第六章 診斷酶學

1、P136-1762教學目標教學目標 教學時數教學時數 6 6學時學時血清酶的分類、生理變異、病生機制血清酶的分類、生理變異、病生機制等，同工酶及其亞型測定，臨床診斷中常用等，同工酶及其亞型測定，臨床診斷中常用的血清酶及其同工酶，重要血清酶的測定、的血清酶及其同工酶，重要血清酶的測定、原理及評價原理及評價 。酶的有關酶基本知識，酶活性濃度的酶的有關酶基本知識，酶活性濃度的測定技術及酶的免疫化學測定測定技術及酶的免疫化學測定 。3 第一節(jié)第一節(jié) 血血 清清 酶酶 4一、血清酶的來源一、血清酶的來源 根據酶的來源及其在血漿中發(fā)揮催化根據酶的來源及其在血漿中發(fā)揮催化功能的情況，將其分為：功能的情況，將

2、其分為：P143一般代謝酶一般代謝酶組織專一酶組織專一酶血漿特異酶血漿特異酶非血漿特異酶非血漿特異酶 外分泌酶外分泌酶細胞酶細胞酶一般代謝酶一般代謝酶組織專一酶組織專一酶血漿特異酶血漿特異酶非血漿特異酶非血漿特異酶 外分泌酶外分泌酶細胞酶細胞酶血血 清清 酶酶5 名稱名稱 血漿特異酶血漿特異酶 非非血漿特異酶血漿特異酶 外分泌酶外分泌酶細胞酶細胞酶一般代謝酶一般代謝酶組織專一酶組織專一酶來源來源肝肝消化腺或其消化腺或其它外分泌腺它外分泌腺 各組織器官各組織器官 （無器官專（無器官專一性）一性） 肝肝 （有器官（有器官專一性）專一性） 種類種類凝血酶原、凝血酶原、因因子、子、因子、纖因子、纖溶酶

3、原、溶酶原、ChEChE、CERCER、LCATLCAT、脂、脂蛋白脂肪酶等蛋白脂肪酶等 胰淀粉酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶、胰蛋白酶、ACP、ALP等等LDH、AST、ALT、CK、MDH等等 OCT等等 6二、血清酶的去路二、血清酶的去路酶蛋白在血管內的失活與降解（主要代謝去路）酶蛋白在血管內的失活與降解（主要代謝去路）血清酶的半壽期（血清酶的半壽期（T1/2)：n酶失活至原來活性一半所需時間。酶失活至原來活性一半所需時間。n有助于了解同一疾病不同酶升高持續(xù)時間的差異。有助于了解同一疾病不同酶升高持續(xù)時間的差異。肝或網狀內皮系統對血清酶的清除肝或網狀內皮系統對血清酶的清除 少

4、數以酶原形式存在的血清酶類（凝血酶原、纖少數以酶原形式存在的血清酶類（凝血酶原、纖溶酶原）在活化后迅速被肝清除，網狀內皮系統也可溶酶原）在活化后迅速被肝清除，網狀內皮系統也可能參與血清酶（能參與血清酶（LD、AST、AMY、CK等）的清除。等）的清除。血清酶的排泄血清酶的排泄 尿路是血清中低分子量酶的重要排泄途徑，如胃尿路是血清中低分子量酶的重要排泄途徑，如胃蛋白酶原、淀粉酶（蛋白酶原、淀粉酶（AMY）。）。轉入其它體液轉入其它體液 只有血清酶的來源與去路保持平衡，才能維持酶只有血清酶的來源與去路保持平衡，才能維持酶活性保持相對恒定。但一些病理情況往往促使這種平活性保持相對恒定。但一些病理情況

5、往往促使這種平衡被打破，導致血清酶活性的變化。衡被打破，導致血清酶活性的變化。P1437三、血清酶變化的病理機制三、血清酶變化的病理機制（一）合成異常（一）合成異常合成減少合成減少合成增多合成增多肝損害導致合成酶的能力受損肝損害導致合成酶的能力受損（ChE、LCAT）酶基因變異引起酶合成減少酶基因變異引起酶合成減少（銅氧化酶）（銅氧化酶）增生性疾?。ü趋兰膊。錾约膊。ü趋兰膊?，ALP)惡性腫瘤（前列腺癌，惡性腫瘤（前列腺癌，ACP)酶的誘導作用（乙醇，酶的誘導作用（乙醇，-GT）P1448（二）釋放增加（大多數血清酶增高的主要機制）（二）釋放增加（大多數血清酶增高的主要機制）細胞內外酶濃度

6、的差異細胞內外酶濃度的差異 對于非血漿特異酶，細胞內外濃度差可在對于非血漿特異酶，細胞內外濃度差可在千倍以上，只要有少量細胞壞死或病變，血中千倍以上，只要有少量細胞壞死或病變，血中酶濃度明顯升高。對血漿特異酶，細胞病變很酶濃度明顯升高。對血漿特異酶，細胞病變很少引起血中酶濃度明顯升高。少引起血中酶濃度明顯升高。酶的相對分子量（影響細胞內釋出的關鍵）酶的相對分子量（影響細胞內釋出的關鍵） 酶從細胞內釋出的速度與酶的相對分子量酶從細胞內釋出的速度與酶的相對分子量成反比。如成反比。如AMI時，血中最先升高的是時，血中最先升高的是CK（MW：85kD)，LD （MW：125kD)出現升高出現升高明顯延

7、遲。明顯延遲。酶的組織分布酶的組織分布 含酶量高且血流豐富的組織器官，其細胞含酶量高且血流豐富的組織器官，其細胞內酶進入血流的可能性大；除少數組織專一性內酶進入血流的可能性大；除少數組織專一性酶以外，大多數血清酶不能特異反映某個特定酶以外，大多數血清酶不能特異反映某個特定組織的病變。但同工酶的發(fā)現大大提高酶檢測組織的病變。但同工酶的發(fā)現大大提高酶檢測的組織的特異性。的組織的特異性。酶在細胞內的定位及存在形式酶在細胞內的定位及存在形式 線粒體酶不易從細胞中釋出，如線粒體酶不易從細胞中釋出，如ASTm的的檢測往往反映肝細胞的損傷程度，且是檢測往往反映肝細胞的損傷程度，且是AMI中中最后升高的酶，用

