中藥指紋圖譜的原理與應(yīng)用ppt課件

1、中藥指紋圖譜的原中藥指紋圖譜的原理與運(yùn)用理與運(yùn)用 2001級(jí) 藥學(xué)院李勇 沈全妃 沈林強(qiáng) 朱建波 喬洪翔 方亮 江周虹 中藥指紋圖譜，即中藥身份證，主要指中藥化學(xué)指紋圖譜，實(shí)踐上是一種保證中藥質(zhì)量的措施，是指對(duì)某種中藥材或中成藥等運(yùn)用現(xiàn)代分別分析科學(xué)的手段，得到可以標(biāo)示該中藥的色譜或光譜的圖譜，最終用來對(duì)中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的科學(xué)性方式。它有兩個(gè)顯著特點(diǎn)，一是經(jīng)過指紋圖譜的特征性，能有效鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地。二是經(jīng)過指紋圖譜主要特征峰的面積或比例的制定，能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保產(chǎn)質(zhì)量量的相對(duì)一致。 中藥指紋圖譜借用DNA指紋圖譜開展而來，最先開展起來的是中藥色譜指紋圖譜。中藥色譜指紋圖譜是一種綜合的

2、，可量化的色譜鑒定手段2。借以鑒別真?zhèn)?，評(píng)價(jià)原料藥材、半廢品和廢質(zhì)量量均一性和穩(wěn)定性。其根本屬性是“整體性和“模糊性。 中藥指紋圖譜按運(yùn)用對(duì)象分類，根據(jù)中藥指紋圖譜可用于中藥制劑研討、消費(fèi)過程的各個(gè)階段，可分為中藥材(原料藥材)指紋圖譜、中藥原料藥(包括飲片、配伍顆粒)指紋圖譜和中藥制劑指紋圖譜。如分得更細(xì)，還可包括用于工藝消費(fèi)過程中間產(chǎn)物的指紋圖譜。兩種中藥原料藥指紋圖譜應(yīng)區(qū)別對(duì)待。對(duì)中藥飲片指紋圖譜的要求根本和中藥材指紋圖譜一樣。對(duì)中藥配伍顆粒(包括規(guī)范提取物)指紋圖譜應(yīng)要求高一點(diǎn) 。 中藥指紋圖譜按測(cè)定手段可分為中藥化學(xué)(成分)指紋圖譜和中藥生物指紋圖譜。中藥化學(xué)(成分)指紋圖譜系指采用

3、光譜、色譜和其他分析方法建立的用以表征中藥化學(xué)成分的特征的指紋圖譜。光譜最常用的是紅外光譜(IR)。色譜最常用的是薄層色譜(TLC)、氣相色譜(GC)、高效液相色譜(HPLC)和毛細(xì)管電泳(CE)。其他方法包括波譜和聯(lián)用技術(shù)。中藥化學(xué)指紋圖譜首推色譜方法和聯(lián)用技術(shù)。TLC法簡(jiǎn)便易行，但提供信息量有限，很難反映幾十種、上百種化學(xué)成分組成的復(fù)雜體系。GC適用于揮發(fā)性化學(xué)成分。HPLC適用于非揮發(fā)性成分，中藥中大部分化學(xué)成分均可用HPLC法得出良好的指紋圖譜。CE適用于大部分化學(xué)成分，特別是生物大分子肽和蛋白的分別，但其重現(xiàn)性有待提高。 聯(lián)用技術(shù)是最有效的建立指紋圖譜的方法，如GC/MS，HPLC/

