實驗5病原性球菌

1、實實 驗驗 五五 病原性球菌病原性球菌實驗?zāi)康模簩嶒災(zāi)康模?熟悉幾種常見病原性球菌的形態(tài)染色特點。熟悉幾種常見病原性球菌的形態(tài)染色特點。 掌握血漿凝固酶試驗的原理、方法、意義。掌握血漿凝固酶試驗的原理、方法、意義。 掌握抗掌握抗“0”0”試驗的原理、方法及臨床意義。試驗的原理、方法及臨床意義。 一、常見病原性球菌形態(tài)染色的觀察（示教）一、常見病原性球菌形態(tài)染色的觀察（示教）（細(xì)菌的形態(tài)；革蘭染色性；排列方式）二、血漿凝固酶試驗（示教二、血漿凝固酶試驗（示教) )三、抗三、抗“0”0”試驗試驗( (操作操作) ) 球菌革蘭染色標(biāo)本片 葡萄球菌培養(yǎng)物、兔血漿、生理鹽水、載玻片、接種環(huán)、酒精燈、火柴

2、、蠟筆 待測病人血清、抗“O”試劑（溶血素“O”、ASO膠乳）、反應(yīng)板、攪拌棒一、病原性球菌形態(tài)特征的觀察一、病原性球菌形態(tài)特征的觀察v又稱為化膿性球菌v根據(jù)革蘭染色性的不同可分成革蘭陽性： 葡萄球菌 鏈球菌 肺炎鏈球菌革蘭陰性： 腦膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌革蘭染色陽性球菌，革蘭染色陽性球菌，葡萄串狀排列葡萄串狀排列無鞭毛，無鞭毛，不形成芽胞，不形成芽胞，右上圖：革蘭染色右上圖：革蘭染色 右下圖：掃描電鏡右下圖：掃描電鏡形態(tài)與染色形態(tài)與染色葡萄球菌葡萄球菌 革蘭染色陽性球菌，革蘭染色陽性球菌，呈鏈狀排列呈鏈狀排列 無鞭毛，無鞭毛， 不形成芽胞，不形成芽胞， 右上圖：革蘭染色右上圖：革蘭染色 右下

3、圖：掃描電鏡右下圖：掃描電鏡形態(tài)與染色形態(tài)與染色鏈球菌鏈球菌 形態(tài)與染色形態(tài)與染色肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌 革蘭染色陽性球革蘭染色陽性球菌，菌體呈矛頭菌，菌體呈矛頭狀，成雙排列，狀，成雙排列，寬端相對，尖端寬端相對，尖端向外。向外。無鞭毛無鞭毛不形成芽胞不形成芽胞有毒株有莢膜有毒株有莢膜 革蘭染色革蘭染色陰陰性雙球菌性雙球菌 呈腎形，成雙排列呈腎形，成雙排列 感染急性期感染急性期 位于中性粒細(xì)胞內(nèi)位于中性粒細(xì)胞內(nèi) 形態(tài)與染色形態(tài)與染色奈瑟菌屬奈瑟菌屬二、二、血漿凝固酶實驗血漿凝固酶實驗 血漿血漿纖維蛋白原纖維蛋白原纖維蛋白纖維蛋白 血漿凝固酶血漿凝固酶附著于細(xì)菌表面附著于細(xì)菌表面玻片上形成凝塊（玻

4、片上形成凝塊（結(jié)合型結(jié)合型）試管中血漿發(fā)生凝固（試管中血漿發(fā)生凝固（游離型）游離型）致病性葡萄球菌致病性葡萄球菌原理原理 （1）取潔凈玻片一張，玻片分為左右兩區(qū)并做好標(biāo)記，于一端加生理鹽水一滴，另一端加兔血漿一滴。 （2）用接種環(huán)取金黃色葡萄球菌苔一環(huán)，在玻片一端生理鹽水中研磨混勻，接種環(huán)滅菌后再取金黃色葡萄球菌苔一環(huán)，在另一端兔血漿中研磨均勻。 （3）立即觀察結(jié)果。血漿凝固酶實驗方法（玻片法）血漿凝固酶實驗方法（玻片法）結(jié)果：細(xì)菌在生理鹽水無凝集而在血漿中聚集成團(tuán)塊或無法混勻，為血漿凝固酶試驗陽性 血漿凝固酶實驗注意事項血漿凝固酶實驗注意事項v血漿多挑幾環(huán)（一滴的量）；菌落不能太多。血漿多挑

5、幾環(huán)（一滴的量）；菌落不能太多。v要做陰性對照，有一部分葡萄球菌有自凝現(xiàn)象。要做陰性對照，有一部分葡萄球菌有自凝現(xiàn)象。v最好用抗凝的兔血漿最好用抗凝的兔血漿 ，兔血漿凝塊結(jié)實，凝固速度快兔血漿凝塊結(jié)實，凝固速度快 ；兔血漿應(yīng)放兔血漿應(yīng)放4冰箱保存。冰箱保存。意義意義：血漿凝固酶試驗是鑒別葡萄球菌有無致病性：血漿凝固酶試驗是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標(biāo)，致病性葡萄球菌為陽性。的重要指標(biāo)，致病性葡萄球菌為陽性。 鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素O（SLO）鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素S（SLS）抗原性強(qiáng)，產(chǎn)生抗抗原性強(qiáng)，產(chǎn)生抗O抗體，該抗體在感染鏈球菌抗體，該抗體在感染鏈球菌2-3

6、周周 至病后至病后1年內(nèi)可檢出；年內(nèi)可檢出； 正常參考值：成人正常參考值：成人200 U200IU/ml ASO200IU/ml 陽性陽性 無凝集出現(xiàn)無凝集出現(xiàn) ASO200IU/ml ASO200IU/ml 陰性陰性注意事項：注意事項： 1.1.試劑使用前先預(yù)置達(dá)室溫，且要搖勻。試劑使用前先預(yù)置達(dá)室溫，且要搖勻。 2.2.加試劑時，要保證液滴大小一致。加試劑時，要保證液滴大小一致。 3.3.試劑盒貯存于試劑盒貯存于2-102-10，切勿冰凍。，切勿冰凍?？箍埂癘”試驗意義試驗意義1.1.抗體滴度抗體滴度 200IU/ml200IU/ml以上，新近有可能反以上，新近有可能反復(fù)感染過乙型溶血型鏈球菌復(fù)感染過乙型溶血型鏈球菌2.2.作為風(fēng)濕活動期、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)心病、作為風(fēng)濕活動期、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)心病、急性腎小球腎炎的輔助診斷。急性腎小球腎炎的輔助