藥物毒理學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本知識(shí)與技術(shù)課件

1、 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)與操作技術(shù)（Basic knowledge and technology for animal test）王 安1/15/2022 5:56 PM1 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM2【目的要求】掌握動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的目的、要求與局限性，以及3R原則；了解動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原則與方法；熟悉動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用的動(dòng)物選擇、動(dòng)物的編號(hào)和隨機(jī)分組、染毒方法等技術(shù)

2、；熟悉常用生物材料的采集。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí) 1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的目的、要求與局限性 2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的職業(yè)道德-3R原則 3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原則與方法.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的操作技術(shù) 1.健康動(dòng)物的選擇，動(dòng)物的抓取與固定 2.動(dòng)物的性別與日齡鑒定 3.動(dòng)物的標(biāo)記與編號(hào) 4.給藥途徑(口、呼吸道) 5.生物材料的收集(血液、尿液) 6.動(dòng)物的處死及生物材料的采集1/15/2022 5:56 PM3【主要內(nèi)容】 Department of Health ToxicologySchool of

3、Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM4Part .動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí) Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(Laboratory animals)是專(zhuān)門(mén)培育供實(shí)驗(yàn)用的動(dòng)物，主要指作為醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、生物學(xué)、獸醫(yī)學(xué)等的科研、教學(xué)、醫(yī)療、鑒定、診斷、生物制品制造等需要為目的而馴養(yǎng)、繁殖、育成的動(dòng)物。 豚鼠 新西蘭家兔 ICR小鼠 Wistar 大鼠 Beagle犬 一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的目的、要求、局限性 Department of Health To

4、xicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM61.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本目的評(píng)價(jià)化學(xué)物的生物學(xué)效應(yīng)；闡明可能的機(jī)制和影響因素；補(bǔ)充人體資料的不足。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM72.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本要求健康(雌性曾交配與未孕)，均一性要求闡明劑量-效應(yīng)關(guān)系，有高劑量接觸組盡可能反映人類(lèi)實(shí)際的接觸途徑 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/

5、15/2022 5:56 PM83 .動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的局限性種屬外推的不確定性高劑量向低劑量外推的不確定性樣本量到大樣本外推的不確定性無(wú)法觀察主觀指標(biāo) Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM9二、 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的職業(yè)道德-3R原則實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在人類(lèi)認(rèn)識(shí)生命、預(yù)防與治療疾病的醫(yī)學(xué)發(fā)展史上，作出了大量犧牲。18世紀(jì)哲學(xué)家Jeremy指出：?jiǎn)栴}不在于它們能否思考，也不是它們能否說(shuō)話，而是它們痛苦不痛苦。19世紀(jì)興起動(dòng)物保護(hù)主義，成立了動(dòng)物保護(hù)組織，并且通過(guò)立法來(lái)保障動(dòng)物福利。禁止虐待動(dòng)物法、科學(xué)動(dòng)物實(shí)

6、驗(yàn)法、動(dòng)物福利法、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例等。給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人道主義的管理與處理使痛苦與不適感減少到最低限度避免不必要的使用動(dòng)物 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM101959年英國(guó)動(dòng)物學(xué)家William和微生物學(xué)家Rex在人性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)原則一書(shū)中提出：“正確的科學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)考慮到動(dòng)物的權(quán)益，盡可能減少動(dòng)物用量，優(yōu)化完善實(shí)驗(yàn)程序或使用其他手段和材料替代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的3R原則”。1.減少(Reduction)： 減少是在滿足實(shí)驗(yàn)要求，又不損失應(yīng)得信息的前提下，盡可能減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量；2.優(yōu)

7、化(Refinement)：優(yōu)化是在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，盡可能選擇和改良實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)，減輕動(dòng)物可能遭受的痛苦；3.替代(Replacement)：替代是不通過(guò)與動(dòng)物相關(guān)的實(shí)驗(yàn)或過(guò)程去獲取所需的信息。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)替代法的3R原則 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM113R原則使全世界的生物化學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)和生物醫(yī)學(xué)界對(duì)替代方法的發(fā)展、驗(yàn)證更加關(guān)注，因?yàn)樘娲椒ǖ难芯坎粏渭兪莿?dòng)物權(quán)益保護(hù)問(wèn)題也是科學(xué)本身發(fā)展的問(wèn)題，對(duì)于建立一個(gè)合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，使科研更人性化，科學(xué)技術(shù)更先進(jìn)化具有重要意義。目

