第三章高效液相色譜法A

1、第三章第三章 高效液相色譜法高效液相色譜法第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜法的特點高效液相色譜法的特點 以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜實驗和以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜實驗和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法 引入氣相色譜法的理論，在技術(shù)上采用新型引入氣相色譜法的理論，在技術(shù)上采用新型高效的固定相、高壓輸液泵、梯度洗脫技術(shù)以高效的固定相、高壓輸液泵、梯度洗脫技術(shù)以及各種高靈敏度的檢測器，實現(xiàn)了分析速度快、及各種高靈敏度的檢測器，實現(xiàn)了分析速度快、分離效率高和操作自動化分離效率高和操作自動化 一、經(jīng)典液相柱色譜法與高效液相色譜法的比較一、經(jīng)典液相柱色譜法與高效液相色譜法

2、的比較經(jīng)典液相色譜經(jīng)典液相色譜高效液相色譜高效液相色譜常壓或減壓常壓或減壓高壓，高壓，4040 50MPa50MPa填料顆粒大，填料顆粒大，7575600m600m填料顆粒小，填料顆粒小，2 2 50m50m柱效低，柱效低，2 2 50 50 塊塊/m/m柱效高柱效高,40000 ,40000 60000 60000 塊塊/m/m分析速度慢，分析速度慢，1 12020小時小時分析速度快，分析速度快，0.050.051.0 h1.0 h色譜柱只用一次色譜柱只用一次色譜柱可重復多次使用色譜柱可重復多次使用不能在線檢測不能在線檢測能在線檢測能在線檢測二、氣相色譜法與高效液相色譜法的比較二、氣相色譜法

3、與高效液相色譜法的比較 相同：相同：兼具分離和分析功能，兼具分離和分析功能， 均可以在線檢測均可以在線檢測 主要差別：主要差別：分析對象的差別、分析對象的差別、 流動相的差別、流動相的差別、 操作條件差別操作條件差別分析對象的差異分析對象的差異GC 能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品 高沸點、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型高沸點、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型 及高聚物的樣品不可檢測及高聚物的樣品不可檢測 占有機物的占有機物的20%HPLC 溶解后能制成溶液的樣品溶解后能制成溶液的樣品 不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制 分子量大、難

4、氣化、熱穩(wěn)定性差及分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及 高分子高分子 和離子型樣品均可檢測和離子型樣品均可檢測 用途廣泛，占有機物的用途廣泛，占有機物的80%流動相差別流動相差別GC： 流動相為惰性氣體流動相為惰性氣體 組分與流動相無親合作用力組分與流動相無親合作用力 只與固定相作用只與固定相作用 流動相差別（續(xù)）流動相差別（續(xù)）HPLC：流動相為液體：流動相為液體 流動相與組分間有親合作用力，為提高柱的流動相與組分間有親合作用力，為提高柱的選擇性、改善分離度增加了因素，對分離起選擇性、改善分離度增加了因素，對分離起很大作用很大作用 流動相種類較多，選擇余地廣流動相種類較多，選擇余地廣 流動相極性和

5、流動相極性和pHpH值的選擇也對分離起到重值的選擇也對分離起到重要作用要作用 選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相可以增大分離選擇性流動相可以增大分離選擇性操作條件差別操作條件差別 GC：加溫操作：加溫操作 HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬?。┓逭箤捫。┤?、高效液相色譜法的特點三、高效液相色譜法的特點（1 1）高壓：供液壓力和進樣壓力可達）高壓：供液壓力和進樣壓力可達5 5 10104 4kPakPa（2 2）高速）高速: : 流動相流速加快流動相流速加快 （3 3）高效）高效: : 柱效可達柱效可達3 3萬塔板萬塔板