8、于判斷預后；有些酶在細胞最后升高的酶，用于判斷預后；有些酶在細胞內與結構蛋白結合，較難釋放。內與結構蛋白結合，較難釋放。ATP ATP不足，細胞內酶容易釋放。不足，細胞內酶容易釋放。P1459（三）排出異常（三）排出異常腎功能減退，血清腎功能減退，血清AMY活性升高可能活性升高可能因酶排泄障礙而在血液中滯留。因酶排泄障礙而在血液中滯留。膽道梗阻，血清膽道梗阻，血清ALP升高的原因是梗升高的原因是梗阻區(qū)阻區(qū)ALP合成加強，合成加強，ALP排泄受阻而逆排泄受阻而逆流入血。流入血。大多數酶，不存在以上的清除機制。大多數酶，不存在以上的清除機制。P14510四、血清酶的生理差異四、血清酶的生理差異（一

9、）性（一）性 別別多數酶無差異，少數有差異多數酶無差異，少數有差異男性高于女性：男性高于女性： CKCK、ALPALP、 -GT女性高于男性：女性高于男性：LDH1LDH1（青年婦女）（青年婦女）（二）年（二）年 齡齡 最明顯的例子是最明顯的例子是ALPALP，新生兒血清中，新生兒血清中ALPALP略略高于成人，高于成人，1 15 5歲增至成人的歲增至成人的2 23 3倍，然后逐倍，然后逐漸下降，到漸下降，到10101515歲，歲，ALPALP又明顯升高，可達又明顯升高，可達成人的成人的3 35 5倍，倍，2020歲后降至成人值。歲后降至成人值。（三）飲（三）飲 食食 血清中大多數酶不受進食影

10、響，故測定酶血清中大多數酶不受進食影響，故測定酶活性不一定需要空腹采血。活性不一定需要空腹采血。（四）運（四）運 動動 激烈的肌肉運動可使血清中多種酶，如激烈的肌肉運動可使血清中多種酶，如CKCK、LDLD、ASTAST、ALDALD、ALTALT等活性升高。等活性升高。（五）妊（五）妊 娠娠（六）其（六）其 它它P14511第第 二二 節(jié)節(jié) 酶活性濃度的測定技術酶活性濃度的測定技術P146- P 16012酶活性濃度的測定技術酶活性濃度的測定技術酶活性濃度概念酶活性濃度概念酶活性濃度測定酶活性濃度測定連續(xù)監(jiān)測法檢測酶活性濃度連續(xù)監(jiān)測法檢測酶活性濃度工具酶工具酶血清酶活性濃度測定條件的優(yōu)化血清

11、酶活性濃度測定條件的優(yōu)化酶活性濃度的單位酶活性濃度的單位13一、酶活性濃度的概念一、酶活性濃度的概念1. 酶的特性：微量性酶的特性：微量性、高效性高效性等。等。直接測量非常困難直接測量非常困難（mmol/L或或mg/dl）通過測定被加速化學反通過測定被加速化學反應的反應速率，來間接應的反應速率，來間接反映酶的濃度反映酶的濃度2. 酶促反應酶促反應SSEE +ESEPE + PVdsdt或或VdpdtES14 3. 酶活性濃度酶活性濃度 即即酶所催化的化學反應的反應速率酶所催化的化學反應的反應速率，用用酶促反應中單位時間內底物的減少量或產物酶促反應中單位時間內底物的減少量或產物的生成量來計算。的

12、生成量來計算。注意注意：只有當酶所催化的反應速度僅與只有當酶所催化的反應速度僅與 E 成正比，而不受其它因素影響時，即在酶促成正比，而不受其它因素影響時，即在酶促反應的反應的零級期零級期，才能根據酶所催化的化學反才能根據酶所催化的化學反應速率來確切表示酶活性濃度的大小。應速率來確切表示酶活性濃度的大小。P14615 實際上是通過檢測酶活性濃度間接反映酶的實際上是通過檢測酶活性濃度間接反映酶的量，因為直接檢測酶的質量濃度要求的實驗條件量，因為直接檢測酶的質量濃度要求的實驗條件及技術條件非常高，價格昂貴，不適用于臨床檢及技術條件非常高，價格昂貴，不適用于臨床檢測，因此測定酶活性濃度是臨床酶學分析最

13、為常測，因此測定酶活性濃度是臨床酶學分析最為常見的方法，具有迅速、靈敏、成本低等特點。見的方法，具有迅速、靈敏、成本低等特點。 但僅在上述前提下，只能在反應的零級期，但僅在上述前提下，只能在反應的零級期，即只有在酶促反應的最適條件下，才能真實地代即只有在酶促反應的最適條件下，才能真實地代表酶含量。因此可根據酶促反應進程曲線，采用表酶含量。因此可根據酶促反應進程曲線，采用合理的方法進行酶活性濃度的檢測。合理的方法進行酶活性濃度的檢測。16零級零級一級一級PSV dpdt反應級數反應級數時間時間4. 酶促反應進程酶促反應進程延滯期延滯期線性期線性期非線性期非線性期P147 Lag phaseZer

14、o orderLinear phaseFirst order酶促反應時間進程曲線酶促反應時間進程曲線17單試劑測定體系酶促反應進程曲線單試劑測定體系酶促反應進程曲線P14818結論：結論： 為了計算酶活性濃度，必須根據線性為了計算酶活性濃度，必須根據線性反應期（零級反應期）的反應速率才能準反應期（零級反應期）的反應速率才能準確計算出酶活性濃度否則將導致誤差。確計算出酶活性濃度否則將導致誤差。 酶活性濃度測定就是要使酶促反應酶活性濃度測定就是要使酶促反應的初速度達到的初速度達到Vmax，即在過量底物存在，即在過量底物存在下的零級反應期的下的零級反應期的V，此時，此時V與與E之間有之間有線性關系。

15、線性關系。P14819二、酶活性濃度測定方法二、酶活性濃度測定方法（一）按檢測方法分類（一）按檢測方法分類1、量氣法、量氣法其原理是通過測量一封閉其原理是通過測量一封閉反應系統中氣體變化后的反應系統中氣體變化后的氣體體積或壓力，從而計氣體體積或壓力，從而計算出氣體的變化量算出氣體的變化量適用于測定在反應中產生適用于測定在反應中產生或或 消耗氣體的酶消耗氣體的酶2、分光光度法、分光光度法酶促反應的底物與產物結酶促反應的底物與產物結構不同，光吸收譜也有差構不同，光吸收譜也有差異，不僅能在可見光范圍異，不僅能在可見光范圍測定有色溶液的濃度，還測定有色溶液的濃度，還能在紫外光波長范圍測定能在紫外光波長

