生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指南

1、實(shí)驗(yàn)一 糖的呈色反應(yīng)和定性鑒定目的要求(1) 學(xué)習(xí)鑒定糖類及區(qū)分酮糖和醛糖的方法。(2) 了解鑒定還原糖的方法及其原理。. Molish反應(yīng)-萘酚反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理糖在濃硫酸或濃鹽酸的作用下脫水形成糠醛及其衍生物與-萘酚作用形成紫紅色復(fù)合物，在糖液和濃硫酸的液面間形成紫環(huán)，因此又稱紫環(huán)反應(yīng)。自由存在和結(jié)合存在的糖均呈陽性反應(yīng)。此外，各種糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈顏色近似的陽性反應(yīng)。因此，陰性反應(yīng)證明沒有糖類物質(zhì)的存在；而陽性反應(yīng)，則說明有糖存在的可能性，需要進(jìn)一步通過其他糖的定性試驗(yàn)才能確定有糖的存在。試劑Molish試劑：取5g -萘酚用95%乙醇溶解至100mL，臨用前配制，

2、棕色瓶保存。1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。操作方法取試管，編號，分別加入各待測糖溶液1 mL，然后加兩滴Molish試劑，搖勻。傾斜試管，沿管壁小心加入約1mL濃硫酸，切勿搖動，小心豎直后仔細(xì)觀察兩層液面交界處的顏色變化。用水代替糖溶液，重復(fù)一遍，觀察結(jié)果。. 蒽酮反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理糖經(jīng)濃酸作用后生成的糠醛及其衍生物與蒽酮（10-酮-9，10-二氫蒽）作用生成藍(lán)綠色復(fù)合物。試劑蒽酮試劑：取0.2g 蒽酮溶于100mL 濃硫酸中，當(dāng)日配制。待測糖溶液，同Molish試驗(yàn)。操作方法取試管，編號，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 3滴待測糖溶液，充分混勻，觀察各管顏色變化并記錄。. 酮糖

3、的Seliwanoff反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理該反應(yīng)是鑒定酮糖的特殊反應(yīng)。酮糖在酸的作用下較醛糖更易生成羥甲基糠醛。后者與間苯二酚作用生成鮮紅色復(fù)合物，反應(yīng)僅需20-30秒。醛糖在濃度較高時或長時間煮沸，才產(chǎn)生微弱的陽性反應(yīng)。試劑Sediwanoff試劑：0.5g 間苯二酚溶于1升鹽酸（H2OHCl=21）(V/V)中，臨用前配制。1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。操作方法取試管，編號，各加入Sediwanoff試劑1mL，再依次分別加入待測糖溶液各4滴，混勻，同時放入沸水浴中，比較各管顏色的變化過程。. Fehling試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理費(fèi)林試劑是含有硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。硫酸銅與堿溶液混合加熱，則生

4、成黑色的氧化銅沉淀。若同時有還原糖存在，則產(chǎn)生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。為防止銅離子和堿反應(yīng)生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀，F(xiàn)ehlin試劑中加入酒石酸鉀鈉，它與Cu2形成的酒石酸鉀鈉絡(luò)合銅離子是可溶性的絡(luò)離子，該反應(yīng)是可逆的。平衡后溶液內(nèi)保持一定濃度的氫氧化銅。費(fèi)林試劑是一種弱的氧化劑，它不與酮和芳香醛發(fā)生反應(yīng)。試劑試劑甲：稱取34.5g硫酸銅溶于500mL蒸餾水中。試劑乙：稱取125g NaOH 137g酒石酸鉀鈉溶于500mL蒸餾水中，貯存于具橡皮塞玻璃瓶中。臨用前，將試劑甲和試劑乙等量混合。1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。操作方法取試管，編號，各加入Fehling試劑甲和乙

