重組DNA技術(shù)教學(xué)PPT課件

1、1基本概念 克隆(clone):來(lái)自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。 獲取同一拷貝的過(guò)程稱為克隆化(cloning)，即無(wú)性繁殖。DNA克隆第1頁(yè)/共79頁(yè)2基本概念技術(shù)水平：分子克隆(molecular clone) （即DNA 克?。?細(xì)胞克隆 個(gè)體克?。▌?dòng)物或植物）第2頁(yè)/共79頁(yè)3基本概念應(yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將各種來(lái)源的遺傳物質(zhì)（同源的或異源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）與載體DNA接合成一具有自我復(fù)制能力的DNA分子復(fù)制子(replicon)，繼而通過(guò)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞，再進(jìn)行擴(kuò)增提取獲得大量同一DNA分子，也稱基因克隆或重組DNA (r

2、ecombinant DNA) 。 DNA克隆第3頁(yè)/共79頁(yè)4基本概念 目的： 分離獲得某一感興趣的基因或DNA 獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物（蛋白質(zhì)）基因工程(genetic engineering) 實(shí)現(xiàn)基因克隆所用的方法及相關(guān)的工作稱基因工程，又稱重組DNA工藝學(xué)。第4頁(yè)/共79頁(yè)5自然界DNA重組和基因轉(zhuǎn)移是經(jīng)常發(fā)生的 一、同源重組是最基本的DNA重組方式二、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組接合作用轉(zhuǎn)化作用三、病毒的作用第5頁(yè)/共79頁(yè)6重組DNA技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史19601970年重組DNA工具的研究90（載體、酶）。1972年，Berg 等第一次完成DNA體外重組實(shí)驗(yàn)。1973年，N.Cohen、W

3、.Boyer第一次完成克隆。1980年，重組胰島素進(jìn)入市場(chǎng)。1985年，Mulis完成PCR技術(shù)。1996年，克隆羊Dolly(1963童第周克隆魚(yú))。20世紀(jì)90年代啟動(dòng)人類基因組計(jì)劃。第6頁(yè)/共79頁(yè)7第一節(jié)第一節(jié) 重組重組DNADNA技術(shù)的基本過(guò)技術(shù)的基本過(guò)程程 1.分2.切3.接4.轉(zhuǎn)5.篩6.表達(dá)第7頁(yè)/共79頁(yè)8第二節(jié)第二節(jié) 重組重組DNA技術(shù)中常用工具酶技術(shù)中常用工具酶 工工 具具 酶酶功功 能能限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別特異序列，切割識(shí)別特異序列，切割DNADNADNADNA連接酶連接酶催化催化DNADNA中相鄰的中相鄰的5 5 磷酸基和磷酸基和3 3 羥基末端之間形

4、成磷酸二酯鍵，羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使使DNADNA切口封合或使兩個(gè)切口封合或使兩個(gè)DNADNA分子或片段連接分子或片段連接DNADNA聚合酶聚合酶合成雙鏈合成雙鏈cDNAcDNA分子或片段連接分子或片段連接缺口平移制作高比活探針缺口平移制作高比活探針DNADNA序列分析序列分析填補(bǔ)填補(bǔ)3 3 末端末端KlenowKlenow片段片段又名又名DNADNA聚合酶聚合酶I I大片段，具有完整大片段，具有完整DNADNA聚合酶聚合酶I I的的5 53 3 聚合、聚合、3 35 5 外切活性，而無(wú)外切活性，而無(wú)5 53 3 外切活性。常用于外切活性。常用于cDNAcDNA第二鏈合第二鏈合成，雙鏈

5、成，雙鏈DNA 3DNA 3 末端標(biāo)記等末端標(biāo)記等反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶合成合成cDNAcDNA替代替代DNADNA聚合酶聚合酶I I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或DNADNA序列分析序列分析多聚核苷酸激酶多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸催化多聚核苷酸5 5 羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針末端轉(zhuǎn)移酶末端轉(zhuǎn)移酶在在3 3 羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾堿性磷酸酶堿性磷酸酶切除末端磷酸基切除末端磷酸基第8頁(yè)/共79頁(yè)9一、限制性核酸內(nèi)切酶概念：是一類能識(shí)別雙鏈DNA分子中的某些特定核苷酸序列，并由此切割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶，又稱為限制酶。第9頁(yè)/共79頁(yè)1