16、范圍測定特異的帶有雙鍵或環(huán)狀結特異的帶有雙鍵或環(huán)狀結構的無色物質構的無色物質3、熒光法和放射性核素法、熒光法和放射性核素法通過熒光光度計測通過熒光光度計測定酶促反應生成熒定酶促反應生成熒光物質的速率，此光物質的速率，此速率與酶濃度成正速率與酶濃度成正比比4、其它方法、其它方法P14620（二）按反應時間分類（二）按反應時間分類1、定時法定時法（取樣法、終點法、兩點法）（取樣法、終點法、兩點法）優(yōu)點：優(yōu)點： 簡單，測定時酶促反應已被終止，故比色計簡單，測定時酶促反應已被終止，故比色計或分光光度計無需保溫設備，顯色劑的選擇或分光光度計無需保溫設備，顯色劑的選擇不考慮對酶活性的影響。不考慮對酶活性的

17、影響。缺點：缺點：無法知道無法知道在整個酶促反應進程中是否都是零在整個酶促反應進程中是否都是零級反應。級反應。注意：注意：應先做預實驗找出酶促反應速率恒定的時期，應先做預實驗找出酶促反應速率恒定的時期，確定線性時間；保證酶和底物在所選定的溫確定線性時間；保證酶和底物在所選定的溫度下作用時間要精確。度下作用時間要精確。P148 21 定時法定時法，早期測定酶活性濃度的方法，大多是，早期測定酶活性濃度的方法，大多是使酶作用一段時間，然后加入強酸、強堿、蛋白沉使酶作用一段時間，然后加入強酸、強堿、蛋白沉淀劑等終止酶促反應，測定這段時間內底物的減少淀劑等終止酶促反應，測定這段時間內底物的減少量或產物的

18、生成量，計算酶促反應的平均速度。量或產物的生成量，計算酶促反應的平均速度。 連續(xù)監(jiān)測法，連續(xù)監(jiān)測法，即指連續(xù)測定酶促反應過程中某即指連續(xù)測定酶促反應過程中某一產物或底物濃度隨時間變化的多點數據，求出酶一產物或底物濃度隨時間變化的多點數據，求出酶促反應初速度，間接計算出酶活性濃度的方法。其促反應初速度，間接計算出酶活性濃度的方法。其是臨床測定酶活性濃度最常用方法。是臨床測定酶活性濃度最常用方法。222、連續(xù)監(jiān)測法連續(xù)監(jiān)測法（動力學法、速率法）（動力學法、速率法）優(yōu)點：優(yōu)點： 容易找到直線區(qū)域，選擇線性反應期容易找到直線區(qū)域，選擇線性反應期來計算酶活性，來計算酶活性，不需終止反應。不需終止反應。缺

19、點：缺點：線性反應期因酶種類和反應條件而異，線性反應期因酶種類和反應條件而異，必須用實驗方法進行確定，必須選取必須用實驗方法進行確定，必須選取酶促反應的最適反應條件，需要有可酶促反應的最適反應條件，需要有可以連續(xù)監(jiān)測的設備以連續(xù)監(jiān)測的設備。P149 3、平衡法、平衡法 目前臨床應用較少，通過測定酶促反應開目前臨床應用較少，通過測定酶促反應開始至反應達到平衡時產物或底物濃度的總變化始至反應達到平衡時產物或底物濃度的總變化量來求出酶活性濃度的方法。量來求出酶活性濃度的方法。23三、連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性濃度三、連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性濃度（一）種類（一）種類1.直接法直接法 不終止酶促反應條件下，直接通

20、過測定反應體系中底物不終止酶促反應條件下，直接通過測定反應體系中底物或產物理化性質的變化（如：或產物理化性質的變化（如：A、熒光、旋光性，、熒光、旋光性，pH、電導、電導率、粘度等），從而計算出酶活性濃度。率、粘度等），從而計算出酶活性濃度。評價評價 方法簡單，但只有底物與產物之間，在理化性質方面有方法簡單，但只有底物與產物之間，在理化性質方面有顯著性差異時，才能使用直接法，只有很少一部分酶能用直顯著性差異時，才能使用直接法，只有很少一部分酶能用直接法測定。接法測定。P149 24（1） 目前以分光光度法最為廣泛，目前以分光光度法最為廣泛，利用利用340nm處吸光度的變化測定各種脫氫酶。處吸光

21、度的變化測定各種脫氫酶。NAD(P)+H+ NAD(P)H 僅在僅在260nm處有吸收峰處有吸收峰 在在260、340nm處有吸收峰處有吸收峰 340nm處處A的變化可以反映反應體系中的變化可以反映反應體系中NAD(P)H量量的增減，進而反映酶活性濃度。的增減，進而反映酶活性濃度。（2） 利用一類人工合成的所謂色原性底物，利用一類人工合成的所謂色原性底物，其本身為無色或微黃色，酶作用后生成有色化合物。其本身為無色或微黃色，酶作用后生成有色化合物。P149 25（1）在原反應體系中加入一些試劑，其只和酶反應）在原反應體系中加入一些試劑，其只和酶反應物迅速作用，產生可被檢出的物質，但該試劑不和物迅

22、速作用，產生可被檢出的物質，但該試劑不和酶反應，也不影響酶的活性。酶反應，也不影響酶的活性。S PE+ 試劑試劑可被檢出的物質可被檢出的物質（2）酶偶聯法）酶偶聯法 目前應用最多目前應用最多，即在原反應體系中，即在原反應體系中加入另一些酶試劑，所進行的酶促反應和被測酶反加入另一些酶試劑，所進行的酶促反應和被測酶反應偶聯起來。應偶聯起來。P149 26（二）酶偶聯反應（二）酶偶聯反應 反應模式反應模式A B PExEi被測酶被測酶被測酶被測酶始發(fā)反應始發(fā)反應始發(fā)反應始發(fā)反應指示反應指示反應指示酶指示酶指示反應指示反應指示酶指示酶A B C P ExEaEi輔助酶輔助酶輔助反應輔助反應酶偶聯體系酶

23、偶聯體系輔助酶輔助酶輔助反應輔助反應P149 271. 酶偶聯反應時相酶偶聯反應時相 酶偶聯反應一開始不能反映酶活性，在反應中存在幾酶偶聯反應一開始不能反映酶活性，在反應中存在幾個時相。以臨床常規(guī)酶學分析中常見的個時相。以臨床常規(guī)酶學分析中常見的ALT的檢測為例，的檢測為例，在該酶偶聯體系中的指示酶為脫氫酶，反應原理如下：在該酶偶聯體系中的指示酶為脫氫酶，反應原理如下：L-丙氨酸丙氨酸-酮戊二酸酮戊二酸 -丙酮酸丙酮酸 L-谷氨酸谷氨酸-丙酮酸丙酮酸NADH 乳酸乳酸NAD+ALTLDH 此時反應的方向由此時反應的方向由NADH轉變?yōu)檗D變?yōu)镹AD，隨反應進行，隨反應進行，A應隨之而下降，通過檢