4、MS，HPLC/MS/MS等可大量提供各種信息，符合處理中藥復(fù)雜體系的要求，但儀器價(jià)錢昂貴。不易推行運(yùn)用?？傊?，目前運(yùn)用最多的中藥化學(xué)指紋圖譜是用HPLC方法。中藥生物指紋圖譜包括中藥材DNA指紋圖譜和研討中的中藥基因組學(xué)指紋圖譜、中藥蛋白組學(xué)指紋圖譜。中藥基因組學(xué)圖譜和中藥蛋白組學(xué)指紋圖譜系指用中藥制劑作用于某特定細(xì)胞或動(dòng)物后，引起的基因和蛋白的復(fù)雜的變化情況，這2種指紋圖譜似可稱為生物活性指紋圖譜。目前而言，最主要和常用的是中藥化學(xué)指紋圖譜，特別是中藥HPLC指紋圖譜。 下面，對(duì)各種指紋圖譜分門別類加以引見。 薄層色譜薄層色譜(TLC)(TLC)由于操作簡(jiǎn)單，展開劑組成靈由于操作簡(jiǎn)單，展開

5、劑組成靈敏多樣，色譜后衍生方便，可以提供顏色斑瀾敏多樣，色譜后衍生方便，可以提供顏色斑瀾的彩色圖像，直觀易辨，在中藥鑒別中運(yùn)用頻的彩色圖像，直觀易辨，在中藥鑒別中運(yùn)用頻率最高。采用合格資料和規(guī)范操作，可得到高率最高。采用合格資料和規(guī)范操作，可得到高質(zhì)量的色譜圖像，于同板同時(shí)比較鑒別多個(gè)樣質(zhì)量的色譜圖像，于同板同時(shí)比較鑒別多個(gè)樣品，配合數(shù)碼成像和數(shù)據(jù)處置，還可瞬間構(gòu)成品，配合數(shù)碼成像和數(shù)據(jù)處置，還可瞬間構(gòu)成輪廓圖譜，并給出各峰積分值，加大信息量，輪廓圖譜，并給出各峰積分值，加大信息量，從而提高綜合分析才干，比較適宜原料藥材指從而提高綜合分析才干，比較適宜原料藥材指紋圖像分析。由于薄層色譜法是一種

6、開放系統(tǒng)，紋圖像分析。由于薄層色譜法是一種開放系統(tǒng)，外界影響要素較多，必然會(huì)添加實(shí)驗(yàn)的難度。外界影響要素較多，必然會(huì)添加實(shí)驗(yàn)的難度。 氣相色譜氣相色譜(GC)(GC)以氣體為流動(dòng)相，對(duì)于含揮發(fā)性以氣體為流動(dòng)相，對(duì)于含揮發(fā)性成分中藥的鑒別具有一定優(yōu)勢(shì)。由于裂解氣相成分中藥的鑒別具有一定優(yōu)勢(shì)。由于裂解氣相色譜具有操作簡(jiǎn)便、樣品無須化學(xué)前處置、提色譜具有操作簡(jiǎn)便、樣品無須化學(xué)前處置、提供信息量大等優(yōu)點(diǎn)而格外引人注目。該方法將供信息量大等優(yōu)點(diǎn)而格外引人注目。該方法將樣品故人裂解器內(nèi)，在一定的條件下將樣品加樣品故人裂解器內(nèi)，在一定的條件下將樣品加熱使其瞬間裂解，生成可揮發(fā)性的小分子物質(zhì)，熱使其瞬間裂解，

7、生成可揮發(fā)性的小分子物質(zhì)，立刻被載氣帶人氣相色譜系統(tǒng)的分析柱上，分立刻被載氣帶人氣相色譜系統(tǒng)的分析柱上，分別后得到具有指紋性質(zhì)的裂解氣相色譜圖。假別后得到具有指紋性質(zhì)的裂解氣相色譜圖。假設(shè)將氣相色譜與質(zhì)譜、傅立葉變換紅外光譜聯(lián)設(shè)將氣相色譜與質(zhì)譜、傅立葉變換紅外光譜聯(lián)用，那么不但可以知道不同中藥中揮發(fā)性成分用，那么不但可以知道不同中藥中揮發(fā)性成分的差別，而且可以對(duì)這些成分進(jìn)展鑒定。的差別，而且可以對(duì)這些成分進(jìn)展鑒定。 高效液相色譜高效液相色譜(HPLC) (HPLC) 具有分別效能高、分析速度快、靈敏度高、具有分別效能高、分析速度快、靈敏度高、方法重現(xiàn)性好、選擇性高、適用的樣品類型廣泛等特點(diǎn)。曾

