臨床免疫學(xué)及檢驗(yàn)李梨平.

1、臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn)臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn)湖南省兒童醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)研究所湖南省兒童醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)研究所李梨平李梨平概概 論論免疫學(xué)免疫學(xué)(Immunology)(Immunology)是研究免疫系統(tǒng)的是研究免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能，并通過對其在免疫應(yīng)答過結(jié)構(gòu)與功能，并通過對其在免疫應(yīng)答過程中所產(chǎn)生的免疫保護(hù)與免疫損傷機(jī)制程中所產(chǎn)生的免疫保護(hù)與免疫損傷機(jī)制的研究，探討有效的免疫措施，實(shí)現(xiàn)以的研究，探討有效的免疫措施，實(shí)現(xiàn)以防病、治病為目的的一門現(xiàn)代醫(yī)學(xué)學(xué)科防病、治病為目的的一門現(xiàn)代醫(yī)學(xué)學(xué)科免疫學(xué)經(jīng)驗(yàn)時期（免疫學(xué)經(jīng)驗(yàn)時期（111117 17 世紀(jì)）世紀(jì)）u中國醫(yī)生發(fā)明了用人痘苗預(yù)防天花中國醫(yī)生發(fā)明了用人痘苗預(yù)防天花

2、 經(jīng)典免疫學(xué)時期（經(jīng)典免疫學(xué)時期（18 18 世紀(jì)末到世紀(jì)末到 20 20 世紀(jì)中葉）世紀(jì)中葉） 抗感抗感染免疫染免疫u牛痘苗、減毒疫苗、吞噬細(xì)胞、抗體、補(bǔ)體、原始體液免牛痘苗、減毒疫苗、吞噬細(xì)胞、抗體、補(bǔ)體、原始體液免疫和細(xì)胞免疫學(xué)說疫和細(xì)胞免疫學(xué)說 近代免疫學(xué)時期（近代免疫學(xué)時期（ 20 20 世紀(jì)中葉）世紀(jì)中葉）u特異性細(xì)胞的免疫功能、天然和獲得性免疫耐受現(xiàn)象、抗特異性細(xì)胞的免疫功能、天然和獲得性免疫耐受現(xiàn)象、抗體生成克隆學(xué)說、細(xì)胞克隆選擇學(xué)說（體生成克隆學(xué)說、細(xì)胞克隆選擇學(xué)說（clonalclonal selection selection）現(xiàn)代免疫學(xué)時期現(xiàn)代免疫學(xué)時期器官、細(xì)胞和分子

3、水平器官、細(xì)胞和分子水平u雞法氏囊及哺乳動物胸腺的免疫功能、雞法氏囊及哺乳動物胸腺的免疫功能、TBTB淋巴細(xì)胞、巨噬淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、細(xì)胞因子、免疫學(xué)技術(shù)發(fā)展（單克隆抗體標(biāo)記技術(shù)、細(xì)胞、細(xì)胞因子、免疫學(xué)技術(shù)發(fā)展（單克隆抗體標(biāo)記技術(shù)、免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)、分子雜交技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、細(xì)胞融合技免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)、分子雜交技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、細(xì)胞融合技術(shù)等）。術(shù)等）。免疫學(xué)的形成與發(fā)展免疫學(xué)的形成與發(fā)展 免疫免疫（immunity）是機(jī)體識別和排斥抗是機(jī)體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能。原性異物的一種生理功能。 免疫系統(tǒng)與機(jī)體的其他系統(tǒng)相互配合，免疫系統(tǒng)與機(jī)體的其他系統(tǒng)相互配合，相互制約，共同維持機(jī)體在生命過

4、程中相互制約，共同維持機(jī)體在生命過程中的生理平衡。的生理平衡。免疫學(xué)簡介免疫學(xué)簡介 宿主體內(nèi)的免疫系統(tǒng)，能識別并清除從外環(huán)境中侵入的病宿主體內(nèi)的免疫系統(tǒng)，能識別并清除從外環(huán)境中侵入的病 原生物及其產(chǎn)生的毒素、內(nèi)環(huán)境中因基因突變產(chǎn)生的腫瘤原生物及其產(chǎn)生的毒素、內(nèi)環(huán)境中因基因突變產(chǎn)生的腫瘤 細(xì)胞、自身衰老殘損的組織細(xì)胞或自身變性抗原，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞、自身衰老殘損的組織細(xì)胞或自身變性抗原，實(shí)現(xiàn) 免疫防御免疫防御(immunological defence) 免疫自穩(wěn)免疫自穩(wěn)(immunological homeostasis)免疫監(jiān)視免疫監(jiān)視(immunological surveillance)免疫系統(tǒng)

5、的三大生理功能免疫系統(tǒng)的三大生理功能免疫學(xué)概念與免疫應(yīng)答免疫學(xué)概念與免疫應(yīng)答免疫防御（免疫防御（immunological defenceimmunological defence） 指機(jī)體排斥外源性異物的能力。指機(jī)體排斥外源性異物的能力。免疫自穩(wěn)（免疫自穩(wěn)（immunological homeostasisimmunological homeostasis） 指機(jī)體識別和清除自身衰變殘損的組指機(jī)體識別和清除自身衰變殘損的組 織細(xì)胞織細(xì)胞 的能力，以維持正常內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。的能力，以維持正常內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。免疫監(jiān)視（免疫監(jiān)視（immunological surveillanceimmunologica

6、l surveillance） 指機(jī)體殺傷和清除異常突變細(xì)胞的能力，以監(jiān)指機(jī)體殺傷和清除異常突變細(xì)胞的能力，以監(jiān) 視和抑制惡性腫瘤在體內(nèi)生長。視和抑制惡性腫瘤在體內(nèi)生長。免疫系統(tǒng)的三大生理功能免疫系統(tǒng)的三大生理功能 免疫應(yīng)答反應(yīng)免疫應(yīng)答反應(yīng)（immune response） 是指機(jī)體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激發(fā)生一系列反應(yīng)，并是指機(jī)體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激發(fā)生一系列反應(yīng)，并以排出或分解該抗原為目的的反應(yīng)過程。以排出或分解該抗原為目的的反應(yīng)過程。 免疫應(yīng)答的過程主要分為：免疫應(yīng)答的過程主要分為：識別階段（識別階段（recognition phaserecognition phase）活化階段（活化階段（

7、activation phaseactivation phase）效應(yīng)階段（效應(yīng)階段（response phaseresponse phase）抗原識別處理抗原識別處理傳遞信息傳遞信息免疫細(xì)胞活化增殖產(chǎn)生免疫細(xì)胞活化增殖產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞、分子效應(yīng)細(xì)胞、分子執(zhí)行效應(yīng)功能執(zhí)行效應(yīng)功能免疫應(yīng)答效應(yīng)大多為生理性，是機(jī)體對免疫應(yīng)答效應(yīng)大多為生理性，是機(jī)體對 外來抗原或自身變性抗原的清除效應(yīng)外來抗原或自身變性抗原的清除效應(yīng) 免疫應(yīng)答反應(yīng)過強(qiáng)時，可致機(jī)體組織或器免疫應(yīng)答反應(yīng)過強(qiáng)時，可致機(jī)體組織或器 官發(fā)生病理損傷，出現(xiàn)臨床疾病官發(fā)生病理損傷，出現(xiàn)臨床疾病功能名稱功能名稱生理功能生理功能 病理表現(xiàn)病理表現(xiàn)免疫防御