6、/ /米以上。米以上。（4 4）高靈敏度）高靈敏度:10:10-16-161010-9-9克克 （5 5）選擇性高：可以通過流動相的控制來改善分離）選擇性高：可以通過流動相的控制來改善分離過程的選擇性過程的選擇性 （6 6）應(yīng)用范圍廣）應(yīng)用范圍廣 四、四、 影響色譜峰擴展及色譜分離的因素影響色譜峰擴展及色譜分離的因素（一）塔板理論（一）塔板理論 理理nLH/22212)(16)(54. 5)(WtWttnRRR理effeffnLH/2212)(54. 5)(16WtWtnRReff0ttkR2)1(kknneff理（二）速率理論（二）速率理論 （填充柱）：uCuBAHGC/（毛細管柱）或uCu

7、BH/dpA2dpAgmDDB22gRDBtB，MTDTDgg或llgsmCCCCCCllDdfC2TDLHPLC H = He + Hd + HsH = He + Hd + Hs + Hmm + Hsm+ Hmm + Hsm 固定相傳質(zhì)阻力固定相傳質(zhì)阻力流動流動相傳質(zhì)阻力流動流動相傳質(zhì)阻力滯留流動相傳質(zhì)阻力滯留流動相傳質(zhì)阻力渦流擴散渦流擴散分子擴散分子擴散1 1、渦流擴散項、渦流擴散項HeHe HeHe A = 2dpA = 2dp 柱效柱效nHAdP, 2 2、分子擴散項、分子擴散項HdHd 樣品在色譜柱中滯留的時間愈長，色譜譜帶樣品在色譜柱中滯留的時間愈長，色譜譜帶的分子擴散也愈嚴重。的

8、分子擴散也愈嚴重。 Dm10 Dm10-5 -5 cmcm2 2/s/s（比在氣體中要?。ū仍跉怏w中要小4545個數(shù)量個數(shù)量級），所以在液相色譜中，縱向分子擴散項實級），所以在液相色譜中，縱向分子擴散項實際上可以忽略際上可以忽略 3 3、傳質(zhì)阻力項、傳質(zhì)阻力項(1)(1)固定相傳質(zhì)阻力項固定相傳質(zhì)阻力項HsHs：(2)(2)流動相傳質(zhì)阻力項：流動相傳質(zhì)阻力項：流動的流動相的傳質(zhì)阻力流動的流動相的傳質(zhì)阻力Hmm Hmm 滯留的流動相的傳質(zhì)阻力滯留的流動相的傳質(zhì)阻力HsmHsm Van DeemterVan Deemter方程方程 uDdCDdCDdCuDCdHSfsmpsmmpmmdp2222C

9、uuBAH分子擴散和傳質(zhì)阻力對板高的貢獻分子擴散和傳質(zhì)阻力對板高的貢獻固定相粒度大小對板高的影響固定相粒度大小對板高的影響 （三）影響譜帶展寬的其他因素（三）影響譜帶展寬的其他因素柱外效應(yīng)柱外效應(yīng)第二節(jié) 高效液相色譜儀 流動相流動相 泵泵色色譜譜柱柱檢測檢測器器 泵泵輸輸液液分離分離 檢測檢測 記錄記錄AEGBCDF進樣閥進樣閥進樣進樣一、貯液和脫氣裝置 1 儲液罐儲液罐 材質(zhì)：玻璃、不銹鋼、氟塑料或特種塑料材質(zhì)：玻璃、不銹鋼、氟塑料或特種塑料聚醚醚酮（聚醚醚酮（PEEK） 容積：容積：0.52.0L 放置位置：高于泵體，保持一定的輸放置位置：高于泵體，保持一定的輸 靜壓差靜壓差 注意：密封、