5、1mL。搖勻后，分別加入4滴待測糖溶液，置沸水浴中加熱2 3min，取出冷卻，觀察沉淀和顏色變化。. Benedict試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理Benedict試劑是Fehling試劑的改良。Benedict試劑利用檸檬酸作為Cu2+的絡(luò)合劑，其堿性較Fehling試劑弱，靈敏度高，干擾因素少。試劑Benedict試劑：將170g 檸檬酸鈉和100g 無水碳酸鈉溶于800mL水中；另將17g硫酸銅溶于100mL熱水中。將硫酸銅溶液緩緩傾入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中，邊加邊攪，最后定容至1000mL。 該試劑可長期使用。1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。操作方法取試管，編號，分別加入2mL Benedi

6、ct試劑和4滴待測糖溶液，沸水浴中加熱5分鐘，取出后冷卻，觀察各管中的顏色變化。. Barfoed試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理在酸性溶液中，單糖和還原二糖的還原速度有明顯差異。Barfoed試劑為弱酸性。單糖在Barfoed試劑的作用下能將Cu2+還原成磚紅色的氧化亞銅，時間約為3分鐘，而還原二糖則需20分鐘左右。所以，該反應(yīng)可用于區(qū)別單糖和還原二糖。當(dāng)加熱時間過長，非還原性二糖經(jīng)水解后也能呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。試劑Barfoed試劑：16.7g 乙酸銅溶于近200mL水中，加1.5mL冰醋酸，定容至250mL即可。1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。操作方法取試管，編號，分別加入2mL Barfoed試劑和

7、2 3滴待測糖溶液，煮沸2-3分鐘，放置20分鐘以上，比較各管的顏色變化。注意事項(xiàng)（1）Molish反應(yīng)非常靈敏，0.001葡萄糖和0.0001蔗糖即能呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。因此，不可在樣品中混入紙屑等雜物。當(dāng)果糖濃度過高時，由于濃硫酸對它的焦化作用，將呈現(xiàn)紅色及褐色而不呈紫色，需稀釋后再做。（2）果糖與Seliwanoff試劑反應(yīng)非常迅速，呈鮮紅色，而葡萄糖所需時間較長，且只能產(chǎn)生黃色至淡黃色。戊糖亦與Seliwanoff試劑反應(yīng)，戊糖經(jīng)酸脫水生成糠醛，與間苯二酚縮合，生成綠色至藍(lán)色產(chǎn)物。（3）酮基本身沒有還原性，只有在變成烯醇式后，才顯示還原作用。（4）糖的還原作用生成氧化亞銅沉淀的顏色決定于顆粒

8、的大小，Cu2O顆粒的大小又決定于反應(yīng)速度。反應(yīng)速度快時，生成的Cu2O顆粒較小，呈黃綠色；反應(yīng)速度慢時，生成的Cu2O顆粒較大，呈紅色。溶液中還原糖的濃度可以從生成沉淀的多少來估計(jì)，而不能依據(jù)沉淀的顏色來判斷。（5）Barfoed 反應(yīng)產(chǎn)生的Cu2O沉淀聚集在試管底部，溶液仍為深藍(lán)色。應(yīng)注意觀察試管底部紅色的出現(xiàn)。思考題1. 列表總結(jié)和比較本實(shí)驗(yàn)六種顏色反應(yīng)的原理和應(yīng)用。2. 運(yùn)用本實(shí)驗(yàn)的方法，設(shè)計(jì)一個鑒定未知糖的方案。實(shí)驗(yàn)二 氨基酸的紙層析目的要求 （1）學(xué)習(xí)紙層析的原理。（2）掌握紙層析法分離混合氨基酸的操作方法。實(shí)驗(yàn)原理紙層析是以濾紙作支持物，用一定的溶劑系統(tǒng)展開，使混合樣品

