臨床免疫學及檢驗李梨平.

1、臨床免疫學與檢驗臨床免疫學與檢驗湖南省兒童醫(yī)院兒科醫(yī)學研究所湖南省兒童醫(yī)院兒科醫(yī)學研究所李梨平李梨平概概 論論免疫學免疫學(Immunology)(Immunology)是研究免疫系統(tǒng)的是研究免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能，并通過對其在免疫應答過結(jié)構(gòu)與功能，并通過對其在免疫應答過程中所產(chǎn)生的免疫保護與免疫損傷機制程中所產(chǎn)生的免疫保護與免疫損傷機制的研究，探討有效的免疫措施，實現(xiàn)以的研究，探討有效的免疫措施，實現(xiàn)以防病、治病為目的的一門現(xiàn)代醫(yī)學學科防病、治病為目的的一門現(xiàn)代醫(yī)學學科免疫學經(jīng)驗時期（免疫學經(jīng)驗時期（111117 17 世紀）世紀）u中國醫(yī)生發(fā)明了用人痘苗預防天花中國醫(yī)生發(fā)明了用人痘苗預防天花

2、 經(jīng)典免疫學時期（經(jīng)典免疫學時期（18 18 世紀末到世紀末到 20 20 世紀中葉）世紀中葉） 抗感抗感染免疫染免疫u牛痘苗、減毒疫苗、吞噬細胞、抗體、補體、原始體液免牛痘苗、減毒疫苗、吞噬細胞、抗體、補體、原始體液免疫和細胞免疫學說疫和細胞免疫學說 近代免疫學時期（近代免疫學時期（ 20 20 世紀中葉）世紀中葉）u特異性細胞的免疫功能、天然和獲得性免疫耐受現(xiàn)象、抗特異性細胞的免疫功能、天然和獲得性免疫耐受現(xiàn)象、抗體生成克隆學說、細胞克隆選擇學說（體生成克隆學說、細胞克隆選擇學說（clonalclonal selection selection）現(xiàn)代免疫學時期現(xiàn)代免疫學時期器官、細胞和分子

3、水平器官、細胞和分子水平u雞法氏囊及哺乳動物胸腺的免疫功能、雞法氏囊及哺乳動物胸腺的免疫功能、TBTB淋巴細胞、巨噬淋巴細胞、巨噬細胞、細胞因子、免疫學技術(shù)發(fā)展（單克隆抗體標記技術(shù)、細胞、細胞因子、免疫學技術(shù)發(fā)展（單克隆抗體標記技術(shù)、免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)、分子雜交技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、細胞融合技免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)、分子雜交技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、細胞融合技術(shù)等）。術(shù)等）。免疫學的形成與發(fā)展免疫學的形成與發(fā)展 免疫免疫（immunity）是機體識別和排斥抗是機體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能。原性異物的一種生理功能。 免疫系統(tǒng)與機體的其他系統(tǒng)相互配合，免疫系統(tǒng)與機體的其他系統(tǒng)相互配合，相互制約，共同維持機體在生命過

4、程中相互制約，共同維持機體在生命過程中的生理平衡。的生理平衡。免疫學簡介免疫學簡介 宿主體內(nèi)的免疫系統(tǒng)，能識別并清除從外環(huán)境中侵入的病宿主體內(nèi)的免疫系統(tǒng)，能識別并清除從外環(huán)境中侵入的病 原生物及其產(chǎn)生的毒素、內(nèi)環(huán)境中因基因突變產(chǎn)生的腫瘤原生物及其產(chǎn)生的毒素、內(nèi)環(huán)境中因基因突變產(chǎn)生的腫瘤 細胞、自身衰老殘損的組織細胞或自身變性抗原，實現(xiàn)細胞、自身衰老殘損的組織細胞或自身變性抗原，實現(xiàn) 免疫防御免疫防御(immunological defence) 免疫自穩(wěn)免疫自穩(wěn)(immunological homeostasis)免疫監(jiān)視免疫監(jiān)視(immunological surveillance)免疫系統(tǒng)

5、的三大生理功能免疫系統(tǒng)的三大生理功能免疫學概念與免疫應答免疫學概念與免疫應答免疫防御（免疫防御（immunological defenceimmunological defence） 指機體排斥外源性異物的能力。指機體排斥外源性異物的能力。免疫自穩(wěn)（免疫自穩(wěn)（immunological homeostasisimmunological homeostasis） 指機體識別和清除自身衰變殘損的組指機體識別和清除自身衰變殘損的組 織細胞織細胞 的能力，以維持正常內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。的能力，以維持正常內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。免疫監(jiān)視（免疫監(jiān)視（immunological surveillanceimmunologica

6、l surveillance） 指機體殺傷和清除異常突變細胞的能力，以監(jiān)指機體殺傷和清除異常突變細胞的能力，以監(jiān) 視和抑制惡性腫瘤在體內(nèi)生長。視和抑制惡性腫瘤在體內(nèi)生長。免疫系統(tǒng)的三大生理功能免疫系統(tǒng)的三大生理功能 免疫應答反應免疫應答反應（immune response） 是指機體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激發(fā)生一系列反應，并是指機體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激發(fā)生一系列反應，并以排出或分解該抗原為目的的反應過程。以排出或分解該抗原為目的的反應過程。 免疫應答的過程主要分為：免疫應答的過程主要分為：識別階段（識別階段（recognition phaserecognition phase）活化階段（活化階段（

7、activation phaseactivation phase）效應階段（效應階段（response phaseresponse phase）抗原識別處理抗原識別處理傳遞信息傳遞信息免疫細胞活化增殖產(chǎn)生免疫細胞活化增殖產(chǎn)生效應細胞、分子效應細胞、分子執(zhí)行效應功能執(zhí)行效應功能免疫應答效應大多為生理性，是機體對免疫應答效應大多為生理性，是機體對 外來抗原或自身變性抗原的清除效應外來抗原或自身變性抗原的清除效應 免疫應答反應過強時，可致機體組織或器免疫應答反應過強時，可致機體組織或器 官發(fā)生病理損傷，出現(xiàn)臨床疾病官發(fā)生病理損傷，出現(xiàn)臨床疾病功能名稱功能名稱生理功能生理功能 病理表現(xiàn)病理表現(xiàn)免疫防御

8、免疫防御 清除病原微生物及其它清除病原微生物及其它抗原性異物抗原性異物超敏反應（強）超敏反應（強）免疫缺陷病（弱）免疫缺陷?。ㄈ酰┟庖咦苑€(wěn)免疫自穩(wěn) 清除損傷或衰老細胞清除損傷或衰老細胞自身免疫性疾病自身免疫性疾病免疫監(jiān)視免疫監(jiān)視 清除突變或畸變細胞，清除突變或畸變細胞，防止腫瘤發(fā)生、殺傷病防止腫瘤發(fā)生、殺傷病毒感染細胞毒感染細胞腫瘤或病毒持續(xù)性腫瘤或病毒持續(xù)性感染感染免疫系統(tǒng)功能的生理和病理表現(xiàn)免疫系統(tǒng)功能的生理和病理表現(xiàn) 免疫組織與器官免疫組織與器官免疫系統(tǒng)免疫系統(tǒng)(immune system)由免疫器官、由免疫器官、免疫細胞和免疫分子構(gòu)成。淋巴組織及免疫細胞和免疫分子構(gòu)成。淋巴組織及免疫細