6、0（一）限制性核酸內(nèi)切酶的命名 Hin d 屬 種 株 序Haemophilus influenzae Rd株流感嗜血桿菌d株的第三種酶第一個(gè)字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名，用大寫(xiě)；第二、第三個(gè)字母是該細(xì)菌的種名，用小寫(xiě)；第四個(gè)字母代表菌株；用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。第10頁(yè)/共79頁(yè)11（二）限制性核酸內(nèi)切酶的類型 型限制性核酸內(nèi)切酶型限制性核酸內(nèi)切酶（應(yīng)用廣泛）型限制性核酸內(nèi)切酶 作用 與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng)，限制外源DNA， 保護(hù)自身DNA第11頁(yè)/共79頁(yè)12（三）型限制性核酸內(nèi)切酶特點(diǎn)：型限制酶識(shí)別雙鏈DNA中48個(gè)核苷酸組成的特定序列，從其識(shí)別序列內(nèi)切割DNA分子中的

7、磷酸二酯鍵，產(chǎn)生含5-P和3-OH的產(chǎn)生粘性末端或平末端。功能：根據(jù)需要在特定的位點(diǎn)精確切割雙鏈DNA分子。第12頁(yè)/共79頁(yè)13 識(shí)別序列特點(diǎn)： 回文結(jié)構(gòu)(palindrome) 第13頁(yè)/共79頁(yè)14（1）產(chǎn)生5 突出粘性末端 (sticky end)EcoR I*GAATTC*CTTAAG*535 3*G*C T T A A 53 35 OHPA A T T C* G*5 3 35 P OH第14頁(yè)/共79頁(yè)15（2）產(chǎn)生3 突出粘性末端Pst I*CTGCAG*GACGTC*53535 33 5 OHP*C T G C A*G533 5 OHPA C G T C*G*第15頁(yè)/共79頁(yè)

8、16（3）產(chǎn)生平末端 (blunt end)*GATATC*CTATAG*53535335 OHP*GAT*CTA5335 OHPATC*TAG*EcoR 第16頁(yè)/共79頁(yè)17n同裂酶（isoschizomer） 又稱異源同工酶，指來(lái)源不同識(shí)別序列相同的酶 n同尾酶（isocaudamer） 識(shí)別序列與切割位點(diǎn)相互有關(guān)的一類酶 n可變酶 此類酶是型限制酶的特例，識(shí)別DNA序列中的一個(gè)或幾個(gè)堿基是可變的，并且識(shí)別序列往往超過(guò)6個(gè)核苷酸第17頁(yè)/共79頁(yè)18(四）限制酶作用的影響因素 DNA底物的純度 DNA的甲基化程度 DNA分子的結(jié)構(gòu) 酶切反應(yīng)的溫度 酶切反應(yīng)的時(shí)間 酶切反應(yīng)的緩沖體系 第1

9、8頁(yè)/共79頁(yè)19名稱名稱 識(shí)別序列及切割位點(diǎn)識(shí)別序列及切割位點(diǎn)名稱識(shí)別序列及切割點(diǎn)名稱識(shí)別序列及切割點(diǎn)切割后產(chǎn)生切割后產(chǎn)生突出末端突出末端:BamH 5GGATCC.3GATCC.3Bgl 5AGATCT.3GATCT.3EcoR EcoR 5GAATTC.3AATTC.3Hind Hind 5AAGCTT.3AGCTT.3 Hpa Hpa 5CCGG.3CGG.3 Mbo Mbo 5GATC.3GATC.3 Nde Nde 5GATATG.3TATG.3切割后產(chǎn)生切割后產(chǎn)生3突出末端突出末端:Apa 5GGGCCC.3C.3Hae 5PuGCGCPy.3Py.3Kpn 5GGTACC.3C