8、免疫防御 清除病原微生物及其它清除病原微生物及其它抗原性異物抗原性異物超敏反應(yīng)（強(qiáng)）超敏反應(yīng)（強(qiáng)）免疫缺陷?。ㄈ酰┟庖呷毕莶。ㄈ酰┟庖咦苑€(wěn)免疫自穩(wěn) 清除損傷或衰老細(xì)胞清除損傷或衰老細(xì)胞自身免疫性疾病自身免疫性疾病免疫監(jiān)視免疫監(jiān)視 清除突變或畸變細(xì)胞，清除突變或畸變細(xì)胞，防止腫瘤發(fā)生、殺傷病防止腫瘤發(fā)生、殺傷病毒感染細(xì)胞毒感染細(xì)胞腫瘤或病毒持續(xù)性腫瘤或病毒持續(xù)性感染感染免疫系統(tǒng)功能的生理和病理表現(xiàn)免疫系統(tǒng)功能的生理和病理表現(xiàn) 免疫組織與器官免疫組織與器官免疫系統(tǒng)免疫系統(tǒng)(immune system)由免疫器官、由免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子構(gòu)成。淋巴組織及免疫細(xì)胞和免疫分子構(gòu)成。淋巴組織及免疫細(xì)

9、胞分布于機(jī)體全身，執(zhí)行免疫防免疫細(xì)胞分布于機(jī)體全身，執(zhí)行免疫防衛(wèi)功能，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境正常的生理功衛(wèi)功能，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境正常的生理功能及動態(tài)平衡。免疫器官按功能不同，能及動態(tài)平衡。免疫器官按功能不同，分為中樞免疫器官和外周免疫器官。分為中樞免疫器官和外周免疫器官。 中樞免疫器官是免疫細(xì)胞產(chǎn)生、分化和中樞免疫器官是免疫細(xì)胞產(chǎn)生、分化和成熟的場所成熟的場所外周免疫器官是免疫應(yīng)答的場所外周免疫器官是免疫應(yīng)答的場所單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞經(jīng)血液循環(huán)及淋巴循單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞經(jīng)血液循環(huán)及淋巴循環(huán)，進(jìn)出于外周淋巴組織及淋巴器官，形環(huán)，進(jìn)出于外周淋巴組織及淋巴器官，形成機(jī)體免疫系統(tǒng)的免疫網(wǎng)絡(luò)成機(jī)體免疫系統(tǒng)的免疫網(wǎng)絡(luò)

10、 通過免疫網(wǎng)絡(luò)，免疫細(xì)胞能及時到達(dá)機(jī)通過免疫網(wǎng)絡(luò)，免疫細(xì)胞能及時到達(dá)機(jī)體各臟器及皮膚粘膜的病原微生物入侵體各臟器及皮膚粘膜的病原微生物入侵部位，又能將機(jī)體各部位的抗原成分經(jīng)部位，又能將機(jī)體各部位的抗原成分經(jīng)抗原遞呈細(xì)胞攜帶至相應(yīng)淋巴組織及淋抗原遞呈細(xì)胞攜帶至相應(yīng)淋巴組織及淋巴器官，活化巴器官，活化T T淋巴細(xì)胞與淋巴細(xì)胞與B B淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，執(zhí)行特異性免疫應(yīng)答功能。執(zhí)行特異性免疫應(yīng)答功能。 （一）中樞淋巴器官：（一）中樞淋巴器官：骨髓骨髓: : （1 1）是造血干細(xì)胞生成、分化發(fā)育的場所；）是造血干細(xì)胞生成、分化發(fā)育的場所； （2 2）是功能性）是功能性B B細(xì)胞分化成熟的唯一場所；細(xì)胞

11、分化成熟的唯一場所； （3 3）提供各種免疫細(xì)胞的前體細(xì)胞；）提供各種免疫細(xì)胞的前體細(xì)胞； T T細(xì)胞分細(xì)胞分 化成熟的場所化成熟的場所胸腺胸腺: : T T細(xì)胞分化成熟的場所細(xì)胞分化成熟的場所（二）外周淋巴器官：（二）外周淋巴器官：淋巴結(jié)、脾臟、粘膜相關(guān)淋巴結(jié)、脾臟、粘膜相關(guān) 淋巴組織（扁桃體、闌尾等）淋巴組織（扁桃體、闌尾等）（三）（三） 淋巴細(xì)胞再循環(huán)與歸巢淋巴細(xì)胞再循環(huán)與歸巢 淋巴細(xì)胞在全身器官組織及體液中的循環(huán)，可擴(kuò)大淋巴細(xì)胞在全身器官組織及體液中的循環(huán)，可擴(kuò)大與病原異物抗原接觸的機(jī)遇，并將被抗原激活的淋巴細(xì)與病原異物抗原接觸的機(jī)遇，并將被抗原激活的淋巴細(xì)胞引流入局部淋巴組織及器官，

12、在胞引流入局部淋巴組織及器官，在T T細(xì)胞、細(xì)胞、B B細(xì)胞、抗原細(xì)胞、抗原遞呈細(xì)胞遞呈細(xì)胞(antigen presenting cells, APC)間發(fā)揮協(xié)同的免間發(fā)揮協(xié)同的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生的效應(yīng)淋巴細(xì)胞定向地遷移于病原異物部疫應(yīng)答，產(chǎn)生的效應(yīng)淋巴細(xì)胞定向地遷移于病原異物部位，發(fā)揮免疫效應(yīng)功能。位，發(fā)揮免疫效應(yīng)功能。 淋巴細(xì)胞再循環(huán)與歸巢淋巴細(xì)胞再循環(huán)與歸巢外周免疫器官及外周淋巴組織既是淋巴細(xì)胞外周免疫器官及外周淋巴組織既是淋巴細(xì)胞再循環(huán)的起點(diǎn)和中途站，也是淋巴細(xì)胞歸巢再循環(huán)的起點(diǎn)和中途站，也是淋巴細(xì)胞歸巢的終點(diǎn)。淋巴細(xì)胞在發(fā)揮免疫效應(yīng)的同時，的終點(diǎn)。淋巴細(xì)胞在發(fā)揮免疫效應(yīng)的同時，被歸巢受

13、體引導(dǎo)回該類細(xì)胞的原定居處，進(jìn)被歸巢受體引導(dǎo)回該類細(xì)胞的原定居處，進(jìn)行修整、增殖和發(fā)育，以提高該類淋巴細(xì)胞行修整、增殖和發(fā)育，以提高該類淋巴細(xì)胞的數(shù)量和功能，這是保證淋巴細(xì)胞功能健全的數(shù)量和功能，這是保證淋巴細(xì)胞功能健全的重要環(huán)節(jié)。的重要環(huán)節(jié)。 免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞凡參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)凡參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞統(tǒng)稱為免疫細(xì)胞，按免疫細(xì)的細(xì)胞統(tǒng)稱為免疫細(xì)胞，按免疫細(xì)胞在體內(nèi)的作用不同分為三大類。胞在體內(nèi)的作用不同分為三大類。 T細(xì)胞細(xì)胞 （Thymus-dependent cell）淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B細(xì)胞細(xì)胞 （Bone marrow dependent cell） NK細(xì)胞（

14、細(xì)胞（Natural Killer cell）能增殖分化并產(chǎn)生免疫效應(yīng)能增殖分化并產(chǎn)生免疫效應(yīng)淋巴細(xì)胞分類淋巴細(xì)胞分類 吞噬細(xì)胞（吞噬細(xì)胞（phagocyte） 樹突狀細(xì)胞（樹突狀細(xì)胞（Dendritic Cell, DC）免疫輔助細(xì)胞免疫輔助細(xì)胞參與輔助淋巴細(xì)胞的活化參與輔助淋巴細(xì)胞的活化 中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞 嗜酸性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞免疫應(yīng)答細(xì)胞免疫應(yīng)答細(xì)胞 嗜堿性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞 肥大細(xì)胞肥大細(xì)胞 參與免疫應(yīng)答中的某一環(huán)節(jié)參與免疫應(yīng)答中的某一環(huán)節(jié) T T細(xì)胞細(xì)胞B B細(xì)胞細(xì)胞NKNK細(xì)胞細(xì)胞 主要功能主要功能抗原識別抗原識別抗原識別抗原識別細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性細(xì)胞免疫細(xì)胞免疫體液免疫體液免