9、胞分布于機體全身，執(zhí)行免疫防免疫細胞分布于機體全身，執(zhí)行免疫防衛(wèi)功能，維持機體內(nèi)環(huán)境正常的生理功衛(wèi)功能，維持機體內(nèi)環(huán)境正常的生理功能及動態(tài)平衡。免疫器官按功能不同，能及動態(tài)平衡。免疫器官按功能不同，分為中樞免疫器官和外周免疫器官。分為中樞免疫器官和外周免疫器官。 中樞免疫器官是免疫細胞產(chǎn)生、分化和中樞免疫器官是免疫細胞產(chǎn)生、分化和成熟的場所成熟的場所外周免疫器官是免疫應答的場所外周免疫器官是免疫應答的場所單核細胞和淋巴細胞經(jīng)血液循環(huán)及淋巴循單核細胞和淋巴細胞經(jīng)血液循環(huán)及淋巴循環(huán)，進出于外周淋巴組織及淋巴器官，形環(huán)，進出于外周淋巴組織及淋巴器官，形成機體免疫系統(tǒng)的免疫網(wǎng)絡(luò)成機體免疫系統(tǒng)的免疫網(wǎng)絡(luò)

10、 通過免疫網(wǎng)絡(luò)，免疫細胞能及時到達機通過免疫網(wǎng)絡(luò)，免疫細胞能及時到達機體各臟器及皮膚粘膜的病原微生物入侵體各臟器及皮膚粘膜的病原微生物入侵部位，又能將機體各部位的抗原成分經(jīng)部位，又能將機體各部位的抗原成分經(jīng)抗原遞呈細胞攜帶至相應淋巴組織及淋抗原遞呈細胞攜帶至相應淋巴組織及淋巴器官，活化巴器官，活化T T淋巴細胞與淋巴細胞與B B淋巴細胞，淋巴細胞，執(zhí)行特異性免疫應答功能。執(zhí)行特異性免疫應答功能。 （一）中樞淋巴器官：（一）中樞淋巴器官：骨髓骨髓: : （1 1）是造血干細胞生成、分化發(fā)育的場所；）是造血干細胞生成、分化發(fā)育的場所； （2 2）是功能性）是功能性B B細胞分化成熟的唯一場所；細胞

11、分化成熟的唯一場所； （3 3）提供各種免疫細胞的前體細胞；）提供各種免疫細胞的前體細胞； T T細胞分細胞分 化成熟的場所化成熟的場所胸腺胸腺: : T T細胞分化成熟的場所細胞分化成熟的場所（二）外周淋巴器官：（二）外周淋巴器官：淋巴結(jié)、脾臟、粘膜相關(guān)淋巴結(jié)、脾臟、粘膜相關(guān) 淋巴組織（扁桃體、闌尾等）淋巴組織（扁桃體、闌尾等）（三）（三） 淋巴細胞再循環(huán)與歸巢淋巴細胞再循環(huán)與歸巢 淋巴細胞在全身器官組織及體液中的循環(huán)，可擴大淋巴細胞在全身器官組織及體液中的循環(huán)，可擴大與病原異物抗原接觸的機遇，并將被抗原激活的淋巴細與病原異物抗原接觸的機遇，并將被抗原激活的淋巴細胞引流入局部淋巴組織及器官，

12、在胞引流入局部淋巴組織及器官，在T T細胞、細胞、B B細胞、抗原細胞、抗原遞呈細胞遞呈細胞(antigen presenting cells, APC)間發(fā)揮協(xié)同的免間發(fā)揮協(xié)同的免疫應答，產(chǎn)生的效應淋巴細胞定向地遷移于病原異物部疫應答，產(chǎn)生的效應淋巴細胞定向地遷移于病原異物部位，發(fā)揮免疫效應功能。位，發(fā)揮免疫效應功能。 淋巴細胞再循環(huán)與歸巢淋巴細胞再循環(huán)與歸巢外周免疫器官及外周淋巴組織既是淋巴細胞外周免疫器官及外周淋巴組織既是淋巴細胞再循環(huán)的起點和中途站，也是淋巴細胞歸巢再循環(huán)的起點和中途站，也是淋巴細胞歸巢的終點。淋巴細胞在發(fā)揮免疫效應的同時，的終點。淋巴細胞在發(fā)揮免疫效應的同時，被歸巢受

13、體引導回該類細胞的原定居處，進被歸巢受體引導回該類細胞的原定居處，進行修整、增殖和發(fā)育，以提高該類淋巴細胞行修整、增殖和發(fā)育，以提高該類淋巴細胞的數(shù)量和功能，這是保證淋巴細胞功能健全的數(shù)量和功能，這是保證淋巴細胞功能健全的重要環(huán)節(jié)。的重要環(huán)節(jié)。 免疫細胞免疫細胞凡參與免疫應答或與免疫應答有關(guān)凡參與免疫應答或與免疫應答有關(guān)的細胞統(tǒng)稱為免疫細胞，按免疫細的細胞統(tǒng)稱為免疫細胞，按免疫細胞在體內(nèi)的作用不同分為三大類。胞在體內(nèi)的作用不同分為三大類。 T細胞細胞 （Thymus-dependent cell）淋巴細胞淋巴細胞 B細胞細胞 （Bone marrow dependent cell） NK細胞（

14、細胞（Natural Killer cell）能增殖分化并產(chǎn)生免疫效應能增殖分化并產(chǎn)生免疫效應淋巴細胞分類淋巴細胞分類 吞噬細胞（吞噬細胞（phagocyte） 樹突狀細胞（樹突狀細胞（Dendritic Cell, DC）免疫輔助細胞免疫輔助細胞參與輔助淋巴細胞的活化參與輔助淋巴細胞的活化 中性粒細胞中性粒細胞 嗜酸性粒細胞嗜酸性粒細胞免疫應答細胞免疫應答細胞 嗜堿性粒細胞嗜堿性粒細胞 肥大細胞肥大細胞 參與免疫應答中的某一環(huán)節(jié)參與免疫應答中的某一環(huán)節(jié) T T細胞細胞B B細胞細胞NKNK細胞細胞 主要功能主要功能抗原識別抗原識別抗原識別抗原識別細胞毒性細胞毒性細胞免疫細胞免疫體液免疫體液免