10、.3Pst 5CTGCAG.3G.3Sph 5GCATGC.3C.3切割后產(chǎn)生平末端切割后產(chǎn)生平末端:Alu 5AGCT.3CT.3EcoR 5GATATC.3ATC.3Hae Hae 5GGCC.3CC.3Pvu Pvu 5CAGCTG.3CTG.3Sma Sma 5CCCGGG.3GGG.3 限制性內(nèi)切核酸酶第19頁(yè)/共79頁(yè)20二、 連接酶(DNA ligase) 將兩條雙鏈DNA片段連接起來(lái)，實(shí)現(xiàn)DNA的體外重組功能： 催化兩條雙鏈DNA分子的互補(bǔ)粘性末端或平末端的5 磷酸基團(tuán)與3 羥基形成磷酸二酯鍵第20頁(yè)/共79頁(yè)21第21頁(yè)/共79頁(yè)22第22頁(yè)/共79頁(yè)23常用的DNA連接酶1

11、.大腸桿菌DNA連接酶 2.T4 DNA連接酶第23頁(yè)/共79頁(yè)24DNA連接酶對(duì)黏性末端的連接效率遠(yuǎn)高于平末端的連接效率。連接黏性末端的溫度一般在415。連接酶的用量在平末端連接高于黏末端。ATP的反應(yīng)濃度：10mol/L1 mmol/L。載體與目標(biāo)基因的摩爾數(shù)比值：1 101 3。影響DNA連接酶作用的因素第24頁(yè)/共79頁(yè)25三、DNA聚合酶 能夠把脫氧核糖核苷酸連續(xù)地添加到雙鏈DNA分子引物鏈的3-OH末端，催化核苷酸的聚合作用類型： 大腸桿菌DNA聚合酶 Klenow片段 Taq DNA聚合酶 逆轉(zhuǎn)錄酶 第25頁(yè)/共79頁(yè)26四、其它修飾酶 1.末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶：主要作用是在外源

12、DNA片段及載體分子的3-OH加上互補(bǔ)的同聚物尾巴，形成人工黏性末端第26頁(yè)/共79頁(yè)27第27頁(yè)/共79頁(yè)282.多核苷酸激酶：在重組DNA技術(shù)中，多核苷酸激酶可用于標(biāo)記DNA的5末端，也可使缺失5-P末端的DNA發(fā)生磷酸化作用。第28頁(yè)/共79頁(yè)293.堿性磷酸酶：能特異地切除DNA、RNA和dNTP上5磷酸基團(tuán)。在重組DNA技術(shù)中，用堿性磷酸酶去除載體分子或DNA片段的5-P，以防止發(fā)生自身連接。第29頁(yè)/共79頁(yè)30第30頁(yè)/共79頁(yè)31第31頁(yè)/共79頁(yè)32第三節(jié)第三節(jié) 重組重組DNA技術(shù)中常用載技術(shù)中常用載體體 定義為攜帶目的基因，實(shí)現(xiàn)其無(wú)性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DN

13、A分子。 常用載體質(zhì)粒DNA噬菌體DNA病毒DNA第32頁(yè)/共79頁(yè)33克隆載體(cloning vector)為使插入的外源DNA序列被擴(kuò)增而特意設(shè)計(jì)的載體稱為克隆載體。 表達(dá)載體(expression vector) 為使插入的外源DNA序列可轉(zhuǎn)錄翻譯成 多肽鏈而特意設(shè)計(jì)的載體稱為表達(dá)載體。第33頁(yè)/共79頁(yè)34作為基因工程載體所需具備的基本條件能自主復(fù)制有多個(gè)單一酶切位點(diǎn)，稱為多克隆位點(diǎn)（MCS），利于外源DNA分子插入具有兩個(gè)以上的選擇性遺傳標(biāo)記，便于重組體的篩選和鑒定分子量小，以容納較大的外源DNA拷貝數(shù)高 具有較高的遺傳穩(wěn)定性第34頁(yè)/共79頁(yè)35一、質(zhì)粒載體 質(zhì)粒 (plasmi

