第三章高效液相色譜法A

1、第三章第三章 高效液相色譜法高效液相色譜法第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn) 以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)和以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法 引入氣相色譜法的理論，在技術(shù)上采用新型引入氣相色譜法的理論，在技術(shù)上采用新型高效的固定相、高壓輸液泵、梯度洗脫技術(shù)以高效的固定相、高壓輸液泵、梯度洗脫技術(shù)以及各種高靈敏度的檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了分析速度快、及各種高靈敏度的檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了分析速度快、分離效率高和操作自動(dòng)化分離效率高和操作自動(dòng)化 一、經(jīng)典液相柱色譜法與高效液相色譜法的比較一、經(jīng)典液相柱色譜法與高效液相色譜法

2、的比較經(jīng)典液相色譜經(jīng)典液相色譜高效液相色譜高效液相色譜常壓或減壓常壓或減壓高壓，高壓，4040 50MPa50MPa填料顆粒大，填料顆粒大，7575600m600m填料顆粒小，填料顆粒小，2 2 50m50m柱效低，柱效低，2 2 50 50 塊塊/m/m柱效高柱效高,40000 ,40000 60000 60000 塊塊/m/m分析速度慢，分析速度慢，1 12020小時(shí)小時(shí)分析速度快，分析速度快，0.050.051.0 h1.0 h色譜柱只用一次色譜柱只用一次色譜柱可重復(fù)多次使用色譜柱可重復(fù)多次使用不能在線檢測(cè)不能在線檢測(cè)能在線檢測(cè)能在線檢測(cè)二、氣相色譜法與高效液相色譜法的比較二、氣相色譜法

3、與高效液相色譜法的比較 相同：相同：兼具分離和分析功能，兼具分離和分析功能， 均可以在線檢測(cè)均可以在線檢測(cè) 主要差別：主要差別：分析對(duì)象的差別、分析對(duì)象的差別、 流動(dòng)相的差別、流動(dòng)相的差別、 操作條件差別操作條件差別分析對(duì)象的差異分析對(duì)象的差異GC 能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品 高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型 及高聚物的樣品不可檢測(cè)及高聚物的樣品不可檢測(cè) 占有機(jī)物的占有機(jī)物的20%HPLC 溶解后能制成溶液的樣品溶解后能制成溶液的樣品 不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制 分子量大、難

4、氣化、熱穩(wěn)定性差及分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及 高分子高分子 和離子型樣品均可檢測(cè)和離子型樣品均可檢測(cè) 用途廣泛，占有機(jī)物的用途廣泛，占有機(jī)物的80%流動(dòng)相差別流動(dòng)相差別GC： 流動(dòng)相為惰性氣體流動(dòng)相為惰性氣體 組分與流動(dòng)相無親合作用力組分與流動(dòng)相無親合作用力 只與固定相作用只與固定相作用 流動(dòng)相差別（續(xù)）流動(dòng)相差別（續(xù)）HPLC：流動(dòng)相為液體：流動(dòng)相為液體 流動(dòng)相與組分間有親合作用力，為提高柱的流動(dòng)相與組分間有親合作用力，為提高柱的選擇性、改善分離度增加了因素，對(duì)分離起選擇性、改善分離度增加了因素，對(duì)分離起很大作用很大作用 流動(dòng)相種類較多，選擇余地廣流動(dòng)相種類較多，選擇余地廣 流動(dòng)相極性和

5、流動(dòng)相極性和pHpH值的選擇也對(duì)分離起到重值的選擇也對(duì)分離起到重要作用要作用 選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相可以增大分離選擇性流動(dòng)相可以增大分離選擇性操作條件差別操作條件差別 GC：加溫操作：加溫操作 HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬?。┓逭箤捫。┤⒏咝б合嗌V法的特點(diǎn)三、高效液相色譜法的特點(diǎn)（1 1）高壓：供液壓力和進(jìn)樣壓力可達(dá)）高壓：供液壓力和進(jìn)樣壓力可達(dá)5 5 10104 4kPakPa（2 2）高速）高速: : 流動(dòng)相流速加快流動(dòng)相流速加快 （3 3）高效）高效: : 柱效可達(dá)柱效可達(dá)3 3萬塔板萬塔板

6、/ /米以上。米以上。（4 4）高靈敏度）高靈敏度:10:10-16-161010-9-9克克 （5 5）選擇性高：可以通過流動(dòng)相的控制來改善分離）選擇性高：可以通過流動(dòng)相的控制來改善分離過程的選擇性過程的選擇性 （6 6）應(yīng)用范圍廣）應(yīng)用范圍廣 四、四、 影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素（一）塔板理論（一）塔板理論 理理nLH/22212)(16)(54. 5)(WtWttnRRR理effeffnLH/2212)(54. 5)(16WtWtnRReff0ttkR2)1(kknneff理（二）速率理論（二）速率理論 （填充柱）：uCuBAHGC/（毛細(xì)管柱）或uCu