8、前通過(guò)正式驗(yàn)證的替代方法有：急性毒性實(shí)驗(yàn)：如上、下法、固定劑量法；皮膚腐蝕性：大鼠皮膚經(jīng)皮電阻實(shí)驗(yàn)和人重組皮膚模型實(shí)驗(yàn)；皮膚變態(tài)反應(yīng)：小鼠局部淋巴結(jié)試驗(yàn)；皮膚光毒性：3T3中性紅攝取光毒實(shí)驗(yàn)，豬皮經(jīng)皮吸收實(shí)驗(yàn)，誘變和光誘變性實(shí)驗(yàn)；胚胎毒性：全胚胎培養(yǎng)、微團(tuán)實(shí)驗(yàn)和胚胎干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)等。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM12三、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則與方法(一)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原則 對(duì)照(Control) 重復(fù)(Repeat) 隨機(jī)(Random) Department of Heal

9、th ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM131.對(duì)照性原則 對(duì)照組：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不施加處理因素(實(shí)驗(yàn)因素)的組別。目的：1.消除或減少非實(shí)驗(yàn)因素的影響。 2.監(jiān)控實(shí)驗(yàn)條件。方式：自體對(duì)照、組間對(duì)照。 類(lèi)型：陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、溶劑對(duì)照 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM14溶劑與助溶劑選擇的基本要求1.無(wú)毒或?qū)嶋H無(wú)毒2.與受試物不起反應(yīng)，受試物在溶劑中穩(wěn)定3.對(duì)受試物的毒動(dòng)學(xué)與毒效學(xué)沒(méi)有影響4.無(wú)刺激性

10、或氣味 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用溶劑和賦形劑水： 所有途徑，首選 生理鹽水： 除皮膚與眼周外，所有的途徑乙醇： 用于皮膚與經(jīng)口，經(jīng)口限量為5ml/kg丙酮： 用于皮膚與經(jīng)口，經(jīng)口限量為5ml/kgDMSO： 用于所有途徑，濃度超過(guò)5可增強(qiáng)吸收甘油： 用于經(jīng)口、皮膚、ip、iv(其水溶液)玉米油： 用于經(jīng)口、皮膚、陰道、直腸、皮下聚乙二醇-400：作為助溶劑羧甲基纖維素：0.10.5%水溶液，用于經(jīng)口凡士林： 用于皮膚、陰道、直腸15 Department

11、of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM162.重復(fù)性原則重復(fù)：指精確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在相同的條件下的一致性，包含重現(xiàn)性和重復(fù)數(shù)兩方面的含義。 目的：估計(jì)試驗(yàn)誤差、增強(qiáng)樣本的代表性、提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 如何保證重復(fù)：1.嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件和可能的干擾因素；2.足夠數(shù)量的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM17實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣本數(shù)的一般估計(jì)試驗(yàn)動(dòng)物 資料類(lèi)型 所需動(dòng)物數(shù)目大、小鼠豚鼠

12、犬、豬計(jì)量資料 計(jì)數(shù)資料 計(jì)量資料 計(jì)數(shù)資料 計(jì)量資料 計(jì)數(shù)資料 1030820620 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM183.隨機(jī)性原則 隨機(jī)：總體中的所有個(gè)體被選取的機(jī)會(huì)均等。在抽樣研究中，樣本要想能代表總體，一個(gè)重要的原則就是隨機(jī)化，以實(shí)現(xiàn)樣本較好的代表性。 目的：減少或避免主觀因素的影響，提高樣本的代表性。隨機(jī)化的方法：抽簽法、隨機(jī)數(shù)字表、隨機(jī)函數(shù) Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1