8、經(jīng)普方法重現(xiàn)性好、選擇性高、適用的樣品類型廣泛等特點(diǎn)。曾經(jīng)普遍運(yùn)用于中藥材及制劑的分析檢測(cè)，特別是三維高效液相色譜法，遍運(yùn)用于中藥材及制劑的分析檢測(cè)，特別是三維高效液相色譜法，近年來開展很快，非常適宜構(gòu)建中藥指紋圖譜。與薄層色譜相比，近年來開展很快，非常適宜構(gòu)建中藥指紋圖譜。與薄層色譜相比，它是封鎖系統(tǒng)色譜，受外界影響小，色譜穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，其它是封鎖系統(tǒng)色譜，受外界影響小，色譜穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，其分別、鑒別才干遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于薄層色譜。在中藥指紋圖譜中首推高效分別、鑒別才干遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于薄層色譜。在中藥指紋圖譜中首推高效液相色譜指紋圖譜。液相色譜指紋圖譜。HPLCHPLC所分析的中藥中，有相當(dāng)部分為次生

9、代所分析的中藥中，有相當(dāng)部分為次生代謝產(chǎn)物，而這些產(chǎn)物的組成和含量不僅和藥材本身的種屬有關(guān)，謝產(chǎn)物，而這些產(chǎn)物的組成和含量不僅和藥材本身的種屬有關(guān)，同時(shí)還與植物后天所處的地域環(huán)境、生長(zhǎng)條件、采摘時(shí)間和炮制同時(shí)還與植物后天所處的地域環(huán)境、生長(zhǎng)條件、采摘時(shí)間和炮制方法有很大的關(guān)系。對(duì)于中成藥來說，與產(chǎn)品的加工過程也有很方法有很大的關(guān)系。對(duì)于中成藥來說，與產(chǎn)品的加工過程也有很大的聯(lián)絡(luò)。不同的加工過程與方法都將對(duì)所得的指紋圖譜有相當(dāng)大的聯(lián)絡(luò)。不同的加工過程與方法都將對(duì)所得的指紋圖譜有相當(dāng)影響，表如今峰高、峰面積、保管時(shí)間以及峰數(shù)量上的變化等。影響，表如今峰高、峰面積、保管時(shí)間以及峰數(shù)量上的變化等。因此

10、，因此，HPLCHPLC不僅可以用來對(duì)生藥的真?zhèn)?、?yōu)劣進(jìn)展鑒定，同時(shí)還不僅可以用來對(duì)生藥的真?zhèn)?、?yōu)劣進(jìn)展鑒定，同時(shí)還可以對(duì)中藥的加工過程進(jìn)展監(jiān)測(cè)，可以有效地分析鑒定經(jīng)過不同可以對(duì)中藥的加工過程進(jìn)展監(jiān)測(cè)，可以有效地分析鑒定經(jīng)過不同的炮制、加工的中成藥。的炮制、加工的中成藥。 高速逆流色譜指紋圖譜高速逆流色譜指紋圖譜(HSCCC fingerprintspectrum，即調(diào)整逆流色譜法即調(diào)整逆流色譜法) HSCCC利用動(dòng)態(tài)液利用動(dòng)態(tài)液-液分配原理分液分配原理分別樣品，其分別度和重現(xiàn)性與別樣品，其分別度和重現(xiàn)性與HPLC類似，但樣品前類似，但樣品前處置簡(jiǎn)單。詳細(xì)地說它是一種基于液處置簡(jiǎn)單。詳細(xì)地說它