10、過濾注意：密封、過濾 2、流動相-過濾、脫氣v流動相過濾的目的流動相過濾的目的 過濾去除可能存在的微小固過濾去除可能存在的微小固體顆粒，保護色譜高壓泵和色譜體顆粒，保護色譜高壓泵和色譜柱柱v流動相過濾方法流動相過濾方法 在線過濾在線過濾 抽真空抽真空過濾過濾過濾用膜：過濾用膜：水系和有機水系和有機 孔徑：孔徑：0.22m和和0.45mv流動相脫氣的目的流動相脫氣的目的使色譜泵的輸液準確使色譜泵的輸液準確v輸液均勻準確，并且脈動減小輸液均勻準確，并且脈動減小v保留時間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高保留時間及色譜峰面積的重現(xiàn)性提高提高檢測的性能提高檢測的性能v防止氣泡引起的尖峰防止氣泡引起的尖峰v基線穩(wěn)

11、定，信噪比增加基線穩(wěn)定，信噪比增加v溶劑的紫外吸收本底降低溶劑的紫外吸收本底降低保護色譜柱保護色譜柱v減少死體積減少死體積v防止填料的氧化防止填料的氧化常用的脫氣方法有：常用的脫氣方法有：吹氦脫氣法吹氦脫氣法： 原理：利用氦氣在液體中的溶解度比空氣低。原理：利用氦氣在液體中的溶解度比空氣低。 特點：效果好，適合所有溶劑，但成本高，使用較少特點：效果好，適合所有溶劑，但成本高，使用較少加熱回留法：加熱回留法：脫氣效果也比較好脫氣效果也比較好抽真空脫氣法：抽真空脫氣法： 特點：可以一次完成過濾和脫氣任務(wù)特點：可以一次完成過濾和脫氣任務(wù) 注意：抽真空會引起混合溶劑組分的變化，適合單一溶劑注意：抽真空

12、會引起混合溶劑組分的變化，適合單一溶劑體系體系超聲波脫氣法超聲波脫氣法 簡單，但效果不理想簡單，但效果不理想常用的脫氣方法（續(xù)）在線真空脫氣法在線真空脫氣法 把真空脫氣裝置串接到儲液系統(tǒng)，結(jié)合膜過濾把真空脫氣裝置串接到儲液系統(tǒng)，結(jié)合膜過濾器可以實現(xiàn)流動相的連續(xù)在線真空脫氣器可以實現(xiàn)流動相的連續(xù)在線真空脫氣。高壓輸液泵性能：高壓輸液泵性能： 泵體材料耐化學腐蝕泵體材料耐化學腐蝕 能在高壓下連續(xù)工作能在高壓下連續(xù)工作 輸液流量范圍寬輸液流量范圍寬 輸出流量穩(wěn)定、重復性高：流量控制的精輸出流量穩(wěn)定、重復性高：流量控制的精密度應(yīng)小于密度應(yīng)小于1%（最好為（最好為0.5% ），重復性），重復性 最好為最

13、好為0.5% 二、高壓輸液系統(tǒng) 高壓輸液泵分類：高壓輸液泵分類：恒壓泵恒壓泵和恒流泵恒流泵 1、恒流泵、恒流泵 輸出恒定體積流量的流動相輸出恒定體積流量的流動相 注射型注射型 恒流泵恒流泵 往復型往復型 雙柱塞往復式并聯(lián)泵雙柱塞往復式并聯(lián)泵 雙柱塞往復式串聯(lián)泵雙柱塞往復式串聯(lián)泵 往復型泵往復型泵 目前使用的是雙柱塞往復式并聯(lián)泵和雙目前使用的是雙柱塞往復式并聯(lián)泵和雙柱塞往復式串聯(lián)泵柱塞往復式串聯(lián)泵往復型泵往復型泵優(yōu)點：優(yōu)點： 可以在高壓下連續(xù)以恒定的流量輸液可以在高壓下連續(xù)以恒定的流量輸液 液缸容積很小，柱塞容易密封，造價低液缸容積很小，柱塞容易密封，造價低 更換溶劑方便，特別適用于梯度洗脫更換