13、/15/2022 5:56 PM19(二)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的主要方法1.配對(duì)設(shè)計(jì)：將受試動(dòng)物按一定條件配成對(duì)子，再隨機(jī)分配每對(duì)中的兩個(gè)受試動(dòng)物到不同的處理組。2.隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)：將受試動(dòng)物按一定的特征劃分為若干配伍組或區(qū)組，再將機(jī)每一配伍組中的各受試動(dòng)物隨機(jī)分配到不同的處理組。3.完全隨機(jī)設(shè)計(jì)：將受試動(dòng)物隨機(jī)地分配不同的處理組。4.拉丁方設(shè)計(jì)：按拉丁方陣型將受試動(dòng)物隨機(jī)的分配到各個(gè)處理組（涉及多個(gè)因素，且各個(gè)因素?zé)o交互作用、水平數(shù)相等）。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM20Par

14、t .動(dòng)物試驗(yàn)的基本操作技術(shù) Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM21無(wú)論選擇哪種種屬品系的動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，均要求選擇健康的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。健康動(dòng)物檢查時(shí)要求達(dá)到：外觀體形豐滿，被毛濃密有光澤、緊貼體表，眼睛明亮，行動(dòng)迅速，反應(yīng)靈活，食欲及營(yíng)養(yǎng)狀況良好。健康動(dòng)物的重要標(biāo)志如下: 1眼睛：明亮，瞳孔雙側(cè)等圓，無(wú)分泌物； 2耳：耳道無(wú)分泌物溢出，耳殼無(wú)膿瘡； 3鼻：無(wú)噴嚏，無(wú)漿性粘液分泌物； 4皮膚：無(wú)創(chuàng)傷、無(wú)膿瘡；疥癬、濕疹； 5頸部：要求頸項(xiàng)端正，如有歪斜提示可能存在內(nèi)耳疾患，不應(yīng)選作實(shí)

15、驗(yàn)動(dòng)物； 6消化道：無(wú)嘔吐、腹瀉，糞便成形，肛門(mén)附近被毛潔凈； 7神經(jīng)系統(tǒng)：無(wú)震顫、麻痹。若動(dòng)物(大鼠、小鼠)出現(xiàn)圓圈動(dòng)作或提尾倒置呈圓圈擺動(dòng)，應(yīng)放棄該動(dòng)物； 8四肢及尾、四肢、趾及尾：無(wú)紅腫及潰瘍。 (一)健康動(dòng)物的選擇 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM22根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇性別，實(shí)驗(yàn)如果對(duì)性別無(wú)特殊要求者，宜選雌雄動(dòng)物各半。（1）大、小鼠 依肛門(mén)與生殖孔間的距離區(qū)分,間距大者為雄性，小者為雌性。成年雄鼠臥位可見(jiàn)到睪丸，雌性在腹部可見(jiàn)乳頭。圖1-1 雌雄大、小鼠肛門(mén)與生殖孔間

16、距離 （二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別和日齡鑒定1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別鑒定 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM232.豚鼠：用一只手抓住豚鼠頸部，另一只手扒開(kāi)靠生殖器孔的皮膚，雄性動(dòng)物在圓孔中露出性器官的突起，雌性動(dòng)物則顯出三角形間隙，成年雌性豚鼠胸部有兩個(gè)乳頭。 3.家兔：將家兔頭輕輕夾在實(shí)驗(yàn)者左腋窩下，左手按住腰背部，右手拉開(kāi)尾并將尾巴夾在中指和無(wú)名指中間，然后用拇指和食指稍稍把生殖器扒開(kāi)。雄兔即可見(jiàn)到一圓孔中露出圓錐形稍向下彎曲的陰莖(但幼年雄兔看不的陰莖，只能看到圓孔中有凸起物，即是陰

17、莖)。雌兔此處則為一條朝向尾縫，呈橢圓形的間隙，間隙越向下越窄，此即為陰道開(kāi)口處。圖1-2 兔雌雄生殖器外形特征與差異 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM24日齡(d)體重(g)初生 1.854.0 10 6.015 11.020 15.02521.030 21.0不同日齡KM小鼠的體重2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(大、小鼠)的日齡鑒定 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM25不