11、是一種基于液-液多級(jí)逆流萃取液多級(jí)逆流萃取建立的色譜體系，以輕巧的聚四氟乙烯螺旋管作分別建立的色譜體系，以輕巧的聚四氟乙烯螺旋管作分別柱，在行星式運(yùn)動(dòng)中延續(xù)地完成整個(gè)分配、傳送、分柱，在行星式運(yùn)動(dòng)中延續(xù)地完成整個(gè)分配、傳送、分別過程；無固相載體，防止了待分別樣品與固相載體別過程；無固相載體，防止了待分別樣品與固相載體外表發(fā)生化學(xué)反響而變成不可逆吸附；分辨率高，可外表發(fā)生化學(xué)反響而變成不可逆吸附；分辨率高，可分別純品；可采用正向或反向的延續(xù)洗脫、步級(jí)洗脫、分別純品；可采用正向或反向的延續(xù)洗脫、步級(jí)洗脫、梯度洗脫等方式；可采用多種多樣的溶劑系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)物梯度洗脫等方式；可采用多種多樣的溶劑系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)物質(zhì)

12、的對(duì)流分配；能在一個(gè)流程中分別復(fù)雜樣品中極性質(zhì)的對(duì)流分配；能在一個(gè)流程中分別復(fù)雜樣品中極性差別極大的各個(gè)組分，特別是能有效地分別強(qiáng)極性的差別極大的各個(gè)組分，特別是能有效地分別強(qiáng)極性的組分；儀器及試劑本錢明顯低于高效液相色譜，適用組分；儀器及試劑本錢明顯低于高效液相色譜，適用于制備高純度、高附加值的化合物。于制備高純度、高附加值的化合物。超臨界流體色譜法超臨界流體色譜法(SFC) (SFC) 以超臨界流體作流以超臨界流體作流動(dòng)相，它經(jīng)過控制壓力調(diào)理流動(dòng)相的密度實(shí)現(xiàn)動(dòng)相，它經(jīng)過控制壓力調(diào)理流動(dòng)相的密度實(shí)現(xiàn)對(duì)溶解度的調(diào)理，從而使不同物質(zhì)分別進(jìn)展溶對(duì)溶解度的調(diào)理，從而使不同物質(zhì)分別進(jìn)展溶解與分別。超臨

13、界流體溶解才干強(qiáng)，流動(dòng)性好，解與分別。超臨界流體溶解才干強(qiáng)，流動(dòng)性好，傳質(zhì)速率快，交融了傳質(zhì)速率快，交融了HPLCHPLC和和GCGC的優(yōu)點(diǎn)而部分地的優(yōu)點(diǎn)而部分地防止了它們的缺陷。防止了它們的缺陷。SFCSFC比比GCGC運(yùn)用范圍更廣，運(yùn)用范圍更廣，比比HPLCHPLC定量效果更好，分別的時(shí)間更短，樣品定量效果更好，分別的時(shí)間更短，樣品的前處置更簡(jiǎn)單，更易與大型分析儀如質(zhì)譜儀、的前處置更簡(jiǎn)單，更易與大型分析儀如質(zhì)譜儀、傅里葉變換紅外光譜儀和核磁共振譜儀等聯(lián)用。傅里葉變換紅外光譜儀和核磁共振譜儀等聯(lián)用。SFCSFC適用范圍很廣，實(shí)際上，可以用適用范圍很廣，實(shí)際上，可以用HPLCHPLC分別分別和

14、測(cè)定的化合物，都可以用和測(cè)定的化合物，都可以用SFCSFC來分別和測(cè)定，來分別和測(cè)定，某些用某些用HPLCHPLC不能分別的物質(zhì)用不能分別的物質(zhì)用SFCSFC也能得到較也能得到較好的效果。好的效果。 近10多年來開展很快的高效毛細(xì)管電泳技術(shù)(HPCE)是一種高效分別分析技術(shù)，以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)，毛細(xì)管為分別通道，根據(jù)樣品中各組分淌度和分配行為上的差別而實(shí)現(xiàn)分別。具有靈敏度高、柱效高、分析速度快、所需樣品量少、溶劑耗費(fèi)少和抗污染才干強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。不僅適用于小分子酸、堿、鹽及中性分子和生物大分子如核酸、多肽、蛋白質(zhì)等的分析，在中藥有效成分分析方面也顯示出一定優(yōu)勢(shì)。中藥紫外光譜(UV)特征的差別，在定程度