7、BH/dpA2dpAgmDDB22gRDBtB，MTDTDgg或llgsmCCCCCCllDdfC2TDLHPLC H = He + Hd + HsH = He + Hd + Hs + Hmm + Hsm+ Hmm + Hsm 固定相傳質(zhì)阻力固定相傳質(zhì)阻力流動(dòng)流動(dòng)相傳質(zhì)阻力流動(dòng)流動(dòng)相傳質(zhì)阻力滯留流動(dòng)相傳質(zhì)阻力滯留流動(dòng)相傳質(zhì)阻力渦流擴(kuò)散渦流擴(kuò)散分子擴(kuò)散分子擴(kuò)散1 1、渦流擴(kuò)散項(xiàng)、渦流擴(kuò)散項(xiàng)HeHe HeHe A = 2dpA = 2dp 柱效柱效nHAdP, 2 2、分子擴(kuò)散項(xiàng)、分子擴(kuò)散項(xiàng)HdHd 樣品在色譜柱中滯留的時(shí)間愈長(zhǎng)，色譜譜帶樣品在色譜柱中滯留的時(shí)間愈長(zhǎng)，色譜譜帶的分子擴(kuò)散也愈嚴(yán)重。的

8、分子擴(kuò)散也愈嚴(yán)重。 Dm10 Dm10-5 -5 cmcm2 2/s/s（比在氣體中要?。ū仍跉怏w中要小4545個(gè)數(shù)量個(gè)數(shù)量級(jí)），所以在液相色譜中，縱向分子擴(kuò)散項(xiàng)實(shí)級(jí)），所以在液相色譜中，縱向分子擴(kuò)散項(xiàng)實(shí)際上可以忽略際上可以忽略 3 3、傳質(zhì)阻力項(xiàng)、傳質(zhì)阻力項(xiàng)(1)(1)固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)HsHs：(2)(2)流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)：流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)：流動(dòng)的流動(dòng)相的傳質(zhì)阻力流動(dòng)的流動(dòng)相的傳質(zhì)阻力Hmm Hmm 滯留的流動(dòng)相的傳質(zhì)阻力滯留的流動(dòng)相的傳質(zhì)阻力HsmHsm Van DeemterVan Deemter方程方程 uDdCDdCDdCuDCdHSfsmpsmmpmmdp2222C

9、uuBAH分子擴(kuò)散和傳質(zhì)阻力對(duì)板高的貢獻(xiàn)分子擴(kuò)散和傳質(zhì)阻力對(duì)板高的貢獻(xiàn)固定相粒度大小對(duì)板高的影響固定相粒度大小對(duì)板高的影響 （三）影響譜帶展寬的其他因素（三）影響譜帶展寬的其他因素柱外效應(yīng)柱外效應(yīng)第二節(jié) 高效液相色譜儀 流動(dòng)相流動(dòng)相 泵泵色色譜譜柱柱檢測(cè)檢測(cè)器器 泵泵輸輸液液分離分離 檢測(cè)檢測(cè) 記錄記錄AEGBCDF進(jìn)樣閥進(jìn)樣閥進(jìn)樣進(jìn)樣一、貯液和脫氣裝置 1 儲(chǔ)液罐儲(chǔ)液罐 材質(zhì)：玻璃、不銹鋼、氟塑料或特種塑料材質(zhì)：玻璃、不銹鋼、氟塑料或特種塑料聚醚醚酮（聚醚醚酮（PEEK） 容積：容積：0.52.0L 放置位置：高于泵體，保持一定的輸放置位置：高于泵體，保持一定的輸 靜壓差靜壓差 注意：密封、

10、過濾注意：密封、過濾 2、流動(dòng)相-過濾、脫氣v流動(dòng)相過濾的目的流動(dòng)相過濾的目的 過濾去除可能存在的微小固過濾去除可能存在的微小固體顆粒，保護(hù)色譜高壓泵和色譜體顆粒，保護(hù)色譜高壓泵和色譜柱柱v流動(dòng)相過濾方法流動(dòng)相過濾方法 在線過濾在線過濾 抽真空抽真空過濾過濾過濾用膜：過濾用膜：水系和有機(jī)水系和有機(jī) 孔徑：孔徑：0.22m和和0.45mv流動(dòng)相脫氣的目的流動(dòng)相脫氣的目的使色譜泵的輸液準(zhǔn)確使色譜泵的輸液準(zhǔn)確v輸液均勻準(zhǔn)確，并且脈動(dòng)減小輸液均勻準(zhǔn)確，并且脈動(dòng)減小v保留時(shí)間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高保留時(shí)間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高提高檢測(cè)的性能提高檢測(cè)的性能v防止氣泡引起的尖峰防止氣泡引起的尖峰v基線穩(wěn)