24、測反應產物應隨之而下降，通過檢測反應產物A在在340nm處處A的變化速的變化速率，可以檢測指示酶反應。率，可以檢測指示酶反應。P150 ALT雙試劑法測定中，首先使血清與缺雙試劑法測定中，首先使血清與缺少少-酮戊二酸的底物溶液混合，酮戊二酸的底物溶液混合，37C保保溫溫5m，將樣品中所含的內源性，將樣品中所含的內源性-酮酸消酮酸消耗完。然后再加入耗完。然后再加入-酮戊二酸啟動酮戊二酸啟動ALT催化的反應。催化的反應。28反應一開始加入的試劑反應一開始加入的試劑1中只有丙氨酸，不存在中只有丙氨酸，不存在-酮戊酮戊二酸，在此時相中，存在于樣品中的干擾物質（內源性二酸，在此時相中，存在于樣品中的干擾

25、物質（內源性-酮酸）消耗完。酮酸）消耗完。 加入試劑加入試劑2（即（即-酮酮戊二酸）啟動反應，在戊二酸）啟動反應，在初始階段，產物初始階段，產物-丙酮丙酮酸開始出現，并逐漸增酸開始出現，并逐漸增多，但處于較低水平，多，但處于較低水平，指示酶反應速度也較低，指示酶反應速度也較低，不能代表待測酶的不能代表待測酶的Vx。隨著產物隨著產物-丙酮酸增加到一丙酮酸增加到一定程度，定程度，Ex和和Ei反應反應V相同，相同，達到穩(wěn)態(tài)期。此階段達到穩(wěn)態(tài)期。此階段340nm處處A出現明顯的線性變化。出現明顯的線性變化。最后由于底最后由于底物的消耗，物的消耗，反應反應V逐漸減逐漸減慢，偏離線慢，偏離線性。性。P15

26、0 292. 酶偶聯反應注意事項酶偶聯反應注意事項(1)延滯期應越短越好，測定時間要避開此期。延滯期應越短越好，測定時間要避開此期。(2)(2)不是所有的酶都適合用酶偶聯法進行測定，酶偶聯不是所有的酶都適合用酶偶聯法進行測定，酶偶聯反應反應V V應超過或等于應超過或等于VxVx，Ei Ei反應必須是一級反應，即指示反應必須是一級反應，即指示酶反應速率和測定酶的產物酶反應速率和測定酶的產物B B濃度成正比。只有使用大量濃度成正比。只有使用大量的的Ei Ei及其及其KmKm值很小時才能做到。值很小時才能做到。(3)(3)從經濟方面考慮應選用一些來源容易且價格便宜的從經濟方面考慮應選用一些來源容易且

27、價格便宜的酶（指示酶）制劑。酶（指示酶）制劑。(4)(4)適當的指示酶的用量，反復實驗法確定，即做到酶適當的指示酶的用量，反復實驗法確定，即做到酶偶聯速率不隨酶量的增加而升高，并在所選的最適條件偶聯速率不隨酶量的增加而升高，并在所選的最適條件下，指示酶偶聯反應速率和酶活性濃度成正比。下，指示酶偶聯反應速率和酶活性濃度成正比。P150 30（三）干擾因素（三）干擾因素(1)其他酶和物質的干擾其他酶和物質的干擾(2)酶的污染酶的污染(3)非酶反應非酶反應(4)分析容器的污染分析容器的污染(5)沉淀形成沉淀形成 解決方法之一可通過試劑空白管檢出并加以解決方法之一可通過試劑空白管檢出并加以校正，另一個

28、有效途徑就是不用單一試劑而改用校正，另一個有效途徑就是不用單一試劑而改用雙試劑測定酶活性。雙試劑測定酶活性。P151 31四、工具酶四、工具酶工具酶：酶學分析中作為試劑用于測定化工具酶：酶學分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶。合物濃度或酶活性濃度的酶。指示酶和輔助酶作為反應系統中的試劑。指示酶和輔助酶作為反應系統中的試劑。（一）工具酶（一）工具酶（二）常用工具酶（二）常用工具酶常用工具酶多為氧化還原酶類常用工具酶多為氧化還原酶類工具酶純度不必要求過高工具酶純度不必要求過高工具酶中雜質的含量有一定的限制工具酶中雜質的含量有一定的限制P152 32（三）工具酶參與的指示反應（三）工具

29、酶參與的指示反應 臨床生化檢驗中，很多項目的測定往往使用有工具酶參與臨床生化檢驗中，很多項目的測定往往使用有工具酶參與的類似的反應原理共通（通用）反應途徑。的類似的反應原理共通（通用）反應途徑。1. 偶聯偶聯H2O2的工具酶及其指示反應的工具酶及其指示反應葡萄糖葡萄糖尿酸尿酸膽固醇膽固醇甘油甘油丙酮酸丙酮酸葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶尿酸氧化酶尿酸氧化酶膽固醇氧化酶膽固醇氧化酶甘油氧化酶甘油氧化酶丙酮酸氧化酶丙酮酸氧化酶H2O2以以H（e）為受體的指示酶）為受體的指示酶以以NAD(P)H為輔酶參與的指示酶為輔酶參與的指示酶觸酶觸酶POD(最常用）最常用）P152 2H2O2+4-AAP+酚酚 醌亞

30、胺醌亞胺(紅色紅色)+4H2OPOD33例：葡萄糖氧化酶法測定血清葡萄糖例：葡萄糖氧化酶法測定血清葡萄糖GluO2H2O GAH2O2H2O24-AAP酚酚 H2OO2紅色醌類化合物紅色醌類化合物GODPOD 葡萄糖氧化酶（葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用）利用O2和和H2O將將Glu氧化成氧化成GA，并釋放，并釋放H2O2 ，過氧化物酶（，過氧化物酶（peroxidase，POD）在色原性氧受體存在時將）在色原性氧受體存在時將H2O2分解為分解為H2O和和O2 ，并將，并將色原性氧受體色原性氧受體4-AAP和酚去氫縮合為紅色醌類化合物，即和酚去氫縮合為紅色醌類化合物

