脂肪肝的實驗研究

1、1脂肪肝的實驗研究生理學(xué)與病理生理學(xué)系生理學(xué)與病理生理學(xué)系 林林 岷岷2n概述概述n脂肪肝的病因脂肪肝的病因n脂肪肝的發(fā)病機(jī)制脂肪肝的發(fā)病機(jī)制n脂肪肝實驗?zāi)Ｐ偷慕⒎椒ㄖ靖螌嶒災(zāi)Ｐ偷慕⒎椒╪脂肪肝的診斷脂肪肝的診斷n脂肪肝的防治脂肪肝的防治3概 述4 脂肪肝是僅次于病毒性肝炎的第二位脂肪肝是僅次于病毒性肝炎的第二位常見肝病，是二十一世紀(jì)肝病領(lǐng)域面臨的常見肝病，是二十一世紀(jì)肝病領(lǐng)域面臨的新挑戰(zhàn)。對于脂肪肝的防治不僅是一個醫(yī)新挑戰(zhàn)。對于脂肪肝的防治不僅是一個醫(yī)學(xué)問題，更是一個社會問題。脂肪肝已成學(xué)問題，更是一個社會問題。脂肪肝已成為消化、內(nèi)分泌、營養(yǎng)、心血管等多學(xué)科為消化、內(nèi)分泌、營養(yǎng)、心血管

2、等多學(xué)科共同關(guān)注的問題。共同關(guān)注的問題。 520112011年年7 7月月 重慶重慶 第四屆全國脂肪性肝病學(xué)術(shù)會議第四屆全國脂肪性肝病學(xué)術(shù)會議 解放軍解放軍302302醫(yī)院病理診斷與研究中心主醫(yī)院病理診斷與研究中心主任、軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士生導(dǎo)師任、軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士生導(dǎo)師趙景民教趙景民教授授指出，未來十年，我國將由指出，未來十年，我國將由“病毒性肝病毒性肝炎大國炎大國”轉(zhuǎn)為轉(zhuǎn)為“脂肪性肝病大國脂肪性肝病大國”，應(yīng)高，應(yīng)高度重視脂肪性肝病的防治度重視脂肪性肝病的防治 。6正常肝臟正常肝臟脂肪肝脂肪肝7脂肪肝大體標(biāo)本切面8大泡、小泡性肝大泡、小泡性肝脂肪變混雜脂肪變混雜小泡性肝脂肪變小泡性肝脂肪變

3、9重度肝脂肪變，脂變肝細(xì)胞達(dá)重度肝脂肪變，脂變肝細(xì)胞達(dá)90%10脂肪肝基本概念n狹義的定義狹義的定義 肝細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量（主要是肝細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量（主要是甘油三酯甘油三酯TGTG）肝臟濕重的）肝臟濕重的5%5%，或肝組織學(xué)上每單，或肝組織學(xué)上每單位面積位面積30%30%的肝實質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性時，的肝實質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性時，稱為稱為脂肪性肝病脂肪性肝病(fatty liver disease(fatty liver disease ，F(xiàn)LD)FLD)，簡稱，簡稱脂肪肝。脂肪肝。 11脂肪肝基本概念n廣義的定義廣義的定義 脂肪肝是遺傳環(huán)境代謝應(yīng)激相關(guān)因脂肪肝是遺傳環(huán)境代謝應(yīng)激相關(guān)因素所致的，病變

4、主體在肝小葉，以肝細(xì)胞素所致的，病變主體在肝小葉，以肝細(xì)胞脂肪變性為主的的臨床病理綜合征脂肪變性為主的的臨床病理綜合征12脂肪肝的分類n根據(jù)起病方式及病程分類根據(jù)起病方式及病程分類 急性脂肪肝：小泡性急性脂肪肝：小泡性 慢性脂肪肝：大泡性或混合性慢性脂肪肝：大泡性或混合性13脂肪肝的分類n根據(jù)病因分類根據(jù)病因分類 酒精性脂肪性肝病酒精性脂肪性肝?。╝lcoholic fatty liver alcoholic fatty liver disease, disease,AFLDAFLD) )非酒精性脂肪性肝病非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver non-alco

5、holic fatty liver disease, disease,NAFLDNAFLD) )酒精性脂肪肝（酒精性脂肪肝（AFL）酒精性肝炎酒精性肝炎酒精性肝纖維化酒精性肝纖維化酒精性肝硬化酒精性肝硬化單純性脂肪肝（單純性脂肪肝（NAFLNAFL）脂肪性肝炎（脂肪性肝炎（NASHNASH）脂肪性肝纖維化和肝硬化脂肪性肝纖維化和肝硬化14NASHNASH，脂變，脂變50%50%，匯管區(qū)，匯管區(qū)中度炎癥細(xì)胞浸潤（中度炎癥細(xì)胞浸潤（HEHE50)50)15脂肪肝的流行病學(xué)調(diào)查 及預(yù)后n非酒精性脂肪性肝?。ǚ蔷凭灾拘愿尾。∟AFLD）：）：80%n酒精性脂肪性肝?。ň凭灾拘愿尾。ˋFLD）：

6、）：5%n其余的是藥物性、中毒性、遺傳性、自身其余的是藥物性、中毒性、遺傳性、自身免疫性等脂肪肝免疫性等脂肪肝16NAFLDNAFLD的流行病學(xué)及預(yù)后的流行病學(xué)及預(yù)后n歐美、日本成人歐美、日本成人NAFLDNAFLD檢出率檢出率20203333，其中至少其中至少1015%1015%為為NASHNASHnNAFLDNAFLD已成為西歐、美國、澳大利亞、日已成為西歐、美國、澳大利亞、日本第一大慢性肝病及肝酶異常的首要病因本第一大慢性肝病及肝酶異常的首要病因n亞太地區(qū)亞太地區(qū)NAFLDNAFLD檢出率檢出率1212242417NAFLDNAFLD的流行病學(xué)及預(yù)后的流行病學(xué)及預(yù)后n代謝綜合征（代謝綜合

7、征（MSMS）可使）可使NAFLDNAFLD患病風(fēng)險增患病風(fēng)險增加加411411倍倍nNAFLDNAFLD可使糖尿病發(fā)生風(fēng)險增加可使糖尿病發(fā)生風(fēng)險增加3.8113.811倍倍n肥胖者：肥胖者： NAFLNAFL發(fā)生率發(fā)生率6090%6090%，NASHNASH為為2025%2025%，肝硬化，肝硬化28%28%n糖尿病和高脂血癥患者糖尿病和高脂血癥患者NAFLDNAFLD檢出率分別檢出率分別為為2178%2178%、2792%,2792%,肥胖肥胖2 2型糖尿病患者型糖尿病患者可達(dá)可達(dá)50%70%50%70%，且多為中度以上，且多為中度以上18流行病學(xué)n研究顯示：研究顯示：2型糖尿病患者是脂肪

8、肝的高發(fā)人群型糖尿病患者是脂肪肝的高發(fā)人群2型糖尿病患者患型糖尿病患者患NASH危險性比一般人高危險性比一般人高2.6倍倍19中國脂肪肝的流行病學(xué)調(diào)查中國脂肪肝的流行病學(xué)調(diào)查 范建高，世界華人消化雜志，01年第1期；中華消化雜志，02年第2期n818818名北京市干部：名北京市干部：18.3%18.3%n40094009名上海市職員：名上海市職員：12.8%12.8%n10501050名北京市職工：名北京市職工：11.011.0n11191119名南京市干部：名南京市干部：10.2%10.2%n1137211372名紹興市職工：名紹興市職工：9.58%9.58%n30153015名杭州市工人：