11、定，信噪比增加基線穩(wěn)定，信噪比增加v溶劑的紫外吸收本底降低溶劑的紫外吸收本底降低保護(hù)色譜柱保護(hù)色譜柱v減少死體積減少死體積v防止填料的氧化防止填料的氧化常用的脫氣方法有：常用的脫氣方法有：吹氦脫氣法吹氦脫氣法： 原理：利用氦氣在液體中的溶解度比空氣低。原理：利用氦氣在液體中的溶解度比空氣低。 特點(diǎn)：效果好，適合所有溶劑，但成本高，使用較少特點(diǎn)：效果好，適合所有溶劑，但成本高，使用較少加熱回留法：加熱回留法：脫氣效果也比較好脫氣效果也比較好抽真空脫氣法：抽真空脫氣法： 特點(diǎn)：可以一次完成過濾和脫氣任務(wù)特點(diǎn)：可以一次完成過濾和脫氣任務(wù) 注意：抽真空會(huì)引起混合溶劑組分的變化，適合單一溶劑注意：抽真空

12、會(huì)引起混合溶劑組分的變化，適合單一溶劑體系體系超聲波脫氣法超聲波脫氣法 簡(jiǎn)單，但效果不理想簡(jiǎn)單，但效果不理想常用的脫氣方法（續(xù)）在線真空脫氣法在線真空脫氣法 把真空脫氣裝置串接到儲(chǔ)液系統(tǒng)，結(jié)合膜過濾把真空脫氣裝置串接到儲(chǔ)液系統(tǒng)，結(jié)合膜過濾器可以實(shí)現(xiàn)流動(dòng)相的連續(xù)在線真空脫氣器可以實(shí)現(xiàn)流動(dòng)相的連續(xù)在線真空脫氣。高壓輸液泵性能：高壓輸液泵性能： 泵體材料耐化學(xué)腐蝕泵體材料耐化學(xué)腐蝕 能在高壓下連續(xù)工作能在高壓下連續(xù)工作 輸液流量范圍寬輸液流量范圍寬 輸出流量穩(wěn)定、重復(fù)性高：流量控制的精輸出流量穩(wěn)定、重復(fù)性高：流量控制的精密度應(yīng)小于密度應(yīng)小于1%（最好為（最好為0.5% ），重復(fù)性），重復(fù)性 最好為最

13、好為0.5% 二、高壓輸液系統(tǒng) 高壓輸液泵分類：高壓輸液泵分類：恒壓泵恒壓泵和恒流泵恒流泵 1、恒流泵、恒流泵 輸出恒定體積流量的流動(dòng)相輸出恒定體積流量的流動(dòng)相 注射型注射型 恒流泵恒流泵 往復(fù)型往復(fù)型 雙柱塞往復(fù)式并聯(lián)泵雙柱塞往復(fù)式并聯(lián)泵 雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵 往復(fù)型泵往復(fù)型泵 目前使用的是雙柱塞往復(fù)式并聯(lián)泵和雙目前使用的是雙柱塞往復(fù)式并聯(lián)泵和雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵往復(fù)型泵往復(fù)型泵優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 可以在高壓下連續(xù)以恒定的流量輸液可以在高壓下連續(xù)以恒定的流量輸液 液缸容積很小，柱塞容易密封，造價(jià)低液缸容積很小，柱塞容易密封，造價(jià)低 更換溶劑方便，特別適用于梯度洗脫更換

14、溶劑方便，特別適用于梯度洗脫往復(fù)型泵往復(fù)型泵缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 流動(dòng)相存在脈動(dòng)，難以用折光示差檢測(cè)器進(jìn)行定量流動(dòng)相存在脈動(dòng)，難以用折光示差檢測(cè)器進(jìn)行定量分析分析 柱塞式往復(fù)泵、柱塞和流動(dòng)相直接接觸，易造成污柱塞式往復(fù)泵、柱塞和流動(dòng)相直接接觸，易造成污染染 長(zhǎng)期運(yùn)轉(zhuǎn)后，流動(dòng)相中的某些機(jī)械雜質(zhì)會(huì)造成單向長(zhǎng)期運(yùn)轉(zhuǎn)后，流動(dòng)相中的某些機(jī)械雜質(zhì)會(huì)造成單向閥阻塞或閥球磨損不能關(guān)閉單向閥，使泵不能正常閥阻塞或閥球磨損不能關(guān)閉單向閥，使泵不能正常運(yùn)轉(zhuǎn)運(yùn)轉(zhuǎn) 柱塞式往復(fù)泵是柱塞式往復(fù)泵是HPLC中應(yīng)用廣泛，也是最重要中應(yīng)用廣泛，也是最重要的高壓輸液泵的高壓輸液泵雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵示意圖2 2、恒壓泵（氣動(dòng)放大泵）、恒壓泵