15、疫免疫監(jiān)視免疫監(jiān)視免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié) 分布分布外周血液外周血液70%70%75%75%10%10%15%15%10%10%淋巴結(jié)淋巴結(jié)70%70%75%75%20%20%25%25%很少很少脾臟脾臟30%30%50%50%50%50%65%65%5%5% 不同淋巴細(xì)胞及功能簡介不同淋巴細(xì)胞及功能簡介 免疫分子免疫分子 免疫分子是由一些免疫活性細(xì)胞免疫分子是由一些免疫活性細(xì)胞或相關(guān)細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)及小分子多或相關(guān)細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)及小分子多肽物質(zhì)組成，它們參與機(jī)體的免疫反肽物質(zhì)組成，它們參與機(jī)體的免疫反應(yīng)或免疫調(diào)節(jié)。應(yīng)或免疫調(diào)節(jié)。 免疫球蛋白（免疫球蛋白（Immunoglobulin

16、, Ig） 補(bǔ)體系統(tǒng)補(bǔ)體系統(tǒng) （Complement, C） 細(xì)胞因子細(xì)胞因子 （Cytokine） 細(xì)胞粘附分子（細(xì)胞粘附分子（Cell Adhesion Molecules, CAM） 白細(xì)胞分化抗原（白細(xì)胞分化抗原（Cluster Differentiation antigen, CD）主要的免疫分子主要的免疫分子 臨床免疫學(xué)臨床免疫學(xué)臨床免疫學(xué)臨床免疫學(xué)(clinical immunology)是將免疫是將免疫學(xué)基礎(chǔ)理論、臨床醫(yī)學(xué)疾病與免疫學(xué)技術(shù)學(xué)基礎(chǔ)理論、臨床醫(yī)學(xué)疾病與免疫學(xué)技術(shù)相結(jié)合，用于研究疾病的免疫病理機(jī)制、相結(jié)合，用于研究疾病的免疫病理機(jī)制、診斷與鑒別診斷、評價治療效果和判斷

17、愈診斷與鑒別診斷、評價治療效果和判斷愈后的多個分支學(xué)科的總稱。后的多個分支學(xué)科的總稱。 臨床免疫學(xué)發(fā)展的主要方向是將基礎(chǔ)免疫臨床免疫學(xué)發(fā)展的主要方向是將基礎(chǔ)免疫學(xué)研究所取得的理論成果應(yīng)用于臨床疾病學(xué)研究所取得的理論成果應(yīng)用于臨床疾病的診治，探討新的免疫現(xiàn)象與臨床疾病的的診治，探討新的免疫現(xiàn)象與臨床疾病的關(guān)系，進(jìn)一步推動臨床免疫學(xué)與各相關(guān)學(xué)關(guān)系，進(jìn)一步推動臨床免疫學(xué)與各相關(guān)學(xué)科的發(fā)展，為人類的生命健康作出重要貢科的發(fā)展，為人類的生命健康作出重要貢獻(xiàn)。獻(xiàn)。免疫病理學(xué)免疫病理學(xué)(immunopathology)是溝通基礎(chǔ)免疫研究與是溝通基礎(chǔ)免疫研究與臨床醫(yī)學(xué)研究的橋梁。臨床醫(yī)學(xué)研究的橋梁。通過研究免

18、疫細(xì)胞、炎性細(xì)胞、免疫分子，了解當(dāng)這些通過研究免疫細(xì)胞、炎性細(xì)胞、免疫分子，了解當(dāng)這些細(xì)胞或分子的功能失衡或缺陷與導(dǎo)致自身免疫性疾病、細(xì)胞或分子的功能失衡或缺陷與導(dǎo)致自身免疫性疾病、免疫缺陷病、免疫增殖病之間的相互關(guān)系。免疫缺陷病、免疫增殖病之間的相互關(guān)系。探討免疫相關(guān)性疾病患者疾病發(fā)生發(fā)展過程中的免疫病探討免疫相關(guān)性疾病患者疾病發(fā)生發(fā)展過程中的免疫病理改變，對治療與預(yù)后評價有著重要的臨床意義。理改變，對治療與預(yù)后評價有著重要的臨床意義。 免疫病理與免疫性疾病免疫病理與免疫性疾病 移植免疫學(xué)移植免疫學(xué) (transplantation immunology)：移植免疫學(xué)是通過組織、：移植免疫學(xué)

19、是通過組織、細(xì)胞或器官移植，以替代機(jī)體喪失功能細(xì)胞或器官移植，以替代機(jī)體喪失功能的組織器官或細(xì)胞，移植后保證移植物的組織器官或細(xì)胞，移植后保證移植物存活，不發(fā)生排斥反應(yīng)的一門科學(xué)，是存活，不發(fā)生排斥反應(yīng)的一門科學(xué)，是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中臨床治療的一項(xiàng)重要手段現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中臨床治療的一項(xiàng)重要手段 移植免疫移植免疫腫瘤免疫學(xué)腫瘤免疫學(xué)(tumor immunology)(tumor immunology)是研究是研究腫瘤相關(guān)抗原和腫瘤的免疫診斷、腫瘤腫瘤相關(guān)抗原和腫瘤的免疫診斷、腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體的免疫狀況、機(jī)體對的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體的免疫狀況、機(jī)體對腫瘤的免疫應(yīng)答和抗腫瘤免疫效應(yīng)機(jī)制腫瘤的免疫應(yīng)答和抗腫瘤免疫效

20、應(yīng)機(jī)制的一門分支學(xué)科的一門分支學(xué)科 腫瘤免疫腫瘤免疫 感染免疫學(xué)（感染免疫學(xué)（infection immunologyinfection immunology）是研究病原）是研究病原生物與宿主相互關(guān)系的學(xué)科，是傳統(tǒng)免疫學(xué)的基礎(chǔ)生物與宿主相互關(guān)系的學(xué)科，是傳統(tǒng)免疫學(xué)的基礎(chǔ)與核心。與核心。 掌握免疫系統(tǒng)在殺傷被病原體感染的宿主細(xì)胞時對掌握免疫系統(tǒng)在殺傷被病原體感染的宿主細(xì)胞時對宿主的損傷程度，在免疫應(yīng)答過程中激活或抑制的宿主的損傷程度，在免疫應(yīng)答過程中激活或抑制的效應(yīng)細(xì)胞當(dāng)病原體被清除后所發(fā)揮的作用，固有性效應(yīng)細(xì)胞當(dāng)病原體被清除后所發(fā)揮的作用，固有性免疫與獲得性免疫間的相互調(diào)節(jié)關(guān)系，生物疫苗在免疫

21、與獲得性免疫間的相互調(diào)節(jié)關(guān)系，生物疫苗在免疫防御中的特點(diǎn)均是當(dāng)前感染免疫研究的重點(diǎn)。免疫防御中的特點(diǎn)均是當(dāng)前感染免疫研究的重點(diǎn)。 感染免疫感染免疫臨床免疫學(xué)與免疫檢驗(yàn)臨床免疫學(xué)與免疫檢驗(yàn) 免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展免疫學(xué)檢驗(yàn)免疫學(xué)檢驗(yàn)（laboratory immunology）是研究是研究免疫學(xué)技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的重要學(xué)科。免疫學(xué)技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的重要學(xué)科。免疫學(xué)檢驗(yàn)的發(fā)展是隨著各種免疫物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)免疫學(xué)檢驗(yàn)的發(fā)展是隨著各種免疫物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)密切相關(guān)，在免疫學(xué)理論與生物學(xué)技術(shù)的長期密切相關(guān)，在免疫學(xué)理論與生物學(xué)技術(shù)的長期發(fā)展過程中，許多經(jīng)典技術(shù)被加以革新與放大發(fā)展過程中，許多經(jīng)典技