9、達(dá)到分離分析的層析方法。其一般操作是將樣品溶解在適當(dāng)溶劑中，點(diǎn)樣在濾紙的一端；再選用適當(dāng)?shù)娜軇┫到y(tǒng)，從點(diǎn)樣的一端通過毛細(xì)現(xiàn)象向另一端展開，展開完畢，取出濾紙晾干或烘干，再以適當(dāng)?shù)娘@色劑或紫外燈、熒光燈下觀察其圖譜。樣品經(jīng)展開后某一物質(zhì)在紙層析譜上的位置常用比移值Rf來表示。Rf= 紙層析可看作是溶質(zhì)（樣品）在固定相與流動相之間的連續(xù)抽提，由于溶質(zhì)在兩相之間的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離。一定的物質(zhì)在兩相間有固定的分配系數(shù)，因而在恒定條件（液劑、PH、溫度）下，各物質(zhì)有固定的Rf值，據(jù)此可達(dá)到分析鑒定的目的。由于濾紙纖維可吸收2025%的水分；且其中67%以氫鍵形式與纖維素上羥基結(jié)合，一般條件下難脫去

10、；所以紙層析實(shí)際上是以水相作固定相，展開的溶劑作流動相。紙層析操作按溶劑展開方向可分為上行、下行和徑向三種。氨基酸分離一般用上行法。上行法又分單向（成分較為簡單的樣品）和雙向（單向時斑點(diǎn)重疊分離不開，于是在其垂直方向用另一種溶劑系統(tǒng)展層）。雙相層析譜可分辨十幾種以上的樣品。層析溶劑要求：（1）被分離物質(zhì)在該溶劑系統(tǒng)中Rf在0.050.8之間，各組分之Rf值相差最好能大于0.05，以免斑點(diǎn)重疊。（2）溶劑系統(tǒng)中任一組分與被分離物之間不能起化學(xué)反應(yīng)。（3）被分離物質(zhì)在溶劑系統(tǒng)中的分配較恒定，不隨溫度而變化，且易迅速達(dá)到平衡，這樣所得斑點(diǎn)較圓整。 試劑和器材 一、試劑0.1%（W

11、/V）茚三酮丙酮液。溶劑系統(tǒng)：正丁醇甲酸水1532（V/V）；二、測試樣品纈氨酸、組氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甘氨酸、（組氨酸、谷氨酸、亮氨酸）混合物、（纈氨酸、甘氨酸）混合物。三、器材層析缸25×40cm（×2）；培養(yǎng)皿15cm（×2）；噴霧器；毛細(xì)管內(nèi)徑0.1cm；電吹風(fēng)；烘箱。層析濾紙12×12cm；鉛筆，尺。操作方法一、點(diǎn)樣取層析濾紙一張（12×12cm），在距紙邊2cm處用鉛筆劃一基線，在此線上標(biāo)出七個點(diǎn)，每個點(diǎn)相距2cm，標(biāo)上順序。以毛細(xì)管吸取七種氨基酸樣品溶液，（注意次序不能混淆），樣品量約10-20uml，點(diǎn)的直徑控制在2mm左右，

12、不可過大。用電吹風(fēng)將斑點(diǎn)吹干，待樣品干燥后再點(diǎn)一次。濾紙上點(diǎn)樣斑點(diǎn)干燥后，把濾紙卷成圓筒形，紙的兩邊以鉻絲相連，但不可重疊相碰。二、展層在層析缸中平穩(wěn)的放入裝有層析溶劑的培養(yǎng)皿。將圓筒形濾紙放入，點(diǎn)樣一端接觸溶劑，以點(diǎn)樣處不浸入溶劑為準(zhǔn)。待溶劑自下而上均勻展開，約2小時后溶劑到達(dá)距紙邊0.5cm處取出濾紙，懸掛于室溫中，用電吹風(fēng)充分吹盡溶劑。 三、顯色 用噴霧器將茚三酮均勻地噴在濾紙上，然后懸濾紙于65烘箱內(nèi)，烘30分鐘，即可看到紫紅色氨基酸斑點(diǎn)，將圖譜上的斑點(diǎn)用鉛筆圈出。用直尺量出各斑點(diǎn)中心與原點(diǎn)的距離以及溶劑前沿與原點(diǎn)的距離，求出各氨基酸的Rf值。將各顯色斑點(diǎn)的Rf值與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸

13、的Rf值比較，可得知該斑點(diǎn)的準(zhǔn)確成分。注意事項(xiàng)（1）烘箱加熱溫度不可過高，且不可有氨的干擾，否則圖譜背景會泛紅。（2）第一相溶劑最好在使用前再按比例混合，否則會引起酯化，影響層析效果。（3）整個實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)戴手套進(jìn)行。思考題1紙層析和柱層析、薄層層析、高效液相層析各有什么特點(diǎn)？實(shí)驗(yàn)三 醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白目的要求 （1）學(xué)習(xí)醋酸纖維素薄膜電泳原理；（2）掌握醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白的操作技術(shù)。實(shí)驗(yàn)原理醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法。它具有簡便、快速、樣品用量少，應(yīng)用范圍廣，分離清晰，沒有吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。目前已廣泛用于血清蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、糖蛋白

14、、多肽、核酸、同工酶及其他生物大分子的分析檢測，是醫(yī)學(xué)和臨床檢驗(yàn)的常規(guī)技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)以醋酸纖維素為電泳支持物，分離各種血清蛋白。血清中含有白蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白和各種脂蛋白等。各種蛋白質(zhì)由于氨基酸組成、分子量、等電點(diǎn)及形狀不同，在電場中的遷移速度不同。以醋酸纖維素薄膜為支持物，正常人血清在pH8.6的緩沖體系中電泳，染色后可顯示5條區(qū)帶。其中白蛋白的泳動速度最快，其余依次為1、2、及球蛋白。這些區(qū)帶經(jīng)洗脫后可直接進(jìn)行光吸收掃描自動繪出區(qū)帶吸收峰及相對百分比。試劑和器材一、試劑巴比妥緩沖液（pH 8.6，離子強(qiáng)度0.07）：巴比妥1.66g, 巴比妥鈉12.76g，加水至1000ml。置4

15、冰箱保存，備用。染色液：氨基黑10B 0.5g, 甲醇50ml, 冰醋酸10ml，蒸餾水40ml，混勻。漂洗液：含95乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸餾水50ml，混勻。透明液：冰醋酸25ml，無水乙醇75ml，混勻。二、材料新鮮血清（未溶血）三、器材醋酸纖維薄膜（2×8cm），培養(yǎng)皿，點(diǎn)樣器，電泳儀，玻璃板，粗濾紙，鉛筆和直尺，竹鑷子操作方法1. 浸泡：用鑷子取醋酸纖維薄膜1張（識別光澤面和無光澤面，并在角上用筆做上記號），小心平放在盛有緩沖液的平皿中，浸泡30min左右。2點(diǎn)樣：將浸透的薄膜從緩沖液取出，夾在兩層粗濾紙內(nèi)吸干多余的液體，然后平鋪在玻璃板上（無光澤面朝上），使其底邊與

16、模板底邊對齊。點(diǎn)樣時，先在點(diǎn)樣器上均勻地沾上血清，再將點(diǎn)樣器輕輕地印在點(diǎn)樣區(qū)內(nèi)，使血清完全滲透至薄膜內(nèi)，形成一定寬度、粗細(xì)均勻的直線。點(diǎn)樣區(qū)距陰極端1.5cm處。醋酸纖維素薄膜規(guī)格及點(diǎn)樣位置示意圖（虛線處為點(diǎn)樣位置）3電泳：根據(jù)電泳槽膜支架的寬度，裁剪尺寸合適的濾紙條。在兩個電極槽中，各倒入等體積的電泳緩沖液，在電泳槽的兩個膜支架上，各放兩層濾紙條，使濾紙一端的長邊與支架前沿對齊，另一端浸入電泳緩沖液中。當(dāng)濾紙全部潤濕后，用玻璃棒輕輕擠壓在膜支架上的濾紙以驅(qū)趕氣泡，使濾紙的一端能緊貼在膜支架上，即為濾紙橋。將點(diǎn)樣端的薄膜平貼在陰極電泳槽支架的濾紙橋上（點(diǎn)樣面朝下），另一端平貼在陽極端支架上。蓋