15、（氣動(dòng)放大泵）輸出恒定壓輸出恒定壓力的泵力的泵優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 能以比較簡(jiǎn)單的方式建立高壓并輸出無脈能以比較簡(jiǎn)單的方式建立高壓并輸出無脈動(dòng)的恒壓流動(dòng)相液流動(dòng)的恒壓流動(dòng)相液流 適合和折光示差檢測(cè)器配合使用適合和折光示差檢測(cè)器配合使用 可以利用改變氣源壓力的方法來調(diào)節(jié)載液可以利用改變氣源壓力的方法來調(diào)節(jié)載液流速流速缺點(diǎn)： 不能輸出恒定流量的流動(dòng)相不能輸出恒定流量的流動(dòng)相 色譜峰的重復(fù)保留時(shí)間差色譜峰的重復(fù)保留時(shí)間差 不能獲得可靠的定性結(jié)果不能獲得可靠的定性結(jié)果 液缸體積大（約液缸體積大（約70ml)70ml)，更換載液時(shí)操作不便，更換載液時(shí)操作不便 目前恒壓泵主要用于目前恒壓泵主要用于色譜柱的制備色譜

16、柱的制備，配合裝柱用的，配合裝柱用的勻漿裝柱機(jī)，可以快速建立所需的高壓輸出勻漿裝柱機(jī)，可以快速建立所需的高壓輸出單液缸氣動(dòng)放大泵示意圖v氣動(dòng)放大泵是利用氣體為動(dòng)力源，通過帕氣動(dòng)放大泵是利用氣體為動(dòng)力源，通過帕斯卡原理把氣體的壓力放大成流動(dòng)相的壓斯卡原理把氣體的壓力放大成流動(dòng)相的壓力力 3 3、輸液系統(tǒng)的輔助設(shè)備、輸液系統(tǒng)的輔助設(shè)備 主要有管道過濾器、脈動(dòng)阻尼器、由壓力傳感器組主要有管道過濾器、脈動(dòng)阻尼器、由壓力傳感器組成的壓力測(cè)量、顯示裝置，以及流動(dòng)相流量的測(cè)量裝置成的壓力測(cè)量、顯示裝置，以及流動(dòng)相流量的測(cè)量裝置4 4、梯度洗脫裝置、梯度洗脫裝置 梯度洗脫技術(shù)可以提高柱效、縮短分析時(shí)間，改善梯

17、度洗脫技術(shù)可以提高柱效、縮短分析時(shí)間，改善檢測(cè)器的靈敏度，它類似于檢測(cè)器的靈敏度，它類似于GCGC種使用的程序升溫技術(shù)種使用的程序升溫技術(shù) 影響梯度洗脫的主要因素有：溶劑的純度、溶劑的影響梯度洗脫的主要因素有：溶劑的純度、溶劑的互溶性、檢測(cè)器的種類互溶性、檢測(cè)器的種類三、進(jìn)樣裝置1 1、進(jìn)樣器進(jìn)樣、進(jìn)樣器進(jìn)樣 進(jìn)樣前打開流動(dòng)相泄流閥進(jìn)樣前打開流動(dòng)相泄流閥 用注射器進(jìn)樣用注射器進(jìn)樣 關(guān)閉泄流閥，完成一次關(guān)閉泄流閥，完成一次 2、六通閥進(jìn)樣裝置一定不能使用尖針！它會(huì)嚴(yán)重刮壞轉(zhuǎn)子墊圈一定不能使用尖針！它會(huì)嚴(yán)重刮壞轉(zhuǎn)子墊圈進(jìn)樣針進(jìn)樣針3 3、自動(dòng)進(jìn)樣器、自動(dòng)進(jìn)樣器 工作站按預(yù)定程序自動(dòng)完成取樣、工作站