22、術(shù)被加以革新與放大而派生出更多新技術(shù)與新方法，這些方法和技而派生出更多新技術(shù)與新方法，這些方法和技術(shù)在醫(yī)學(xué)研究與臨床診斷的運(yùn)用中發(fā)揮了不可術(shù)在醫(yī)學(xué)研究與臨床診斷的運(yùn)用中發(fā)揮了不可估量的作用。估量的作用。 發(fā)展進(jìn)程的主要階段發(fā)展進(jìn)程的主要階段自然的肉眼觀察的抗原抗體反應(yīng)（沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)）自然的肉眼觀察的抗原抗體反應(yīng)（沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)）加速的肉眼觀察的抗原抗體反應(yīng)（電泳技術(shù)、分離技術(shù)）加速的肉眼觀察的抗原抗體反應(yīng)（電泳技術(shù)、分離技術(shù)）標(biāo)記性免疫技術(shù)提高抗原抗體反應(yīng)的特異性、敏感性標(biāo)記性免疫技術(shù)提高抗原抗體反應(yīng)的特異性、敏感性半自動、自動化檢驗(yàn)儀器與免疫反應(yīng)原理結(jié)合，加快了反應(yīng)過程半自動、自動

23、化檢驗(yàn)儀器與免疫反應(yīng)原理結(jié)合，加快了反應(yīng)過程標(biāo)記技術(shù)、單克隆技術(shù)、高智能自動化技術(shù)的最佳組合標(biāo)記技術(shù)、單克隆技術(shù)、高智能自動化技術(shù)的最佳組合免疫檢驗(yàn)可分為兩部分：免疫檢驗(yàn)可分為兩部分：一部分為利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測免疫一部分為利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測免疫活性細(xì)胞、抗原、抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子、活性細(xì)胞、抗原、抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子等免疫相關(guān)物質(zhì)；細(xì)胞粘附分子等免疫相關(guān)物質(zhì)；另一部分是利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測體另一部分是利用免疫檢測原理與技術(shù)檢測體液中微量物質(zhì)如激素、酶、血漿微量蛋白、液中微量物質(zhì)如激素、酶、血漿微量蛋白、血液藥物濃度、微量元素等。血液藥物濃度、微量元素等。 臨

24、床免疫學(xué)與免疫檢驗(yàn)臨床免疫學(xué)與免疫檢驗(yàn)放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù) 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù) 流式細(xì)胞免疫技術(shù)流式細(xì)胞免疫技術(shù)酶聯(lián)免疫技術(shù)酶聯(lián)免疫技術(shù) 免疫印跡技術(shù)免疫印跡技術(shù)速率散射免疫技術(shù)速率散射免疫技術(shù) 單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)免疫檢驗(yàn)涉及的主要技術(shù)免疫檢驗(yàn)涉及的主要技術(shù)確定診斷確定診斷分析病情分析病情調(diào)整治療方案調(diào)整治療方案判斷預(yù)后判斷預(yù)后提供有效實(shí)驗(yàn)依據(jù)提供有效實(shí)驗(yàn)依據(jù)臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用臨床免疫檢驗(yàn)常用技術(shù)臨床免疫檢驗(yàn)常用技術(shù)標(biāo)記免疫技術(shù)標(biāo)記免疫技術(shù)u免疫技術(shù)：免疫技術(shù)：以抗原以抗原- -抗體反應(yīng)原理為基礎(chǔ)，對樣抗體反應(yīng)原理為基礎(chǔ)，對樣品中相應(yīng)抗原或抗體

25、進(jìn)行檢測。品中相應(yīng)抗原或抗體進(jìn)行檢測。u標(biāo)記技術(shù)：標(biāo)記技術(shù)：將可被探測的示蹤物質(zhì)用化學(xué)方法與將可被探測的示蹤物質(zhì)用化學(xué)方法與化合物連接?；衔镞B接。u標(biāo)記免疫分析：標(biāo)記免疫分析：用可微量或超微量檢測的示蹤劑用可微量或超微量檢測的示蹤劑標(biāo)記抗原、抗體，檢測免疫反應(yīng)結(jié)果并確定待檢標(biāo)記抗原、抗體，檢測免疫反應(yīng)結(jié)果并確定待檢物。物。放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù) 早期的放射免疫技術(shù)是基于競爭性結(jié)合反應(yīng)原理的早期的放射免疫技術(shù)是基于競爭性結(jié)合反應(yīng)原理的放射免疫分析放射免疫分析(RIA)(RIA)，稍后又發(fā)展了非競爭性結(jié)合的，稍后又發(fā)展了非競爭性結(jié)合的免疫放射分析免疫放射分析(IRMA)(IRMA)。該類技術(shù)具

26、有靈敏度高、特。該類技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、樣品及試劑用量少、操作簡便異性強(qiáng)、重復(fù)性好、樣品及試劑用量少、操作簡便且易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和且易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥臨床診斷領(lǐng)域中各種微量蛋白質(zhì)、激素、小分子藥物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析，對相關(guān)學(xué)科的發(fā)展起物和腫瘤標(biāo)志物的定量分析，對相關(guān)學(xué)科的發(fā)展起到了極大地推動作用。到了極大地推動作用。 原理及分類原理及分類 放射免疫放射免疫 RIARIA以標(biāo)記抗原與反以標(biāo)記抗原與反應(yīng)系統(tǒng)中未標(biāo)記應(yīng)系統(tǒng)中未標(biāo)記抗原競爭結(jié)合特抗原競爭結(jié)合特異性抗體來測定異性抗體來測定待

27、檢樣品中抗原待檢樣品中抗原量。量。 免疫放射免疫放射 IRMAIRMA以過量標(biāo)記抗體以過量標(biāo)記抗體與抗原非競爭結(jié)與抗原非競爭結(jié)合，采用固相免合，采用固相免疫吸附載體分離疫吸附載體分離游離和結(jié)合標(biāo)記游離和結(jié)合標(biāo)記抗體?？贵w。其它其它放射受體分析放射受體分析 RRARRA用受體測量抗原用受體測量抗原放射配體結(jié)合放射配體結(jié)合 分析分析RBARBA用標(biāo)記配體研究用標(biāo)記配體研究受體生物學(xué)特牲受體生物學(xué)特牲IRMAIRMA與與RIARIA比較比較化學(xué)發(fā)光免疫分析 化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光是吸收了化學(xué)反應(yīng)過程中所產(chǎn)生是吸收了化學(xué)反應(yīng)過程中所產(chǎn)生的化學(xué)能使分子激發(fā)而發(fā)光。的化學(xué)能使分子激發(fā)而發(fā)光。化學(xué)發(fā)光免化學(xué)發(fā)光免

28、疫分析疫分析是將化學(xué)發(fā)光與免疫反應(yīng)相結(jié)合，是將化學(xué)發(fā)光與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測微量抗原或抗體的標(biāo)記免疫分析用于檢測微量抗原或抗體的標(biāo)記免疫分析技術(shù)，分為直接化學(xué)發(fā)光免疫分析，化學(xué)技術(shù)，分為直接化學(xué)發(fā)光免疫分析，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析和電化學(xué)發(fā)光免疫分析。發(fā)光酶免疫分析和電化學(xué)發(fā)光免疫分析。直接化學(xué)發(fā)光免疫分析直接化學(xué)發(fā)光免疫分析u用用吖啶酯吖啶酯直接標(biāo)記抗體直接標(biāo)記抗體( (抗原抗原) )，與待測標(biāo)本中相應(yīng)，與待測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原的抗原( (抗體抗體) )發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體抗體- -待測抗原待測抗原- -吖啶酯吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時只需加入標(biāo)記抗體復(fù)