9、名杭州市工人：5.2%5.2%n41004100名大慶油田工人：名大慶油田工人：5.15%5.15%n四川四川1010個寺廟和尚：個寺廟和尚：0.27%0.27%n來自廣州的一項長達(dá)來自廣州的一項長達(dá)3年的隊列研究顯示，年的隊列研究顯示，2003年年NAFLD患病率為患病率為16.3%，而，而2008年則高達(dá)年則高達(dá)20.5%20n20112011年，北京地壇醫(yī)院副院長、軍事醫(yī)學(xué)年，北京地壇醫(yī)院副院長、軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院博導(dǎo)科學(xué)院博導(dǎo)成軍教授成軍教授對對北京市居民（北京市居民（37623762名）名）FLDFLD患病率患病率及其危險因素流行病學(xué)調(diào)查及其危險因素流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示：結(jié)果顯示： 北京

10、市常住居民北京市常住居民 FLDFLD35.1%35.1% NAFLD NAFLD31.0%31.0% AFLD AFLD4.1% 4.1% 在過去的在過去的710710年，中國發(fā)達(dá)地區(qū)成人年，中國發(fā)達(dá)地區(qū)成人脂肪肝患病率增加了一倍脂肪肝患病率增加了一倍21NAFLDNAFLD的預(yù)后的預(yù)后nNAFLNAFL近期預(yù)后良好近期預(yù)后良好nNAFLNAFL有有1240%1240%患者患者813813年進(jìn)展為年進(jìn)展為NASHNASHnNASHNASH約有約有25%25%患者在患者在813813年發(fā)展為脂肪年發(fā)展為脂肪性肝硬化性肝硬化n脂肪性肝硬化患者發(fā)生原發(fā)性肝細(xì)胞癌、脂肪性肝硬化患者發(fā)生原發(fā)性肝細(xì)胞癌

11、、肝功能衰竭的概率高達(dá)肝功能衰竭的概率高達(dá)3040%3040%22NAFLDNAFLD相關(guān)腫瘤相關(guān)腫瘤n20142014年上海國際消化系統(tǒng)疾病會議：年上海國際消化系統(tǒng)疾病會議： 福建漳州報道福建漳州報道1 1例手術(shù)證實例手術(shù)證實NAFLDNAFLD相關(guān)肝癌，癌相關(guān)肝癌，癌旁組織并無肝硬化。旁組織并無肝硬化。 美國國立衛(wèi)生研究院的美國國立衛(wèi)生研究院的Bin GaoBin Gao教授也有類似的教授也有類似的報道報道 提示提示：NAFLDNAFLD可以不經(jīng)過肝纖維化、肝硬化就發(fā)生可以不經(jīng)過肝纖維化、肝硬化就發(fā)生肝癌肝癌 有研究表明，有研究表明， NAFLDNAFLD與多種腫瘤的發(fā)生相關(guān)，與多種腫瘤的

12、發(fā)生相關(guān)，包括直腸癌、乳腺癌等，也是目前研究的一項熱點包括直腸癌、乳腺癌等，也是目前研究的一項熱點23非酒精性脂肪肝的病情演變非酒精性脂肪肝的病情演變脂肪肝脂肪肝纖維化纖維化肝硬化肝硬化脂肪堆積致肝脂肪堆積致肝腫大腫大可逆轉(zhuǎn)可逆轉(zhuǎn)纖維組織形成纖維組織形成纖維組織無法纖維組織無法逆轉(zhuǎn)逆轉(zhuǎn)結(jié)締組織生成破壞結(jié)締組織生成破壞肝細(xì)胞肝細(xì)胞病變不可逆轉(zhuǎn)病變不可逆轉(zhuǎn)24酒精性肝病酒精性肝病ALDALD的流行病學(xué)及預(yù)后的流行病學(xué)及預(yù)后n歐美國家嗜酒人群中歐美國家嗜酒人群中ALDALD患病率高達(dá)患病率高達(dá)84%84%，其中其中2030%2030%發(fā)展為肝硬化發(fā)展為肝硬化n在美國，在美國，ALDALD為慢性肝病最

13、常見病因，每年為慢性肝病最常見病因，每年 1.521.52萬人死于萬人死于ALDALDn我國居民我國居民ALDALD發(fā)病率為發(fā)病率為45%45%，北方南方，北方南方n女性對酒精敏感性高，但由于男性嗜酒者多女性對酒精敏感性高，但由于男性嗜酒者多見，見，ALDALD男女比例約男女比例約2:12:125酒精性肝病ALD的診斷標(biāo)準(zhǔn)第一條：n有長期飲酒史，一般超過有長期飲酒史，一般超過5 5年，年， 折合乙醇量折合乙醇量40g/d40g/d，女性，女性20g/d20g/d； 或或2 2周內(nèi)有大量飲酒史（周內(nèi)有大量飲酒史（80g/d80g/d）26 酒精量： 飲酒量飲酒量酒精度（酒精度（%）0.8n以56

14、度二鍋頭為例 飲用180ml就超過80g 飲用700ml就超過300g*喜力啤酒1000ml40g27ALDALD的流行病學(xué)及預(yù)后的流行病學(xué)及預(yù)后n酒精量酒精量80160g/d80160g/d，其發(fā)生率增長，其發(fā)生率增長525525倍倍 酒精量酒精量300g/d300g/d，8 8天后就出現(xiàn)酒精性脂肪肝天后就出現(xiàn)酒精性脂肪肝nAFLDAFLD比比NAFLD NAFLD 患者患者1010年內(nèi)肝硬化發(fā)生率顯年內(nèi)肝硬化發(fā)生率顯著增高（著增高（20%20%對對1%1%） * * *美國胃腸病學(xué)會統(tǒng)計，男性平均每天飲用美國胃腸病學(xué)會統(tǒng)計，男性平均每天飲用80g80g酒精，可能在酒精，可能在1010年內(nèi)發(fā)

15、生肝硬化，而女年內(nèi)發(fā)生肝硬化，而女性消耗同等量酒精，性消耗同等量酒精，5 5年內(nèi)就發(fā)生肝硬化年內(nèi)就發(fā)生肝硬化28脂肪肝的病因29一、營養(yǎng)性因素一、營養(yǎng)性因素1 1、肥胖病、肥胖病 NAFLDNAFLD最常見和最肯定的病因最常見和最肯定的病因 肥胖伴酗酒者脂肪肝發(fā)生率達(dá)肥胖伴酗酒者脂肪肝發(fā)生率達(dá)90%90%以上以上2 2、胃腸外營養(yǎng)、胃腸外營養(yǎng) 全胃腸外營養(yǎng)持續(xù)時間過長可導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變?nèi)改c外營養(yǎng)持續(xù)時間過長可導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變和和NASHNASH3 3、營養(yǎng)不良、營養(yǎng)不良 蛋白質(zhì)攝入不足或吸收不良，或膽堿、卵磷脂等蛋白質(zhì)攝入不足或吸收不良，或膽堿、卵磷脂等缺乏缺乏30二、化學(xué)性致病因素二、化學(xué)

16、性致病因素1 1、工業(yè)毒物、工業(yè)毒物 苯、二氯甲烷、二氯乙烯、鋇鹽等苯、二氯甲烷、二氯乙烯、鋇鹽等 NAFLNAFL CClCCl4 4、砷化物、三氯甲烷、磷等、砷化物、三氯甲烷、磷等 肝細(xì)胞壞死合并脂肪變肝細(xì)胞壞死合并脂肪變2 2、藥物、藥物 長期使用糖皮質(zhì)激素、大量四環(huán)素、雌激素制劑、長期使用糖皮質(zhì)激素、大量四環(huán)素、雌激素制劑、氨甲喋呤、胺碘酮等氨甲喋呤、胺碘酮等3 3、酒精中毒：、酒精中毒：90%90%酒精在肝臟轉(zhuǎn)化為乙醛酒精在肝臟轉(zhuǎn)化為乙醛31三、內(nèi)分泌代謝因素三、內(nèi)分泌代謝因素1 1、糖尿病、糖尿病 2 2型糖尿病型糖尿病5070%5070%合并脂肪肝，且大多為中度合并脂肪肝，且大多

