食品理化檢驗(yàn)維生素的測定詳解

1、會(huì)計(jì)學(xué)1食品理化檢驗(yàn)維生素的測定詳解食品理化檢驗(yàn)維生素的測定詳解一、概述一、概述 （二）常見維生素的生理功能（二）常見維生素的生理功能沸。沸。（一）脂溶性維生素的主要理化性質(zhì)（一）脂溶性維生素的主要理化性質(zhì)常用的測定方法有常用的測定方法有: 薄層色譜法、分光光度法、氣相薄層色譜法、分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。色譜法、高效液相色譜法等。高效液相色譜法：高效液相色譜法：快速、高效、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，快速、高效、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)， 是我國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分析方法是我國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分析方法 （二）脂溶性維生素的測定方法（二）脂溶性維生素的測定方法 卻；卻；1000100mX水溶性維生素的理化性質(zhì)水溶性維

2、生素的理化性質(zhì)維生素維生素B B1 1的測定的測定維生素維生素B B2 2的測定的測定維生素維生素C C的測定的測定 三、水溶性維生素的測定三、水溶性維生素的測定 （一）水溶性維生素的主要理化性質(zhì)（一）水溶性維生素的主要理化性質(zhì) VB VB1 1又叫硫胺素、抗神經(jīng)炎素又叫硫胺素、抗神經(jīng)炎素 1 1、食品中、食品中VBVB1 1的存在形式的存在形式 常以游離態(tài)存在；常以游離態(tài)存在； 復(fù)合脂形式存在（磷蛋白）；復(fù)合脂形式存在（磷蛋白）； 輔羧酶形式存在輔羧酶形式存在 VBVB1 1在酵母、米糠、麥胚、花生、黃豆以及綠色在酵母、米糠、麥胚、花生、黃豆以及綠色的蔬菜和牛乳、蛋黃中比較豐富，的蔬菜和牛乳

3、、蛋黃中比較豐富，動(dòng)物組織不如植物動(dòng)物組織不如植物含量豐富。含量豐富。2.VB2.VB1 1的性質(zhì)的性質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法：標(biāo)準(zhǔn)曲線法： 配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測定熒光強(qiáng)度，繪制配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測定熒光強(qiáng)度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測量未知試樣的熒光強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測量未知試樣的熒光強(qiáng)度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度。度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度。稱樣三角瓶三角瓶高壓水解高壓水解鹽酸溶液鹽酸溶液調(diào)調(diào)pHpH值值乙酸鈉溶液乙酸鈉溶液酶解酶解淀粉酶淀粉酶定容定容樣品樣品熱水熱水酸性氯化鉀酸性氯化鉀收集酸性氯化鉀定容收集酸性氯化鉀定容 凈化凈化反應(yīng)瓶編號(hào)反應(yīng)瓶編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)A A瓶瓶標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)B B瓶瓶

4、樣品樣品A A瓶瓶樣品樣品B B瓶瓶加標(biāo)準(zhǔn)液或加標(biāo)準(zhǔn)液或樣品液樣品液標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液5ml5ml 標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液5ml5ml 樣品液樣品液5ml5ml 樣品液樣品液5ml5ml加氫氧化鈉加氫氧化鈉3ml3ml3ml3ml加堿性鐵氰加堿性鐵氰化鉀化鉀3ml3ml3ml3ml加正丁醇加正丁醇10ml10ml10ml10ml10ml10ml10ml10ml 熒光強(qiáng)度測定熒光強(qiáng)度測定(通過熒光分光光度計(jì)可以測得通過熒光分光光度計(jì)可以測得) 激發(fā)波長激發(fā)波長365nm365nm；發(fā)射波長；發(fā)射波長435nm435nm； 激發(fā)波狹縫激發(fā)波狹縫5nm5nm；發(fā)射波狹縫；發(fā)射波狹縫5nm5nm。（4 4）方法說明）

5、方法說明 本方法適用于各類食物中硫胺素的測定，但本方法適用于各類食物中硫胺素的測定，但不適用于不適用于有有吸附吸附硫胺素能力的物質(zhì)和含有影響硫色素?zé)晒馕镔|(zhì)的樣品硫胺素能力的物質(zhì)和含有影響硫色素?zé)晒馕镔|(zhì)的樣品； 酸解、水解的目的：酸解、水解的目的：使結(jié)合型的使結(jié)合型的VBVB1 1成為游離型的成為游離型的； 紫外線會(huì)破壞硫色素，所以硫色素形成后，紫外線會(huì)破壞硫色素，所以硫色素形成后，反應(yīng)瓶反應(yīng)瓶要用要用黑布黑布遮蓋或在暗室中進(jìn)行熒光測定遮蓋或在暗室中進(jìn)行熒光測定，并且要，并且要迅速測定迅速測定；稱樣三角瓶三角瓶高壓水解高壓水解鹽酸溶液鹽酸溶液調(diào)調(diào)pHpH值值氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液酶解酶解淀粉酶