18、按預(yù)定程序自動(dòng)完成取樣、進(jìn)樣、復(fù)位、樣品管路清洗和樣品盤進(jìn)樣、復(fù)位、樣品管路清洗和樣品盤的移動(dòng)等所有步驟的移動(dòng)等所有步驟 樣品瓶置于進(jìn)樣針下方樣品瓶置于進(jìn)樣針下方進(jìn)樣針穿過墊圈進(jìn)入瓶中進(jìn)樣針穿過墊圈進(jìn)入瓶中注射器抽取所設(shè)定的樣品體積進(jìn)樣針收回轉(zhuǎn)入針端口使之并成為流路的一部分轉(zhuǎn)入針端口使之并成為流路的一部分功能的拓展： 進(jìn)樣針的位置可以上下調(diào)節(jié)；進(jìn)樣針的位置可以上下調(diào)節(jié)； 利用進(jìn)樣程序進(jìn)行某些柱前衍生化反應(yīng)利用進(jìn)樣程序進(jìn)行某些柱前衍生化反應(yīng)例：氨基酸的衍生化反應(yīng)例：氨基酸的衍生化反應(yīng) “三明治三明治”式進(jìn)樣可以自動(dòng)混合式進(jìn)樣可以自動(dòng)混合 茚三酮衍生，用紫外檢測(cè)器茚三酮衍生，用紫外檢測(cè)器 鄰苯二甲

19、醛衍生，用熒光檢測(cè)器鄰苯二甲醛衍生，用熒光檢測(cè)器四、分離系統(tǒng)1 1、柱材料和規(guī)格、柱材料和規(guī)格 不銹鋼管不銹鋼管 柱管的內(nèi)徑：柱管的內(nèi)徑：0.5 4.6mm 填料粒度：填料粒度：3 10 m 柱長(zhǎng)度：柱長(zhǎng)度：10 50 cm2 2、色譜柱色譜性能的評(píng)價(jià)、色譜柱色譜性能的評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)內(nèi)容：評(píng)價(jià)內(nèi)容：分離效能、對(duì)指定溶質(zhì)的選擇型、在不同分離效能、對(duì)指定溶質(zhì)的選擇型、在不同PHPH介質(zhì)中的穩(wěn)定性、不同批次但同型號(hào)填料間性能的重介質(zhì)中的穩(wěn)定性、不同批次但同型號(hào)填料間性能的重現(xiàn)性、適宜的操作壓力等?，F(xiàn)性、適宜的操作壓力等。性能評(píng)價(jià)方法：性能評(píng)價(jià)方法：以指定的一組標(biāo)準(zhǔn)溶質(zhì)為樣品，測(cè)定它以指定的一組標(biāo)準(zhǔn)溶質(zhì)為樣

20、品，測(cè)定它們?cè)谥由系睦碚撍鍞?shù)，作為柱效的衡量指標(biāo)。們?cè)谥由系睦碚撍鍞?shù)，作為柱效的衡量指標(biāo)。例：對(duì)于反相色譜填料，可以選擇一組具有不同極性的例：對(duì)于反相色譜填料，可以選擇一組具有不同極性的芳香族化合物，如：苯、萘、菲或苯、甲苯、二甲苯芳香族化合物，如：苯、萘、菲或苯、甲苯、二甲苯等作為基本組分，再加以苯酚或苯胺等酸、堿性溶質(zhì)。等作為基本組分，再加以苯酚或苯胺等酸、堿性溶質(zhì)。五、檢測(cè)系統(tǒng)主要作用：主要作用：監(jiān)測(cè)經(jīng)色譜柱分離后的組分濃監(jiān)測(cè)經(jīng)色譜柱分離后的組分濃度變化，并由工作站記錄數(shù)據(jù)，定性、度變化，并由工作站記錄數(shù)據(jù)，定性、定量分析。定量分析。（一）概述 1 1、理想的檢測(cè)器應(yīng)具備的特性、

21、理想的檢測(cè)器應(yīng)具備的特性第一：具有高靈敏度和可預(yù)測(cè)的響應(yīng)第一：具有高靈敏度和可預(yù)測(cè)的響應(yīng) 第二：對(duì)樣品所有組分都有響應(yīng)，或具有可預(yù)測(cè)的特異第二：對(duì)樣品所有組分都有響應(yīng)，或具有可預(yù)測(cè)的特異性，適用范圍廣性，適用范圍廣 第三：溫度和洗脫液流速的變化對(duì)響應(yīng)沒有影響第三：溫度和洗脫液流速的變化對(duì)響應(yīng)沒有影響 第四：響應(yīng)與洗脫液組成無關(guān)，因此可作梯度洗脫第四：響應(yīng)與洗脫液組成無關(guān)，因此可作梯度洗脫 第五：死體積小，不造成柱外譜帶擴(kuò)展第五：死體積小，不造成柱外譜帶擴(kuò)展 第六：使用方便、可靠、耐用，易清洗和檢修第六：使用方便、可靠、耐用，易清洗和檢修 第七：響應(yīng)值隨樣品組分量的增加而線性增加，第七：響應(yīng)值隨