17、上電泳槽蓋，使薄膜平衡10min。通電，調(diào)節(jié)電流強(qiáng)度0.40.6mA/cm膜寬度，電泳時間約11.5小時。醋酸纖維薄膜電泳裝置示意圖1. 濾紙橋 2. 電泳槽 3. 醋酸纖維素薄膜 4. 電泳槽膜支架 5. 電極室中央隔板4染色：電泳完畢后將薄膜取下, 放在染色液中浸泡10min。5漂洗：將薄膜從染色液中取出后移置漂洗液中漂洗數(shù)次，直至背景藍(lán)色脫凈。取出薄膜放在濾紙上，用吹風(fēng)機(jī)將薄膜吹干。6透明：將脫色吹干后的薄膜浸入透明液中，浸泡23分鐘后，取出緊貼于潔凈玻璃板上，兩者間不能有氣泡，干后即為透明的薄膜圖譜（見下圖）。血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳圖譜示意圖注意事項(xiàng)（1）市售醋酸纖維素薄膜均為干膜

18、片，薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的關(guān)鍵之一。若飄浮于液面的薄膜在1530s內(nèi)迅速潤濕，整條薄膜色澤深淺一致，則此膜均勻可用于電泳。（2）醋酸纖維素薄膜電泳常選用pH8.6巴比妥巴比妥鈉緩沖液，其濃度為0.050.09mol/L。選擇何種濃度與樣品和薄膜的厚薄有關(guān)。緩沖液濃度過低，則區(qū)帶泳動速度快區(qū)帶擴(kuò)散變寬；緩沖液濃度過高，則區(qū)帶泳動速度慢，區(qū)帶分布過于集中，不易分辨。（3）點(diǎn)樣時，應(yīng)將薄膜表面多余的緩沖液用濾紙吸去，以免引起樣品擴(kuò)散。但不宜太干，否則樣品不易進(jìn)入膜內(nèi)，造成點(diǎn)樣起始點(diǎn)參差不起，影響分離效果。（4）點(diǎn)樣時，動作要輕、穩(wěn)，用力不能太大，以免損壞膜片或印出凹陷影響電泳區(qū)帶分離效果。（5

19、）電泳時應(yīng)選擇合適的電流強(qiáng)度，一般電流強(qiáng)度為0.40.6mA/cm膜寬度。電流強(qiáng)度高，則熱效應(yīng)高；電流過低，則樣品泳動速度慢且易擴(kuò)散。（6）操作過程為防止指紋污染，應(yīng)戴手套。思考題1. 根據(jù)人血清中各蛋白組分的性質(zhì)，如何估計(jì)它們在pH8.6的巴比妥巴比妥鈉電泳緩沖液中的相對遷移速度？2簡述醋酸纖維素薄膜電泳的原理和優(yōu)點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)四  溫度、pH對酶活性的影響溫度對酶活性的影響目的要求通過檢驗(yàn)不同溫度下唾液淀粉酶的活性，了解溫度對酶活性的影響。實(shí)驗(yàn)原理酶的催化作用受溫度影響很大，一方面與一般化學(xué)反應(yīng)一樣，提高溫度可以增加酶促反應(yīng)的速度。通常溫度每升高10，反應(yīng)速度增加一倍左右，最后反應(yīng)速