14、溶劑方便，特別適用于梯度洗脫往復型泵往復型泵缺點：缺點： 流動相存在脈動，難以用折光示差檢測器進行定量流動相存在脈動，難以用折光示差檢測器進行定量分析分析 柱塞式往復泵、柱塞和流動相直接接觸，易造成污柱塞式往復泵、柱塞和流動相直接接觸，易造成污染染 長期運轉(zhuǎn)后，流動相中的某些機械雜質(zhì)會造成單向長期運轉(zhuǎn)后，流動相中的某些機械雜質(zhì)會造成單向閥阻塞或閥球磨損不能關(guān)閉單向閥，使泵不能正常閥阻塞或閥球磨損不能關(guān)閉單向閥，使泵不能正常運轉(zhuǎn)運轉(zhuǎn) 柱塞式往復泵是柱塞式往復泵是HPLC中應(yīng)用廣泛，也是最重要中應(yīng)用廣泛，也是最重要的高壓輸液泵的高壓輸液泵雙柱塞往復式串聯(lián)泵示意圖2 2、恒壓泵（氣動放大泵）、恒壓泵

15、（氣動放大泵）輸出恒定壓輸出恒定壓力的泵力的泵優(yōu)點：優(yōu)點： 能以比較簡單的方式建立高壓并輸出無脈能以比較簡單的方式建立高壓并輸出無脈動的恒壓流動相液流動的恒壓流動相液流 適合和折光示差檢測器配合使用適合和折光示差檢測器配合使用 可以利用改變氣源壓力的方法來調(diào)節(jié)載液可以利用改變氣源壓力的方法來調(diào)節(jié)載液流速流速缺點： 不能輸出恒定流量的流動相不能輸出恒定流量的流動相 色譜峰的重復保留時間差色譜峰的重復保留時間差 不能獲得可靠的定性結(jié)果不能獲得可靠的定性結(jié)果 液缸體積大（約液缸體積大（約70ml)70ml)，更換載液時操作不便，更換載液時操作不便 目前恒壓泵主要用于目前恒壓泵主要用于色譜柱的制備色譜

16、柱的制備，配合裝柱用的，配合裝柱用的勻漿裝柱機，可以快速建立所需的高壓輸出勻漿裝柱機，可以快速建立所需的高壓輸出單液缸氣動放大泵示意圖v氣動放大泵是利用氣體為動力源，通過帕氣動放大泵是利用氣體為動力源，通過帕斯卡原理把氣體的壓力放大成流動相的壓斯卡原理把氣體的壓力放大成流動相的壓力力 3 3、輸液系統(tǒng)的輔助設(shè)備、輸液系統(tǒng)的輔助設(shè)備 主要有管道過濾器、脈動阻尼器、由壓力傳感器組主要有管道過濾器、脈動阻尼器、由壓力傳感器組成的壓力測量、顯示裝置，以及流動相流量的測量裝置成的壓力測量、顯示裝置，以及流動相流量的測量裝置4 4、梯度洗脫裝置、梯度洗脫裝置 梯度洗脫技術(shù)可以提高柱效、縮短分析時間，改善梯

17、度洗脫技術(shù)可以提高柱效、縮短分析時間，改善檢測器的靈敏度，它類似于檢測器的靈敏度，它類似于GCGC種使用的程序升溫技術(shù)種使用的程序升溫技術(shù) 影響梯度洗脫的主要因素有：溶劑的純度、溶劑的影響梯度洗脫的主要因素有：溶劑的純度、溶劑的互溶性、檢測器的種類互溶性、檢測器的種類三、進樣裝置1 1、進樣器進樣、進樣器進樣 進樣前打開流動相泄流閥進樣前打開流動相泄流閥 用注射器進樣用注射器進樣 關(guān)閉泄流閥，完成一次關(guān)閉泄流閥，完成一次 2、六通閥進樣裝置一定不能使用尖針！它會嚴重刮壞轉(zhuǎn)子墊圈一定不能使用尖針！它會嚴重刮壞轉(zhuǎn)子墊圈進樣針進樣針3 3、自動進樣器、自動進樣器 工作站按預定程序自動完成取樣、工作站