22、樣品組分量的增加而線性增加，線性范圍寬線性范圍寬 第八：不破壞樣品組分第八：不破壞樣品組分 第九：能對(duì)被檢測(cè)的峰提供定性和定量信息第九：能對(duì)被檢測(cè)的峰提供定性和定量信息 第十：響應(yīng)時(shí)間快第十：響應(yīng)時(shí)間快 檢測(cè)器的種類v可變波長(zhǎng)紫外可見光檢測(cè)器可變波長(zhǎng)紫外可見光檢測(cè)器v光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器v示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器v熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器v蒸發(fā)光散射檢測(cè)器蒸發(fā)光散射檢測(cè)器v電導(dǎo)電化學(xué)和脈沖安培檢測(cè)器電導(dǎo)電化學(xué)和脈沖安培檢測(cè)器v質(zhì)譜檢測(cè)器質(zhì)譜檢測(cè)器2、衡量檢測(cè)器的指標(biāo)v靈敏度靈敏度 S = S = R / R / Q QR R是檢測(cè)器響應(yīng)值的增量是檢測(cè)器響應(yīng)值的增量Q Q是樣

23、品量的增量是樣品量的增量v噪音噪音 沒有樣品時(shí)檢測(cè)器的最大輸出信號(hào)沒有樣品時(shí)檢測(cè)器的最大輸出信號(hào)v漂移漂移 檢測(cè)器在一段時(shí)間內(nèi)響應(yīng)值的變化檢測(cè)器在一段時(shí)間內(nèi)響應(yīng)值的變化v線性動(dòng)態(tài)范圍線性動(dòng)態(tài)范圍最大線性相應(yīng)與最小檢出限之比最大線性相應(yīng)與最小檢出限之比v最小檢測(cè)限最小檢測(cè)限樣品產(chǎn)生兩或三倍于噪音信號(hào)時(shí)的濃度樣品產(chǎn)生兩或三倍于噪音信號(hào)時(shí)的濃度v信噪比信噪比S/NS/N注意注意最小檢測(cè)限不是一個(gè)單純的檢測(cè)器指標(biāo)。它實(shí)最小檢測(cè)限不是一個(gè)單純的檢測(cè)器指標(biāo)。它實(shí)際上是評(píng)價(jià)整個(gè)色譜系統(tǒng)的指標(biāo)，包括了色譜系統(tǒng)、際上是評(píng)價(jià)整個(gè)色譜系統(tǒng)的指標(biāo)，包括了色譜系統(tǒng)、分離機(jī)理、色譜柱在內(nèi)的綜合性指標(biāo)，信噪比亦如此分離機(jī)理

24、、色譜柱在內(nèi)的綜合性指標(biāo)，信噪比亦如此（二）紫外檢測(cè)器（二）紫外檢測(cè)器原理：原理：基于被分析組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光或可見基于被分析組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光或可見光的選擇性吸收光的選擇性吸收定量基礎(chǔ)：定量基礎(chǔ)：比耳定律，比耳定律，LCKA 比耳定律v光能量光能量 I I0 0 = = 入射光強(qiáng)度入射光強(qiáng)度 I = I = 透過光強(qiáng)度透過光強(qiáng)度v光通量光通量( (透過率透過率%)%) T= I/I T= I/I0 0v吸光度吸光度 A = -log(T)= A = -log(T)= log(Ilog(I0 0/I)/I)v吸光度吸光度 A = abc A = abc流動(dòng)池示意圖 定波長(zhǎng)檢測(cè)器定波長(zhǎng)檢測(cè)器

25、紫外檢測(cè)器種類紫外檢測(cè)器種類 可變波長(zhǎng)檢測(cè)器可變波長(zhǎng)檢測(cè)器 二極管陣列檢測(cè)器二極管陣列檢測(cè)器第一種類型：固定波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器光源光源 低壓汞燈，發(fā)出低壓汞燈，發(fā)出90%90%的的254nm254nm波長(zhǎng)的光波長(zhǎng)的光 鋅燈，發(fā)出鋅燈，發(fā)出214nm214nm波長(zhǎng)的光波長(zhǎng)的光 鎘燈則為鎘燈則為229nm229nm和和326nm 326nm 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 結(jié)構(gòu)緊湊、造價(jià)低、操作維修方便、靈敏度高，結(jié)構(gòu)緊湊、造價(jià)低、操作維修方便、靈敏度高，適于梯度洗脫適于梯度洗脫 只能對(duì)具特征波長(zhǎng)有吸收的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)只能對(duì)具特征波長(zhǎng)有吸收的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè) 第二種類型：可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器 氘燈氘燈190190600 nm