14、d)特點(diǎn): 能在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立自主復(fù)制；帶有某些遺傳信息, 會(huì)賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀。 第35頁(yè)/共79頁(yè)36（一）（一）pBR322pBR322質(zhì)粒載體（克隆質(zhì)粒載體（克隆6kb6kb） 第36頁(yè)/共79頁(yè)37（二） pUC19 質(zhì)粒載體LacZ基因與-半乳糖苷酶X-gal，5-溴-4氯-3-吲哚-D-半乳糖苷MCS區(qū)段：來(lái)自M13噬菌體第37頁(yè)/共79頁(yè)38二、噬菌體（bacteriophage）載體 （一）噬菌體 (phage)載體（二）粘粒 (cosmid)載體（三）M13噬菌體載體第38頁(yè)/共79頁(yè)39 噬菌體插入較大外源DNA片段（23kb）第39頁(yè)/共79頁(yè)40n與質(zhì)粒載體相比

15、，其突出優(yōu)點(diǎn)是可插入較大外源DNA片段n噬菌體的感染效率遠(yuǎn)高于質(zhì)粒載體的轉(zhuǎn)化效率第40頁(yè)/共79頁(yè)41三、病毒載體質(zhì)粒載體、噬菌體載體都是以原核細(xì)胞（如大腸桿菌）作為宿主細(xì)胞。近年來(lái)為適應(yīng)真核細(xì)胞重組DNA技術(shù)的需要，特別是為實(shí)現(xiàn)真核基因表達(dá)或基因治療的需要，已發(fā)展出用動(dòng)物病毒改造的病毒載體。第41頁(yè)/共79頁(yè)42目前常用的病毒載體有整合型和游離型兩類 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 （整合型）腺病毒載體 （游離型）第42頁(yè)/共79頁(yè)43病毒載體的改造帶目標(biāo)基因假病毒包裝細(xì)胞目標(biāo)基因第43頁(yè)/共79頁(yè)44三、人工染色體載體 酵母人工染色體載體（YAC）是第一個(gè)成功構(gòu)建的人工染色體載體，用于在酵母細(xì)胞中克隆大片

16、段外源DNA。YAC可接受100kb2 000kb的外源DNA片段插入，是人類基因組計(jì)劃中物理圖譜繪制采用的主要載體。第44頁(yè)/共79頁(yè)45人工染色體載體包含的調(diào)控元件 著絲粒：以保證染色體在細(xì)胞分裂過(guò)程中正確地分配到子代細(xì)胞。端粒：作為染色體復(fù)制所必需的成分，可防止染色體被核酸外切酶降解而縮短。復(fù)制起始點(diǎn)和限制性酶切位點(diǎn)。YAC載體的兩臂均帶有選擇標(biāo)記。原核序列及調(diào)控元件：以便于在大腸桿菌中操作。第45頁(yè)/共79頁(yè)46第四節(jié)第四節(jié) 重組重組DNADNA技術(shù)基本原理技術(shù)基本原理基本原理目的基因的獲取DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞外源基因與載體的連接克隆載體的選擇和構(gòu)建重組體的篩選克隆基因的表達(dá) 第46頁(yè)/

17、共79頁(yè)47一、目的基因的獲得（一） 化學(xué)合成法（二）聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction, PCR)（三）從基因文庫(kù)中篩選第47頁(yè)/共79頁(yè)48（一）（一） 化學(xué)合成法化學(xué)合成法要求：已知目的基因的核苷酸序列或其 產(chǎn)物的氨基酸序列由已知氨基酸序列推測(cè)可能的DNA序列第48頁(yè)/共79頁(yè)49（二）聚合酶鏈反應(yīng) PCR法 RT-PCR法（三）從基因文庫(kù)中篩選 基因組DNA文庫(kù) (genomic library) cDNA文庫(kù) (cDNA library)基因組DNA文庫(kù)存在于轉(zhuǎn)化細(xì)胞內(nèi)由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA的集合。第49頁(yè)/共79頁(yè)50限制酶切位點(diǎn)限制酶消