18、同日齡SD大鼠的體重 日齡(d)體重(g)初生 6-71017-25 20 35-5030 55-9040 100-15050150-21060 170-24070210-27080240-320 注：月齡后，雄鼠取上限，雌鼠取下限。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM26正確地抓取固定動(dòng)物，是為了在不損害動(dòng)物健康、不影響觀察指標(biāo)、并防止被動(dòng)物咬傷的前提下，確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。 1.小鼠的抓取與固定 先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒?yàn)臺(tái)上向后拉，其向前爬行時(shí)，用左手拇指和食指抓

19、住小鼠的兩耳和頸部皮膚，將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，以無(wú)名指按住鼠尾，小指按住后腿即可固定（圖1-3、圖1-4）。該固定法常用作小鼠灌胃、腹腔注射、肌肉注射和皮下注射的實(shí)驗(yàn)操作。 圖1-3 在籠蓋上抓取小鼠 圖1-4 徒手固定小鼠圖 （三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取與固定方法 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM272.大鼠的抓取與固定 大鼠的抓取基本同小鼠，只是大鼠比小鼠性情兇猛，不易用襲擊方法抓取。為避免咬傷，可帶上帆布或棉紗手套。采用左手固定法，用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指緊捏鼠

20、背皮膚，置于左掌心中，這樣右手可進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)操作（圖1-5）。3.豚鼠的抓取與固定 豚鼠膽小易驚，在抓取時(shí)要穩(wěn)、準(zhǔn)、迅速。用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，另一只手托住臀部即可（圖1-6）圖1-5 大鼠的抓取與固定圖1-6 豚鼠抓取固定方法 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM281.動(dòng)物的編號(hào)與標(biāo)記 （四）動(dòng)物的編號(hào)及標(biāo)記方法根據(jù)不同的動(dòng)物、不同的實(shí)驗(yàn)需要和不同的實(shí)驗(yàn)方法選擇合適的標(biāo)記方法。不論采用何種標(biāo)記方法，應(yīng)遵守的基本原則是：號(hào)碼清楚、持久、簡(jiǎn)便、

21、易認(rèn)和適用。1）臨時(shí)性標(biāo)記（1）染色法：染色法是用化學(xué)劑在動(dòng)物身體明顯部位如被毛、四肢等處進(jìn)行涂染，或用不同顏色等來(lái)區(qū)別各組動(dòng)物，是實(shí)驗(yàn)室最常用、最容易掌握的方法。 常用的標(biāo)記液有：飽和苦味酸酒精溶液(黃色)。0.5%中性紅或堿性品紅溶液(紅色)。2%硝酸銀溶液。龍膽紫溶液(紫色)。煤焦油酒精溶液(黑色)。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU*29Take a break Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5

22、:56 PM30編號(hào)的方法：從頭頂部開(kāi)始，按從右至左順時(shí)針標(biāo)號(hào)。一般把頭頂部記為1號(hào)，右前腿處記為2號(hào)，右側(cè)腹部為3號(hào)，右后腿為4號(hào)，尾基部為5號(hào)，左后腿為6號(hào)，左側(cè)腹部為7號(hào)，左前腿為8號(hào)，腰背部中央為9號(hào)。若動(dòng)物編號(hào)超過(guò)10或更大數(shù)字時(shí)，可使 用上述兩種不同顏色的溶液，即把一種顏色作為個(gè)位數(shù)，另一種顏色作為十位數(shù)。這種交互使用可編到99號(hào)。此法主要用于大、小鼠、豚鼠和白色家兔。 圖 1-7 大小鼠的染色法標(biāo)記 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM31（2）涂漆或貼膠布：用油漆

23、在動(dòng)物角或體表涂漆進(jìn)行標(biāo)記，或用膠布貼在動(dòng)物腿上進(jìn)行標(biāo)記，也都是效果較好的臨時(shí)性標(biāo)記方法。 2）半永久性標(biāo)記（1）掛耳標(biāo)簽法：掛耳標(biāo)簽法可用來(lái)標(biāo)記多種動(dòng)物。市售的耳標(biāo)簽一般是由塑料、鋁或鋼片制成。使用耳標(biāo)簽時(shí)必須仔細(xì)挑選大小合適的耳標(biāo)簽。通常使用塑料制品。（2）戴項(xiàng)圈法：首先，將號(hào)碼沖壓在圓形或方形金屬牌上。金屬牌常用鋁板或不銹鋼制作，長(zhǎng)期使用不生銹。然后，將標(biāo)有號(hào)碼的金屬薄片固定在拴動(dòng)物的皮帶圈上，將此圈固定在動(dòng)物頸部。 3）永久性標(biāo)記（1）烙印法：（2）針刺法：（3）打耳孔法： Department of Health ToxicologySchool of Public Health,