31、，即Trinder反應。紅色醌類化合物的量與反應。紅色醌類化合物的量與Glu含量成正比。含量成正比。 即即POD催化下，催化下， H2O2氧化芳香族胺色素原生成有色色氧化芳香族胺色素原生成有色色素，此類色素原供氫體包括：素，此類色素原供氫體包括：OT、DAB、ODA、TMB。342. NAD(P)+或或NAD(P)H偶聯的脫氫酶及其指示反應偶聯的脫氫酶及其指示反應 許多氧化還原反應，尤其是作為工具酶如許多氧化還原反應，尤其是作為工具酶如LD、GLD、G6PD等參與時，常將底物的等參與時，常將底物的H去除后傳遞給去除后傳遞給NAD (P)+形成形成NAD(P)H。借助。借助NAD(P)H340n

32、m處特征性的光吸收，借此用處特征性的光吸收，借此用分光光度法檢測。分光光度法檢測。 如：葡萄糖、尿素、如：葡萄糖、尿素、-羥丁酸、甘油三酯、甲醇、血氨、羥丁酸、甘油三酯、甲醇、血氨、 ALT、AST、LD、GLD、CK、ALD、G6PD、ICD等。等。例：例：尿素尿素H2O 2NH3CO2NH3 -酮戊二酸酮戊二酸 NADHH+ 谷氨酸谷氨酸NAD+H2O尿素酶尿素酶GLDP152 P+NAD(P)H+H+ PH2+NAD(P) + 35五、血清酶活性濃度測定條件的優(yōu)化五、血清酶活性濃度測定條件的優(yōu)化方法方法儀器設備儀器設備試劑試劑自動生物化學分析儀參數設置自動生物化學分析儀參數設置標本的采集

33、、運輸與保存標本的采集、運輸與保存P153 36標本的采集、運輸與保存標本的采集、運輸與保存溶血：細胞內酶而言，細胞內外濃度差異大；所以應及時溶血：細胞內酶而言，細胞內外濃度差異大；所以應及時進行分離，進行分離，靜脈采血后應在靜脈采血后應在12h內分離血清內分離血清?？鼓齽豪貌菟猁}、枸櫞酸鹽、抗凝劑：利用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA抗凝的血漿一般不抗凝的血漿一般不用作酶活性測定；肝素對用作酶活性測定；肝素對ALT、AST、CK、LD、ACP檢測檢測均無影響，可用于急診；臨床多用均無影響，可用于急診；臨床多用血清血清為首選測定標本。為首選測定標本。溫度：大部分酶在低溫中比較穩(wěn)定，一般在血清分離

34、當天溫度：大部分酶在低溫中比較穩(wěn)定，一般在血清分離當天測定，否則應放冰箱冷藏；測定，否則應放冰箱冷藏；通常在通常在04 C下使用、處理及下使用、處理及保存保存，除了一些冷變性的酶；液氮可作為酶學測定時血清標，除了一些冷變性的酶；液氮可作為酶學測定時血清標本及質控長期保存的方法。本及質控長期保存的方法。P155 37六、酶活性濃度單位六、酶活性濃度單位（一）酶活性單位（一）酶活性單位慣用單位慣用單位 用首先報告該種酶測定方法的臨床酶學家的名字來命名其用首先報告該種酶測定方法的臨床酶學家的名字來命名其單位，即使同一種酶因方法不同而有數種活性單位，參考值差單位，即使同一種酶因方法不同而有數種活性單位

35、，參考值差別很大。別很大。國際單位國際單位1963年，年，1IU1mol/min （25 C 及其他最適條件下）及其他最適條件下） 1976年，年， 1U1mol/min（特定條件下）（特定條件下） 1979年，年，1Katal1mol/s（規(guī)定條件下），（規(guī)定條件下），1U16.67nKatalP156 38（二）酶活性濃度單位（二）酶活性濃度單位以每單位體積所含的酶活性單位數表示；以每單位體積所含的酶活性單位數表示；各國學者習慣用各國學者習慣用U/L表示體液中酶催化活性濃度，表示體液中酶催化活性濃度， 1U/L=16.67nKatal/L 正常上限（正常上限（upper limits of

36、 normal，ULN）倍數）倍數 把酶測定值轉換為正常上限值的倍數；把酶測定值轉換為正常上限值的倍數；易于比較解釋來自不同方法的結果，利于各實驗室間質評調查；易于比較解釋來自不同方法的結果，利于各實驗室間質評調查；可將可將ULN進一步適當分級，制定出輕度、中度及重度增加的范圍，進一步適當分級，制定出輕度、中度及重度增加的范圍，使檢測結果更加一目了然；使檢測結果更加一目了然；P156 39（三）酶活性濃度計算（三）酶活性濃度計算 連續(xù)監(jiān)測法檢測酶活性濃度時，使用摩爾消光系數（連續(xù)監(jiān)測法檢測酶活性濃度時，使用摩爾消光系數（）。）。其定義為：特定條件下，一定波長的光，光徑為其定義為：特定條件下，一

37、定波長的光，光徑為1.0cm時，通過時，通過所含吸光物質的濃度為所含吸光物質的濃度為1.00mol/L時的吸光度。時的吸光度。 連續(xù)監(jiān)測法測定在線性范圍內每分鐘吸光度的變化（連續(xù)監(jiān)測法測定在線性范圍內每分鐘吸光度的變化（A/min）U/LAminV106 v LA吸光度變化吸光度變化 106 把把mol換算成換算成mol v樣品量樣品量（ml） L 比色杯光徑（比色杯光徑（cm）V反應體系體積（反應體系體積（ml） 摩爾消光系數（摩爾消光系數（cm2 mol-1 ）P157 40 自動生物化學分析儀測定同一酶，條件固定時，自動生物化學分析儀測定同一酶，條件固定時，從理論上講從理論上講V，v和和

38、L均為固定值，均為固定值， 為常數，則可為常數，則可將公式簡寫為：將公式簡寫為： U/LAminKV106 v LK=K為酶活性濃度定量系數為酶活性濃度定量系數主要用于臨床酶活性測定的計算與校正主要用于臨床酶活性測定的計算與校正K值設置應考慮酶的參考值上限及測定時間兩值設置應考慮酶的參考值上限及測定時間兩方面，這些均與儀器測定的噪音有關。方面，這些均與儀器測定的噪音有關。P15841第第 三三 節(jié)節(jié) 酶的免疫化學測定酶的免疫化學測定42一、報告方式一、報告方式酶活性濃度單位：酶活性濃度單位：U/L質量濃度單位：質量濃度單位：ng/ml， g/L二、優(yōu)點二、優(yōu)點靈敏度高靈敏度高特異性高特異性高能