17、為中度或中度以上的脂肪肝或中度以上的脂肪肝 NAFLDNAFLD與胰島素抵抗（與胰島素抵抗（IRIR）、高胰島素血癥有）、高胰島素血癥有較強的關(guān)聯(lián)較強的關(guān)聯(lián)2 2、高脂血癥、高脂血癥 關(guān)系最密切的是高甘油三酯血癥，脂肪肝發(fā)病率關(guān)系最密切的是高甘油三酯血癥，脂肪肝發(fā)病率為為6080%6080%，常伴有肥胖和糖尿病，常伴有肥胖和糖尿病3 3、皮質(zhì)醇增多癥、妊娠等亦可導(dǎo)致脂肪肝、皮質(zhì)醇增多癥、妊娠等亦可導(dǎo)致脂肪肝32四、生物性致病因素四、生物性致病因素 肝炎病毒肝炎病毒HBVHBV和和HCVHCV感染可引起脂肪肝感染可引起脂肪肝 特別是特別是HCVHCV感染患者中感染患者中80%80%伴脂肪肝伴脂肪

18、肝五、遺傳因素五、遺傳因素 先天性代謝性肝?。焊味?fàn)詈俗冃?、半乳糖血癥、先天性代謝性肝?。焊味?fàn)詈俗冃?、半乳糖血癥、 肝糖原貯積病等肝糖原貯積病等 遺傳易感性：肥胖、糖尿病、原發(fā)性高脂血癥遺傳易感性：肥胖、糖尿病、原發(fā)性高脂血癥六、其他六、其他 免疫性疾病如免疫性疾病如SLESLE、自身免疫性肝炎等、自身免疫性肝炎等 部分病因不明脂肪肝部分病因不明脂肪肝隱源性脂肪肝隱源性脂肪肝33酒精中毒、肥胖、糖尿病酒精中毒、肥胖、糖尿病 脂肪肝的三大病因脂肪肝的三大病因34脂肪肝的發(fā)病機(jī)制3519981998年年DayDay提出的提出的“二次打擊二次打擊”學(xué)說學(xué)說n第一次打擊第一次打擊 各種病因作用各種病

19、因作用 肝細(xì)胞脂肪代謝異常，肝內(nèi)脂肪沉積肝細(xì)胞脂肪代謝異常，肝內(nèi)脂肪沉積n第二次打擊第二次打擊 肝細(xì)胞脂肪變性肝細(xì)胞脂肪變性 脂肪性肝炎、肝纖維化脂肪性肝炎、肝纖維化氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化、氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化、細(xì)胞因子等作用下細(xì)胞因子等作用下36NAFLDNAFLD的發(fā)病機(jī)制的發(fā)病機(jī)制n脂質(zhì)代謝障礙脂質(zhì)代謝障礙n激素的作用：激素的作用： 胰島素抵抗（胰島素抵抗（IRIR） 瘦素抵抗瘦素抵抗n氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化損傷氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化損傷n細(xì)胞因子的作用細(xì)胞因子的作用第一次打擊第一次打擊第二次打擊第二次打擊37肝臟在脂肪代謝中占據(jù)中心地位肝臟在脂肪代謝中占據(jù)中心地位饑餓饑餓脂庫脂肪動員脂庫脂肪

20、動員脂肪酸脂肪酸肝臟肝臟 - -氧化氧化酮體酮體肝外組織肝外組織（腦、肌肉）利用（腦、肌肉）利用輸出輸出飽食飽食葡萄糖代謝葡萄糖代謝乙酰乙酰CoA合成合成脂肪酸、膽固醇脂肪酸、膽固醇VLDL （TG+膽固醇膽固醇+磷脂磷脂+載脂蛋白）載脂蛋白）脂肪組織貯存脂肪組織貯存輸出輸出38- -氧化氧化脂肪酸脂酰輔酶A線粒體線粒體-氧化氧化乙酰輔酶乙酰輔酶A三羧酸循環(huán)三羧酸循環(huán)酮體酮體肝外組織肝外組織氧化供能氧化供能左旋肉堿左旋肉堿39脂質(zhì)代謝障礙脂質(zhì)代謝障礙1 1、血中游離脂肪酸（、血中游離脂肪酸（FFAFFA）增加）增加2 2、碳水化合物攝取過多、碳水化合物攝取過多3 3、肝細(xì)胞線粒體、肝細(xì)胞線粒體

21、- -氧化障礙氧化障礙4 4、VLDLVLDL合成障礙合成障礙40胰島素抵抗（胰島素抵抗（IRIR） NAFLDNAFLD的發(fā)病機(jī)制的發(fā)病機(jī)制n定義：指胰島素作用的靶組織或靶器官（主要指胰島素作用的靶組織或靶器官（主要是肝臟、肌肉和脂肪組織）對胰島素生物作用的是肝臟、肌肉和脂肪組織）對胰島素生物作用的敏感性下降，即正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常敏感性下降，即正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)n原因：胰島素生物活性下降胰島素生物活性下降，或靶器官、靶組或靶器官、靶組織上的受體障礙及受體下調(diào)，或受體后缺陷，對織上的受體障礙及受體下調(diào)，或受體后缺陷，對胰島素表現(xiàn)為一定

22、的抵抗性，敏感性下降胰島素表現(xiàn)為一定的抵抗性，敏感性下降* * *IRIR是代謝綜合征的是代謝綜合征的“共同土壤共同土壤”41n胰島素是調(diào)節(jié)脂肪合成的主要激素胰島素是調(diào)節(jié)脂肪合成的主要激素胰島素胰島素胰島素抵抗（胰島素抵抗（IRIR） NAFLDNAFLD的發(fā)病機(jī)制的發(fā)病機(jī)制脂肪組織內(nèi)的脂肪組織內(nèi)的激素敏感性脂肪酶激素敏感性脂肪酶脂肪動員脂肪動員（- -）（- -）脂肪組織內(nèi)的脂肪組織內(nèi)的脂蛋白脂酶脂蛋白脂酶脂肪酸進(jìn)入脂肪脂肪酸進(jìn)入脂肪組織合成與貯存組織合成與貯存（+ +）（+ +）血中游離脂肪酸血中游離脂肪酸42IRIR胰島素抵抗（胰島素抵抗（IRIR） NAFLDNAFLD的發(fā)病機(jī)制的發(fā)病

23、機(jī)制激素敏感性脂肪酶激素敏感性脂肪酶（TG脂酶）活性增強脂酶）活性增強脂肪動員脂肪動員脂蛋白脂酶脂蛋白脂酶活性降低活性降低脂肪組織合成脂肪組織合成與貯存與貯存血中游離血中游離脂肪酸脂肪酸肝內(nèi)肝內(nèi)TG合成合成入肝入肝脂肪肝脂肪肝43n瘦素是肥胖基因（瘦素是肥胖基因（obob基因）表達(dá)的蛋白質(zhì)類激素，基因）表達(dá)的蛋白質(zhì)類激素，主要由白色脂肪組織分泌合成主要由白色脂肪組織分泌合成n作用：抑制食欲、減少能量攝入、抑制脂肪合成、作用：抑制食欲、減少能量攝入、抑制脂肪合成、 增加能量消耗增加能量消耗 * * *瘦素抵抗患者瘦素抵抗患者 （1 1）食欲增強，脂肪合成增多，肥胖）食欲增強，脂肪合成增多，肥胖