15、上反映了中藥化學(xué)成分的差別。某些情況下，偽品雖可在外觀上以假亂真，但其化學(xué)成分的組成和含量與正品必有差別，這種差別在紫外光譜上必有所反映。假設(shè)中藥親緣相近而紫外光譜不易區(qū)別，可采用多階導(dǎo)數(shù)光譜法提高分辨率。紅外光譜紅外光譜(IR)不斷是藥品鑒定的權(quán)威方法，但不斷是藥品鑒定的權(quán)威方法，但這是對(duì)純物質(zhì)而言的。中藥提取液是復(fù)雜的混這是對(duì)純物質(zhì)而言的。中藥提取液是復(fù)雜的混合物體系，這一混合物的紅外光譜在本質(zhì)上與合物體系，這一混合物的紅外光譜在本質(zhì)上與純化合物的紅外光譜不同，它是混合物中各組純化合物的紅外光譜不同，它是混合物中各組分紅外光譜的疊加。中藥各種化學(xué)成分只需質(zhì)分紅外光譜的疊加。中藥各種化學(xué)成分

16、只需質(zhì)和量相對(duì)穩(wěn)定，并且樣品的處置方法按一致要和量相對(duì)穩(wěn)定，并且樣品的處置方法按一致要求進(jìn)展，那么其紅外光譜應(yīng)是相對(duì)穩(wěn)定的。這求進(jìn)展，那么其紅外光譜應(yīng)是相對(duì)穩(wěn)定的。這樣得到的混合物紅外光譜應(yīng)該具有一定的客觀樣得到的混合物紅外光譜應(yīng)該具有一定的客觀性和可反復(fù)性。據(jù)此原理，不用將混合物紅外性和可反復(fù)性。據(jù)此原理，不用將混合物紅外光 譜 各 主 要 吸 收 峰 進(jìn) 展 歸 屬 ， 只 需 在光 譜 各 主 要 吸 收 峰 進(jìn) 展 歸 屬 ， 只 需 在4000400cm-1范圍內(nèi)比較光譜的差別即可。應(yīng)范圍內(nèi)比較光譜的差別即可。應(yīng)該指出，紫外和紅外光譜都具有加和性，對(duì)于該指出，紫外和紅外光譜都具有加和

17、性，對(duì)于混合物來說，其鑒別專屬性差，分辨率低。需混合物來說，其鑒別專屬性差，分辨率低。需借助計(jì)算機(jī)方式識(shí)別技術(shù)或模糊數(shù)學(xué)方法進(jìn)展借助計(jì)算機(jī)方式識(shí)別技術(shù)或模糊數(shù)學(xué)方法進(jìn)展處置。處置。三維熒光光譜指紋技術(shù)是研討樣本的三三維熒光光譜指紋技術(shù)是研討樣本的三維熒光指紋特征，建立起對(duì)照品的三維維熒光指紋特征，建立起對(duì)照品的三維熒光指紋圖譜，而不同的藥物具有各自熒光指紋圖譜，而不同的藥物具有各自特征的指紋圖類型和特征指紋，藥物的特征的指紋圖類型和特征指紋，藥物的熒光強(qiáng)度與其含量成正相關(guān)關(guān)系。因此，熒光強(qiáng)度與其含量成正相關(guān)關(guān)系。因此，熒光強(qiáng)度可作為藥物含量評(píng)價(jià)的根據(jù)之熒光強(qiáng)度可作為藥物含量評(píng)價(jià)的根據(jù)之一。三維