29、合物，這時只需加入氧化劑（氧化劑（H H2 2O O2 2）和）和NaOHNaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光需要催化劑的情況下分解、發(fā)光 。u由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時間內(nèi)所產(chǎn)由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時間內(nèi)所產(chǎn)生的光子能，這部分光的積分與待測抗原的量成正生的光子能，這部分光的積分與待測抗原的量成正比，可從比，可從標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出待測抗原的含量。上計(jì)算出待測抗原的含量。直接化學(xué)發(fā)光的機(jī)理直接化學(xué)發(fā)光的機(jī)理發(fā)光發(fā)光Y YY磁微粒磁微粒被測抗原被測抗原+抗體抗體+帶丫啶酯帶丫啶酯標(biāo)記物抗標(biāo)記物抗體體YYYYYYYYYYY沖

30、洗后沖洗后（1 1）加入加入H H2 2O O2 2（pH10）化學(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（chemiluminescencechemiluminescence enzyme enzyme immunoassayimmunoassay，CLEIACLEIA）是用參與催是用參與催化某一化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶如化某一化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶如辣根過氧化物酶辣根過氧化物酶（HRPHRP）或或堿性磷酸酶堿性磷酸酶(ALP)(ALP)來標(biāo)記抗原或抗體，來標(biāo)記抗原或抗體，在與待測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原在與待測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原( (抗體抗體) )發(fā)生免疫反發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固

31、相包被抗體應(yīng)后，形成固相包被抗體- -待測抗原待測抗原- -酶標(biāo)記抗酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后，加入底物體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后，加入底物( (發(fā)光劑發(fā)光劑) )，酶，酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯螅怆姳对龉軐⒐庑盘栟D(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯?，再把它們傳送至?jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算出再把它們傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算出測定物的濃度。測定物的濃度。辣根過氧化物酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖辣根過氧化物酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖堿性磷酸酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖堿性磷酸酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖電化學(xué)發(fā)

32、光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析 電化學(xué)發(fā)光免疫電化學(xué)發(fā)光免疫（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以電化學(xué)發(fā)光劑是以電化學(xué)發(fā)光劑三三聯(lián)吡啶釕聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體標(biāo)記抗體( (抗原抗原) )，以，以三丙胺三丙胺(TPA)(TPA)為電子為電子供體，供體， 在電場中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學(xué)發(fā)在電場中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，它包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個過程。光反應(yīng)，它包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個過程。電化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖電化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖酶免疫技術(shù)酶酶免免疫疫技技術(shù)術(shù)酶免疫組化酶免疫組化酶免疫測定酶免疫測定均均 相相非均相非均相固相酶

33、免疫測定固相酶免疫測定液相酶免疫測定液相酶免疫測定組織切片或其它標(biāo)本中抗原的定位組織切片或其它標(biāo)本中抗原的定位 液體標(biāo)本中抗原或液體標(biāo)本中抗原或抗體的定性和定量抗體的定性和定量用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測定用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測定 酶標(biāo)記物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，酶標(biāo)記物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會發(fā)生改變，不用分離結(jié)合標(biāo)記酶的活性會發(fā)生改變，不用分離結(jié)合和游離酶標(biāo)記物，通過測定標(biāo)記酶的活性和游離酶標(biāo)記物，通過測定標(biāo)記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。的改變，而確定抗原或抗體的含量。原理原理均相酶免疫測定均相酶免疫測定最具代表性的兩種技術(shù)最具代表性的兩

34、種技術(shù)酶增強(qiáng)免疫測定技術(shù)酶增強(qiáng)免疫測定技術(shù)EMITEMITenzyme-mutiplied immunoassay technique克隆酶供體免疫分析克隆酶供體免疫分析 CEDIACEDIAcloned enzyme donor immunoassay EMITEMIT示意圖示意圖CEDIACEDIA示意圖示意圖分類：分類：液相酶免疫測定液相酶免疫測定 固相酶免疫測定固相酶免疫測定 以聚苯乙烯等材料作為固相載體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)以聚苯乙烯等材料作為固相載體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISAELISA） 是目前最為常用的固相酶免疫測定是目前最為常用的固相酶免疫測定與均相不同與均相不同之處之處需分離

35、游離與結(jié)合的酶標(biāo)記物需分離游離與結(jié)合的酶標(biāo)記物非均相酶免疫測定非均相酶免疫測定酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)底物顯色底物顯色定性或定量的分析定性或定量的分析原理原理包被包被反應(yīng)反應(yīng)加入待測抗體或加入待測抗體或抗原和酶標(biāo)抗原抗原和酶標(biāo)抗原或抗體或抗體洗滌洗滌使結(jié)合在固相上使結(jié)合在固相上的抗原抗體復(fù)合物的抗原抗體復(fù)合物與未結(jié)合的分離與未結(jié)合的分離1234ELISA雙抗體夾心法檢測抗原雙抗體夾心法檢測抗原方法：方法：用已知抗體包被，加入待檢血清，再加酶標(biāo)抗體，加底物顯色用已知抗體包被，加入待檢血清，再加酶標(biāo)抗體，加底物顯色應(yīng)用：應(yīng)用：二價或二價以上的較大分子抗原測定二價或二價以上的較大分子抗原測定

36、 ELISAELISA竟?fàn)幏z測抗原竟?fàn)幏z測抗原 方法：方法：用已知抗體包被，加入待測血清，再加酶標(biāo)抗原，酶標(biāo)用已知抗體包被，加入待測血清，再加酶標(biāo)抗原，酶標(biāo) 抗原與待檢物競爭與包被物結(jié)合。加底物顯色?？乖c待檢物競爭與包被物結(jié)合。加底物顯色。 應(yīng)用：應(yīng)用：用于只有一個抗原決定簇的小分子半抗原（藥物、激素等）用于只有一個抗原決定簇的小分子半抗原（藥物、激素等）ELISA間接法檢測抗體u方法方法 用已知抗原包被，加入待測血清，再加酶標(biāo)的抗人用已知抗原包被，加入待測血清，再加酶標(biāo)的抗人IgGIgG（抗抗體或二抗）加底物顯色。（抗抗體或二抗）加底物顯色。u優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 一種酶標(biāo)抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)

37、的抗體。一種酶標(biāo)抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。u應(yīng)用應(yīng)用 常用于常用于HCVHCV抗體、抗體、HIVHIV抗體和梅毒螺旋體抗體等的測定。抗體和梅毒螺旋體抗體等的測定。ELISA捕獲法檢測抗體原理：原理：抗人抗人IgMIgM鏈抗體包被鏈抗體包被捕獲待測標(biāo)本中捕獲待測標(biāo)本中IgMIgM類抗體類抗體加入特異性抗原和酶標(biāo)記加入特異性抗原和酶標(biāo)記特異性抗原的抗體特異性抗原的抗體 底物顯色底物顯色 熒光免疫技術(shù)基本原理基本原理 將抗原抗體反應(yīng)與熒光物質(zhì)發(fā)光分析相結(jié)合，將抗原抗體反應(yīng)與熒光物質(zhì)發(fā)光分析相結(jié)合，用熒光檢測儀檢測抗原抗體復(fù)合物中特異性熒光用熒光檢測儀檢測抗原抗體復(fù)合物中特異性熒光強(qiáng)度，對液體標(biāo)