15、疫免疫監(jiān)視免疫監(jiān)視免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié) 分布分布外周血液外周血液70%70%75%75%10%10%15%15%10%10%淋巴結(jié)淋巴結(jié)70%70%75%75%20%20%25%25%很少很少脾臟脾臟30%30%50%50%50%50%65%65%5%5% 不同淋巴細胞及功能簡介不同淋巴細胞及功能簡介 免疫分子免疫分子 免疫分子是由一些免疫活性細胞免疫分子是由一些免疫活性細胞或相關(guān)細胞分泌的蛋白質(zhì)及小分子多或相關(guān)細胞分泌的蛋白質(zhì)及小分子多肽物質(zhì)組成，它們參與機體的免疫反肽物質(zhì)組成，它們參與機體的免疫反應或免疫調(diào)節(jié)。應或免疫調(diào)節(jié)。 免疫球蛋白（免疫球蛋白（Immunoglobulin

16、, Ig） 補體系統(tǒng)補體系統(tǒng) （Complement, C） 細胞因子細胞因子 （Cytokine） 細胞粘附分子（細胞粘附分子（Cell Adhesion Molecules, CAM） 白細胞分化抗原（白細胞分化抗原（Cluster Differentiation antigen, CD）主要的免疫分子主要的免疫分子 臨床免疫學臨床免疫學臨床免疫學臨床免疫學(clinical immunology)是將免疫是將免疫學基礎(chǔ)理論、臨床醫(yī)學疾病與免疫學技術(shù)學基礎(chǔ)理論、臨床醫(yī)學疾病與免疫學技術(shù)相結(jié)合，用于研究疾病的免疫病理機制、相結(jié)合，用于研究疾病的免疫病理機制、診斷與鑒別診斷、評價治療效果和判斷

17、愈診斷與鑒別診斷、評價治療效果和判斷愈后的多個分支學科的總稱。后的多個分支學科的總稱。 臨床免疫學發(fā)展的主要方向是將基礎(chǔ)免疫臨床免疫學發(fā)展的主要方向是將基礎(chǔ)免疫學研究所取得的理論成果應用于臨床疾病學研究所取得的理論成果應用于臨床疾病的診治，探討新的免疫現(xiàn)象與臨床疾病的的診治，探討新的免疫現(xiàn)象與臨床疾病的關(guān)系，進一步推動臨床免疫學與各相關(guān)學關(guān)系，進一步推動臨床免疫學與各相關(guān)學科的發(fā)展，為人類的生命健康作出重要貢科的發(fā)展，為人類的生命健康作出重要貢獻。獻。免疫病理學免疫病理學(immunopathology)是溝通基礎(chǔ)免疫研究與是溝通基礎(chǔ)免疫研究與臨床醫(yī)學研究的橋梁。臨床醫(yī)學研究的橋梁。通過研究免

18、疫細胞、炎性細胞、免疫分子，了解當這些通過研究免疫細胞、炎性細胞、免疫分子，了解當這些細胞或分子的功能失衡或缺陷與導致自身免疫性疾病、細胞或分子的功能失衡或缺陷與導致自身免疫性疾病、免疫缺陷病、免疫增殖病之間的相互關(guān)系。免疫缺陷病、免疫增殖病之間的相互關(guān)系。探討免疫相關(guān)性疾病患者疾病發(fā)生發(fā)展過程中的免疫病探討免疫相關(guān)性疾病患者疾病發(fā)生發(fā)展過程中的免疫病理改變，對治療與預后評價有著重要的臨床意義。理改變，對治療與預后評價有著重要的臨床意義。 免疫病理與免疫性疾病免疫病理與免疫性疾病 移植免疫學移植免疫學 (transplantation immunology)：移植免疫學是通過組織、：移植免疫學

19、是通過組織、細胞或器官移植，以替代機體喪失功能細胞或器官移植，以替代機體喪失功能的組織器官或細胞，移植后保證移植物的組織器官或細胞，移植后保證移植物存活，不發(fā)生排斥反應的一門科學，是存活，不發(fā)生排斥反應的一門科學，是現(xiàn)代醫(yī)學中臨床治療的一項重要手段現(xiàn)代醫(yī)學中臨床治療的一項重要手段 移植免疫移植免疫腫瘤免疫學腫瘤免疫學(tumor immunology)(tumor immunology)是研究是研究腫瘤相關(guān)抗原和腫瘤的免疫診斷、腫瘤腫瘤相關(guān)抗原和腫瘤的免疫診斷、腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機體的免疫狀況、機體對的發(fā)生發(fā)展與機體的免疫狀況、機體對腫瘤的免疫應答和抗腫瘤免疫效應機制腫瘤的免疫應答和抗腫瘤免疫效

20、應機制的一門分支學科的一門分支學科 腫瘤免疫腫瘤免疫 感染免疫學（感染免疫學（infection immunologyinfection immunology）是研究病原）是研究病原生物與宿主相互關(guān)系的學科，是傳統(tǒng)免疫學的基礎(chǔ)生物與宿主相互關(guān)系的學科，是傳統(tǒng)免疫學的基礎(chǔ)與核心。與核心。 掌握免疫系統(tǒng)在殺傷被病原體感染的宿主細胞時對掌握免疫系統(tǒng)在殺傷被病原體感染的宿主細胞時對宿主的損傷程度，在免疫應答過程中激活或抑制的宿主的損傷程度，在免疫應答過程中激活或抑制的效應細胞當病原體被清除后所發(fā)揮的作用，固有性效應細胞當病原體被清除后所發(fā)揮的作用，固有性免疫與獲得性免疫間的相互調(diào)節(jié)關(guān)系，生物疫苗在免疫

21、與獲得性免疫間的相互調(diào)節(jié)關(guān)系，生物疫苗在免疫防御中的特點均是當前感染免疫研究的重點。免疫防御中的特點均是當前感染免疫研究的重點。 感染免疫感染免疫臨床免疫學與免疫檢驗臨床免疫學與免疫檢驗 免疫學技術(shù)的發(fā)展免疫學技術(shù)的發(fā)展免疫學檢驗免疫學檢驗（laboratory immunology）是研究是研究免疫學技術(shù)及其在醫(yī)學檢驗領(lǐng)域的重要學科。免疫學技術(shù)及其在醫(yī)學檢驗領(lǐng)域的重要學科。免疫學檢驗的發(fā)展是隨著各種免疫物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)免疫學檢驗的發(fā)展是隨著各種免疫物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)密切相關(guān)，在免疫學理論與生物學技術(shù)的長期密切相關(guān)，在免疫學理論與生物學技術(shù)的長期發(fā)展過程中，許多經(jīng)典技術(shù)被加以革新與放大發(fā)展過程中，許多經(jīng)典技