18、熒光光譜技術(shù)比常規(guī)熒光分析一。三維熒光光譜技術(shù)比常規(guī)熒光分析方法更能反映激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)同時(shí)方法更能反映激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)同時(shí)變化時(shí)的熒光強(qiáng)度信息，而且具有靈敏變化時(shí)的熒光強(qiáng)度信息，而且具有靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)。度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)。 核磁共振波譜核磁共振波譜(NMR)(NMR)是鑒定有機(jī)化合物構(gòu)造的是鑒定有機(jī)化合物構(gòu)造的常規(guī)方法和重要手段。植物中藥特征性化學(xué)成常規(guī)方法和重要手段。植物中藥特征性化學(xué)成分往往不限一種，多表現(xiàn)為特征性成分組。因分往往不限一種，多表現(xiàn)為特征性成分組。因此，其特征性規(guī)范提取物的此，其特征性規(guī)范提取物的NMRNMR譜是其中各種譜是其中各種成分圖譜的疊加。在混合物的

19、成分圖譜的疊加。在混合物的NMRNMR圖譜上，除圖譜上，除每個(gè)信號(hào)在磁場(chǎng)中的共振數(shù)據(jù)外，信號(hào)的相對(duì)每個(gè)信號(hào)在磁場(chǎng)中的共振數(shù)據(jù)外，信號(hào)的相對(duì)強(qiáng)弱反映了混合物中各組分的相對(duì)含量。當(dāng)圖強(qiáng)弱反映了混合物中各組分的相對(duì)含量。當(dāng)圖譜不太復(fù)雜時(shí)，也可察看到某些信號(hào)的巧合關(guān)譜不太復(fù)雜時(shí)，也可察看到某些信號(hào)的巧合關(guān)系。經(jīng)過對(duì)各化合物進(jìn)展構(gòu)造鑒定和系。經(jīng)過對(duì)各化合物進(jìn)展構(gòu)造鑒定和NMRNMR研討，研討，可實(shí)現(xiàn)植物中藥可實(shí)現(xiàn)植物中藥NMRNMR指紋圖譜的解析。指紋圖譜的解析。 傳統(tǒng)的質(zhì)譜技術(shù)無法測(cè)定大分子(分子量超越2000Da)、極性分子和難汽化分子的構(gòu)造。電噴霧電離(electrospray ionizatio

20、n，ESI)和基質(zhì)輔助的激光解吸電離(matrix assisted laser desorption ionization，MALDI)等軟電離技術(shù)使簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地研討生物大分子成為能夠。目前質(zhì)譜法已成為研討生物大分子特別是蛋白質(zhì)和核酸的中心技術(shù)之一。將中藥提取物置于質(zhì)譜儀中進(jìn)展電子轟擊電離，可獲得提取物中化學(xué)成分的EI-MS圖。不同中藥提取物所含成分不同，所得質(zhì)譜圖顯示的分子離子峰及進(jìn)一步的裂解碎片峰亦不一致，可用于鑒別。MS法靈敏度及準(zhǔn)確度高，指紋特征性強(qiáng)，常與HPLC、GC聯(lián)用。液相色譜可以起到脫鹽和濃縮樣品的作用，減少鹽或其它小分子對(duì)樣品離子化的影響而降低樣品的損耗和污染。液相色

21、譜與質(zhì)譜在線聯(lián)用使質(zhì)譜法與常規(guī)的蛋白質(zhì)分析方法可以很好的聯(lián)用，其準(zhǔn)確度和靈敏度都大大超越了常規(guī)方法。并且，快速流動(dòng)的在線分別技術(shù)是一種高效率的生物分析方法。用LC/ESI/MS進(jìn)展生物大分子的分析鑒定能獲得稱心的結(jié)果。 X射線衍射法射線衍射法(XRD)是研討物質(zhì)的物相和晶體是研討物質(zhì)的物相和晶體構(gòu)造的主要方法。當(dāng)對(duì)某一物質(zhì)進(jìn)展衍射分析構(gòu)造的主要方法。當(dāng)對(duì)某一物質(zhì)進(jìn)展衍射分析時(shí)，該物質(zhì)被射線照射而產(chǎn)生不同程度的衍射時(shí)，該物質(zhì)被射線照射而產(chǎn)生不同程度的衍射景象。物質(zhì)的組成、晶型、分子內(nèi)成鍵方式、景象。物質(zhì)的組成、晶型、分子內(nèi)成鍵方式、分子的構(gòu)型等決議該物質(zhì)產(chǎn)生特有的衍射圖譜。分子的構(gòu)型等決議該物質(zhì)