38、本中微量或超微量物質(zhì)進(jìn)行定量強(qiáng)度，對液體標(biāo)本中微量或超微量物質(zhì)進(jìn)行定量測定。測定。熒光抗體技術(shù)熒光抗體技術(shù)熒光免疫測定熒光免疫測定均相熒光免疫測定均相熒光免疫測定（homogeneous fluorescence homogeneous fluorescence immunoassayimmunoassay） 非均相熒光免疫測定非均相熒光免疫測定（heterogeneous heterogeneous fluorescence immunoassayfluorescence immunoassay）熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)的類型熒光免疫技術(shù)的類型非均相熒光免疫測定：非均相熒光免疫測

39、定： 時間分辨熒光免疫測定、熒光酶免疫測定時間分辨熒光免疫測定、熒光酶免疫測定均相熒光免疫測定：均相熒光免疫測定： 熒光偏振免疫測定熒光偏振免疫測定直接熒光抗體染色法示意圖直接熒光抗體染色法示意圖 熒光素標(biāo)記的特異熒光素標(biāo)記的特異性抗體直接與相應(yīng)性抗體直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)?？乖磻?yīng)。直接熒光抗體染色法直接熒光抗體染色法特異性抗體與相應(yīng)特異性抗體與相應(yīng)抗原反應(yīng)，熒光素抗原反應(yīng)，熒光素標(biāo)記的抗抗體再與標(biāo)記的抗抗體再與第一抗體結(jié)合。第一抗體結(jié)合。 間接熒光抗體染色法示意圖間接熒光抗體染色法示意圖 間接熒光抗體染色法間接熒光抗體染色法時間分辨熒光免疫分析技術(shù)時間分辨熒光免疫分析技術(shù)（TRFIATRFIA

40、）是用鑭系）是用鑭系金屬離子作為示蹤物標(biāo)記蛋白質(zhì)、多肽、激素、金屬離子作為示蹤物標(biāo)記蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體、核酸探針或生物活性細(xì)胞抗體、核酸探針或生物活性細(xì)胞, ,與其螯合劑、與其螯合劑、增強(qiáng)液增強(qiáng)液( (有一部分不需要有一部分不需要) )在待反應(yīng)體系在待反應(yīng)體系( (如如: :抗原抗原抗體免疫反應(yīng)、生物素親和素反應(yīng)、核酸探針雜抗體免疫反應(yīng)、生物素親和素反應(yīng)、核酸探針雜交反應(yīng)、靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞的殺傷反應(yīng)等交反應(yīng)、靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞的殺傷反應(yīng)等) )發(fā)生反發(fā)生反應(yīng)后應(yīng)后, ,用時間分辨熒光儀測定最后產(chǎn)物中的熒光用時間分辨熒光儀測定最后產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度強(qiáng)度, ,根據(jù)熒光強(qiáng)度和相對熒光強(qiáng)度比值根據(jù)熒

41、光強(qiáng)度和相對熒光強(qiáng)度比值, ,推測反推測反應(yīng)體系中分析物的濃度應(yīng)體系中分析物的濃度, ,達(dá)到定量分析的目的達(dá)到定量分析的目的時間分辨熒光免疫分析技術(shù)自發(fā)熒光壽命短自發(fā)熒光壽命短: :1ns1ns10ns10ns鑭系元素壽命鑭系元素壽命長長: :10s10s1000s1000s短壽命熒光完全衰變后短壽命熒光完全衰變后再測定鑭系元素特異熒光再測定鑭系元素特異熒光 基本原理基本原理時間分辨檢測原理示意圖時間分辨檢測原理示意圖時間分辨時間分辨時間分辨熒光免疫分析技術(shù)時間分辨熒光免疫分析技術(shù)u雙抗體夾心法雙抗體夾心法固相抗體和固相抗體和Eu3+Eu3+標(biāo)記抗體與待檢抗原結(jié)合，形成固相抗體標(biāo)記抗體與待檢抗

42、原結(jié)合，形成固相抗體- -待檢抗原待檢抗原-Eu3+-Eu3+標(biāo)記抗體復(fù)合物，酸性增強(qiáng)液下，標(biāo)記抗體復(fù)合物，酸性增強(qiáng)液下，Eu3+Eu3+解解離，離，340nm340nm激發(fā)光下發(fā)射激發(fā)光下發(fā)射613nm613nm熒光。熒光。u固相抗原競爭法固相抗原競爭法待檢抗原和固相抗原競爭結(jié)合定量的待檢抗原和固相抗原競爭結(jié)合定量的Eu3+Eu3+標(biāo)記抗體，溫育標(biāo)記抗體，溫育洗滌后在固相中加入熒光增強(qiáng)液洗滌后在固相中加入熒光增強(qiáng)液, ,測定熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度測定熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成反比。與待檢抗原含量成反比。u固相抗體競爭法固相抗體競爭法 待檢抗原和待檢抗原和Eu3+Eu3+標(biāo)記抗原與固相抗體

43、競爭結(jié)合標(biāo)記抗原與固相抗體競爭結(jié)合, ,溫育洗滌溫育洗滌后在固相中加入熒光增強(qiáng)液后在固相中加入熒光增強(qiáng)液, ,測定熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與待測定熒光強(qiáng)度，熒光強(qiáng)度與待檢抗原含量成反比。檢抗原含量成反比。時間分辨熒光免疫技術(shù)測定方法光線通過偏振濾光片后，光線通過偏振濾光片后，形成一個方向的平面光稱形成一個方向的平面光稱為偏振光為偏振光。偏振熒光偏振熒光( (綠光綠光,525nm,525nm550nm)550nm)偏振光偏振光( (藍(lán)光藍(lán)光,485nm),485nm)熒光物質(zhì)熒光物質(zhì)基本原理基本原理熒光偏振免疫技術(shù)測定熒光偏振免疫技術(shù)測定 抗原抗體競爭反應(yīng)抗原抗體競爭反應(yīng)AgAgF F分子小，轉(zhuǎn)動速度

44、快，偏振熒光弱分子小，轉(zhuǎn)動速度快，偏振熒光弱 AgAgF F-Ab-Ab分子大，轉(zhuǎn)動速度慢，偏振熒光強(qiáng)分子大，轉(zhuǎn)動速度慢，偏振熒光強(qiáng) 若待檢抗原多，則若待檢抗原多，則AgAgF F-Ab-Ab少，少，AgAgF F多，偏振熒光弱多，偏振熒光弱待檢抗原含量與偏振熒光強(qiáng)度成反比待檢抗原含量與偏振熒光強(qiáng)度成反比熒光偏振免疫技術(shù)測定原理示意圖熒光偏振免疫技術(shù)測定原理示意圖 基本原理基本原理熒光偏振免疫技術(shù)測定熒光偏振免疫技術(shù)測定基本原理基本原理熒光酶免疫測定熒光物質(zhì)產(chǎn)生示意圖熒光酶免疫測定熒光物質(zhì)產(chǎn)生示意圖 堿性磷酸酶標(biāo)記抗堿性磷酸酶標(biāo)記抗體或抗原，固相載體或抗原，固相載體包被抗原或抗體，體包被抗原或