18、按預定程序自動完成取樣、進樣、復位、樣品管路清洗和樣品盤進樣、復位、樣品管路清洗和樣品盤的移動等所有步驟的移動等所有步驟 樣品瓶置于進樣針下方樣品瓶置于進樣針下方進樣針穿過墊圈進入瓶中進樣針穿過墊圈進入瓶中注射器抽取所設(shè)定的樣品體積進樣針收回轉(zhuǎn)入針端口使之并成為流路的一部分轉(zhuǎn)入針端口使之并成為流路的一部分功能的拓展： 進樣針的位置可以上下調(diào)節(jié)；進樣針的位置可以上下調(diào)節(jié)； 利用進樣程序進行某些柱前衍生化反應(yīng)利用進樣程序進行某些柱前衍生化反應(yīng)例：氨基酸的衍生化反應(yīng)例：氨基酸的衍生化反應(yīng) “三明治三明治”式進樣可以自動混合式進樣可以自動混合 茚三酮衍生，用紫外檢測器茚三酮衍生，用紫外檢測器 鄰苯二甲

19、醛衍生，用熒光檢測器鄰苯二甲醛衍生，用熒光檢測器四、分離系統(tǒng)1 1、柱材料和規(guī)格、柱材料和規(guī)格 不銹鋼管不銹鋼管 柱管的內(nèi)徑：柱管的內(nèi)徑：0.5 4.6mm 填料粒度：填料粒度：3 10 m 柱長度：柱長度：10 50 cm2 2、色譜柱色譜性能的評價、色譜柱色譜性能的評價評價內(nèi)容：評價內(nèi)容：分離效能、對指定溶質(zhì)的選擇型、在不同分離效能、對指定溶質(zhì)的選擇型、在不同PHPH介質(zhì)中的穩(wěn)定性、不同批次但同型號填料間性能的重介質(zhì)中的穩(wěn)定性、不同批次但同型號填料間性能的重現(xiàn)性、適宜的操作壓力等?，F(xiàn)性、適宜的操作壓力等。性能評價方法：性能評價方法：以指定的一組標準溶質(zhì)為樣品，測定它以指定的一組標準溶質(zhì)為樣

20、品，測定它們在柱子上的理論塔板數(shù)，作為柱效的衡量指標。們在柱子上的理論塔板數(shù)，作為柱效的衡量指標。例：對于反相色譜填料，可以選擇一組具有不同極性的例：對于反相色譜填料，可以選擇一組具有不同極性的芳香族化合物，如：苯、萘、菲或苯、甲苯、二甲苯芳香族化合物，如：苯、萘、菲或苯、甲苯、二甲苯等作為基本組分，再加以苯酚或苯胺等酸、堿性溶質(zhì)。等作為基本組分，再加以苯酚或苯胺等酸、堿性溶質(zhì)。五、檢測系統(tǒng)主要作用：主要作用：監(jiān)測經(jīng)色譜柱分離后的組分濃監(jiān)測經(jīng)色譜柱分離后的組分濃度變化，并由工作站記錄數(shù)據(jù)，定性、度變化，并由工作站記錄數(shù)據(jù)，定性、定量分析。定量分析。（一）概述 1 1、理想的檢測器應(yīng)具備的特性、

21、理想的檢測器應(yīng)具備的特性第一：具有高靈敏度和可預測的響應(yīng)第一：具有高靈敏度和可預測的響應(yīng) 第二：對樣品所有組分都有響應(yīng)，或具有可預測的特異第二：對樣品所有組分都有響應(yīng)，或具有可預測的特異性，適用范圍廣性，適用范圍廣 第三：溫度和洗脫液流速的變化對響應(yīng)沒有影響第三：溫度和洗脫液流速的變化對響應(yīng)沒有影響 第四：響應(yīng)與洗脫液組成無關(guān)，因此可作梯度洗脫第四：響應(yīng)與洗脫液組成無關(guān)，因此可作梯度洗脫 第五：死體積小，不造成柱外譜帶擴展第五：死體積小，不造成柱外譜帶擴展 第六：使用方便、可靠、耐用，易清洗和檢修第六：使用方便、可靠、耐用，易清洗和檢修 第七：響應(yīng)值隨樣品組分量的增加而線性增加，第七：響應(yīng)值隨