39、用于檢測一些不表現酶活性的酶蛋白能用于檢測一些不表現酶活性的酶蛋白特別適用于同工酶的檢測特別適用于同工酶的檢測樣品中其他方法不易測樣品中其他方法不易測出的少量或痕量酶出的少量或痕量酶不受體液中其它物質的不受體液中其它物質的影響影響酶原或去輔基酶蛋白酶原或去輔基酶蛋白P160 43三、缺點三、缺點要制備足夠量多的提純酶作為抗原和具有要制備足夠量多的提純酶作為抗原和具有免疫化學性質的抗血清免疫化學性質的抗血清步驟多，操作繁瑣步驟多，操作繁瑣測定成本高測定成本高P161 44第第 四四 節(jié)節(jié) 同工酶及其亞型測定同工酶及其亞型測定45一、概念一、概念同工酶（同工酶（isoenzyme） 同一種屬中由不

40、同基因或等位基因所編碼的多同一種屬中由不同基因或等位基因所編碼的多肽鏈單體、純聚體或雜化體，具有相同的催化功能，肽鏈單體、純聚體或雜化體，具有相同的催化功能，但其分子組成、空間構象、理化性質、生物學性質但其分子組成、空間構象、理化性質、生物學性質以及器官分布和細胞內定位不同的一類酶。以及器官分布和細胞內定位不同的一類酶。亞型（亞型（isoform） 即指基因在編碼過程中由于翻譯后修飾的差異即指基因在編碼過程中由于翻譯后修飾的差異所形成的多種形式的一類酶，往往在基因編碼產物所形成的多種形式的一類酶，往往在基因編碼產物從細胞內釋入血漿時因肽酶作用降解而形成。從細胞內釋入血漿時因肽酶作用降解而形成。

41、P161 46二、分析方法二、分析方法 臨床同工酶的分析可分為兩步臨床同工酶的分析可分為兩步首先精確地分離出某酶的各同工酶組分首先精確地分離出某酶的各同工酶組分測定酶的總活性和各同工酶或亞型組分的活性測定酶的總活性和各同工酶或亞型組分的活性P162 47二、分析方法二、分析方法（一）電泳法（一）電泳法原理原理使用最為廣泛使用最為廣泛簡便、快速、分離效果好、不破壞酶的天然構象簡便、快速、分離效果好、不破壞酶的天然構象可分為：乙酸纖維素薄膜電泳、聚丙烯酰胺凝膠電可分為：乙酸纖維素薄膜電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳及毛細管電泳泳、等電聚焦電泳及毛細管電泳測定步驟為：區(qū)帶分離、活性顯色和檢測結

42、果測定步驟為：區(qū)帶分離、活性顯色和檢測結果方法方法 同工酶氨基酸組成不同（一級結構不同），同工酶氨基酸組成不同（一級結構不同），pI不同，不同，電泳遷移率也就不同，電泳可將其分開。電泳遷移率也就不同，電泳可將其分開。P163 48顯色染料顯色染料偶氮染料偶氮染料四唑鹽四唑鹽 離子型化合物，易溶于水，離子型化合物，易溶于水，難溶于一般的有機試劑，利用其難溶于一般的有機試劑，利用其進行的偶合反應，生成不同顏色進行的偶合反應，生成不同顏色的偶氮色素進行同工酶譜檢測的偶氮色素進行同工酶譜檢測 受氫體作用，四唑鹽可被還原受氫體作用，四唑鹽可被還原成紫紅色的成紫紅色的formazan，常用的有：，常用的有

43、：NBT、INT、MTT等。其中等。其中NBT使用最多。使用最多。掃描定量掃描定量光密度計光密度計熒光計熒光計P16349（二）色譜法（二）色譜法 柱色譜法柱色譜法離子交換色譜離子交換色譜親和色譜親和色譜商品化微型色譜柱商品化微型色譜柱P16450（三）免疫分析法（三）免疫分析法免疫抑制法免疫抑制法免疫沉淀法免疫沉淀法其它免疫學方法其它免疫學方法 利用同工酶利用同工酶的一種亞基與相的一種亞基與相應抗體結合后，應抗體結合后，酶活性受到抑制，酶活性受到抑制，測定加與不加抗測定加與不加抗體前后樣品中酶體前后樣品中酶活性的變化活性的變化 利用分離提純的同工酶作抗原制備的利用分離提純的同工酶作抗原制備的

44、抗體與含該型同工酶的待測樣品混合，在抗體與含該型同工酶的待測樣品混合，在一定條件下抗原抗體復合物形成沉淀，離一定條件下抗原抗體復合物形成沉淀，離心后測定上清液中其它型別的酶活性，將心后測定上清液中其它型別的酶活性，將加入抗體前測得的總活性減去上清液酶活加入抗體前測得的總活性減去上清液酶活性，即可求出被沉淀的同工酶的活性。性，即可求出被沉淀的同工酶的活性。免疫電泳、免疫電泳、RIA、EIA和和CLIAP164 51（四）動力學分析法（四）動力學分析法 底物特異性分析法底物特異性分析法 抑制劑分析法抑制劑分析法 pH分析法分析法 熱失活分析法熱失活分析法（五）蛋白酶水解法（五）蛋白酶水解法P165

45、 52三、同工酶檢測意義三、同工酶檢測意義提高酶診斷的特異性提高酶診斷的特異性提高診斷的靈敏度提高診斷的靈敏度對某些疾病的預后有評價價值對某些疾病的預后有評價價值 有些同工酶有明顯的組織有些同工酶有明顯的組織分布和細胞內定位差異分布和細胞內定位差異 有些同工酶的變化可在總有些同工酶的變化可在總酶變化之前發(fā)生酶變化之前發(fā)生線粒體酶的測定線粒體酶的測定53第第 五節(jié)五節(jié) 臨床常用血清酶分析臨床常用血清酶分析 54一、轉氨酶（一、轉氨酶（ Aminotransferases ）及其同工酶）及其同工酶丙氨酸氨基轉移酶丙氨酸氨基轉移酶 (Alanine aminotransferases，ALT) /