24、（2 2）高瘦素血癥，干擾胰島素的生理功能，誘）高瘦素血癥，干擾胰島素的生理功能，誘 導(dǎo)導(dǎo)IR IR ，促進(jìn)肝內(nèi)脂肪貯積，促進(jìn)肝內(nèi)脂肪貯積瘦素抵抗瘦素抵抗 NAFLDNAFLD的發(fā)病機(jī)的發(fā)病機(jī)制制44氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化損傷氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化損傷 NAFLDNAFLD的發(fā)病機(jī)制的發(fā)病機(jī)制n肝組織內(nèi)脂肪酸和肝組織內(nèi)脂肪酸和TGTG增多增多 線粒體線粒體- -氧氧化速度代償性化速度代償性 活性氧（活性氧（ROSROS） ROS 激活磷脂酶激活磷脂酶A A2 2 膜磷脂膜磷脂 花生四烯酸花生四烯酸 PGPG、LTLT等等 激活激活NF-NF-B B： 細(xì)胞因子表達(dá)增強細(xì)胞因子表達(dá)增強 TNFTNF

25、、IL-8IL-8等等 O O2 2 OH OH 1 1O O2 2 H H2 2O O2 2脂質(zhì)過氧化反應(yīng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)生物膜結(jié)構(gòu)功能破壞生物膜結(jié)構(gòu)功能破壞抑制膜蛋白功能抑制膜蛋白功能線粒體損傷線粒體損傷炎炎癥癥反反應(yīng)應(yīng)+ +不飽和脂肪酸不飽和脂肪酸45細(xì)胞因子的作用細(xì)胞因子的作用 NAFLDNAFLD的發(fā)病機(jī)制的發(fā)病機(jī)制肝組織脂肪酸、肝組織脂肪酸、ROSROS增多增多激活激活KupfferKupffer細(xì)胞細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子如釋放大量細(xì)胞因子如TNFTNF、TGF-1TGF-1、PDGFPDGF等等肝細(xì)胞炎癥、壞死、肝細(xì)胞炎癥、壞死、肝纖維化肝纖維化46細(xì)胞因子的作用細(xì)胞因子的作用 NA

26、FLDNAFLD的發(fā)病機(jī)制的發(fā)病機(jī)制n轉(zhuǎn)化生長因子（轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-1TGF-1） 肝纖維化主要始動因子之一肝纖維化主要始動因子之一 TGF-1 TGF-1 肝星狀細(xì)胞（肝星狀細(xì)胞（HSCHSC）活化增殖）活化增殖 肌成纖維細(xì)胞并分泌膠原纖維肌成纖維細(xì)胞并分泌膠原纖維n血小板衍生生長因子血小板衍生生長因子 （PDGFPDGF） 目前已知的目前已知的HSCHSC最強的絲裂原，能刺激最強的絲裂原，能刺激HSCHSC活化增活化增殖轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生殖轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生47酒精性脂肪肝的發(fā)病機(jī)制n長期大量攝入酒精是導(dǎo)致長期大量攝入酒精是導(dǎo)致ALDALD的主

27、要原因的主要原因n酒精對肝臟直接毒性作用酒精對肝臟直接毒性作用n氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化的作用氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化的作用n細(xì)胞因子的作用細(xì)胞因子的作用第一次打擊第一次打擊第二次打擊第二次打擊48酒精對肝臟直接毒性作用酒精對肝臟直接毒性作用 AFLDAFLD發(fā)病機(jī)制發(fā)病機(jī)制乙醇乙醇乙醛乙醛乙酸乙酸乙醇脫氫酶乙醇脫氫酶ADH微粒體乙醇氧化酶系微粒體乙醇氧化酶系MEOSNAD+NADH乙醛脫氫酶乙醛脫氫酶NAD+NADH促進(jìn)自由基產(chǎn)生，促進(jìn)膜的脂質(zhì)過氧化促進(jìn)自由基產(chǎn)生，促進(jìn)膜的脂質(zhì)過氧化與丙二醛（與丙二醛（MDAMDA）等形成加合物）等形成加合物 損傷肝臟損傷肝臟抑制抑制VLDLVLDL合成合成 肝內(nèi)肝

28、內(nèi)TGTG轉(zhuǎn)運障礙，肝轉(zhuǎn)運障礙，肝TGTG堆積堆積乙醛乙醛NADH/NADNADH/NAD+ + 抑制線粒體三羧酸循環(huán)抑制線粒體三羧酸循環(huán) - -氧化氧化 肝內(nèi)肝內(nèi)TGTG堆積堆積49氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化損傷氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化損傷 AFLDAFLD發(fā)病機(jī)制發(fā)病機(jī)制n酒精含量高時，其代謝主要由微粒體乙醇酒精含量高時，其代謝主要由微粒體乙醇氧化酶系（氧化酶系（MEOSMEOS）起作用）起作用nMEOSMEOS主要成分為細(xì)胞色素主要成分為細(xì)胞色素P450 2E1P450 2E1（CYP2E1CYP2E1），在酒精誘導(dǎo)下活化，產(chǎn)生大），在酒精誘導(dǎo)下活化，產(chǎn)生大量量ROSROS，引發(fā)，引發(fā)氧化應(yīng)激和脂

29、質(zhì)過氧化氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化，造成，造成肝組織炎癥、細(xì)胞損傷肝組織炎癥、細(xì)胞損傷50細(xì)胞因子的作用細(xì)胞因子的作用 AFLDAFLD發(fā)病機(jī)制發(fā)病機(jī)制nROSROS等激活等激活KupfferKupffer細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子如如TGF-1TGF-1、PDGFPDGF等等 促進(jìn)肝纖維化促進(jìn)肝纖維化* * * TNFTNF在在ALDALD中占重要地位中占重要地位 長期大量飲酒長期大量飲酒 腸道菌群過度生長，腸粘膜屏障腸道菌群過度生長，腸粘膜屏障通透性通透性 腸細(xì)菌移位腸細(xì)菌移位 腸源性內(nèi)毒素血癥腸源性內(nèi)毒素血癥 激活激活KupfferKupffer細(xì)胞釋放大量細(xì)胞釋放大量TNFTN

30、F 組織炎癥反應(yīng)、肝細(xì)胞凋亡、壞死組織炎癥反應(yīng)、肝細(xì)胞凋亡、壞死 激活中性粒細(xì)胞，增加激活中性粒細(xì)胞，增加ROSROS的生成的生成51脂肪肝實驗?zāi)Ｐ偷闹靖螌嶒災(zāi)Ｐ偷慕⒎椒ń⒎椒?2理想的實驗?zāi)Ｐ屠硐氲膶嶒災(zāi)Ｐ蚽與人類疾病特征相似與人類疾病特征相似n病變有一定發(fā)展過程，與人類發(fā)病過程相似病變有一定發(fā)展過程，與人類發(fā)病過程相似n形成率高，動物死亡率低，重復(fù)性好形成率高，動物死亡率低，重復(fù)性好n造模方法簡單易行，對實驗人員無傷害造模方法簡單易行，對實驗人員無傷害n造模停止后組織學(xué)病變逆轉(zhuǎn)緩慢，便于藥物造模停止后組織學(xué)病變逆轉(zhuǎn)緩慢，便于藥物干預(yù)研究干預(yù)研究53脂肪肝實驗?zāi)Ｐ椭靖螌嶒災(zāi)Ｐ蚽NAF