22、術(shù)被加以革新與放大而派生出更多新技術(shù)與新方法，這些方法和技而派生出更多新技術(shù)與新方法，這些方法和技術(shù)在醫(yī)學研究與臨床診斷的運用中發(fā)揮了不可術(shù)在醫(yī)學研究與臨床診斷的運用中發(fā)揮了不可估量的作用。估量的作用。 發(fā)展進程的主要階段發(fā)展進程的主要階段自然的肉眼觀察的抗原抗體反應（沉淀反應、凝集反應）自然的肉眼觀察的抗原抗體反應（沉淀反應、凝集反應）加速的肉眼觀察的抗原抗體反應（電泳技術(shù)、分離技術(shù)）加速的肉眼觀察的抗原抗體反應（電泳技術(shù)、分離技術(shù)）標記性免疫技術(shù)提高抗原抗體反應的特異性、敏感性標記性免疫技術(shù)提高抗原抗體反應的特異性、敏感性半自動、自動化檢驗儀器與免疫反應原理結(jié)合，加快了反應過程半自動、自動

23、化檢驗儀器與免疫反應原理結(jié)合，加快了反應過程標記技術(shù)、單克隆技術(shù)、高智能自動化技術(shù)的最佳組合標記技術(shù)、單克隆技術(shù)、高智能自動化技術(shù)的最佳組合免疫檢驗可分為兩部分：免疫檢驗可分為兩部分：一部分為利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測免疫一部分為利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測免疫活性細胞、抗原、抗體、補體、細胞因子、活性細胞、抗原、抗體、補體、細胞因子、細胞粘附分子等免疫相關(guān)物質(zhì)；細胞粘附分子等免疫相關(guān)物質(zhì)；另一部分是利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測體另一部分是利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測體液中微量物質(zhì)如激素、酶、血漿微量蛋白、液中微量物質(zhì)如激素、酶、血漿微量蛋白、血液藥物濃度、微量元素等。血液藥物濃度、微量元素等。 臨

24、床免疫學與免疫檢驗臨床免疫學與免疫檢驗放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù) 化學發(fā)光免疫技術(shù)化學發(fā)光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù) 流式細胞免疫技術(shù)流式細胞免疫技術(shù)酶聯(lián)免疫技術(shù)酶聯(lián)免疫技術(shù) 免疫印跡技術(shù)免疫印跡技術(shù)速率散射免疫技術(shù)速率散射免疫技術(shù) 單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)免疫檢驗涉及的主要技術(shù)免疫檢驗涉及的主要技術(shù)確定診斷確定診斷分析病情分析病情調(diào)整治療方案調(diào)整治療方案判斷預后判斷預后提供有效實驗依據(jù)提供有效實驗依據(jù)臨床應用臨床應用臨床免疫檢驗常用技術(shù)臨床免疫檢驗常用技術(shù)標記免疫技術(shù)標記免疫技術(shù)u免疫技術(shù)：免疫技術(shù)：以抗原以抗原- -抗體反應原理為基礎(chǔ)，對樣抗體反應原理為基礎(chǔ)，對樣品中相應抗原或抗體

25、進行檢測。品中相應抗原或抗體進行檢測。u標記技術(shù)：標記技術(shù)：將可被探測的示蹤物質(zhì)用化學方法與將可被探測的示蹤物質(zhì)用化學方法與化合物連接?；衔镞B接。u標記免疫分析：標記免疫分析：用可微量或超微量檢測的示蹤劑用可微量或超微量檢測的示蹤劑標記抗原、抗體，檢測免疫反應結(jié)果并確定待檢標記抗原、抗體，檢測免疫反應結(jié)果并確定待檢物。物。放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù) 早期的放射免疫技術(shù)是基于競爭性結(jié)合反應原理的早期的放射免疫技術(shù)是基于競爭性結(jié)合反應原理的放射免疫分析放射免疫分析(RIA)(RIA)，稍后又發(fā)展了非競爭性結(jié)合的，稍后又發(fā)展了非競爭性結(jié)合的免疫放射分析免疫放射分析(IRMA)(IRMA)。該類技術(shù)具

26、有靈敏度高、特。該類技術(shù)具有靈敏度高、特異性強、重復性好、樣品及試劑用量少、操作簡便異性強、重復性好、樣品及試劑用量少、操作簡便且易于標準化等優(yōu)點，廣泛應用于生物醫(yī)學研究和且易于標準化等優(yōu)點，廣泛應用于生物醫(yī)學研究和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥物和腫瘤標志物的定量分析，對相關(guān)學科的發(fā)展起物和腫瘤標志物的定量分析，對相關(guān)學科的發(fā)展起到了極大地推動作用。到了極大地推動作用。 原理及分類原理及分類 放射免疫放射免疫 RIARIA以標記抗原與反以標記抗原與反應系統(tǒng)中未標記應系統(tǒng)中未標記抗原競爭結(jié)合特抗原競爭結(jié)合特異性抗體來測定異性抗體來測定待

27、檢樣品中抗原待檢樣品中抗原量。量。 免疫放射免疫放射 IRMAIRMA以過量標記抗體以過量標記抗體與抗原非競爭結(jié)與抗原非競爭結(jié)合，采用固相免合，采用固相免疫吸附載體分離疫吸附載體分離游離和結(jié)合標記游離和結(jié)合標記抗體。抗體。其它其它放射受體分析放射受體分析 RRARRA用受體測量抗原用受體測量抗原放射配體結(jié)合放射配體結(jié)合 分析分析RBARBA用標記配體研究用標記配體研究受體生物學特牲受體生物學特牲IRMAIRMA與與RIARIA比較比較化學發(fā)光免疫分析 化學發(fā)光化學發(fā)光是吸收了化學反應過程中所產(chǎn)生是吸收了化學反應過程中所產(chǎn)生的化學能使分子激發(fā)而發(fā)光。的化學能使分子激發(fā)而發(fā)光?；瘜W發(fā)光免化學發(fā)光免

28、疫分析疫分析是將化學發(fā)光與免疫反應相結(jié)合，是將化學發(fā)光與免疫反應相結(jié)合，用于檢測微量抗原或抗體的標記免疫分析用于檢測微量抗原或抗體的標記免疫分析技術(shù)，分為直接化學發(fā)光免疫分析，化學技術(shù)，分為直接化學發(fā)光免疫分析，化學發(fā)光酶免疫分析和電化學發(fā)光免疫分析。發(fā)光酶免疫分析和電化學發(fā)光免疫分析。直接化學發(fā)光免疫分析直接化學發(fā)光免疫分析u用用吖啶酯吖啶酯直接標記抗體直接標記抗體( (抗原抗原) )，與待測標本中相應，與待測標本中相應的抗原的抗原( (抗體抗體) )發(fā)生免疫反應后，形成固相包被發(fā)生免疫反應后，形成固相包被抗體抗體- -待測抗原待測抗原- -吖啶酯吖啶酯標記抗體復合物，這時只需加入標記抗體復

29、合物，這時只需加入氧化劑（氧化劑（H H2 2O O2 2）和）和NaOHNaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光需要催化劑的情況下分解、發(fā)光 。u由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時間內(nèi)所產(chǎn)由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時間內(nèi)所產(chǎn)生的光子能，這部分光的積分與待測抗原的量成正生的光子能，這部分光的積分與待測抗原的量成正比，可從比，可從標準曲線標準曲線上計算出待測抗原的含量。上計算出待測抗原的含量。直接化學發(fā)光的機理直接化學發(fā)光的機理發(fā)光發(fā)光Y YY磁微粒磁微粒被測抗原被測抗原+抗體抗體+帶丫啶酯帶丫啶酯標記物抗標記物抗體體YYYYYYYYYYY沖