22、樣品組分量的增加而線性增加，線性范圍寬線性范圍寬 第八：不破壞樣品組分第八：不破壞樣品組分 第九：能對被檢測的峰提供定性和定量信息第九：能對被檢測的峰提供定性和定量信息 第十：響應(yīng)時間快第十：響應(yīng)時間快 檢測器的種類v可變波長紫外可見光檢測器可變波長紫外可見光檢測器v光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器v示差折光檢測器示差折光檢測器v熒光檢測器熒光檢測器v蒸發(fā)光散射檢測器蒸發(fā)光散射檢測器v電導電化學和脈沖安培檢測器電導電化學和脈沖安培檢測器v質(zhì)譜檢測器質(zhì)譜檢測器2、衡量檢測器的指標v靈敏度靈敏度 S = S = R / R / Q QR R是檢測器響應(yīng)值的增量是檢測器響應(yīng)值的增量Q Q是樣

23、品量的增量是樣品量的增量v噪音噪音 沒有樣品時檢測器的最大輸出信號沒有樣品時檢測器的最大輸出信號v漂移漂移 檢測器在一段時間內(nèi)響應(yīng)值的變化檢測器在一段時間內(nèi)響應(yīng)值的變化v線性動態(tài)范圍線性動態(tài)范圍最大線性相應(yīng)與最小檢出限之比最大線性相應(yīng)與最小檢出限之比v最小檢測限最小檢測限樣品產(chǎn)生兩或三倍于噪音信號時的濃度樣品產(chǎn)生兩或三倍于噪音信號時的濃度v信噪比信噪比S/NS/N注意注意最小檢測限不是一個單純的檢測器指標。它實最小檢測限不是一個單純的檢測器指標。它實際上是評價整個色譜系統(tǒng)的指標，包括了色譜系統(tǒng)、際上是評價整個色譜系統(tǒng)的指標，包括了色譜系統(tǒng)、分離機理、色譜柱在內(nèi)的綜合性指標，信噪比亦如此分離機理

24、、色譜柱在內(nèi)的綜合性指標，信噪比亦如此（二）紫外檢測器（二）紫外檢測器原理：原理：基于被分析組分對特定波長紫外光或可見基于被分析組分對特定波長紫外光或可見光的選擇性吸收光的選擇性吸收定量基礎(chǔ)：定量基礎(chǔ)：比耳定律，比耳定律，LCKA 比耳定律v光能量光能量 I I0 0 = = 入射光強度入射光強度 I = I = 透過光強度透過光強度v光通量光通量( (透過率透過率%)%) T= I/I T= I/I0 0v吸光度吸光度 A = -log(T)= A = -log(T)= log(Ilog(I0 0/I)/I)v吸光度吸光度 A = abc A = abc流動池示意圖 定波長檢測器定波長檢測器

25、紫外檢測器種類紫外檢測器種類 可變波長檢測器可變波長檢測器 二極管陣列檢測器二極管陣列檢測器第一種類型：固定波長紫外檢測器光源光源 低壓汞燈，發(fā)出低壓汞燈，發(fā)出90%90%的的254nm254nm波長的光波長的光 鋅燈，發(fā)出鋅燈，發(fā)出214nm214nm波長的光波長的光 鎘燈則為鎘燈則為229nm229nm和和326nm 326nm 特點：特點： 結(jié)構(gòu)緊湊、造價低、操作維修方便、靈敏度高，結(jié)構(gòu)緊湊、造價低、操作維修方便、靈敏度高，適于梯度洗脫適于梯度洗脫 只能對具特征波長有吸收的物質(zhì)進行檢測只能對具特征波長有吸收的物質(zhì)進行檢測 第二種類型：可變波長紫外檢測器 氘燈氘燈190190600 nm