31、LDnAFLD特殊品系脂肪肝動物模型特殊品系脂肪肝動物模型營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型毒物或藥物性脂肪肝動物模型毒物或藥物性脂肪肝動物模型體外誘導(dǎo)模型體外誘導(dǎo)模型復(fù)合模型復(fù)合模型急性酒精性肝病動物模型急性酒精性肝病動物模型慢性酒精性肝病動物模型慢性酒精性肝病動物模型體外誘導(dǎo)模型體外誘導(dǎo)模型54特殊品系脂肪肝動物模型特殊品系脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型 （基因突變或基因敲除）（基因突變或基因敲除）1、ob/ob小鼠、小鼠、db/db小鼠（或小鼠（或fa/fa大鼠）大鼠）ob/obob/ob小鼠小鼠obob基因自發(fā)突變基因自發(fā)突變db/dbdb/db小鼠小鼠dbdb基因自

32、發(fā)突變基因自發(fā)突變fa/fafa/fa大鼠大鼠fafa基因自發(fā)突變基因自發(fā)突變瘦素受體缺乏瘦素受體缺乏* * *可出現(xiàn)與人類可出現(xiàn)與人類NAFLDNAFLD相似的特征：相似的特征： 過度攝食、肥胖、高脂血癥、高胰島素血癥等過度攝食、肥胖、高脂血癥、高胰島素血癥等55n特點特點：該模型雖有明顯的該模型雖有明顯的IRIR，但不能自發(fā)地由單，但不能自發(fā)地由單 純性脂肪肝發(fā)展為純性脂肪肝發(fā)展為NASHNASH、肝纖維化、肝纖維化n解決方案解決方案：+ +蛋氨酸蛋氨酸- -膽堿缺乏（膽堿缺乏（MCDMCD）飲食、）飲食、 或內(nèi)毒素、或酒精、或高脂飲食、或再灌或內(nèi)毒素、或酒精、或高脂飲食、或再灌 注損傷方

33、可演變?yōu)樽p傷方可演變?yōu)镹ASHNASH、肝纖維化、肝纖維化n意義意義：研究由肝脂肪變向研究由肝脂肪變向NASHNASH進(jìn)展、進(jìn)展、 NASHNASH向向 纖維化進(jìn)展的良好模型纖維化進(jìn)展的良好模型56特殊品系脂肪肝動物模型特殊品系脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型2 2、幼齡內(nèi)臟脂肪變小鼠（、幼齡內(nèi)臟脂肪變小鼠（JVSJVS）模型）模型 系統(tǒng)性肉毒堿缺乏模型系統(tǒng)性肉毒堿缺乏模型表現(xiàn)表現(xiàn)：出生出生328328天，小鼠生長緩慢，肝腫大，肝天，小鼠生長緩慢，肝腫大，肝 細(xì)胞脂肪變性細(xì)胞脂肪變性機(jī)理機(jī)理：肉毒堿是轉(zhuǎn)運脂肪酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行肉毒堿是轉(zhuǎn)運脂肪酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行氧化氧化 所必須的物質(zhì)。所必須的物

34、質(zhì)。57特殊品系脂肪肝動物模型特殊品系脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型3 3、FLSFLS小鼠模型小鼠模型 19991999年年SogaSoga等用同系交配法建立了一種等用同系交配法建立了一種無過度攝無過度攝食、不出現(xiàn)肥胖和糖尿病食、不出現(xiàn)肥胖和糖尿病而伴有脂肪肝的新品種。而伴有脂肪肝的新品種。 表現(xiàn)表現(xiàn)：新生的：新生的FLSFLS小鼠的肝細(xì)胞內(nèi)即有細(xì)小的脂肪顆小鼠的肝細(xì)胞內(nèi)即有細(xì)小的脂肪顆粒聚集，隨年齡增長進(jìn)行性加重，肝臟粒聚集，隨年齡增長進(jìn)行性加重，肝臟 TGTG含量較同含量較同齡小鼠升高齡小鼠升高5 5倍，伴倍，伴ALTALT和和ASTAST增高、炎癥反應(yīng)，而增高、炎癥反應(yīng)，而血脂無異

35、常血脂無異常。 1212個月多自發(fā)形成肝細(xì)胞癌（個月多自發(fā)形成肝細(xì)胞癌（HCCHCC），但），但未見未見肝硬化肝硬化意義意義：可作為人類非肥胖、糖尿病而伴有脂肪肝和人：可作為人類非肥胖、糖尿病而伴有脂肪肝和人類類NASHNASH相關(guān)相關(guān)HCCHCC機(jī)制研究的模型機(jī)制研究的模型58特殊品系脂肪肝動物模型特殊品系脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型n特殊品系動物模型因基因突變或缺失，引特殊品系動物模型因基因突變或缺失，引起脂肪代謝障礙，能自發(fā)形成脂肪肝起脂肪代謝障礙，能自發(fā)形成脂肪肝n缺點缺點： 1 1、可建立先天性和幼年型脂肪肝模型，但不適、可建立先天性和幼年型脂肪肝模型，但不適于后天營養(yǎng)障礙所致

36、的脂肪肝的研究于后天營養(yǎng)障礙所致的脂肪肝的研究 2 2、多缺乏、多缺乏NASHNASH和肝纖維化的自然演變過程，僅和肝纖維化的自然演變過程，僅適合適合NAFLDNAFLD特定發(fā)病機(jī)制的研究特定發(fā)病機(jī)制的研究3 3、實驗動物成本高，來源較困難，死亡率高，缺、實驗動物成本高，來源較困難，死亡率高，缺乏廣泛應(yīng)用的可行性乏廣泛應(yīng)用的可行性59營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型1 1、蛋氨酸、蛋氨酸- -膽堿缺乏（膽堿缺乏（MCDMCD）飲食模型）飲食模型 國際上經(jīng)典的國際上經(jīng)典的NASHNASH動物模型動物模型機(jī)理機(jī)理：蛋氨酸、膽堿缺乏導(dǎo)致線粒體蛋氨酸、膽堿缺乏導(dǎo)致線

37、粒體-氧化障礙、氧化障礙、 VLDLVLDL合成減少合成減少表現(xiàn)表現(xiàn)：MCDMCD飲食小鼠，飲食小鼠，2 2周后形成周后形成NASHNASH， 肝內(nèi)可見肝內(nèi)可見活化的巨噬細(xì)胞浸潤，伴活化的巨噬細(xì)胞浸潤，伴NF-NF-B B激活、炎性細(xì)胞激活、炎性細(xì)胞因子、粘附分子等表達(dá)增加，因子、粘附分子等表達(dá)增加，12W12W出現(xiàn)肝纖維化出現(xiàn)肝纖維化特點特點：MCDMCD飲食模型有明顯的氧化應(yīng)激、線粒體損飲食模型有明顯的氧化應(yīng)激、線粒體損傷及細(xì)胞凋亡；與人類傷及細(xì)胞凋亡；與人類NASHNASH相比，動物多出現(xiàn)相比，動物多出現(xiàn)ALTALT過高、過高、TGTG過低、不引起過低、不引起IRIR等表現(xiàn)等表現(xiàn)60意義

38、意義：用于用于NSAHNSAH及肝纖維化的機(jī)制及藥物篩選、藥及肝纖維化的機(jī)制及藥物篩選、藥物干預(yù)研究，并為非肥胖而伴物干預(yù)研究，并為非肥胖而伴NASHNASH等特殊脂肪營等特殊脂肪營養(yǎng)障礙疾病提供研究思路養(yǎng)障礙疾病提供研究思路缺點缺點：MCDMCD飲食價格昂貴，且不符合人類膳食結(jié)構(gòu)飲食價格昂貴，且不符合人類膳食結(jié)構(gòu)61營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型2 2、高脂飲食（、高脂飲食（HFDHFD）模型）模型 國內(nèi)最常用的模型國內(nèi)最常用的模型配方配方：多種，構(gòu)造原理基本一致，主要差別在于飲多種，構(gòu)造原理基本一致，主要差別在于飲食中脂肪占供能物質(zhì)的比例不等（食中脂肪