22、產(chǎn)生特有的衍射圖譜。假設(shè)是混合物，那么所得衍射圖是各組成成分假設(shè)是混合物，那么所得衍射圖是各組成成分衍射效應(yīng)的疊加。只需混合物的組成是恒定的，衍射效應(yīng)的疊加。只需混合物的組成是恒定的，衍射圖就可作為混合物的特征譜。衍射法所獲衍射圖就可作為混合物的特征譜。衍射法所獲得的信息量大，指紋性強(qiáng)，穩(wěn)定可靠，是中藥得的信息量大，指紋性強(qiáng)，穩(wěn)定可靠，是中藥定性鑒別的可靠根據(jù)。另外，該方法所需樣品定性鑒別的可靠根據(jù)。另外，該方法所需樣品量小，不破壞樣品，操作簡(jiǎn)單。量小，不破壞樣品，操作簡(jiǎn)單。 現(xiàn)代分子生物學(xué)研討發(fā)現(xiàn)，核苷酸序列含有生命有機(jī)物構(gòu)建、維持和繁衍生命所必需的遺傳信息，不同種生物體含有不同的DNA序列

23、，同種生物體既有一樣的DNA序列，堅(jiān)持同種生物體的遺傳性狀，又具有多態(tài)性，使同種生物各個(gè)體千差萬別。由于這種核苷酸序列是相對(duì)穩(wěn)定的，因此可以利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建DNA指紋圖。其原理是：每個(gè)生物體個(gè)體的DNA經(jīng)酶切后，電泳分別，用標(biāo)志的DNA探針雜交和放射自顯影后構(gòu)成的帶紋分布應(yīng)該是有區(qū)別的，具有個(gè)體、群體和物種的特異性(DNA fingerprintion，DNAfp)。如要了解中藥復(fù)方制劑中的某味藥能否存在，經(jīng)過對(duì)這種中藥材的分子遺傳標(biāo)志的研討，找到具有該種高度特異性的片段，便可以此為根底，制備出對(duì)該種高度特異性的寡核苷酸探針，再經(jīng)分子雜交進(jìn)展指紋分析，即可到達(dá)鑒別目的。DNA指紋圖具

24、有高度的個(gè)體特異性。DNA指紋圖譜技術(shù)包括AP-PCR(arbitrary primer PCR，恣意引物聚合酶鏈?zhǔn)椒错?和RAPD(隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA，randomly amplified polymorphic DNA)兩種指紋圖譜技術(shù)。RFLP (限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性，restriction fragment length polymorphism)是最常用的構(gòu)建DNA指紋圖的方法，但該法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，使運(yùn)用遭到限制。隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA(RAPD)標(biāo)志，可以在特異DNA序列尚不清楚的情況下，檢測(cè)DNA的多態(tài)性，這是構(gòu)建中藥指紋圖譜的新方法，具有極好的運(yùn)用前景。此外，還有SSR(簡(jiǎn)單反復(fù)序列，simple sequence repeat)、ISSR(簡(jiǎn)單反復(fù)序列間區(qū)，inter simple sequence repeat)、AFLP(擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性，amplified fragment length polymorphism)及小衛(wèi)星等。 多維多息特征譜即聯(lián)用技術(shù)多維多息特征譜即聯(lián)用技術(shù)將色譜法良好的分別將色譜法良好的分別才干與波譜法特有的構(gòu)造鑒別才干相結(jié)合。所謂多維才干與波譜法特有的構(gòu)造鑒別才干相結(jié)合。所謂多維是指采用多種分析儀器聯(lián)用