45、抗體，酶分解酶分解4-MUP4-MUP，脫磷，脫磷酸根基團(tuán)形成酸根基團(tuán)形成4-MU4-MU，360nm360nm激發(fā)光照射，激發(fā)光照射，發(fā)出發(fā)出450nm450nm熒光。熒光。熒光酶免疫技術(shù)測定熒光酶免疫技術(shù)測定雙抗體夾心法雙抗體夾心法固相抗體和酶標(biāo)記抗體與待固相抗體和酶標(biāo)記抗體與待檢原反應(yīng)，形成固相抗體檢原反應(yīng)，形成固相抗體- -抗原抗原- -酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加入底物進(jìn)行酶促發(fā)光反應(yīng)，入底物進(jìn)行酶促發(fā)光反應(yīng)，發(fā)光量與待檢抗原含量成正發(fā)光量與待檢抗原含量成正比。比。固相抗原競爭法固相抗原競爭法熒光酶免疫測定（雙抗體夾心法）示意圖熒光酶免疫測定（雙抗體夾心法）示意圖 熒光酶免疫

46、技術(shù)測定方法熒光酶免疫技術(shù)測定方法|時間分辨熒光免疫測定：時間分辨熒光免疫測定： 蛋白質(zhì)、激素、藥物、腫瘤標(biāo)記物、病原體抗原蛋白質(zhì)、激素、藥物、腫瘤標(biāo)記物、病原體抗原/ /抗抗體等體等|熒光偏振免疫測定：熒光偏振免疫測定： 藥物、維生素、激素、常規(guī)生化項(xiàng)目等藥物、維生素、激素、常規(guī)生化項(xiàng)目等|熒光酶免疫測定：熒光酶免疫測定： 病毒抗體、細(xì)菌和毒素抗原、激素、腫瘤標(biāo)志物等病毒抗體、細(xì)菌和毒素抗原、激素、腫瘤標(biāo)志物等熒光免疫測定的應(yīng)用熒光免疫測定的應(yīng)用 流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry(flow cytometry, FCM), FCM)是以流式細(xì)胞儀是以流式細(xì)胞儀為檢測手段的一

47、項(xiàng)能快速、精確的對單個細(xì)胞理化為檢測手段的一項(xiàng)能快速、精確的對單個細(xì)胞理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。 流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀是測量染色細(xì)胞標(biāo)記物熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分是測量染色細(xì)胞標(biāo)記物熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分析儀，是在單個細(xì)胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的析儀，是在單個細(xì)胞分析和分選基礎(chǔ)上發(fā)展起來的對細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)（如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、對細(xì)胞的物理或化學(xué)性質(zhì)（如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNADNA、RNARNA、蛋白質(zhì)、抗原等）進(jìn)行快速測量并可分類收集、蛋白質(zhì)、抗原等）進(jìn)行快速測量并可分類收集的高技術(shù)。的高技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)最大的特點(diǎn)是能在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或

48、微流式細(xì)胞術(shù)最大的特點(diǎn)是能在保持細(xì)胞及細(xì)胞器或微粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的粒的結(jié)構(gòu)及功能不被破壞的狀態(tài)下，通過熒光探針的協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號對細(xì)胞進(jìn)行定量分協(xié)助，從分子水平上獲取多種信號對細(xì)胞進(jìn)行定量分析或純化分選。析或純化分選。 細(xì)胞不被破壞，測量快速、大量、準(zhǔn)確、靈敏、定量細(xì)胞不被破壞，測量快速、大量、準(zhǔn)確、靈敏、定量流式細(xì)胞術(shù)的特點(diǎn)流式細(xì)胞儀檢測范圍細(xì)胞大小細(xì)胞粒度細(xì)胞表面面積核漿比例DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞結(jié)構(gòu)特異性抗原（細(xì)胞表面/胞漿/核）細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子細(xì)胞活性酶活性激素結(jié)合位點(diǎn)細(xì)胞受體細(xì)胞功能 流式細(xì)胞術(shù)目前已廣泛地被應(yīng)用于

49、免疫學(xué)基礎(chǔ)研究和流式細(xì)胞術(shù)目前已廣泛地被應(yīng)用于免疫學(xué)基礎(chǔ)研究和逐步進(jìn)入臨床應(yīng)用各方面，用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞表面逐步進(jìn)入臨床應(yīng)用各方面，用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞表面的抗原成分進(jìn)行標(biāo)記分析，可區(qū)別多種細(xì)胞的特性，的抗原成分進(jìn)行標(biāo)記分析，可區(qū)別多種細(xì)胞的特性，為細(xì)胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。為細(xì)胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。 在免疫學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用 uT T淋巴細(xì)胞及其亞群分析淋巴細(xì)胞及其亞群分析Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4-CD8+T)uB淋巴細(xì)胞及其亞群分析淋巴細(xì)胞及其亞群分析B1(CD19+CD5+):產(chǎn)生產(chǎn)生IgM型自身抗體型自身抗體, 參與免疫調(diào)節(jié)、參與免

50、疫調(diào)節(jié)、與自身免疫病的發(fā)生有關(guān)與自身免疫病的發(fā)生有關(guān)B2(CD19+CD5-):受外來抗原刺激受外來抗原刺激, 產(chǎn)生高親和性特異性產(chǎn)生高親和性特異性抗體抗體uNK細(xì)胞分析細(xì)胞分析NK(CD3-CD16+CD56+)細(xì)胞表面的抗原成分分析細(xì)胞表面的抗原成分分析淋巴細(xì)胞亞群與疾病淋巴細(xì)胞亞群與疾病疾疾 病病CD3CD4CD8CD4/CD8NK自身免疫性疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎自身免疫性溶血性貧血重癥肌無力免疫缺陷病愛滋病病毒感染傳染性單核細(xì)胞增多癥慢性活動性肝炎活動性肝硬化腫瘤消化道癌, 肝癌, 肺癌再生障礙性貧血粒細(xì)胞減少癥在免疫學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用淋巴細(xì)胞功能分析淋巴細(xì)胞

51、功能分析u細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性試驗(yàn)細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性試驗(yàn)( (死細(xì)胞與活細(xì)胞比例死細(xì)胞與活細(xì)胞比例) )u細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測定細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子測定淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型淋巴造血系統(tǒng)及白血病免疫分型u對淋巴瘤和白血病進(jìn)行多色免疫分型對淋巴瘤和白血病進(jìn)行多色免疫分型u用于選擇化療方案、判斷預(yù)后及檢出微小殘留病變用于選擇化療方案、判斷預(yù)后及檢出微小殘留病變腫瘤耐藥基因分析腫瘤耐藥基因分析uMDR(+)MDR(+)表示對化療藥物耐藥表示對化療藥物耐藥在免疫學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用 AIDS病檢測中的應(yīng)用病檢測中的應(yīng)用u CD4+ThCD4+Th細(xì)胞、細(xì)胞、CD4+/CD8+CD4+/CD8+比例比例自身免疫病相關(guān)自

52、身免疫病相關(guān)HLAHLA抗原分析抗原分析u HLA-B27HLA-B27可出現(xiàn)在可出現(xiàn)在58%58%97%97%的強(qiáng)直性脊椎炎的強(qiáng)直性脊椎炎(As) (As) 患者患者移植免疫中的應(yīng)用移植免疫中的應(yīng)用u FCM作為一個強(qiáng)大的技術(shù)平臺，其在移植免疫分析中的應(yīng)用也作為一個強(qiáng)大的技術(shù)平臺，其在移植免疫分析中的應(yīng)用也越來越廣泛。目前移植免疫中的越來越廣泛。目前移植免疫中的FCM應(yīng)用主要包括流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用主要包括流式細(xì)胞術(shù)的交叉配型（的交叉配型（Flow cytometry cross-matching, FCXM）和群）和群體反應(yīng)性抗體（體反應(yīng)性抗體（Panel reactive antibody,