39、占供能物質(zhì)的比例不等（10%71%10%71%），），含或不含高碳水化合物含或不含高碳水化合物特點特點： A A、造模周期長，約、造模周期長，約412W412W，甚至半年，成功率高，甚至半年，成功率高 B B、病變有一定的發(fā)展過程，在發(fā)病機(jī)制、臨床表、病變有一定的發(fā)展過程，在發(fā)病機(jī)制、臨床表現(xiàn)上與人類現(xiàn)上與人類NAFLD NAFLD 最相似，且多合并肥胖、最相似，且多合并肥胖、IRIR等等62高脂飲食常用配方高脂飲食常用配方A、華天懿等：高脂飼料喂養(yǎng)大鼠華天懿等：高脂飼料喂養(yǎng)大鼠12W12W 基礎(chǔ)飼料基礎(chǔ)飼料50% +50% +豬油豬油10%+10%+奶粉奶粉10%+10%+雞蛋雞蛋30%30

40、%表現(xiàn)表現(xiàn)：大鼠第：大鼠第2W 2W 開始體重增長加速，至第開始體重增長加速，至第4W 4W 體體重已明顯高于對照組，肝重已明顯高于對照組，肝TGTG、膽固醇明顯增加，、膽固醇明顯增加，肝細(xì)胞脂肪變肝細(xì)胞脂肪變。意義意義：與兒童單純性肥胖癥的自然發(fā)病過程相似，與兒童單純性肥胖癥的自然發(fā)病過程相似，對該病及并發(fā)的脂肪肝的防治研究有一定的意義對該病及并發(fā)的脂肪肝的防治研究有一定的意義63高脂飲食常用配方高脂飲食常用配方B B、祁培宏等：普通飼料喂養(yǎng)大鼠、祁培宏等：普通飼料喂養(yǎng)大鼠1W1W，再用脂肪乳，再用脂肪乳劑灌胃劑灌胃4W4W 乳清酸乳清酸5 %+5 %+膽固醇膽固醇10% +10% +豬油豬

41、油20%+20%+蛋黃粉蛋黃粉1%1%表現(xiàn)表現(xiàn)：肝臟體積變大，濕重增加，色黃，切面油膩；：肝臟體積變大，濕重增加，色黃，切面油膩；HEHE染色肝細(xì)胞呈大泡性脂肪變，血清、肝臟染色肝細(xì)胞呈大泡性脂肪變，血清、肝臟TGTG、膽固醇顯著升高膽固醇顯著升高64高脂飲食常用配方高脂飲食常用配方C、徐正婕、鐘嵐、范建高等：徐正婕、鐘嵐、范建高等：HFDHFD飼養(yǎng)雄性飼養(yǎng)雄性SDSD大鼠大鼠 標(biāo)準(zhǔn)飼料標(biāo)準(zhǔn)飼料88 %+88 %+豬油豬油10%+10%+膽固醇膽固醇2%2%表現(xiàn)表現(xiàn)： 4 w4 w出現(xiàn)肝脂肪變；出現(xiàn)肝脂肪變；8 w8 w呈現(xiàn)單純性脂肪肝；呈現(xiàn)單純性脂肪肝；12 w12 w形成形成NASHNAS

42、H，伴，伴ALTALT水平升高；水平升高；24 w24 w出現(xiàn)明顯出現(xiàn)明顯竇周纖維化；竇周纖維化；3648 w3648 w纖維化加劇纖維化加劇意義意義：本模型與人類肥胖癥合并高脂血癥及脂肪肝本模型與人類肥胖癥合并高脂血癥及脂肪肝的病例極為相似，可用于血脂調(diào)整藥物防治動脈粥的病例極為相似，可用于血脂調(diào)整藥物防治動脈粥樣硬化和脂肪肝的藥理研究樣硬化和脂肪肝的藥理研究65高脂飲食常用配方高脂飲食常用配方D、美國美國CharlesCharles等：高脂液體飼料喂養(yǎng)等：高脂液體飼料喂養(yǎng)SDSD大鼠大鼠 脂肪脂肪71 %+71 %+碳水化合物碳水化合物11%+11%+蛋白蛋白18%18%表現(xiàn)：表現(xiàn)：3 3

43、周可形成全小葉肝細(xì)胞脂肪變，伴有周可形成全小葉肝細(xì)胞脂肪變，伴有TNFaTNFa和和I I型膠原型膠原mRNA mRNA 的表達(dá)增強，可誘發(fā)線粒體損傷的表達(dá)增強，可誘發(fā)線粒體損傷和氧化應(yīng)激和氧化應(yīng)激意義：意義：造模方法簡單，所需時間較短，與人體高脂造模方法簡單，所需時間較短，與人體高脂血癥性脂肪肝機(jī)制相似，是一種用于該病研究的血癥性脂肪肝機(jī)制相似，是一種用于該病研究的經(jīng)典模型經(jīng)典模型缺點：缺點：每天灌胃較為繁瑣，操作不當(dāng)可引起動物窒每天灌胃較為繁瑣，操作不當(dāng)可引起動物窒息死亡息死亡66營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型3 3、高糖飲食大鼠模型、高糖飲食大鼠模型

44、 高蔗糖高蔗糖/ /果糖飲食果糖飲食 * * *在在WistarWistar大鼠的飲用水中加入大鼠的飲用水中加入10%10%蔗糖，蔗糖，4848小時小時內(nèi)即能在其體內(nèi)觀察到脂肪酸合成增加內(nèi)即能在其體內(nèi)觀察到脂肪酸合成增加 * * *SDSD大鼠在含蔗糖大鼠在含蔗糖70%70%的飲食喂養(yǎng)后出現(xiàn)肥胖，的飲食喂養(yǎng)后出現(xiàn)肥胖，2323周可形成脂肪肝，并伴有參與脂肪合成的酶周可形成脂肪肝，并伴有參與脂肪合成的酶類增加，雄性鼠肝損傷更為嚴(yán)重類增加，雄性鼠肝損傷更為嚴(yán)重意義：意義：形成機(jī)制與部分人群，尤其是女性不良飲食形成機(jī)制與部分人群，尤其是女性不良飲食習(xí)慣導(dǎo)致的脂肪肝相似。但是雄性鼠比雌性鼠對習(xí)慣導(dǎo)致的

45、脂肪肝相似。但是雄性鼠比雌性鼠對高糖誘導(dǎo)的肝損傷具有更高的易感性高糖誘導(dǎo)的肝損傷具有更高的易感性67營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型4 4、禁食、禁食后高糖飼料誘發(fā)后高糖飼料誘發(fā)大鼠脂肪肝模型大鼠脂肪肝模型* * *LeclercqLeclercq等將雄性等將雄性WisterWister大鼠禁食大鼠禁食48h48h后給予高糖后給予高糖飼料，飼料，2d2d后大鼠肝內(nèi)脂肪含量較正常增加后大鼠肝內(nèi)脂肪含量較正常增加235%235%，呈現(xiàn)肝細(xì)胞單純性脂肪變性呈現(xiàn)肝細(xì)胞單純性脂肪變性意義：意義：禁食后再進(jìn)食導(dǎo)致脂肪肝的可能機(jī)制為肝臟禁食后再進(jìn)食導(dǎo)致脂肪肝的可能機(jī)制為肝