18、化 除去中間片段cos LR coscos L左臂R cos右臂真核生物染色體DNA限制酶部分消化 外源DNA與載體DNA混合 連接反應(yīng) 體外包裝 用重組噬菌體感染大腸桿菌 20 Kb DNA 片段 cos LR cos20 Kb 外源 DNA 片段 基因文庫(kù)用隨機(jī)切割的真核生物染色體DNA片段構(gòu)建基因文庫(kù) 第50頁(yè)/共79頁(yè)51mRNA cDNA 雙鏈cDNA 重組DNA分子 cDNA文庫(kù) 反轉(zhuǎn)錄酶 載體 受體菌 復(fù)制 從cDNA文庫(kù)獲取目的基因 第51頁(yè)/共79頁(yè)52二、克隆載體的選擇和構(gòu)建目的不同，操作基因的性質(zhì)不同，載體的選擇和改建方法也不同。 第52頁(yè)/共79頁(yè)53三、目的基因的體外

19、重組 DNA體外重組本質(zhì)上是一個(gè)酶促反應(yīng)過(guò)程，在DNA連接酶的催化作用下，將外源DNA分子（目的基因）與載體DNA分子連接成一個(gè)重組分子的過(guò)程 第53頁(yè)/共79頁(yè)54（一）黏性末端連接（二）平末端連接（三）人工接頭連接（四）同聚物加尾連接第54頁(yè)/共79頁(yè)55（一）黏性末端連接基本方法： 目的基因與載體分子經(jīng)同一限制性核酸內(nèi)切酶切割成具有相同黏性末端的DNA片段后，可通過(guò)黏末端互補(bǔ)配對(duì)，再借助DNA連接酶封閉缺口，形成完整的重組DNA分子 第55頁(yè)/共79頁(yè)56Bam H切割反應(yīng) GGATCC CCTAGGT4 DNA連接酶15CGATCC GGCCTAG目的基因用 Bam H切割GCCTAG

20、GCCTAGGCCTAGGCCTAGGATCCGGATCCGGATCCGGATCCG載體DNA用Bam H切割GCCTAGGCCTAGGCCTAGGCCTAGGATCCGGATCCGGATCCGGATCCG重組體GCCTAGGCCTAGGATCCGGATCCGGCCTAGGCCTAGGATCCGGATCCG載體自連目的基因自連同一限制酶切位點(diǎn)連接第56頁(yè)/共79頁(yè)57不同限制酶切位點(diǎn)的連接GCTTAAATCTAGAATTCGGATCTAGAATTCCTTAAGAGATCTTCTAGAEco R切割位點(diǎn)Bg l切割位點(diǎn)AATTCGATCTAGAATTCGGATCTAAATTCGATCTAGEco

21、R+ Bg l雙酶切Eco R+ Bg l雙酶切GCTTAAATCTAGAATTCGGATCTAT4 DNA連接酶15C重組體第57頁(yè)/共79頁(yè)58（二）平末端連接限制性內(nèi)切酶切割產(chǎn)生的平端粘端補(bǔ)齊或切平形成的平端第58頁(yè)/共79頁(yè)59目的基因載體限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶T4 DNA連接酶15C重組體載體自連目的基因 自連第59頁(yè)/共79頁(yè)識(shí)別序列外源DNA酶切位點(diǎn)酶切位點(diǎn)EcoR酶切Pvu酶切粘性末端平末端雙酶切載體DNA連接酶第60頁(yè)/共79頁(yè)61（三）人工接頭連接由平端加上新的酶切位點(diǎn)，再用限制酶切除產(chǎn)生粘性末端，而進(jìn)行粘端連接。 第61頁(yè)/共79頁(yè)人工接頭及其應(yīng)用CCGAATTCG G