46、谷丙轉氨酶谷丙轉氨酶 GPT天冬氨酸氨基轉移酶天冬氨酸氨基轉移酶 (Aspartate aminotransferases，AST/ 谷草轉氨酶谷草轉氨酶 GOT1.催化反應催化反應L-丙氨酸丙氨酸-酮戊二酸酮戊二酸 -丙酮酸丙酮酸 L-谷氨酸谷氨酸L-天冬氨酸天冬氨酸-酮戊二酸酮戊二酸 -草酰乙酸草酰乙酸 L-谷氨酸谷氨酸ALTAST 兩種酶均需要磷酸吡哆醛（兩種酶均需要磷酸吡哆醛（VitB6）為輔基，不含）為輔基，不含磷酸吡哆醛的酶蛋白為脫輔基酶蛋白，無催化活性。磷酸吡哆醛的酶蛋白為脫輔基酶蛋白，無催化活性。P166 552.組織分布組織分布 ALT大量存在于肝組織大量存在于肝組織，其次為

47、腎、心、骨骼肌等。，其次為腎、心、骨骼肌等。其有兩種活性同工酶，其有兩種活性同工酶，(ALTs)、(ALTm)，分別存在細，分別存在細胞質及線粒體中。肝細胞中胞質及線粒體中。肝細胞中ALT大多存在細胞質，少量在大多存在細胞質，少量在線粒體，肝細胞壞死時血清中以線粒體，肝細胞壞死時血清中以ALTs為主。為主。 AST存在多種器官，按含量多少為存在多種器官，按含量多少為心心、肝、肝、骨骼肌和骨骼肌和腎。其有兩種同工酶腎。其有兩種同工酶ASTs、ASTm，分別存在細胞質及線，分別存在細胞質及線粒體中。細胞輕度損傷粒體中。細胞輕度損傷ASTs顯著升高，而嚴重損傷時顯著升高，而嚴重損傷時ASTm 大量出

48、現于血清中。血中大量出現于血清中。血中AST升高多來自心臟或肝升高多來自心臟或肝臟損傷。臟損傷。P166563.標本標本 溶血標本不能用于檢測溶血標本不能用于檢測 宜用血清，宜用血清，4 冰箱中可貯存冰箱中可貯存1星期，活性無明顯改變。星期，活性無明顯改變。4.臨床意義臨床意義 ALT是反映肝損傷的一個靈敏指標是反映肝損傷的一個靈敏指標 急性肝炎早期升高，急性肝炎早期升高，ALTAST； 急性肝炎恢復指標急性肝炎恢復指標 Deritis比值可用于肝炎診斷、鑒別診斷及判斷轉歸比值可用于肝炎診斷、鑒別診斷及判斷轉歸 酶膽分離是肝細胞壞死先兆酶膽分離是肝細胞壞死先兆P16757 AST主要用于肝臟疾

49、病的診斷主要用于肝臟疾病的診斷 AMI發(fā)病發(fā)病6-8h即升高，即升高，48-60h達高峰，達高峰，4-5d恢復正常。恢復正常。由于由于AST在在AMI時升高遲于時升高遲于CK，恢復早于，恢復早于LD，故目前診，故目前診斷斷AMI價值不大。價值不大。 急性肝炎，急性肝炎，AST升高程度不及升高程度不及ALT；慢性肝炎，特別肝；慢性肝炎，特別肝硬化、慢性活動性肝炎時，硬化、慢性活動性肝炎時，AST升高程度超過升高程度超過ALT。P167 58二、二、 -谷氨酰轉移酶及其同工酶谷氨酰轉移酶及其同工酶-谷氨酰轉移酶谷氨酰轉移酶 （ - glutamyl transpeptid, - GT/GGT） 1

50、. 催化反應催化反應又稱：又稱：-谷氨酰轉肽酶谷氨酰轉肽酶 （ -GTP/GGTP) 一種含巰基的線粒體酶一種含巰基的線粒體酶，可催化，可催化-谷氨?；鶑墓劝滨；鶑腉SH或其或其它含它含-谷氨?；衔镏修D移至另一肽或氨基酸分子上。谷氨?；衔镏修D移至另一肽或氨基酸分子上。 GSH氨基酸氨基酸 -谷氨酰氨基酸半胱氨酰甘氨酸谷氨酰氨基酸半胱氨酰甘氨酸GGTP167 59 2. 組織分布組織分布 腎臟中含量最多，其次為胰、肺、肝等。血清中的腎臟中含量最多，其次為胰、肺、肝等。血清中的GGT主要來自肝膽。主要來自肝膽。 3. 標本標本 GGT較穩(wěn)定，室溫下可放置較穩(wěn)定，室溫下可放置2d， 4可存放

51、可存放1w1w， -20可儲存可儲存1y1y；RBCRBC中幾乎無中幾乎無GGTGGT，因此溶血標本可以檢，因此溶血標本可以檢測。測。P167604. 臨床意義臨床意義 有助肝膽疾病的鑒別診斷有助肝膽疾病的鑒別診斷 與與ALP聯合進行肝臟疾病檢測聯合進行肝臟疾病檢測 膽道疾病，膽道疾病，GGT陽性陽性率高，而且升高明顯，可高達率高，而且升高明顯，可高達5-30ULN，肝實質疾病是，肝實質疾病是GGT一般只是中度升高，可達一般只是中度升高，可達2-5ULN。 若若ALP升高而升高而GGT正正常，則完全排除常，則完全排除ALP的肝的肝來源，若來源，若ALP和和GGT都增都增加，則應先排除肝外引起加

52、，則應先排除肝外引起GGT增加的原因，一旦排增加的原因，一旦排除，則除，則GGT增高為肝病所增高為肝病所致。致。(1) 肝膽疾病檢出陽性率最高的酶肝膽疾病檢出陽性率最高的酶 (2) 用于判斷惡性腫瘤有無肝轉移用于判斷惡性腫瘤有無肝轉移 (3) 乙醇、巴比妥類藥物等可誘導乙醇、巴比妥類藥物等可誘導GGT的升高。的升高。P168 61三、三、 肌酸激酶及其同工酶和亞型肌酸激酶及其同工酶和亞型肌酸激酶肌酸激酶 （creatine kinase，CK）1. 催化反應催化反應 CK催化肌酸和催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和或磷酸肌酸和ADP之間的磷酸轉移之間的磷酸轉移的可逆性反應，的可逆性反應，所產生的磷酸

53、肌酸含高能磷酸鍵，是肌肉收所產生的磷酸肌酸含高能磷酸鍵，是肌肉收縮時能量的直接來源。縮時能量的直接來源。 磷酸肌酸磷酸肌酸ADP 肌酸肌酸ATPCKP168622. 組織分布組織分布 廣泛分布于全身，在骨骼肌含量最高，其次是心肌和腦。廣泛分布于全身，在骨骼肌含量最高，其次是心肌和腦。CK由兩種不同亞基（由兩種不同亞基（M，B）組成的二聚體，細胞質中存在）組成的二聚體，細胞質中存在三種同工酶：三種同工酶：CK-BB(CK1)、CK-MB(CK2)、CK-MM(CK3)，線粒體中存在線粒體中存在CK-Mt(CK4)，其電泳速率最慢。，其電泳速率最慢。 CK同工酶又可分為不同亞型，同工酶又可分為不同