46、臟合成脂肪酸和脂肪酸的循環(huán)失衡，合成脂肪酸和脂肪酸的循環(huán)失衡，TGTG的合成和分的合成和分泌失衡泌失衡68營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型營養(yǎng)失調(diào)性脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型5 5、玉米油注射大鼠脂肪肝模型、玉米油注射大鼠脂肪肝模型 墨西哥墨西哥TerrazosTerrazosLuchLuch等采用皮下注射玉米油的等采用皮下注射玉米油的方法建立大鼠脂肪肝模型方法建立大鼠脂肪肝模型6 6、全胃腸外營養(yǎng)（、全胃腸外營養(yǎng)（TPNTPN）脂肪肝模型）脂肪肝模型 予成年大鼠深靜脈插管，導(dǎo)管接電腦輸液泵，予成年大鼠深靜脈插管，導(dǎo)管接電腦輸液泵，將營養(yǎng)液以將營養(yǎng)液以3ml/h3ml/h的滴速持續(xù)滴注。靜脈營

47、養(yǎng)液中的滴速持續(xù)滴注。靜脈營養(yǎng)液中非蛋白能量占非蛋白能量占33%33%以上，以上，1W1W后大鼠肝臟即出現(xiàn)明后大鼠肝臟即出現(xiàn)明顯的脂肪變性。顯的脂肪變性。 此造模方法時間短、成功率高，但操作復(fù)雜，此造模方法時間短、成功率高，但操作復(fù)雜，限制了實驗的廣泛應(yīng)用限制了實驗的廣泛應(yīng)用69毒物或藥物性脂肪肝動物模型毒物或藥物性脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型1 1、四氯化碳（、四氯化碳（CClCCl4 4）誘發(fā)模型）誘發(fā)模型 CClCCl4 4 0.5ml/kg 0.5ml/kg，每周，每周3 3次，大鼠皮下注射次，大鼠皮下注射 表現(xiàn)：表現(xiàn)：短時間內(nèi)即可觀察到中央靜脈周圍中重度大短時間內(nèi)即可觀察到中央

48、靜脈周圍中重度大泡性肝細(xì)胞脂肪變，伴炎癥及壞死；泡性肝細(xì)胞脂肪變，伴炎癥及壞死；6W6W可出現(xiàn)肝纖可出現(xiàn)肝纖維化；維化；12W12W可見肝硬化?？梢姼斡不C(jī)理：機(jī)理：CClCCl4 4誘導(dǎo)誘導(dǎo)CYP2E1CYP2E1激活及嚴(yán)重脂質(zhì)過氧化反應(yīng)激活及嚴(yán)重脂質(zhì)過氧化反應(yīng)造成肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能破壞造成肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能破壞優(yōu)缺點：優(yōu)缺點：模型復(fù)制率模型復(fù)制率100%100%，但死亡率高達(dá)，但死亡率高達(dá)2040%2040%70毒物或藥物性脂肪肝動物模型毒物或藥物性脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型2 2、四環(huán)素誘發(fā)模型、四環(huán)素誘發(fā)模型 * *雄性大鼠一次性口服四環(huán)素雄性大鼠一次性口服四環(huán)素1 g/kg1

49、g/kg，在，在24h24h即可即可見肝細(xì)胞小泡性脂肪變，并伴膽固醇、見肝細(xì)胞小泡性脂肪變，并伴膽固醇、TGTG合成增合成增加及脂肪酸加及脂肪酸-氧化受抑制。氧化受抑制。 * *另有報道，經(jīng)四環(huán)素單次誘導(dǎo)即可使肝臟另有報道，經(jīng)四環(huán)素單次誘導(dǎo)即可使肝臟TGTG水水平增加平增加270%270%，并出現(xiàn)小泡性脂變。，并出現(xiàn)小泡性脂變。機(jī)理：機(jī)理：四環(huán)素沉積于肝細(xì)胞線粒體，抑制線粒體四環(huán)素沉積于肝細(xì)胞線粒體，抑制線粒體DNADNA復(fù)制，干擾復(fù)制，干擾mRNAmRNA翻譯成載脂蛋白，繼而影響翻譯成載脂蛋白，繼而影響肝內(nèi)肝內(nèi)TGTG的轉(zhuǎn)運及線粒體脂肪酸的的轉(zhuǎn)運及線粒體脂肪酸的-氧化氧化71毒物或藥物性脂肪

50、肝動物模型毒物或藥物性脂肪肝動物模型 NAFLD模型模型n 藥物或毒物誘導(dǎo)模型具有成型時間短、方法簡藥物或毒物誘導(dǎo)模型具有成型時間短、方法簡便、病變明顯等特點便、病變明顯等特點n 但其發(fā)病機(jī)制、病理、病理生理改變與人類常見但其發(fā)病機(jī)制、病理、病理生理改變與人類常見脂肪肝類型差異較大，未出現(xiàn)肥胖和脂肪肝類型差異較大，未出現(xiàn)肥胖和IRIR，且動物肝，且動物肝損傷嚴(yán)重，死亡率高損傷嚴(yán)重，死亡率高72體外誘導(dǎo)模型體外誘導(dǎo)模型 NAFLD模型模型 肝細(xì)胞株脂肪變性模型肝細(xì)胞株脂肪變性模型* * *20022002年日本年日本OkamotoOkamoto等，用含有等，用含有1 mmol1 mmolL L油

51、酸油酸的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)人的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)人HepG2HepG2細(xì)胞細(xì)胞24h24h，成功地建立，成功地建立了一個體外的脂肪肝模型，細(xì)胞內(nèi)了一個體外的脂肪肝模型，細(xì)胞內(nèi)TGTG增加增加* * *以正常成人肝細(xì)胞株（以正常成人肝細(xì)胞株（L-02L-02）等為材料，在培養(yǎng)）等為材料，在培養(yǎng)液中加入不同濃度的液中加入不同濃度的TGTG、油酸、亞油酸、花生四、油酸、亞油酸、花生四烯酸等脂質(zhì)建立體外脂肪肝模型烯酸等脂質(zhì)建立體外脂肪肝模型意義：意義：應(yīng)用此模型可在細(xì)胞水平進(jìn)行脂肪肝發(fā)病機(jī)應(yīng)用此模型可在細(xì)胞水平進(jìn)行脂肪肝發(fā)病機(jī)制及干預(yù)治療的體外研究制及干預(yù)治療的體外研究73復(fù)合模型復(fù)合模型 NAFLD模型模型

52、目的：目的：在基因模型的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用營養(yǎng)、藥物誘在基因模型的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用營養(yǎng)、藥物誘發(fā)模型，試圖使新模型的表型與人類發(fā)模型，試圖使新模型的表型與人類NAFLDNAFLD更接更接近，并能反映疾病從單純性脂肪肝向近，并能反映疾病從單純性脂肪肝向NASHNASH進(jìn)展，進(jìn)展，NASHNASH向肝纖維化進(jìn)展的過程向肝纖維化進(jìn)展的過程常見復(fù)合模型常見復(fù)合模型：ob/obob/ob小鼠小鼠+MCD+MCD飲食，飲食，db/dbdb/db小小鼠鼠+MCD+MCD飲食，飲食，fa/fafa/fa大鼠大鼠+HFD+HFD等等意義：意義：復(fù)合模型均可產(chǎn)生復(fù)合模型均可產(chǎn)生IRIR、肥胖以及、肥胖以及NASHNAS

