檢測方法簡易、快捷(kui ji)（3h）、準確、靈敏度高，重復性好。 價格優(yōu)勢：同類產品在美國普遍應用，臨床的檢測收費在250美元（人民幣1500），天津市物價局批復每人份380元。第十九頁，共28頁。4.4.適應科室及人群適應科室及人群(rnqn)(rnqn)4.1 4.1 醫(yī)院科室醫(yī)院科室 門診部：內科(nik)、外科。 住院部：心內科(nik)、神經(jīng)內科(nik)、內分泌科、神經(jīng)外科、老干科。 急診部：內科(nik)、外科。 健康管理中心。第二十

13、頁，共28頁。4.2 4.2 適用人群適用人群 高危人群：冠心病、腦血栓、高血壓、高血脂癥、高粘血癥等患者及肥胖、煙酒過度、缺乏運動(yndng)等人群的門診常規(guī)血液檢測。 住院病人的常規(guī)血液檢測。 40歲以上人群體檢的常規(guī)血液檢測項目。第二十一頁，共28頁。5.5.樣本樣本(yngbn)(yngbn)的采集的采集 用肝素或EDTA抗凝管或者不抗凝取血管抽取適應癥患者(hunzh)靜脈血2-5ml送檢即可。第二十二頁，共28頁。6.ELISA6.ELISA原理原理(yunl)(yunl)6.1 6.1 原理原理(yunl)(yunl)：ELISAELISA是以免疫學反應為基礎，是以免疫學反應為

14、基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的新型免疫檢測技術。用相結合起來的一種敏感性很高的新型免疫檢測技術。洗洗滌滌待測抗原待測抗原第二十三頁，共28頁。第二十四頁，共28頁。6.2 6.2 操作操作(cozu)(cozu)流程流程a. a. 將試劑盒從冰箱中取出，在室溫中平衡片刻；將試劑盒從冰箱中取出，在室溫中平衡片刻；b. b. 加入加入2020微升待測樣品（血清或血漿微升待測樣品（血清或血漿(xujing)(xujing)）或標準品于反應孔內，然后加入或標準品于反應孔內，然后加入3030微升稀釋液混微升

15、稀釋液混和后覆膜，和后覆膜，3737溫育溫育2020分鐘分鐘( (建議血清樣本可按建議血清樣本可按比例先在離心管中充分混勻后再取比例先在離心管中充分混勻后再取5050微升加入到微升加入到反應孔內）；反應孔內）；c. c. 加入加入150150微升酶標記物，混和后覆膜微升酶標記物，混和后覆膜3737溫育溫育120120分鐘；分鐘；d.d.除去孔內液體，每孔加入除去孔內液體，每孔加入300300微升洗滌液，振蕩微升洗滌液，振蕩20-3020-30秒后除去洗滌液，重復秒后除去洗滌液，重復4 4次；次；第二十五頁，共28頁。 e.每孔加入顯色液100微升，混勻，37避光溫育20分鐘； f.加入50微升終止液； g.立即用酶標儀在450納米波長條件下測定各孔的OD值； h.以吸光度OD值為縱坐標（Y），Lp-PLA2標準品濃度(nngd)為橫坐標（X），做得相應的曲