20、度達(dá)到最大值。另一方面酶是一種蛋白質(zhì)，溫度過高可使蛋白質(zhì)變性，導(dǎo)致酶失活。因此，反應(yīng)速度達(dá)到最大值以后，隨著溫度的升高，反應(yīng)速度反而逐漸下降，以至完全停止反應(yīng)。反應(yīng)速度達(dá)到最大值時的溫度稱為某種酶作用的最適溫度。高于或低于最適溫度時，反應(yīng)速度逐漸降低。大多數(shù)動物酶的最適溫度為3740，植物酶的最適溫度為5060。但是，一種酶的最適溫度不是完全固定的，它與作用的時間長短有關(guān)，反應(yīng)時間增長時，最適溫度向數(shù)值較低的方向移動。通常測定酶的活性時，在酶反應(yīng)的最適溫度下進(jìn)行。為了維持反應(yīng)過程中溫度的恒定，一般利用恒溫水浴等恒溫裝置。酶對溫度的穩(wěn)定性與其存在形式有關(guān)。實(shí)踐證明大多數(shù)酶在干燥的固體狀態(tài)下比較穩(wěn)

21、定，能在室溫下保存數(shù)月以至一年。溶液中的酶，一般不如固體的酶穩(wěn)定，而且容易被微生物污染，通常很難長期保存而不喪失其活性，在高溫的情況下，更不穩(wěn)定。唾液淀粉酶 碘淀粉H2O 藍(lán)色糊精 紅色糊精 無色糊精 麥芽糖 葡萄糖試劑和器材一、試劑顯色劑：KI-I2溶液二、器材（1）試管和試管架（2）吸量管（1、2ml）（3）燒杯（500、100ml）（4）錐形瓶（100ml）（5）水浴鍋（6）鐵三腳架（7）煤氣燈（8）恒溫水浴操作方法1、取唾液1ml，稀釋200倍。2、取3只支試管，編號并各注入2mL淀粉溶液；3、將第1，2號管置于37，第3號管置于冰浴中保溫5分鐘。4、向1號管加入1ml煮沸15分鐘后的

22、稀釋唾液淀粉酶液，2，3號管加入常溫等量酶液。5、 靜置20分鐘，向各試管滴2滴KI-I2溶液。6、 觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象并記錄思考題1.什么是酶的最適溫度？有體實(shí)踐意義？2.酶在干燥的狀態(tài)下與水溶液中，它的活性受溫度的影響是否相同？這個性質(zhì)對酶的保存有體意義？3.酶反應(yīng)的最適溫度是酶的特征物理常數(shù)嗎？它與哪些因素有關(guān)？pH對酶活性的影響目的要求1.了解pH對酶活性的影響。2.學(xué)習(xí)測定酶的最適pH的方法實(shí)驗(yàn)原理酶的活性受環(huán)境pH的影響極為顯著。通常各種酶只有在一定的pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活性。一種酶表現(xiàn)其活性最高時的pH值，稱為該酶的最適pH。低于或高于最適pH時，酶的活性降低。不同酶的最適pH值不同，

23、例如，胃蛋白酶的最適pH為1.5-2.5 ，胰蛋白酶的最適pH為8等。應(yīng)當(dāng)指出酶的最適pH受底物性質(zhì)和緩沖溶液性質(zhì)的影響。例如，唾液淀粉酶的最適pH約為6.8，但在磷酸緩沖液中，其最適pH為6.4-6.6，在醋酸緩沖液中則為5.6。試劑和器材一、試劑（1）0.3%氯化鈉的0.5%淀粉溶液 新鮮配制、需加熱至無濁狀 （2）稀釋200倍的新鮮唾液（3）0.2M磷酸氫二鈉溶液（4）0.1M檸檬酸溶液（5）碘化鉀-碘溶液：取碘化鉀2g 、碘1g溶于10ml水中，用時稀釋10倍。二、器材（1）試管和試管架；（2）吸量管（0.5、1、2、5、10ml）；（3）錐形瓶（50、100ml）；（4）燒杯（100