53、H和纖和纖維化，最大程度地模擬了人類維化，最大程度地模擬了人類NAFLDNAFLD的復(fù)雜性，的復(fù)雜性，病理變化顯著，是一種極具潛力的病理變化顯著，是一種極具潛力的NASHNASH模型模型74急性酒精性肝病動物模型急性酒精性肝病動物模型 AFLD模型模型健康成熟雄性健康成熟雄性WistarWistar或或SDSD大鼠，大鼠， 自由飲水自由飲水+ +普通飼料普通飼料 1 1、5656度白酒灌胃，每次度白酒灌胃，每次7ml/kg7ml/kg，每日，每日2 2次次 2 2、腹腔注射一定濃度乙醇，每次、腹腔注射一定濃度乙醇，每次20ml/kg20ml/kg，每日，每日2 2次次 12W12W后成功復(fù)制大

54、鼠急性酒精性肝損傷模型，后成功復(fù)制大鼠急性酒精性肝損傷模型，表現(xiàn)為肝細(xì)胞脂肪變性和炎癥細(xì)胞浸潤。表現(xiàn)為肝細(xì)胞脂肪變性和炎癥細(xì)胞浸潤。 灌胃法明顯優(yōu)于腹腔注射法，后者死亡率高，且灌胃法明顯優(yōu)于腹腔注射法，后者死亡率高，且不符合人類的飲酒習(xí)慣不符合人類的飲酒習(xí)慣75慢性酒精性肝病動物模型慢性酒精性肝病動物模型 AFLD模型模型1 1、酒精液體飲料模型、酒精液體飲料模型 A A、大鼠模型、大鼠模型：KeeganKeegan等在飲水中加等在飲水中加40%40%酒精，酒精，29W29W后實驗鼠出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變、炎癥、壞死和后實驗鼠出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變、炎癥、壞死和中央靜脈周圍硬化中央靜脈周圍硬化優(yōu)點優(yōu)點：造

55、模方法簡單，與人類酒精性肝病相近：造模方法簡單，與人類酒精性肝病相近缺點缺點：耗時長，且大鼠厭酒，攝入量難以控制：耗時長，且大鼠厭酒，攝入量難以控制 B B、微豬模型、微豬模型：固體飼料：固體飼料+ +占每日熱量占每日熱量40%40%的酒精的酒精飲料，飲料，1 1個月后血個月后血ALTALT升高，升高，1212個月后出現(xiàn)肝細(xì)胞個月后出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變，局灶性炎細(xì)胞浸潤及中央靜脈周圍纖維化脂肪變，局灶性炎細(xì)胞浸潤及中央靜脈周圍纖維化優(yōu)點優(yōu)點：微豬可隨意食用酒精飲料，與人類酒精性肝：微豬可隨意食用酒精飲料，與人類酒精性肝損傷較接近和較自然的動物模型損傷較接近和較自然的動物模型缺點缺點：造模時間長，費

56、用較高：造模時間長，費用較高76慢性酒精性肝病動物模型慢性酒精性肝病動物模型 AFLD模型模型2 2、酒精灌胃模型、酒精灌胃模型 A A、Tsukamato-FrenchTsukamato-French大鼠模型大鼠模型Tsukamato-FrenchTsukamato-French等給等給SDSD大鼠手術(shù)植入胃管，持大鼠手術(shù)植入胃管，持續(xù)注入含酒精的液體食料，維持大鼠血中續(xù)注入含酒精的液體食料，維持大鼠血中200200300mg/dl300mg/dl的酒精濃度。的酒精濃度。表現(xiàn)表現(xiàn)：造模：造模3 3個月，成功的建立了從肝細(xì)胞脂肪變性、個月，成功的建立了從肝細(xì)胞脂肪變性、小葉中央壞死、炎性細(xì)胞浸

57、潤至肝纖維化的進(jìn)行性小葉中央壞死、炎性細(xì)胞浸潤至肝纖維化的進(jìn)行性酒精性肝損傷模型酒精性肝損傷模型優(yōu)點優(yōu)點：可完全控制酒精和各種營養(yǎng)物質(zhì)的攝入量，：可完全控制酒精和各種營養(yǎng)物質(zhì)的攝入量，且病變符合進(jìn)行性酒精性肝損傷的演變規(guī)律且病變符合進(jìn)行性酒精性肝損傷的演變規(guī)律缺點缺點：造模技術(shù)復(fù)雜、實驗設(shè)備較昂貴、強制性持：造模技術(shù)復(fù)雜、實驗設(shè)備較昂貴、強制性持續(xù)注入含酒精食料，不符合人類脂肪肝形成過程續(xù)注入含酒精食料，不符合人類脂肪肝形成過程 77酒精灌胃模型酒精灌胃模型B B、美國美國IimuroIimuro等選用年齡和體重匹配的雌性和雄性等選用年齡和體重匹配的雌性和雄性WisterWister大鼠，酒精

58、灌胃（大鼠，酒精灌胃（11-12g/kg/d11-12g/kg/d）4W4W，雌性，雌性大鼠血清大鼠血清ASTAST高于雄性大鼠，肝組織脂肪變、炎癥高于雄性大鼠，肝組織脂肪變、炎癥及壞死亦以雌性鼠發(fā)展更快、更嚴(yán)重，累及全小葉，及壞死亦以雌性鼠發(fā)展更快、更嚴(yán)重，累及全小葉，說明雌性大鼠對乙醇導(dǎo)致的肝損傷更敏感說明雌性大鼠對乙醇導(dǎo)致的肝損傷更敏感 C C、范建高等在大鼠高脂飲食基礎(chǔ)上，用范建高等在大鼠高脂飲食基礎(chǔ)上，用60%60%的酒精的酒精15mg/kg15mg/kg灌胃，每日灌胃，每日2 2次，次，3 3個月后出現(xiàn)輕、中度肝個月后出現(xiàn)輕、中度肝細(xì)胞脂肪變，細(xì)胞脂肪變，6 6個月時出現(xiàn)中度以上脂

59、肪變、局灶個月時出現(xiàn)中度以上脂肪變、局灶性炎癥伴肝細(xì)胞壞死和纖維化性炎癥伴肝細(xì)胞壞死和纖維化 78慢性酒精性肝病動物模型慢性酒精性肝病動物模型 AFLD模型模型3 3、 Liber-DecarliLiber-Decarli大鼠模型大鼠模型 LiberLiber和和DecarliDecarli配制出含酒精和全營養(yǎng)素的液體食配制出含酒精和全營養(yǎng)素的液體食料：糖類料：糖類47%47%（其中（其中36%36%的熱量由酒精代替），蛋的熱量由酒精代替），蛋白質(zhì)白質(zhì)18%18%，脂肪，脂肪35%35%，及適量的維生素和無機(jī)鹽。，及適量的維生素和無機(jī)鹽。 造模大鼠只喂該食料，酒精攝入量達(dá)造模大鼠只喂該食料，酒

60、精攝入量達(dá)121218g/kg18g/kg，造模造模4W4W即出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞脂肪變性。即出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞脂肪變性。 優(yōu)點優(yōu)點：Liber-DecarliLiber-Decarli液體食料已商品化出售，還可液體食料已商品化出售，還可用于小鼠、家兔、豚鼠等。該模型簡便易行，費用于小鼠、家兔、豚鼠等。該模型簡便易行，費用低，形成率高及穩(wěn)定性好用低，形成率高及穩(wěn)定性好79體外誘導(dǎo)模型體外誘導(dǎo)模型 AFLD模型模型n20102010年廖于等用含年廖于等用含0.28%0.28%乙醇的培養(yǎng)液，培養(yǎng)人乙醇的培養(yǎng)液，培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞株（正常肝細(xì)胞株（L-02L-02）。誘導(dǎo)、傳代至第）。誘導(dǎo)、傳代至第3030