30、洗后沖洗后（1 1）加入加入H H2 2O O2 2（pH10）化學發(fā)光酶免疫分析化學發(fā)光酶免疫分析 化學發(fā)光酶免疫分析（化學發(fā)光酶免疫分析（chemiluminescencechemiluminescence enzyme enzyme immunoassayimmunoassay，CLEIACLEIA）是用參與催是用參與催化某一化學發(fā)光反應的酶如化某一化學發(fā)光反應的酶如辣根過氧化物酶辣根過氧化物酶（HRPHRP）或或堿性磷酸酶堿性磷酸酶(ALP)(ALP)來標記抗原或抗體，來標記抗原或抗體，在與待測標本中相應的抗原在與待測標本中相應的抗原( (抗體抗體) )發(fā)生免疫反發(fā)生免疫反應后，形成固

31、相包被抗體應后，形成固相包被抗體- -待測抗原待測抗原- -酶標記抗酶標記抗體復合物，經(jīng)洗滌后，加入底物體復合物，經(jīng)洗滌后，加入底物( (發(fā)光劑發(fā)光劑) )，酶，酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯螅怆姳对龉軐⒐庑盘栟D(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯?，再把它們傳送至計算機數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計算出再把它們傳送至計算機數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計算出測定物的濃度。測定物的濃度。辣根過氧化物酶標記化學發(fā)光免疫分析示意圖辣根過氧化物酶標記化學發(fā)光免疫分析示意圖堿性磷酸酶標記化學發(fā)光免疫分析示意圖堿性磷酸酶標記化學發(fā)光免疫分析示意圖電化學發(fā)

32、光免疫分析電化學發(fā)光免疫分析 電化學發(fā)光免疫電化學發(fā)光免疫（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以電化學發(fā)光劑是以電化學發(fā)光劑三三聯(lián)吡啶釕聯(lián)吡啶釕標記抗體標記抗體( (抗原抗原) )，以，以三丙胺三丙胺(TPA)(TPA)為電子為電子供體，供體， 在電場中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學發(fā)在電場中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學發(fā)光反應，它包括電化學和化學發(fā)光兩個過程。光反應，它包括電化學和化學發(fā)光兩個過程。電化學發(fā)光免疫分析示意圖電化學發(fā)光免疫分析示意圖酶免疫技術(shù)酶酶免免疫疫技技術(shù)術(shù)酶免疫組化酶免疫組化酶免疫測定酶免疫測定均均 相相非均相非均相固相酶

33、免疫測定固相酶免疫測定液相酶免疫測定液相酶免疫測定組織切片或其它標本中抗原的定位組織切片或其它標本中抗原的定位 液體標本中抗原或液體標本中抗原或抗體的定性和定量抗體的定性和定量用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測定用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測定 酶標記物與相應的抗原或抗體結(jié)合后，酶標記物與相應的抗原或抗體結(jié)合后，標記酶的活性會發(fā)生改變，不用分離結(jié)合標記酶的活性會發(fā)生改變，不用分離結(jié)合和游離酶標記物，通過測定標記酶的活性和游離酶標記物，通過測定標記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。的改變，而確定抗原或抗體的含量。原理原理均相酶免疫測定均相酶免疫測定最具代表性的兩種技術(shù)最具代表性的兩

34、種技術(shù)酶增強免疫測定技術(shù)酶增強免疫測定技術(shù)EMITEMITenzyme-mutiplied immunoassay technique克隆酶供體免疫分析克隆酶供體免疫分析 CEDIACEDIAcloned enzyme donor immunoassay EMITEMIT示意圖示意圖CEDIACEDIA示意圖示意圖分類：分類：液相酶免疫測定液相酶免疫測定 固相酶免疫測定固相酶免疫測定 以聚苯乙烯等材料作為固相載體的酶聯(lián)免疫吸附試驗以聚苯乙烯等材料作為固相載體的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISAELISA） 是目前最為常用的固相酶免疫測定是目前最為常用的固相酶免疫測定與均相不同與均相不同之處之處需分離

35、游離與結(jié)合的酶標記物需分離游離與結(jié)合的酶標記物非均相酶免疫測定非均相酶免疫測定酶聯(lián)免疫吸附試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗底物顯色底物顯色定性或定量的分析定性或定量的分析原理原理包被包被反應反應加入待測抗體或加入待測抗體或抗原和酶標抗原抗原和酶標抗原或抗體或抗體洗滌洗滌使結(jié)合在固相上使結(jié)合在固相上的抗原抗體復合物的抗原抗體復合物與未結(jié)合的分離與未結(jié)合的分離1234ELISA雙抗體夾心法檢測抗原雙抗體夾心法檢測抗原方法：方法：用已知抗體包被，加入待檢血清，再加酶標抗體，加底物顯色用已知抗體包被，加入待檢血清，再加酶標抗體，加底物顯色應用：應用：二價或二價以上的較大分子抗原測定二價或二價以上的較大分子抗原測定

36、 ELISAELISA竟爭法檢測抗原竟爭法檢測抗原 方法：方法：用已知抗體包被，加入待測血清，再加酶標抗原，酶標用已知抗體包被，加入待測血清，再加酶標抗原，酶標 抗原與待檢物競爭與包被物結(jié)合。加底物顯色?？乖c待檢物競爭與包被物結(jié)合。加底物顯色。 應用：應用：用于只有一個抗原決定簇的小分子半抗原（藥物、激素等）用于只有一個抗原決定簇的小分子半抗原（藥物、激素等）ELISA間接法檢測抗體u方法方法 用已知抗原包被，加入待測血清，再加酶標的抗人用已知抗原包被，加入待測血清，再加酶標的抗人IgGIgG（抗抗體或二抗）加底物顯色。（抗抗體或二抗）加底物顯色。u優(yōu)點優(yōu)點 一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應

37、的抗體。一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。u應用應用 常用于常用于HCVHCV抗體、抗體、HIVHIV抗體和梅毒螺旋體抗體等的測定。抗體和梅毒螺旋體抗體等的測定。ELISA捕獲法檢測抗體原理：原理：抗人抗人IgMIgM鏈抗體包被鏈抗體包被捕獲待測標本中捕獲待測標本中IgMIgM類抗體類抗體加入特異性抗原和酶標記加入特異性抗原和酶標記特異性抗原的抗體特異性抗原的抗體 底物顯色底物顯色 熒光免疫技術(shù)基本原理基本原理 將抗原抗體反應與熒光物質(zhì)發(fā)光分析相結(jié)合，將抗原抗體反應與熒光物質(zhì)發(fā)光分析相結(jié)合，用熒光檢測儀檢測抗原抗體復合物中特異性熒光用熒光檢測儀檢測抗原抗體復合物中特異性熒光強度，對液體標