24、CSU1/15/2022 5:56 PM32四、大小鼠常用的給藥途徑經(jīng)口給藥： 口服法、喂服法、灌胃法 經(jīng)呼吸道給藥： 吸入法(靜式、動(dòng)式)、氣管注入 經(jīng)皮膚給藥： 涂布給藥、浸尾給藥注射給藥： 腹腔注射、靜脈注射、皮下注射 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM33（1）喂飼法: 把藥物放入飼料或溶于飲水中讓動(dòng)物自動(dòng)攝取，此法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單方便，缺點(diǎn)是不能保證劑量準(zhǔn)確。一般適用于動(dòng)物疾病的防治、藥物的長(zhǎng)期毒性觀察，以及制造某些人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型等。（2）口服法: 實(shí)驗(yàn)者用左手從背部

25、向頭部夾緊動(dòng)物(如豚鼠、兔、犬等)，并用拇指和食指指分別捏緊左、右口角處，讓它開(kāi)口，右手(或助手)用鑷子夾住藥物送入舌根，關(guān)閉嘴唇，讓其咽下。（3）灌胃法：灌胃法是用灌胃器將所應(yīng)投給動(dòng)物的藥灌到動(dòng)物胃內(nèi)，此法劑量準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便、快速。缺點(diǎn)：對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成的機(jī)械性損傷和心理上的影響；實(shí)驗(yàn)人員有被咬傷的危險(xiǎn)性。常用灌胃量：小鼠0.2lml，大鼠14ml，豚鼠15ml。(一)經(jīng)口染毒 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM34大鼠、小鼠灌胃方法成年動(dòng)物插入的深度一般是：小鼠3cm，大鼠或

26、豚鼠5cm，兔約15cm，犬約20cm。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM35(二) 經(jīng)呼吸道給藥法(1)靜式吸入特點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)便、容易操作實(shí)驗(yàn)條件不穩(wěn)定只適應(yīng)于易揮發(fā)液態(tài)化合物或一定體積的氣態(tài)化合物測(cè)定。1.吸入給藥法系將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于一個(gè)有一定體積的密閉容器內(nèi)，加入定量的易揮發(fā)液態(tài)化合物或一定體積的氣態(tài)化合物，在容器內(nèi)形成所需要的受試化合物濃度的空氣環(huán)境。根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需濃度可用下述公式計(jì)算出應(yīng)加毒物的毫升數(shù)。 Department of Health ToxicologySch

27、ool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM36靜式給藥的裝置 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM37實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最低需氣量及不同體積染毒裝置放置動(dòng)物數(shù)（注：按接觸2小時(shí)計(jì)算 引自：湖南醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生學(xué)教研室，衛(wèi)生毒理學(xué)試驗(yàn)方法.北京：人民出版社.1971,46） 動(dòng)物種屬 呼吸通氣 最低需氣量 不同容積染毒柜放置動(dòng)物數(shù)（只）(L/小時(shí))(L/小時(shí)) 25L 50L100L300L小鼠1.45 3.453-5 6-10 12-1536-40大鼠

28、10.1830.50 1125615-18 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM38(2)動(dòng)式吸入動(dòng)式吸入染毒：由染毒柜、機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)和不斷補(bǔ)充受試化合物的配氣系統(tǒng)組成。 面罩吸入染毒：用一個(gè)特制的面罩密封實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的口鼻部分，使之與恒定供應(yīng)的受試物接觸。兩種方式：特點(diǎn)：基本穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)條件適應(yīng)于各種動(dòng)物設(shè)備較貴 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM39動(dòng)式染毒裝置 D

29、epartment of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM40動(dòng)式吸入染毒裝置 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM41面罩式吸入染毒裝置 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM422.氣管注入法在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被麻醉情況下，將已消毒滅菌的受試化合物(粉塵、混懸液或液體)注入氣管，使