26、600 nm t新發(fā)展新發(fā)展 可以可以 高靈敏度高靈敏度4 波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè) 根據(jù)根據(jù)4波長(zhǎng)測(cè)定得到的吸收值之比判斷峰的純度波長(zhǎng)測(cè)定得到的吸收值之比判斷峰的純度 具有具有DAD檢測(cè)器的相似功能檢測(cè)器的相似功能第三種類型：光電二極管陣列檢測(cè)器（DAD） 光電二極管陣列檢測(cè)器DAD檢測(cè)器的主要特點(diǎn)：可以同時(shí)得到多個(gè)波長(zhǎng)的色譜圖，可以計(jì)算可以同時(shí)得到多個(gè)波長(zhǎng)的色譜圖，可以計(jì)算不同波長(zhǎng)處的相對(duì)吸收比不同波長(zhǎng)處的相對(duì)吸收比可以在色譜分離同時(shí)，對(duì)色譜峰的指定位置可以在色譜分離同時(shí)，對(duì)色譜峰的指定位置實(shí)時(shí)記錄吸收光譜圖，并得到最大吸收波長(zhǎng)實(shí)時(shí)記錄吸收光譜圖，并得到最大吸收波長(zhǎng)在色譜運(yùn)行期間，可以逐點(diǎn)

27、進(jìn)行光譜掃描，在色譜運(yùn)行期間，可以逐點(diǎn)進(jìn)行光譜掃描，得到時(shí)間得到時(shí)間波長(zhǎng)波長(zhǎng)吸收值為坐標(biāo)的三維圖形吸收值為坐標(biāo)的三維圖形DAD檢測(cè)器的主要特點(diǎn)（續(xù) ）可以選擇寬波帶進(jìn)行檢測(cè)，一次就能把所有組分檢測(cè)可以選擇寬波帶進(jìn)行檢測(cè)，一次就能把所有組分檢測(cè)出來出來 DADDAD檢測(cè)器的一些特殊功能：檢測(cè)器的一些特殊功能：.色譜峰的準(zhǔn)確定性色譜峰的準(zhǔn)確定性.進(jìn)行峰純度的檢驗(yàn)進(jìn)行峰純度的檢驗(yàn).選擇最佳波長(zhǎng)選擇最佳波長(zhǎng).建立光譜庫(kù)，檢索被測(cè)樣品的光譜建立光譜庫(kù)，檢索被測(cè)樣品的光譜例：山梨酸和苯甲酸部分例：山梨酸和苯甲酸部分 分離的色譜峰分離的色譜峰a.a.山梨酸山梨酸b.b.苯甲酸苯甲酸c.c.混合物混合物紫外普

28、通檢測(cè)器和光電二極管陣列檢測(cè)器的比較紫外普通檢測(cè)器和光電二極管陣列檢測(cè)器的比較（三）熒光檢測(cè)器（FLD） v熒光檢測(cè)器是利用測(cè)量化合物熒光強(qiáng)度，對(duì)化熒光檢測(cè)器是利用測(cè)量化合物熒光強(qiáng)度，對(duì)化合物進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)器。合物進(jìn)行檢測(cè)的檢測(cè)器。v在實(shí)驗(yàn)條件固定，樣品濃度較低時(shí)，熒光強(qiáng)度在實(shí)驗(yàn)條件固定，樣品濃度較低時(shí)，熒光強(qiáng)度與樣品濃度呈線性關(guān)系，因此熒光檢測(cè)器是濃與樣品濃度呈線性關(guān)系，因此熒光檢測(cè)器是濃度敏感性檢測(cè)器，可直接用于定量分析度敏感性檢測(cè)器，可直接用于定量分析 主要主要特點(diǎn)特點(diǎn)：靈敏度高（靈敏度高（高于紫外吸收檢測(cè)器兩個(gè)數(shù)量級(jí)高于紫外吸收檢測(cè)器兩個(gè)數(shù)量級(jí) ）選擇性好選擇性好 產(chǎn)生熒光的必要條件：

29、產(chǎn)生熒光的必要條件： 第一：物質(zhì)分子中具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶，第一：物質(zhì)分子中具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶，即物質(zhì)分子必須具有一定的吸收結(jié)構(gòu)即物質(zhì)分子必須具有一定的吸收結(jié)構(gòu) 第二：物質(zhì)分子吸收了激發(fā)光能量之后具有高的熒光第二：物質(zhì)分子吸收了激發(fā)光能量之后具有高的熒光效率效率定量分析時(shí)定量分析時(shí)線性范圍較窄線性范圍較窄 受外界條件的影響小受外界條件的影響小當(dāng)所選用的流動(dòng)相溶劑不發(fā)射熒光，當(dāng)所選用的流動(dòng)相溶劑不發(fā)射熒光，F(xiàn)LDFLD就能適用于就能適用于梯度洗脫梯度洗脫最小檢測(cè)濃度可達(dá)最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng0.1ngmlml，適用于痕量分析，適用于痕量分析氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及