38、本中微量或超微量物質(zhì)進行定量強度，對液體標本中微量或超微量物質(zhì)進行定量測定。測定。熒光抗體技術(shù)熒光抗體技術(shù)熒光免疫測定熒光免疫測定均相熒光免疫測定均相熒光免疫測定（homogeneous fluorescence homogeneous fluorescence immunoassayimmunoassay） 非均相熒光免疫測定非均相熒光免疫測定（heterogeneous heterogeneous fluorescence immunoassayfluorescence immunoassay）熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)的類型熒光免疫技術(shù)的類型非均相熒光免疫測定：非均相熒光免疫測

39、定： 時間分辨熒光免疫測定、熒光酶免疫測定時間分辨熒光免疫測定、熒光酶免疫測定均相熒光免疫測定：均相熒光免疫測定： 熒光偏振免疫測定熒光偏振免疫測定直接熒光抗體染色法示意圖直接熒光抗體染色法示意圖 熒光素標記的特異熒光素標記的特異性抗體直接與相應性抗體直接與相應抗原反應?？乖磻?。直接熒光抗體染色法直接熒光抗體染色法特異性抗體與相應特異性抗體與相應抗原反應，熒光素抗原反應，熒光素標記的抗抗體再與標記的抗抗體再與第一抗體結(jié)合。第一抗體結(jié)合。 間接熒光抗體染色法示意圖間接熒光抗體染色法示意圖 間接熒光抗體染色法間接熒光抗體染色法時間分辨熒光免疫分析技術(shù)時間分辨熒光免疫分析技術(shù)（TRFIATRFIA

40、）是用鑭系）是用鑭系金屬離子作為示蹤物標記蛋白質(zhì)、多肽、激素、金屬離子作為示蹤物標記蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體、核酸探針或生物活性細胞抗體、核酸探針或生物活性細胞, ,與其螯合劑、與其螯合劑、增強液增強液( (有一部分不需要有一部分不需要) )在待反應體系在待反應體系( (如如: :抗原抗原抗體免疫反應、生物素親和素反應、核酸探針雜抗體免疫反應、生物素親和素反應、核酸探針雜交反應、靶細胞與效應細胞的殺傷反應等交反應、靶細胞與效應細胞的殺傷反應等) )發(fā)生反發(fā)生反應后應后, ,用時間分辨熒光儀測定最后產(chǎn)物中的熒光用時間分辨熒光儀測定最后產(chǎn)物中的熒光強度強度, ,根據(jù)熒光強度和相對熒光強度比值根據(jù)熒

41、光強度和相對熒光強度比值, ,推測反推測反應體系中分析物的濃度應體系中分析物的濃度, ,達到定量分析的目的達到定量分析的目的時間分辨熒光免疫分析技術(shù)自發(fā)熒光壽命短自發(fā)熒光壽命短: :1ns1ns10ns10ns鑭系元素壽命鑭系元素壽命長長: :10s10s1000s1000s短壽命熒光完全衰變后短壽命熒光完全衰變后再測定鑭系元素特異熒光再測定鑭系元素特異熒光 基本原理基本原理時間分辨檢測原理示意圖時間分辨檢測原理示意圖時間分辨時間分辨時間分辨熒光免疫分析技術(shù)時間分辨熒光免疫分析技術(shù)u雙抗體夾心法雙抗體夾心法固相抗體和固相抗體和Eu3+Eu3+標記抗體與待檢抗原結(jié)合，形成固相抗體標記抗體與待檢抗

42、原結(jié)合，形成固相抗體- -待檢抗原待檢抗原-Eu3+-Eu3+標記抗體復合物，酸性增強液下，標記抗體復合物，酸性增強液下，Eu3+Eu3+解解離，離，340nm340nm激發(fā)光下發(fā)射激發(fā)光下發(fā)射613nm613nm熒光。熒光。u固相抗原競爭法固相抗原競爭法待檢抗原和固相抗原競爭結(jié)合定量的待檢抗原和固相抗原競爭結(jié)合定量的Eu3+Eu3+標記抗體，溫育標記抗體，溫育洗滌后在固相中加入熒光增強液洗滌后在固相中加入熒光增強液, ,測定熒光強度，熒光強度測定熒光強度，熒光強度與待檢抗原含量成反比。與待檢抗原含量成反比。u固相抗體競爭法固相抗體競爭法 待檢抗原和待檢抗原和Eu3+Eu3+標記抗原與固相抗體

43、競爭結(jié)合標記抗原與固相抗體競爭結(jié)合, ,溫育洗滌溫育洗滌后在固相中加入熒光增強液后在固相中加入熒光增強液, ,測定熒光強度，熒光強度與待測定熒光強度，熒光強度與待檢抗原含量成反比。檢抗原含量成反比。時間分辨熒光免疫技術(shù)測定方法光線通過偏振濾光片后，光線通過偏振濾光片后，形成一個方向的平面光稱形成一個方向的平面光稱為偏振光為偏振光。偏振熒光偏振熒光( (綠光綠光,525nm,525nm550nm)550nm)偏振光偏振光( (藍光藍光,485nm),485nm)熒光物質(zhì)熒光物質(zhì)基本原理基本原理熒光偏振免疫技術(shù)測定熒光偏振免疫技術(shù)測定 抗原抗體競爭反應抗原抗體競爭反應AgAgF F分子小，轉(zhuǎn)動速度

44、快，偏振熒光弱分子小，轉(zhuǎn)動速度快，偏振熒光弱 AgAgF F-Ab-Ab分子大，轉(zhuǎn)動速度慢，偏振熒光強分子大，轉(zhuǎn)動速度慢，偏振熒光強 若待檢抗原多，則若待檢抗原多，則AgAgF F-Ab-Ab少，少，AgAgF F多，偏振熒光弱多，偏振熒光弱待檢抗原含量與偏振熒光強度成反比待檢抗原含量與偏振熒光強度成反比熒光偏振免疫技術(shù)測定原理示意圖熒光偏振免疫技術(shù)測定原理示意圖 基本原理基本原理熒光偏振免疫技術(shù)測定熒光偏振免疫技術(shù)測定基本原理基本原理熒光酶免疫測定熒光物質(zhì)產(chǎn)生示意圖熒光酶免疫測定熒光物質(zhì)產(chǎn)生示意圖 堿性磷酸酶標記抗堿性磷酸酶標記抗體或抗原，固相載體或抗原，固相載體包被抗原或抗體，體包被抗原或

45、抗體，酶分解酶分解4-MUP4-MUP，脫磷，脫磷酸根基團形成酸根基團形成4-MU4-MU，360nm360nm激發(fā)光照射，激發(fā)光照射，發(fā)出發(fā)出450nm450nm熒光。熒光。熒光酶免疫技術(shù)測定熒光酶免疫技術(shù)測定雙抗體夾心法雙抗體夾心法固相抗體和酶標記抗體與待固相抗體和酶標記抗體與待檢原反應，形成固相抗體檢原反應，形成固相抗體- -抗原抗原- -酶標抗體復合物，加酶標抗體復合物，加入底物進行酶促發(fā)光反應，入底物進行酶促發(fā)光反應，發(fā)光量與待檢抗原含量成正發(fā)光量與待檢抗原含量成正比。比。固相抗原競爭法固相抗原競爭法熒光酶免疫測定（雙抗體夾心法）示意圖熒光酶免疫測定（雙抗體夾心法）示意圖 熒光酶免疫