54、亞型，CK-MM有三種亞型，有三種亞型，CK-MM1，CK-MM2，CK-MM3，電泳速率依次減慢；，電泳速率依次減慢；CK-MB有有CK-MB2和和CK-MB1兩種亞型。兩種亞型。3. 標本標本 不得用溶血標本，不得用溶血標本，RBC中含有中含有AK，可干擾測定，可干擾測定，引起測定值偏高；測定樣品宜用血清或肝素抗凝血漿，引起測定值偏高；測定樣品宜用血清或肝素抗凝血漿，其它抗凝劑都抑制其它抗凝劑都抑制CK活性?；钚浴168 63 4. 臨床意義臨床意義 CK及其同工酶和亞型是目前臨床上測定次數最多的及其同工酶和亞型是目前臨床上測定次數最多的酶之一，主要用于心肌、骨骼肌和腦疾患的診斷。酶之一

55、，主要用于心肌、骨骼肌和腦疾患的診斷。 (1) AMI的早期診斷的早期診斷總總CK在在AMI診斷中意義不大診斷中意義不大CK-MB為診斷為診斷AMI的金指標的金指標CK-MM3/CK-MM11.0為診斷為診斷AMI的標準（排除急性骨骼肌損傷）的標準（排除急性骨骼肌損傷）CK-MB21.9U/L或或CK-MB2/CK-MB11.5為診斷為診斷AMI的標準之一的標準之一 (2) 全身疾病特別是肌肉疾病時，全身疾病特別是肌肉疾病時，CK極度升高極度升高P169 64四、乳酸脫氫酶及其同工酶和亞型四、乳酸脫氫酶及其同工酶和亞型乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶 （lactate dehydrogenase，LD/L

56、DH） 1. 催化反應催化反應 LD催化乳酸氧化成丙酮酸，同時將氫轉移給輔酶而成催化乳酸氧化成丙酮酸，同時將氫轉移給輔酶而成為為NADH，依條件不同而有可逆性。，依條件不同而有可逆性。 L-乳酸乳酸NAD+ 丙酮酸丙酮酸NADHH+pH8.89.8Ph7.47.8P169 65 2. 組織分布組織分布 LD是一種含鋅的糖酵解酶，廣泛存在于人體各組織中，以是一種含鋅的糖酵解酶，廣泛存在于人體各組織中，以肝、心肌、腎、肌肉、肝、心肌、腎、肌肉、RBC含量最高。含量最高。 LD是由兩種不同亞基（是由兩種不同亞基（M和和H）組成的四聚體，形成）組成的四聚體，形成5種結種結構不同的同工酶，即構不同的同工

57、酶，即LD1(H4)，LD2(H3M)，LD3(H2M2)，LD4(HM3)和和LD5(M4)。 1.以以LD1為主，主要在心肌，可占總為主，主要在心肌，可占總LD活性活性50以上，以上，也存在于也存在于RBC內；內； 2.以以LD5為主，以橫紋肌為代表，肝臟中也有；為主，以橫紋肌為代表，肝臟中也有； 3.以以LD3為主，存在于脾肺。為主，存在于脾肺。 一般成年人血中一般成年人血中LD同工酶存在如下規(guī)律：同工酶存在如下規(guī)律：LD2LD1LD3LD4LD5，部分正常兒童血中可見，部分正常兒童血中可見LD1LD2。663. 標本標本 一般用血清，用血漿需離心去除血小板（血小板中含一般用血清，用血漿

58、需離心去除血小板（血小板中含有大量的有大量的LD），采血后迅速分離血清；因），采血后迅速分離血清；因RBC中中LD含量含量比血清高比血清高100倍以上，倍以上，不宜用溶血標本。不宜用溶血標本。 LD4、LD5宜冷變性，不應放在冰箱中宜冷變性，不應放在冰箱中，25 放放2-3d，LD活性變化不大?；钚宰兓淮蟆?74. 臨床意義臨床意義 亞急性心肌梗死診斷有一定價值，但其特異性差；亞急性心肌梗死診斷有一定價值，但其特異性差； (1) 診斷心臟疾病診斷心臟疾病 心肌梗死和心肌炎時以心肌梗死和心肌炎時以LD1和和LD2升高為主，大多升高為主，大多數數AMI患者血中會出現患者血中會出現“反轉比率反轉比

59、率”，即，即LD1LD2； (2) 診斷肝臟疾病診斷肝臟疾病 肝細胞損傷時常出現肝細胞損傷時常出現LD5LD4; 急性肝炎時急性肝炎時LD1LD2相對下降，相對下降，LD5升高；慢性肝升高；慢性肝炎時炎時LD5升高，且升高，且LD1LD3； (3) 診斷骨骼肌疾病診斷骨骼肌疾病 骨骼肌損傷時常出現骨骼肌損傷時常出現LD5LD4;P170 68五、堿性磷酸酶及其同工酶五、堿性磷酸酶及其同工酶堿性磷酸酶堿性磷酸酶 （alkaline phosphatase，ALP/AKP）1. 催化反應催化反應 一種含鋅的糖蛋白，在堿性環(huán)境中（一種含鋅的糖蛋白，在堿性環(huán)境中（pH10.0）可以水）可以水解各種天然

60、及人工合成的磷酸單酯化合物。解各種天然及人工合成的磷酸單酯化合物。2. 組織分布組織分布 ALP廣泛存在于各組織器官中，其含量以肝臟為最多，廣泛存在于各組織器官中，其含量以肝臟為最多，其次為腎、胎盤、小腸和骨骼等。血清中的其次為腎、胎盤、小腸和骨骼等。血清中的ALP主要來自主要來自肝臟和骨骼。肝臟和骨骼。 生長期兒童血清內生長期兒童血清內ALP主要來自成骨母細胞和生長中主要來自成骨母細胞和生長中的骨軟骨細胞，少量來自肝。的骨軟骨細胞，少量來自肝。P170 69 3. 標本標本 空腹采血空腹采血，避免脂肪餐的影響；樣品用血清，避免脂肪餐的影響；樣品用血清，不能用不能用明顯溶血標本明顯溶血標本；在