DB41∕T 2188-2021 金銀花組織培養(yǎng)育苗技術規(guī)程

1、 ICS 65.020.01CCS B 3041河 南 省 地 方 標 準DB41/T 21882021金銀花組織培養(yǎng)育苗技術規(guī)程2021-10-19發(fā)布2022-01-18實施 DB41/T 21882021目次前言. II123456范圍. 1規(guī)范性引用文件 . 1術語和定義 . 1設施設備 . 1組織培養(yǎng) . 2溫室馴化 . 3附錄A（資料性）培養(yǎng)基成分. 4I DB41/T 21882021前言本文件按照GB/T 1.12020標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則的規(guī)定起草。II DB41/T 21882021金銀花組織培養(yǎng)育苗技術規(guī)程12范圍本文件規(guī)定了金銀花組織培養(yǎng)育

2、苗的術語和定義、設施設備、組織培養(yǎng)和溫室馴化。本文件適用于金銀花組織培養(yǎng)育苗。規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T 18822010林木組織培養(yǎng)育苗技術規(guī)程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.13.2金銀花忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）。組織培養(yǎng)在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細胞以及原生質體，在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中，使其再生新植株的過程和技術。3.3外植體用于植物組織

3、培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細胞以及原生質體。3.4初代培養(yǎng)在組織培養(yǎng)過程中,最初建立的外植體無菌培養(yǎng)階段。3.5繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)獲得的莖段或愈傷組織，通過分離切割接種在新的培養(yǎng)基中，從而獲得大量無菌幼苗的培養(yǎng)階段。4設施設備4.1組織培養(yǎng)設施設備4.1.1基本要求組織培養(yǎng)室選址應環(huán)境清潔，遠離微粒和煙霧等污染源，水電供應充足，交通運輸便利。1 DB41/T 21882021組織培養(yǎng)室包括洗滌室、滅菌室、培養(yǎng)基配制室、緩沖室、無菌接種室和無菌培養(yǎng)室等。4.1.2洗滌室設備配備自動或半自動洗瓶機、水槽、收納箱、量瓶架等。4.1.3滅菌室設備配備高壓蒸汽滅菌鍋、器械消毒器、紫外線燈、烘干箱、微孔過

4、濾器等。4.1.4培養(yǎng)基配制室設備配備電子天平（0.0001 g,0.01 g）、酸度計、微波爐、冰箱等。4.1.5緩沖室設備配備衣帽柜、風淋裝置等。4.1.6無菌接種室設備配備超凈工作臺、器械消毒器、酒精燈等。4.1.7無菌培養(yǎng)室設備配備培養(yǎng)架、紫外燈、臭氧發(fā)生器、空氣加濕器、除濕機、時控裝置等。溫室馴化設施設備4.2日光溫室，配備溫濕度調節(jié)裝置、光照控制裝置、灌溉設備、栽培床、穴盤等。5組織培養(yǎng)5.1外植體取材與滅菌5.1.1外植體取材選取生長健壯、無病蟲害的金銀花當年生嫩枝，截取長度為0.5cm3cm的芽段，每個芽段包含13個腋芽。5.1.2外植體處理將截取的芽段置于1%中性洗滌劑中浸泡

5、10 min，再用自來水沖洗30 min。5.1.3外植體滅菌在超凈工作臺內，將處理過的芽段置于無菌培養(yǎng)瓶中，加入2.5%次氯酸鈉（按有效氯計）溶液浸泡20 min，再用滅菌蒸餾水沖洗4次，以獲得無菌的外植體用于接種。5.25.32培養(yǎng)基成分芽段初代培養(yǎng)與繼代培養(yǎng)所需培養(yǎng)基成分見附錄A，培養(yǎng)基pH 5.8。外植體的接種將經過滅菌的芽段置于超凈工作臺內，無菌接種。 DB41/T 218820215.4初代培養(yǎng)外植體接種于300 mL650 mL培養(yǎng)瓶中，每瓶分裝培養(yǎng)基高度1.0 cm1.5 cm，每10 mL培養(yǎng)基接種1個芽段。置于無菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)20 d30 d。培養(yǎng)室設置光照強度2000 l

6、x3000 lx，光照時間14 h/d，濕度60%，溫度25±2。5.5繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)獲得的不定芽分割成1cm的不定芽塊，按5.4的方法接種培養(yǎng)，擴繁獲得大量的不定芽3塊。5.6生根培養(yǎng)從繼代培養(yǎng)獲得的不定芽塊中分離高度2 cm的健壯不定芽，按5.4的方法接種培養(yǎng)，其中光照強度設置為3000 lx。獲得根芽齊全的金銀花無菌幼苗。6溫室馴化6.1將根芽齊全的無菌幼苗帶瓶轉移至溫室中，日光鍛煉5 d7 d，然后開瓶鍛煉3 d5 d，及時加水保濕。6.2將鍛煉好的幼苗從培養(yǎng)瓶中取出，用自來水沖洗根部10min，洗凈根系附著的培養(yǎng)基，置于適宜濃度的農用殺菌劑中，浸泡處理，然后定植于珍珠巖

7、基質的穴盤中，噴水保濕。3 DB41/T 21882021AA附錄 A（資料性）培養(yǎng)基成分金銀花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分見表A.1。表A.1金銀花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基成分表初代培養(yǎng)基mg/L16501900170繼代培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基mg/L825培養(yǎng)基成分mg/L16501900170硝酸銨硝酸鉀NH4NO3KNO3950磷酸二氫鉀 KH2PO485七水硫酸鎂 MgSO47H2O二水氯化鈣 CaCl22H2O四水硫酸錳 MnSO44H2O37037018544044022022.36.222.36.222.36.2硼酸H3BO3無機成分七水硫酸鋅 ZnSO47H2O8.68.68.6碘化鉀KI0.830.250.0250.02537.327.81000.830.250.0250.02537.327.81000.830.250.0250.02537.327.8100二水鉬酸鈉 Na2MoO42H2O五水硫酸銅 CuSO45H2O六水氯化鈷 CoCl26H2O乙二胺四乙酸二鈉Na2EDTA2H2O七水硫酸亞鐵 FeSO47H2O肌醇Myo-inositol鹽酸硫胺素 Thiamine HCl鹽酸吡哆醇 Pyridoxine HCl0.10.10.1維生素0.50.50.5煙酸Nicotinic AcidGlycine0.50.50.5氨基酸甘氨酸