46、技術(shù)測定方法熒光酶免疫技術(shù)測定方法|時間分辨熒光免疫測定：時間分辨熒光免疫測定： 蛋白質(zhì)、激素、藥物、腫瘤標記物、病原體抗原蛋白質(zhì)、激素、藥物、腫瘤標記物、病原體抗原/ /抗抗體等體等|熒光偏振免疫測定：熒光偏振免疫測定： 藥物、維生素、激素、常規(guī)生化項目等藥物、維生素、激素、常規(guī)生化項目等|熒光酶免疫測定：熒光酶免疫測定： 病毒抗體、細菌和毒素抗原、激素、腫瘤標志物等病毒抗體、細菌和毒素抗原、激素、腫瘤標志物等熒光免疫測定的應用熒光免疫測定的應用 流式細胞術(shù)流式細胞術(shù)(flow cytometry(flow cytometry, FCM), FCM)是以流式細胞儀是以流式細胞儀為檢測手段的一

47、項能快速、精確的對單個細胞理化為檢測手段的一項能快速、精確的對單個細胞理化特性進行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。特性進行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。 流式細胞儀流式細胞儀是測量染色細胞標記物熒光強度的細胞分是測量染色細胞標記物熒光強度的細胞分析儀，是在單個細胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的析儀，是在單個細胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的對細胞的物理或化學性質(zhì)（如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、對細胞的物理或化學性質(zhì)（如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNADNA、RNARNA、蛋白質(zhì)、抗原等）進行快速測量并可分類收集、蛋白質(zhì)、抗原等）進行快速測量并可分類收集的高技術(shù)。的高技術(shù)。流式細胞術(shù)流式細胞術(shù)最大的特點是能在保持細胞及細胞器或

48、微流式細胞術(shù)最大的特點是能在保持細胞及細胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號對細胞進行定量分協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號對細胞進行定量分析或純化分選。析或純化分選。 細胞不被破壞，測量快速、大量、準確、靈敏、定量細胞不被破壞，測量快速、大量、準確、靈敏、定量流式細胞術(shù)的特點流式細胞儀檢測范圍細胞大小細胞粒度細胞表面面積核漿比例DNA含量與細胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量細胞結(jié)構(gòu)細胞結(jié)構(gòu)特異性抗原（細胞表面/胞漿/核）細胞內(nèi)細胞因子細胞活性酶活性激素結(jié)合位點細胞受體細胞功能 流式細胞術(shù)目前已廣泛地被應用于

49、免疫學基礎(chǔ)研究和流式細胞術(shù)目前已廣泛地被應用于免疫學基礎(chǔ)研究和逐步進入臨床應用各方面，用流式細胞儀對細胞表面逐步進入臨床應用各方面，用流式細胞儀對細胞表面的抗原成分進行標記分析，可區(qū)別多種細胞的特性，的抗原成分進行標記分析，可區(qū)別多種細胞的特性，為細胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。為細胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。 在免疫學檢驗中的應用 uT T淋巴細胞及其亞群分析淋巴細胞及其亞群分析Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4-CD8+T)uB淋巴細胞及其亞群分析淋巴細胞及其亞群分析B1(CD19+CD5+):產(chǎn)生產(chǎn)生IgM型自身抗體型自身抗體, 參與免疫調(diào)節(jié)、參與免

50、疫調(diào)節(jié)、與自身免疫病的發(fā)生有關(guān)與自身免疫病的發(fā)生有關(guān)B2(CD19+CD5-):受外來抗原刺激受外來抗原刺激, 產(chǎn)生高親和性特異性產(chǎn)生高親和性特異性抗體抗體uNK細胞分析細胞分析NK(CD3-CD16+CD56+)細胞表面的抗原成分分析細胞表面的抗原成分分析淋巴細胞亞群與疾病淋巴細胞亞群與疾病疾疾 病病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫性疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡類風濕性關(guān)節(jié)炎自身免疫性溶血性貧血重癥肌無力免疫缺陷病愛滋病病毒感染傳染性單核細胞增多癥慢性活動性肝炎活動性肝硬化腫瘤消化道癌, 肝癌, 肺癌再生障礙性貧血粒細胞減少癥在免疫學檢驗中的應用在免疫學檢驗中的應用淋巴細胞功能分析淋巴細胞

51、功能分析u細胞介導細胞毒性試驗細胞介導細胞毒性試驗( (死細胞與活細胞比例死細胞與活細胞比例) )u細胞內(nèi)細胞因子測定細胞內(nèi)細胞因子測定淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型u對淋巴瘤和白血病進行多色免疫分型對淋巴瘤和白血病進行多色免疫分型u用于選擇化療方案、判斷預后及檢出微小殘留病變用于選擇化療方案、判斷預后及檢出微小殘留病變腫瘤耐藥基因分析腫瘤耐藥基因分析uMDR(+)MDR(+)表示對化療藥物耐藥表示對化療藥物耐藥在免疫學檢驗中的應用 AIDS病檢測中的應用病檢測中的應用u CD4+ThCD4+Th細胞、細胞、CD4+/CD8+CD4+/CD8+比例比例自身免疫病相關(guān)自

52、身免疫病相關(guān)HLAHLA抗原分析抗原分析u HLA-B27HLA-B27可出現(xiàn)在可出現(xiàn)在58%58%97%97%的強直性脊椎炎的強直性脊椎炎(As) (As) 患者患者移植免疫中的應用移植免疫中的應用u FCM作為一個強大的技術(shù)平臺，其在移植免疫分析中的應用也作為一個強大的技術(shù)平臺，其在移植免疫分析中的應用也越來越廣泛。目前移植免疫中的越來越廣泛。目前移植免疫中的FCM應用主要包括流式細胞術(shù)應用主要包括流式細胞術(shù)的交叉配型（的交叉配型（Flow cytometry cross-matching, FCXM）和群）和群體反應性抗體（體反應性抗體（Panel reactive antibody,

53、PRA）檢測。）檢測。在免疫學檢驗中的應用 基因芯片技術(shù) 基因芯片基因芯片(Gene chip)(Gene chip) 又稱又稱DNADNA芯片（芯片（DNA DNA ChipChip）或生物芯片）或生物芯片(Biological chip(Biological chip），它），它是指將大量探針分子固定于支持物上，然后是指將大量探針分子固定于支持物上，然后與標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號與標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號的強度及分布進而對靶分子的序列和數(shù)量進的強度及分布進而對靶分子的序列和數(shù)量進行分析。行分析?；蛐酒瑱z測原理及簡要過程u用生物素標記并經(jīng)擴增的靶序列或樣品然后再與芯