24、ml）；（5）量筒（100ml）；（6）玻璃漏斗；（7）吸量管架；（8）白瓷板；（9）恒溫水??；（10）滴管；（11）秒表；（12）濾紙。操作方法取8個50ml錐形瓶，編號。按下表中的比例，用吸量管添加0.2M磷酸氫二鈉溶液和0.1M檸檬酸溶液，制備pH5.0-8.0的8種緩沖溶液。錐形瓶號0.2M磷酸氫二鈉（ml）0.1M檸檬酸（ml）緩沖液pH15.154.855.025.804.205.636.313.696.046.923.086.457.722.286.868.691.317.279.360.647.689.720.288.0取9支干燥的試管，編號。將8個錐形瓶中不同pH的緩沖液各取

25、3ml，分別加入相應(yīng)號碼（18）號的試管中。然后，再向每個試管中添加0.5%淀粉溶液2ml。第9號試管與第5號試管的內(nèi)容物相同。向第9干燥的試管中加入稀釋200倍的唾液2ml,搖勻后放入37恒溫水浴中保溫.每隔1min由第9號試管中取出一滴混合液,置于白瓷板上,加1滴碘化鉀-碘溶液,檢驗(yàn)淀粉的水解程度,待結(jié)果呈檢黃色時,取出試管,記錄保溫時間。注意，掌握第9號試管的水解程度是本實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵之一。以1min的間隔，依次向第1至第8號試管中加入稀釋200倍的唾液2ml，搖勻，并以1min的間隔依次將8號支試管放入37恒溫水浴中保溫。然后，按照第9號試管的保溫時間，依次將各管迅速取出，并立即加入碘

26、化鉀-碘溶液2滴，充分搖勻。觀察各管呈現(xiàn)的顏色，判斷在不同pH值下淀粉被水解的程度，可以看出pH對唾液淀粉酶活性的影響，并確定其最適pH。思考題1.PH對酶活性有何影響？什么是酶反應(yīng)的最適pH？2.酶反應(yīng)的pH是否是一個常數(shù)？它與哪些因素有關(guān)？這種性質(zhì)對于選擇測定酶活性的條件有什么意義？3.通過幾個酶學(xué)實(shí)驗(yàn)，你對下面問題如何認(rèn)識：（1）酶作為生物催化劑具有哪些特性？（2）進(jìn)行酶的實(shí)驗(yàn)必須注意控制哪些條件？為什么？生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱課程名稱：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)英文名稱：EXPERIMENT OF BIOCHEMISTRY 面向?qū)I(yè)：生命學(xué)科相關(guān)專業(yè)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書名稱：現(xiàn)代生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 出版單位：四

27、川大學(xué)出版社出版日期：2002年 主編：林宏輝等一、課程學(xué)時學(xué)分課程總學(xué)時：51 課程總學(xué)分：2實(shí)驗(yàn)總學(xué)時：51 實(shí)驗(yàn)總分學(xué)：2二、實(shí)驗(yàn)的地位、作用和目的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程是生命科學(xué)教學(xué)中重要的基礎(chǔ)課,它使學(xué)生通過本門課程的學(xué)習(xí),掌握生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本理論基本知識以及基本實(shí)驗(yàn)技能,培養(yǎng)學(xué)生分析問題和解決問題的能力,培養(yǎng)學(xué)生具有一定的科學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)芰皣?yán)格認(rèn)真的科學(xué)學(xué)風(fēng),加深理論知識和感性認(rèn)識,注重培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新意識。三、基本原理及課程簡介生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程包括滴定、比色、層析、電泳、生化物質(zhì)的分離、制備、分析和鑒定等基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)及原理，包括實(shí)驗(yàn)方法、操作技術(shù)和一些基本儀器的原理及使用，分析糖、脂、蛋白質(zhì)、核酸、酶、維生素等生物化學(xué)物質(zhì)（定量、定性分析）及某些代謝過程（如脂肪