26、600 nm t新發(fā)展新發(fā)展 可以可以 高靈敏度高靈敏度4 波長同時檢測波長同時檢測 根據(jù)根據(jù)4波長測定得到的吸收值之比判斷峰的純度波長測定得到的吸收值之比判斷峰的純度 具有具有DAD檢測器的相似功能檢測器的相似功能第三種類型：光電二極管陣列檢測器（DAD） 光電二極管陣列檢測器DAD檢測器的主要特點：可以同時得到多個波長的色譜圖，可以計算可以同時得到多個波長的色譜圖，可以計算不同波長處的相對吸收比不同波長處的相對吸收比可以在色譜分離同時，對色譜峰的指定位置可以在色譜分離同時，對色譜峰的指定位置實時記錄吸收光譜圖，并得到最大吸收波長實時記錄吸收光譜圖，并得到最大吸收波長在色譜運行期間，可以逐點

27、進行光譜掃描，在色譜運行期間，可以逐點進行光譜掃描，得到時間得到時間波長波長吸收值為坐標的三維圖形吸收值為坐標的三維圖形DAD檢測器的主要特點（續(xù) ）可以選擇寬波帶進行檢測，一次就能把所有組分檢測可以選擇寬波帶進行檢測，一次就能把所有組分檢測出來出來 DADDAD檢測器的一些特殊功能：檢測器的一些特殊功能：.色譜峰的準確定性色譜峰的準確定性.進行峰純度的檢驗進行峰純度的檢驗.選擇最佳波長選擇最佳波長.建立光譜庫，檢索被測樣品的光譜建立光譜庫，檢索被測樣品的光譜例：山梨酸和苯甲酸部分例：山梨酸和苯甲酸部分 分離的色譜峰分離的色譜峰a.a.山梨酸山梨酸b.b.苯甲酸苯甲酸c.c.混合物混合物紫外普

28、通檢測器和光電二極管陣列檢測器的比較紫外普通檢測器和光電二極管陣列檢測器的比較（三）熒光檢測器（FLD） v熒光檢測器是利用測量化合物熒光強度，對化熒光檢測器是利用測量化合物熒光強度，對化合物進行檢測的檢測器。合物進行檢測的檢測器。v在實驗條件固定，樣品濃度較低時，熒光強度在實驗條件固定，樣品濃度較低時，熒光強度與樣品濃度呈線性關(guān)系，因此熒光檢測器是濃與樣品濃度呈線性關(guān)系，因此熒光檢測器是濃度敏感性檢測器，可直接用于定量分析度敏感性檢測器，可直接用于定量分析 主要主要特點特點：靈敏度高（靈敏度高（高于紫外吸收檢測器兩個數(shù)量級高于紫外吸收檢測器兩個數(shù)量級 ）選擇性好選擇性好 產(chǎn)生熒光的必要條件：

29、產(chǎn)生熒光的必要條件： 第一：物質(zhì)分子中具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶，第一：物質(zhì)分子中具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶，即物質(zhì)分子必須具有一定的吸收結(jié)構(gòu)即物質(zhì)分子必須具有一定的吸收結(jié)構(gòu) 第二：物質(zhì)分子吸收了激發(fā)光能量之后具有高的熒光第二：物質(zhì)分子吸收了激發(fā)光能量之后具有高的熒光效率效率定量分析時定量分析時線性范圍較窄線性范圍較窄 受外界條件的影響小受外界條件的影響小當所選用的流動相溶劑不發(fā)射熒光，當所選用的流動相溶劑不發(fā)射熒光，F(xiàn)LDFLD就能適用于就能適用于梯度洗脫梯度洗脫最小檢測濃度可達最小檢測濃度可達0.1ng0.1ngmlml，適用于痕量分析，適用于痕量分析氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及