30、之分布于左、右肺內(nèi)。這種方式多用于制造急性中毒模型。在經(jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)時(shí)多采用吸入給藥法，因?yàn)樗咏鼨C(jī)體實(shí)際接觸情況。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM43為了鑒定化學(xué)物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用經(jīng)皮膚染毒。 (三)經(jīng)皮膚染毒 1.斑貼法（家兔）：斑貼法染毒部位為脊柱兩側(cè)的背部皮膚，用脫毛劑脫去被毛，洗凈脫毛劑后，放回籠內(nèi)，至少待24h后才可使用。脫毛過(guò)程中應(yīng)特別注意不要損傷皮膚。次日，仔細(xì)檢查處理過(guò)的皮膚是否有刀傷或過(guò)度腐蝕的創(chuàng)口，以及

31、有無(wú)炎癥，過(guò)敏等現(xiàn)象。如有，應(yīng)暫緩使用，待動(dòng)物完全恢復(fù)。如皮膚準(zhǔn)備合乎要求，便可將動(dòng)物固定好，在脫毛區(qū)（2cm2左右）均勻涂布受試物，然后用二層紗布覆蓋，再用無(wú)刺激性膠帶固定，保證受試物與皮膚密切接觸，防止實(shí)驗(yàn)動(dòng)物舔食。涂布26h后（觀察時(shí)間視實(shí)驗(yàn)需要而定），用溫水將皮膚表面仔細(xì)洗凈，觀察皮膚反應(yīng)。 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM44大、小鼠可采用浸尾方式經(jīng)尾皮給藥，主要目的是定性地判斷藥物經(jīng)皮膚的吸收作用。先將動(dòng)物放人特制的固定盒內(nèi)，露出尾巴，再將尾巴通過(guò)小試管軟木塞小孔

32、，插入裝有藥液或受檢液體的試管內(nèi)，浸泡2-6h，并觀察其中毒癥狀。如果是有毒物，實(shí)驗(yàn)時(shí)要特別注意，避免實(shí)驗(yàn)人員因吸入受檢液所形成的有毒蒸氣而中毒。為此，要將試管的軟木塞塞緊，必要時(shí)可將受檢液表面加上一層液體石臘。 2.浸尾給藥：小鼠浸尾試驗(yàn)裝置 液體石蠟 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM451.皮內(nèi)注射：兔、豚鼠和大鼠的皮內(nèi)注射部位均為背部脊柱兩側(cè)的皮膚。 2.皮下注射：小鼠皮下注射時(shí)，通常選用頸背部皮膚。3.腹腔注射：左手用拇指和食指緊緊抓住頸部背側(cè)的松弛皮膚，手掌成杯狀緊

33、握鼠背使得腹部皮膚伸展，同時(shí)用小指壓住尾根，固定好動(dòng)物。使小鼠腹部抬高，右手將注射器的針頭(5號(hào))刺入皮膚。進(jìn)針部位是距離下腹部腹中線稍向左或右lmm的位置。針頭到達(dá)皮下后，繼續(xù)向前進(jìn)針35mm，再以45刺入腹肌，針尖通過(guò)腹肌后抵抗力消失，固定針尖，緩緩注入藥液。為避免刺破內(nèi)臟，應(yīng)將動(dòng)物頭部放低，尾部提高，使臟器移向橫膈處。小鼠的一次注射量為0.10.2ml/10g體重。4.肌肉注射法 5.靜脈注射法: 小鼠、大鼠尾靜脈注射 兔耳靜脈注射 (四)注射染毒 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM46大鼠、小鼠靜脈注射方法 Department of Health ToxicologySchool of Public Health, CSU1/15/2022 5:56 PM47注射方式 小鼠 大鼠 豚鼠 兔 狗 腹腔 0.21.0 13 25 510 515 肌肉 0.10.2 0.20.5 0.20.5 0.51 25 靜脈 0.20.5 12 15 310 515 皮下 0.10.5 0.51 0.52 13 310 幾種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同注射途徑常用注射量(ml) Department of Health ToxicologySchool of Pub