30、某些代謝藥物氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測(cè)都可以用熒光法檢測(cè) 原理：原理：化合物受到紫外光的照射后，吸收輻射能，化合物受到紫外光的照射后，吸收輻射能，發(fā)出比吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)的特征輻射，這種特征輻射發(fā)出比吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)的特征輻射，這種特征輻射光線就是熒光光線就是熒光, ,測(cè)定發(fā)出的熒光能量即可定量測(cè)定發(fā)出的熒光能量即可定量 l主要包括：激發(fā)光源、選擇激發(fā)波長(zhǎng)用的單色器、流通主要包括：激發(fā)光源、選擇激發(fā)波長(zhǎng)用的單色器、流通池、選擇發(fā)射波長(zhǎng)用的單色器、用于檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度的光池、選擇發(fā)射波長(zhǎng)用的單色器、用于檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度的光電檢測(cè)器電檢測(cè)器 目前使用比較多的是目前使用比較多的是激光

31、誘導(dǎo)熒光激光誘導(dǎo)熒光檢檢測(cè)器。組成與普通的熒光檢測(cè)器一樣。測(cè)器。組成與普通的熒光檢測(cè)器一樣。 兩者的主要兩者的主要區(qū)別區(qū)別為光源，前者光氙弧燈為光源，前者光氙弧燈（連續(xù)式、脈沖式），后者的光源是激光（連續(xù)式、脈沖式），后者的光源是激光器，使用較多的是小功率的器，使用較多的是小功率的ArAr離子激光器離子激光器（四）示差折光檢測(cè)器（DRD）v原理原理：示差折光檢測(cè)器是通過連續(xù)監(jiān)測(cè)參比池和測(cè)量：示差折光檢測(cè)器是通過連續(xù)監(jiān)測(cè)參比池和測(cè)量池中溶液的折光指數(shù)之差來測(cè)定樣品濃度池中溶液的折光指數(shù)之差來測(cè)定樣品濃度通用型通用型沒有紫外吸收的沒有紫外吸收的標(biāo)準(zhǔn)糖類混合物(單糖和糖醇)樣品：樣品：1. 麥芽三糖

32、麥芽三糖 2. 蔗糖蔗糖 3. 葡萄糖葡萄糖 4. 半乳糖半乳糖 5. 果糖果糖 6. 甘露醇甘露醇 7. 阿拉伯醇阿拉伯醇 8. 山梨醇山梨醇分析條件：分析條件：柱：柱：CHO620(Ca 2)聚合物柱聚合物柱洗脫液：蒸餾水洗脫液：蒸餾水流速流速 ；0.5ml/min溫度溫度 ：90 dig.C.檢測(cè)器：檢測(cè)器：RI進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：20微升微升（五）電化學(xué)檢測(cè)器（ECD）v 電導(dǎo)檢測(cè)器是一種選擇性檢測(cè)器，用電導(dǎo)檢測(cè)器是一種選擇性檢測(cè)器，用于檢測(cè)陽離子和陰離子，在離子色譜中于檢測(cè)陽離子和陰離子，在離子色譜中應(yīng)用廣泛應(yīng)用廣泛特點(diǎn)：特點(diǎn)：靈敏度高，最小檢測(cè)量一般為靈敏度高，最小檢測(cè)量一般為ngng

33、級(jí)，有的可達(dá)級(jí)，有的可達(dá)pgpg級(jí)級(jí) 選擇性好，可測(cè)定具有電解活性物質(zhì)（亦可測(cè)定大量非選擇性好，可測(cè)定具有電解活性物質(zhì)（亦可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)）電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)） 線性范圍寬，一般為線性范圍寬，一般為4 45 5個(gè)數(shù)量級(jí)個(gè)數(shù)量級(jí) 測(cè)量時(shí)要恒溫，不宜用于梯度洗脫測(cè)量時(shí)要恒溫，不宜用于梯度洗脫設(shè)備簡(jiǎn)單，成本較低；設(shè)備簡(jiǎn)單，成本較低；易于自動(dòng)操作易于自動(dòng)操作 安培檢測(cè)器安培檢測(cè)器 極譜檢測(cè)器極譜檢測(cè)器 電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器 庫(kù)侖檢測(cè)器庫(kù)侖檢測(cè)器 電位檢測(cè)器電位檢測(cè)器 電導(dǎo)檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器 (六)其它類型檢測(cè)器 通用型質(zhì)量檢測(cè)器通用型質(zhì)量檢測(cè)器應(yīng)具備應(yīng)具備的性能的性能: :樣品結(jié)構(gòu)不需要具備紫外發(fā)色團(tuán)或合適的折射樣品結(jié)構(gòu)不需要具備紫外發(fā)色團(tuán)或合適的折射率率對(duì)梯