30、某些代謝藥物氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測都可以用熒光法檢測 原理：原理：化合物受到紫外光的照射后，吸收輻射能，化合物受到紫外光的照射后，吸收輻射能，發(fā)出比吸收波長長的特征輻射，這種特征輻射發(fā)出比吸收波長長的特征輻射，這種特征輻射光線就是熒光光線就是熒光, ,測定發(fā)出的熒光能量即可定量測定發(fā)出的熒光能量即可定量 l主要包括：激發(fā)光源、選擇激發(fā)波長用的單色器、流通主要包括：激發(fā)光源、選擇激發(fā)波長用的單色器、流通池、選擇發(fā)射波長用的單色器、用于檢測發(fā)光強度的光池、選擇發(fā)射波長用的單色器、用于檢測發(fā)光強度的光電檢測器電檢測器 目前使用比較多的是目前使用比較多的是激光

31、誘導熒光激光誘導熒光檢檢測器。組成與普通的熒光檢測器一樣。測器。組成與普通的熒光檢測器一樣。 兩者的主要兩者的主要區(qū)別區(qū)別為光源，前者光氙弧燈為光源，前者光氙弧燈（連續(xù)式、脈沖式），后者的光源是激光（連續(xù)式、脈沖式），后者的光源是激光器，使用較多的是小功率的器，使用較多的是小功率的ArAr離子激光器離子激光器（四）示差折光檢測器（DRD）v原理原理：示差折光檢測器是通過連續(xù)監(jiān)測參比池和測量：示差折光檢測器是通過連續(xù)監(jiān)測參比池和測量池中溶液的折光指數(shù)之差來測定樣品濃度池中溶液的折光指數(shù)之差來測定樣品濃度通用型通用型沒有紫外吸收的沒有紫外吸收的標準糖類混合物(單糖和糖醇)樣品：樣品：1. 麥芽三糖

32、麥芽三糖 2. 蔗糖蔗糖 3. 葡萄糖葡萄糖 4. 半乳糖半乳糖 5. 果糖果糖 6. 甘露醇甘露醇 7. 阿拉伯醇阿拉伯醇 8. 山梨醇山梨醇分析條件：分析條件：柱：柱：CHO620(Ca 2)聚合物柱聚合物柱洗脫液：蒸餾水洗脫液：蒸餾水流速流速 ；0.5ml/min溫度溫度 ：90 dig.C.檢測器：檢測器：RI進樣量：進樣量：20微升微升（五）電化學檢測器（ECD）v 電導檢測器是一種選擇性檢測器，用電導檢測器是一種選擇性檢測器，用于檢測陽離子和陰離子，在離子色譜中于檢測陽離子和陰離子，在離子色譜中應(yīng)用廣泛應(yīng)用廣泛特點：特點：靈敏度高，最小檢測量一般為靈敏度高，最小檢測量一般為ngng

33、級，有的可達級，有的可達pgpg級級 選擇性好，可測定具有電解活性物質(zhì)（亦可測定大量非選擇性好，可測定具有電解活性物質(zhì)（亦可測定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)）電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)） 線性范圍寬，一般為線性范圍寬，一般為4 45 5個數(shù)量級個數(shù)量級 測量時要恒溫，不宜用于梯度洗脫測量時要恒溫，不宜用于梯度洗脫設(shè)備簡單，成本較低；設(shè)備簡單，成本較低；易于自動操作易于自動操作 安培檢測器安培檢測器 極譜檢測器極譜檢測器 電化學檢測器電化學檢測器 庫侖檢測器庫侖檢測器 電位檢測器電位檢測器 電導檢測器電導檢測器 (六)其它類型檢測器 通用型質(zhì)量檢測器通用型質(zhì)量檢測器應(yīng)具備應(yīng)具備的性能的性能: :樣品結(jié)構(gòu)不需要具備紫外發(fā)色團或合適的折射樣品結(jié)構(gòu)不需要具備紫外發(fā)色團或合適的折射率率對梯