22、GCTTAAGC5-3-Eco REco REco REco R第62頁(yè)/共79頁(yè)63（四）同聚物加尾連接在末端轉(zhuǎn)移酶(terminal transferase) 的作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再進(jìn)行粘端連接。第63頁(yè)/共79頁(yè)645335載體DNA5335目的基因限制酶或機(jī)械剪切限制酶 53 35 5 3 T(T)nT T(T)nT 35 5 3 353 A(A)nA A(A)nA 35-核酸外切酶-核酸外切酶末端轉(zhuǎn)移酶+ dATP末端轉(zhuǎn)移酶+ dTTPT(T)nTA(A)nAA(A)nA T(T)nTT4 DNA連接酶15C重組體5第64頁(yè)/共79頁(yè)65四、重組

23、DNA分子的導(dǎo)入宿主細(xì)胞應(yīng)具備的條件 處于感受態(tài) 對(duì)載體無(wú)嚴(yán)格限制 限制酶和重組酶缺陷 不對(duì)外源DNA進(jìn)行修飾 能表達(dá)重組體所提供表型特征第65頁(yè)/共79頁(yè)66磷酸鈣轉(zhuǎn)染DEAE-葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染電穿孔轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染顯微注射轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)染 感染第66頁(yè)/共79頁(yè)67（一）根據(jù)重組載體的遺傳表型進(jìn)行篩選（二）限制性核酸內(nèi)切酶酶切鑒定（三）核酸分子雜交法（四）PCR法（五）免疫化學(xué)檢測(cè)法五、重組DNA分子的篩選與鑒定第67頁(yè)/共79頁(yè)68(插入失活法) 抗藥性標(biāo)記選擇第68頁(yè)/共79頁(yè)69篩選重組體pUC18 第69頁(yè)/共79頁(yè)70表達(dá)體系的建立： 表達(dá)載體的構(gòu)建 受體細(xì)胞的建立 表達(dá)產(chǎn)物的分離純化六、

24、克隆基因的表達(dá)第70頁(yè)/共79頁(yè)71其優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、迅速、經(jīng)濟(jì)、適合大規(guī)模生產(chǎn) 。 E.coli表達(dá)體系的不足：不宜表達(dá)真核基因組DNA；不能加工表達(dá)的真核蛋白質(zhì)；表達(dá)的蛋白質(zhì)常形成不溶性包涵體；很難表達(dá)大量可溶性蛋白。1. 原核表達(dá)體系 (E.coli表達(dá)體系最為常用)第71頁(yè)/共79頁(yè)72 優(yōu)點(diǎn)：可表達(dá)克隆的cDNA及真核基因組DNA 可適當(dāng)修飾表達(dá)的蛋白質(zhì) 表達(dá)產(chǎn)物分區(qū)域積累 缺點(diǎn)：操作技術(shù)難、費(fèi)時(shí)、不經(jīng)濟(jì)2.真核表達(dá)體系（酵母、昆蟲(chóng)、乳類動(dòng)物細(xì)胞）第72頁(yè)/共79頁(yè)73第五節(jié)重組DNA技術(shù)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系非常密切并前景遠(yuǎn)大一、疾病基因的發(fā)現(xiàn)與克隆根據(jù)基因定位克隆之并研究其性質(zhì)，而認(rèn)識(shí)疾病的分子機(jī)制。 疾病基因發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)典型例子: 脆性X綜合征Kallmann綜合征第73頁(yè)/共79頁(yè)74二、生物制藥 利用基因工程生產(chǎn)有藥用價(jià)值的蛋白質(zhì)、多肽產(chǎn)品已成為當(dāng)今世界一項(xiàng)重大產(chǎn)業(yè)，并將有望成為21世紀(jì)的支柱產(chǎn)業(yè)。 美國(guó)Eli Lilly公司于1982年首先利用重組DNA技術(shù)合成人胰島素并投放市場(chǎng)，標(biāo)志著生物工程藥物時(shí)代