實驗5病原性球菌

1、實實 驗驗 五五 病原性球菌病原性球菌實驗?zāi)康模簩嶒災(zāi)康模?熟悉幾種常見病原性球菌的形態(tài)染色特點。熟悉幾種常見病原性球菌的形態(tài)染色特點。 掌握血漿凝固酶試驗的原理、方法、意義。掌握血漿凝固酶試驗的原理、方法、意義。 掌握抗掌握抗“0”0”試驗的原理、方法及臨床意義。試驗的原理、方法及臨床意義。 一、常見病原性球菌形態(tài)染色的觀察（示教）一、常見病原性球菌形態(tài)染色的觀察（示教）（細菌的形態(tài)；革蘭染色性；排列方式）二、血漿凝固酶試驗（示教二、血漿凝固酶試驗（示教) )三、抗三、抗“0”0”試驗試驗( (操作操作) ) 球菌革蘭染色標(biāo)本片 葡萄球菌培養(yǎng)物、兔血漿、生理鹽水、載玻片、接種環(huán)、酒精燈、火柴

2、、蠟筆 待測病人血清、抗“O”試劑（溶血素“O”、ASO膠乳）、反應(yīng)板、攪拌棒一、病原性球菌形態(tài)特征的觀察一、病原性球菌形態(tài)特征的觀察v又稱為化膿性球菌v根據(jù)革蘭染色性的不同可分成革蘭陽性： 葡萄球菌 鏈球菌 肺炎鏈球菌革蘭陰性： 腦膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌革蘭染色陽性球菌，革蘭染色陽性球菌，葡萄串狀排列葡萄串狀排列無鞭毛，無鞭毛，不形成芽胞，不形成芽胞，右上圖：革蘭染色右上圖：革蘭染色 右下圖：掃描電鏡右下圖：掃描電鏡形態(tài)與染色形態(tài)與染色葡萄球菌葡萄球菌 革蘭染色陽性球菌，革蘭染色陽性球菌，呈鏈狀排列呈鏈狀排列 無鞭毛，無鞭毛， 不形成芽胞，不形成芽胞， 右上圖：革蘭染色右上圖：革蘭染色 右下

3、圖：掃描電鏡右下圖：掃描電鏡形態(tài)與染色形態(tài)與染色鏈球菌鏈球菌 形態(tài)與染色形態(tài)與染色肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌 革蘭染色陽性球革蘭染色陽性球菌，菌體呈矛頭菌，菌體呈矛頭狀，成雙排列，狀，成雙排列，寬端相對，尖端寬端相對，尖端向外。向外。無鞭毛無鞭毛不形成芽胞不形成芽胞有毒株有莢膜有毒株有莢膜 革蘭染色革蘭染色陰陰性雙球菌性雙球菌 呈腎形，成雙排列呈腎形，成雙排列 感染急性期感染急性期 位于中性粒細胞內(nèi)位于中性粒細胞內(nèi) 形態(tài)與染色形態(tài)與染色奈瑟菌屬奈瑟菌屬二、二、血漿凝固酶實驗血漿凝固酶實驗 血漿血漿纖維蛋白原纖維蛋白原纖維蛋白纖維蛋白 血漿凝固酶血漿凝固酶附著于細菌表面附著于細菌表面玻片上形成凝塊（玻

4、片上形成凝塊（結(jié)合型結(jié)合型）試管中血漿發(fā)生凝固（試管中血漿發(fā)生凝固（游離型）游離型）致病性葡萄球菌致病性葡萄球菌原理原理 （1）取潔凈玻片一張，玻片分為左右兩區(qū)并做好標(biāo)記，于一端加生理鹽水一滴，另一端加兔血漿一滴。 （2）用接種環(huán)取金黃色葡萄球菌苔一環(huán)，在玻片一端生理鹽水中研磨混勻，接種環(huán)滅菌后再取金黃色葡萄球菌苔一環(huán)，在另一端兔血漿中研磨均勻。 （3）立即觀察結(jié)果。血漿凝固酶實驗方法（玻片法）血漿凝固酶實驗方法（玻片法）結(jié)果：細菌在生理鹽水無凝集而在血漿中聚集成團塊或無法混勻，為血漿凝固酶試驗陽性 血漿凝固酶實驗注意事項血漿凝固酶實驗注意事項v血漿多挑幾環(huán)（一滴的量）；菌落不能太多。血漿多挑

5、幾環(huán)（一滴的量）；菌落不能太多。v要做陰性對照，有一部分葡萄球菌有自凝現(xiàn)象。要做陰性對照，有一部分葡萄球菌有自凝現(xiàn)象。v最好用抗凝的兔血漿最好用抗凝的兔血漿 ，兔血漿凝塊結(jié)實，凝固速度快兔血漿凝塊結(jié)實，凝固速度快 ；兔血漿應(yīng)放兔血漿應(yīng)放4冰箱保存。冰箱保存。意義意義：血漿凝固酶試驗是鑒別葡萄球菌有無致病性：血漿凝固酶試驗是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標(biāo)，致病性葡萄球菌為陽性。的重要指標(biāo)，致病性葡萄球菌為陽性。 鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素O（SLO）鏈球菌溶血素鏈球菌溶血素S（SLS）抗原性強，產(chǎn)生抗抗原性強，產(chǎn)生抗O抗體，該抗體在感染鏈球菌抗體，該抗體在感染鏈球菌2-3

6、周周 至病后至病后1年內(nèi)可檢出；年內(nèi)可檢出； 正常參考值：成人正常參考值：成人200 U200IU/ml ASO200IU/ml 陽性陽性 無凝集出現(xiàn)無凝集出現(xiàn) ASO200IU/ml ASO200IU/ml 陰性陰性注意事項：注意事項： 1.1.試劑使用前先預(yù)置達室溫，且要搖勻。試劑使用前先預(yù)置達室溫，且要搖勻。 2.2.加試劑時，要保證液滴大小一致。加試劑時，要保證液滴大小一致。 3.3.試劑盒貯存于試劑盒貯存于2-102-10，切勿冰凍。，切勿冰凍。抗抗“O”試驗意義試驗意義1.1.抗體滴度抗體滴度 200IU/ml200IU/ml以上，新近有可能反以上，新近有可能反復(fù)感染過乙型溶血型鏈球菌復(fù)感染過乙型溶血型鏈球菌2.2.作為風(fēng)濕活動期、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)心病、作為風(fēng)濕活動期、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)心病、急性腎小球腎炎的輔助診斷。急性腎小球腎炎的輔助