54、片用生物素標記并經(jīng)擴增的靶序列或樣品然后再與芯片上的大量探針進行雜交上的大量探針進行雜交u用鏈霉親和素用鏈霉親和素(streptavidin(streptavidin) )偶聯(lián)的熒光素（常用的偶聯(lián)的熒光素（常用的熒光素還有熒光素還有l(wèi)assaminelassamine 和和phycoerythrinphycoerythrin）進行顯色）進行顯色u圖象的采集用落射熒光顯微鏡圖象的采集用落射熒光顯微鏡(epifluorescence(epifluorescence microscope)microscope)、激光共聚焦顯微鏡或其它熒光顯微裝、激光共聚焦顯微鏡或其它熒光顯微裝置對片基掃描置對片基掃

55、描u由計算機收集熒光信號，并對每個點的熒光強度數(shù)字由計算機收集熒光信號，并對每個點的熒光強度數(shù)字化后進行分析?；筮M行分析。基因芯片技術(shù)的應用u利用基因芯片進行雜交測序利用基因芯片進行雜交測序u基因芯片技術(shù)與生物傳感器的結(jié)合應用基因芯片技術(shù)與生物傳感器的結(jié)合應用u基因芯片技術(shù)在分子免疫學中的應用基因芯片技術(shù)在分子免疫學中的應用u基因芯片技術(shù)在基因表達譜測定中的應用基因芯片技術(shù)在基因表達譜測定中的應用u基因芯片技術(shù)在突變檢測及多態(tài)性分析方面的應用基因芯片技術(shù)在突變檢測及多態(tài)性分析方面的應用u基因芯片技術(shù)在基因組文庫作圖中的應用基因芯片技術(shù)在基因組文庫作圖中的應用自身免疫性疾病及其免疫檢測自身免疫

56、性疾病及其免疫檢測自身免疫性疾病自身免疫性疾病(autoimmune disease(autoimmune disease，AID)AID) 因自身免疫反應導致組織器官損傷或功能障因自身免疫反應導致組織器官損傷或功能障礙所致疾病。礙所致疾病。自身免疫性疾病分類自身免疫性疾病分類系統(tǒng)性自身免疫病系統(tǒng)性自身免疫病 (systemic autoimmune (systemic autoimmune disease)disease)或器官非特異性或全身性自身免疫病或器官非特異性或全身性自身免疫病器官特異性自身免疫病器官特異性自身免疫病 (organ-specific (organ-specific a

57、utoimmune disease)autoimmune disease)或局限性自身免疫病或局限性自身免疫病按疾病累及的系統(tǒng)區(qū)分按疾病累及的系統(tǒng)區(qū)分按器官特異性分為兩類按器官特異性分為兩類 結(jié)締組織疾病結(jié)締組織疾病 神經(jīng)肌肉疾病神經(jīng)肌肉疾病 內(nèi)分泌性疾病內(nèi)分泌性疾病 消化系統(tǒng)疾病消化系統(tǒng)疾病 泌尿系統(tǒng)疾病泌尿系統(tǒng)疾病 血液系統(tǒng)疾病血液系統(tǒng)疾病生殖系統(tǒng)疾病生殖系統(tǒng)疾病 皮膚組織疾病皮膚組織疾病 循環(huán)系統(tǒng)疾病循環(huán)系統(tǒng)疾病器官特異性器官特異性 非器官特異性非器官特異性橋本甲狀腺炎橋本甲狀腺炎 擴張性心肌炎擴張性心肌炎 自身免疫性溶血性貧血自身免疫性溶血性貧血 系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡原發(fā)性粘液

58、水腫原發(fā)性粘液水腫 惡性貧血惡性貧血 特發(fā)性血小板減少性紫癜特發(fā)性血小板減少性紫癜 干燥綜合征干燥綜合征甲狀腺機能亢進甲狀腺機能亢進 自身免疫性胃炎自身免疫性胃炎 特發(fā)性粒細胞減少癥特發(fā)性粒細胞減少癥 類風濕關(guān)節(jié)炎類風濕關(guān)節(jié)炎AddisinoAddisino病病 自身免疫性肝炎自身免疫性肝炎 絕經(jīng)過早（少數(shù)病例）絕經(jīng)過早（少數(shù)病例） 硬皮病硬皮病1 1型糖尿病型糖尿病 原發(fā)性膽汁性肝硬化原發(fā)性膽汁性肝硬化 男性不育（少數(shù)病例）男性不育（少數(shù)病例） 多發(fā)性肌炎多發(fā)性肌炎/ /皮肌皮肌炎炎重癥肌無力重癥肌無力 原發(fā)性硬化性膽管炎原發(fā)性硬化性膽管炎 交感性眼炎交感性眼炎 混合性結(jié)締組織病混合性結(jié)締組

59、織病多發(fā)性硬化癥多發(fā)性硬化癥 潰瘍性結(jié)腸炎潰瘍性結(jié)腸炎 晶狀體源性葡萄膜炎晶狀體源性葡萄膜炎 系統(tǒng)性血管炎系統(tǒng)性血管炎脫髓鞘疾病脫髓鞘疾病 克羅恩病克羅恩病 抗磷脂綜合征抗磷脂綜合征 尋常型天皰瘡尋常型天皰瘡 自身免疫性腎小球腎炎自身免疫性腎小球腎炎 肺腎出血綜合征肺腎出血綜合征自身免疫病的自身免疫病的“病譜病譜”1. 1. 多數(shù)病因不明多數(shù)病因不明2. 2. 患者以女性居多，并隨年齡增加發(fā)病率有所增加患者以女性居多，并隨年齡增加發(fā)病率有所增加3. 3. 有遺傳傾向有遺傳傾向4. 4. 患者血清中有多種自身抗體或自身反應性致敏淋巴細胞存在患者血清中有多種自身抗體或自身反應性致敏淋巴細胞存在5

60、5、疾病有重疊現(xiàn)象，即一個病人可同時患一種以上自身免疫病、疾病有重疊現(xiàn)象，即一個病人可同時患一種以上自身免疫病6. 6. 病程一般較長，多遷延為慢性病程一般較長，多遷延為慢性7. 7. 病損局部可發(fā)現(xiàn)淋巴細胞、漿細胞、中性粒細胞等浸潤病損局部可發(fā)現(xiàn)淋巴細胞、漿細胞、中性粒細胞等浸潤8. 8. 免疫抑制劑治療可取得一定療效免疫抑制劑治療可取得一定療效自身免疫性疾病的共同特征自身免疫性疾病的共同特征 常見的自身免疫性疾病常見的自身免疫性疾病 由于病理性的自身免疫應答可發(fā)生在體內(nèi)任何組織器由于病理性的自身免疫應答可發(fā)生在體內(nèi)任何組織器官，臨床上常以病理損害的機制來區(qū)分各類自身免疫性疾官，臨床上常以病