53、PRA）檢測。）檢測。在免疫學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用 基因芯片技術(shù) 基因芯片基因芯片(Gene chip)(Gene chip) 又稱又稱DNADNA芯片（芯片（DNA DNA ChipChip）或生物芯片）或生物芯片(Biological chip(Biological chip），它），它是指將大量探針分子固定于支持物上，然后是指將大量探針分子固定于支持物上，然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過檢測雜交信號與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過檢測雜交信號的強(qiáng)度及分布進(jìn)而對靶分子的序列和數(shù)量進(jìn)的強(qiáng)度及分布進(jìn)而對靶分子的序列和數(shù)量進(jìn)行分析。行分析。基因芯片檢測原理及簡要過程u用生物素標(biāo)記并經(jīng)擴(kuò)增的靶序列或樣品然后再與芯

54、片用生物素標(biāo)記并經(jīng)擴(kuò)增的靶序列或樣品然后再與芯片上的大量探針進(jìn)行雜交上的大量探針進(jìn)行雜交u用鏈霉親和素用鏈霉親和素(streptavidin(streptavidin) )偶聯(lián)的熒光素（常用的偶聯(lián)的熒光素（常用的熒光素還有熒光素還有l(wèi)assaminelassamine 和和phycoerythrinphycoerythrin）進(jìn)行顯色）進(jìn)行顯色u圖象的采集用落射熒光顯微鏡圖象的采集用落射熒光顯微鏡(epifluorescence(epifluorescence microscope)microscope)、激光共聚焦顯微鏡或其它熒光顯微裝、激光共聚焦顯微鏡或其它熒光顯微裝置對片基掃描置對片基掃

55、描u由計(jì)算機(jī)收集熒光信號，并對每個點(diǎn)的熒光強(qiáng)度數(shù)字由計(jì)算機(jī)收集熒光信號，并對每個點(diǎn)的熒光強(qiáng)度數(shù)字化后進(jìn)行分析?；筮M(jìn)行分析?；蛐酒夹g(shù)的應(yīng)用u利用基因芯片進(jìn)行雜交測序利用基因芯片進(jìn)行雜交測序u基因芯片技術(shù)與生物傳感器的結(jié)合應(yīng)用基因芯片技術(shù)與生物傳感器的結(jié)合應(yīng)用u基因芯片技術(shù)在分子免疫學(xué)中的應(yīng)用基因芯片技術(shù)在分子免疫學(xué)中的應(yīng)用u基因芯片技術(shù)在基因表達(dá)譜測定中的應(yīng)用基因芯片技術(shù)在基因表達(dá)譜測定中的應(yīng)用u基因芯片技術(shù)在突變檢測及多態(tài)性分析方面的應(yīng)用基因芯片技術(shù)在突變檢測及多態(tài)性分析方面的應(yīng)用u基因芯片技術(shù)在基因組文庫作圖中的應(yīng)用基因芯片技術(shù)在基因組文庫作圖中的應(yīng)用自身免疫性疾病及其免疫檢測自身免疫

56、性疾病及其免疫檢測自身免疫性疾病自身免疫性疾病(autoimmune disease(autoimmune disease，AID)AID) 因自身免疫反應(yīng)導(dǎo)致組織器官損傷或功能障因自身免疫反應(yīng)導(dǎo)致組織器官損傷或功能障礙所致疾病。礙所致疾病。自身免疫性疾病分類自身免疫性疾病分類系統(tǒng)性自身免疫病系統(tǒng)性自身免疫病 (systemic autoimmune (systemic autoimmune disease)disease)或器官非特異性或全身性自身免疫病或器官非特異性或全身性自身免疫病器官特異性自身免疫病器官特異性自身免疫病 (organ-specific (organ-specific a

57、utoimmune disease)autoimmune disease)或局限性自身免疫病或局限性自身免疫病按疾病累及的系統(tǒng)區(qū)分按疾病累及的系統(tǒng)區(qū)分按器官特異性分為兩類按器官特異性分為兩類 結(jié)締組織疾病結(jié)締組織疾病 神經(jīng)肌肉疾病神經(jīng)肌肉疾病 內(nèi)分泌性疾病內(nèi)分泌性疾病 消化系統(tǒng)疾病消化系統(tǒng)疾病 泌尿系統(tǒng)疾病泌尿系統(tǒng)疾病 血液系統(tǒng)疾病血液系統(tǒng)疾病生殖系統(tǒng)疾病生殖系統(tǒng)疾病 皮膚組織疾病皮膚組織疾病 循環(huán)系統(tǒng)疾病循環(huán)系統(tǒng)疾病器官特異性器官特異性 非器官特異性非器官特異性橋本甲狀腺炎橋本甲狀腺炎 擴(kuò)張性心肌炎擴(kuò)張性心肌炎 自身免疫性溶血性貧血自身免疫性溶血性貧血 系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡原發(fā)性粘液

58、水腫原發(fā)性粘液水腫 惡性貧血惡性貧血 特發(fā)性血小板減少性紫癜特發(fā)性血小板減少性紫癜 干燥綜合征干燥綜合征甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)甲狀腺機(jī)能亢進(jìn) 自身免疫性胃炎自身免疫性胃炎 特發(fā)性粒細(xì)胞減少癥特發(fā)性粒細(xì)胞減少癥 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎AddisinoAddisino病病 自身免疫性肝炎自身免疫性肝炎 絕經(jīng)過早（少數(shù)病例）絕經(jīng)過早（少數(shù)病例） 硬皮病硬皮病1 1型糖尿病型糖尿病 原發(fā)性膽汁性肝硬化原發(fā)性膽汁性肝硬化 男性不育（少數(shù)病例）男性不育（少數(shù)病例） 多發(fā)性肌炎多發(fā)性肌炎/ /皮肌皮肌炎炎重癥肌無力重癥肌無力 原發(fā)性硬化性膽管炎原發(fā)性硬化性膽管炎 交感性眼炎交感性眼炎 混合性結(jié)締組織病混合性結(jié)締組

59、織病多發(fā)性硬化癥多發(fā)性硬化癥 潰瘍性結(jié)腸炎潰瘍性結(jié)腸炎 晶狀體源性葡萄膜炎晶狀體源性葡萄膜炎 系統(tǒng)性血管炎系統(tǒng)性血管炎脫髓鞘疾病脫髓鞘疾病 克羅恩病克羅恩病 抗磷脂綜合征抗磷脂綜合征 尋常型天皰瘡尋常型天皰瘡 自身免疫性腎小球腎炎自身免疫性腎小球腎炎 肺腎出血綜合征肺腎出血綜合征自身免疫病的自身免疫病的“病譜病譜”1. 1. 多數(shù)病因不明多數(shù)病因不明2. 2. 患者以女性居多，并隨年齡增加發(fā)病率有所增加患者以女性居多，并隨年齡增加發(fā)病率有所增加3. 3. 有遺傳傾向有遺傳傾向4. 4. 患者血清中有多種自身抗體或自身反應(yīng)性致敏淋巴細(xì)胞存在患者血清中有多種自身抗體或自身反應(yīng)性致敏淋巴細(xì)胞存在5

60、5、疾病有重疊現(xiàn)象，即一個病人可同時患一種以上自身免疫病、疾病有重疊現(xiàn)象，即一個病人可同時患一種以上自身免疫病6. 6. 病程一般較長，多遷延為慢性病程一般較長，多遷延為慢性7. 7. 病損局部可發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等浸潤病損局部可發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等浸潤8. 8. 免疫抑制劑治療可取得一定療效免疫抑制劑治療可取得一定療效自身免疫性疾病的共同特征自身免疫性疾病的共同特征 常見的自身免疫性疾病常見的自身免疫性疾病 由于病理性的自身免疫應(yīng)答可發(fā)生在體內(nèi)任何組織器由于病理性的自身免疫應(yīng)答可發(fā)生在體內(nèi)任何組織器官，臨床上常以病理損害的機(jī)制來區(qū)分各類自身免疫性疾官，臨床上常以病