6、淀粉酶定容定容蛋白酶蛋白酶樣品提取液樣品提取液具塞試管具塞試管水水雙氧水雙氧水冰乙酸冰乙酸高錳酸鉀高錳酸鉀氧化去雜氧化去雜褪色褪色標(biāo)準(zhǔn)液按相同方法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)液按相同方法進(jìn)行樣品液樣品液水水丙酮丙酮- -乙酸乙酸- -水混合液水混合液水水收集洗脫液收集洗脫液定容定容 * *標(biāo)準(zhǔn)液按相標(biāo)準(zhǔn)液按相同操作進(jìn)行同操作進(jìn)行1000100)()(1fmDCmBAX（三）維生素（三）維生素C的測定的測定 （第一法）熒光法（測總抗壞血酸）（第一法）熒光法（測總抗壞血酸）偏磷酸偏磷酸冰醋酸溶液：稱取冰醋酸溶液：稱取15g偏磷酸，加入偏磷酸，加入40mL冰醋冰醋酸，加水稀釋至酸，加水稀釋至500mL過濾后，貯存于冰箱

7、中；過濾后，貯存于冰箱中；硫酸：硫酸：0.15mol/L偏磷酸偏磷酸乙酸乙酸硫酸溶液：稱取硫酸溶液：稱取15g偏磷酸，加入偏磷酸，加入40mL冰醋酸，用冰醋酸，用0.015molL-1硫酸稀釋至硫酸稀釋至500mL；乙酸鈉溶液：稱取乙酸鈉溶液：稱取500g乙酸鈉溶解并稀釋至乙酸鈉溶解并稀釋至1L；硼酸硼酸乙酸鈉溶液：稱取硼酸乙酸鈉溶液：稱取硼酸9g，加入，加入35mL乙酸鈉溶液乙酸鈉溶液，用水稀釋至，用水稀釋至1000mL；鄰苯二胺溶液：稱取鄰苯二胺溶液：稱取20mg鄰苯二胺鹽酸鹽溶于鄰苯二胺鹽酸鹽溶于100mL水水中；中；抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.500g抗壞血

8、酸溶于偏磷酸抗壞血酸溶于偏磷酸冰醋酸溶液中，定容至冰醋酸溶液中，定容至500mL容量瓶中，吸取上述溶液容量瓶中，吸取上述溶液5mL，再用偏磷酸再用偏磷酸冰醋酸溶液定容至冰醋酸溶液定容至50mL；抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：100g/mL百里酚藍(lán)指示劑百里酚藍(lán)指示劑(麝香草酚藍(lán)麝香草酚藍(lán))：變色范圍：變色范圍pH1.2(紅紅)2.8(黃黃)；活性炭：取活性炭：取50g活性炭加入活性炭加入250mL10%鹽酸，加熱至沸，減鹽酸，加熱至沸，減壓過濾，用蒸餾水沖洗活性炭，檢查濾液中無鐵離子為止，于壓過濾，用蒸餾水沖洗活性炭，檢查濾液中無鐵離子為止，于110120烘干。烘干。熒光分光光度

9、計(jì)熒光分光光度計(jì)或具有或具有350nm及及430nm 波長的波長的熒光計(jì)；搗碎機(jī)。熒光計(jì)；搗碎機(jī)。各取各取10mL標(biāo)準(zhǔn)氧化液標(biāo)準(zhǔn)氧化液于于2個(gè)個(gè)100mL容量瓶中，分別標(biāo)明容量瓶中，分別標(biāo)明“標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)”及及“標(biāo)準(zhǔn)空白標(biāo)準(zhǔn)空白”各取各取10mL試樣氧化液試樣氧化液于于2個(gè)個(gè)100mL容量瓶中，分別標(biāo)明容量瓶中，分別標(biāo)明“試試樣樣”及及“試樣空白試樣空白”于于“標(biāo)準(zhǔn)空白標(biāo)準(zhǔn)空白”及及“試樣空白試樣空白”中各加中各加5mL硼酸硼酸-乙酸鈉溶乙酸鈉溶液，液，混合搖動(dòng)混合搖動(dòng)15min，用水稀釋至，用水稀釋至100mL，在，在4冰箱中放冰箱中放置置23小時(shí)，即得小時(shí)，即得“標(biāo)準(zhǔn)空白標(biāo)準(zhǔn)空白”溶液及溶液及

10、“試樣空白試樣空白”溶液，溶液，備用。備用。于于“試樣試樣”及及“標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)”中各加中各加5mL /L乙酸鈉溶液，用水稀乙酸鈉溶液，用水稀釋至釋至100mL,即得即得“試樣試樣”溶液及溶液及“標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)”溶液，備用。溶液，備用。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備： 取上述取上述“標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)”溶液（抗壞血酸含量溶液（抗壞血酸含量10g/mL）0.5、1.0、1.5和和2.0mL標(biāo)準(zhǔn)系列，取雙份分別置于標(biāo)準(zhǔn)系列，取雙份分別置于10mL帶蓋試管中，帶蓋試管中，再用水補(bǔ)充至再用水補(bǔ)充至2.0mL。（平行。（平行2次，做標(biāo)準(zhǔn)曲線）次，做標(biāo)準(zhǔn)曲線） 取中取中“標(biāo)準(zhǔn)空白標(biāo)準(zhǔn)空白”溶液，溶液，“樣品空白樣品空白”溶液及

11、溶液及 “樣品樣品”溶溶液各液各2mL，分別置于，分別置于10mL帶蓋試管中。在暗室中迅速向各試帶蓋試管中。在暗室中迅速向各試管中加入管中加入5mL鄰苯二胺溶液，振搖混合，在室溫下反應(yīng)鄰苯二胺溶液，振搖混合，在室溫下反應(yīng)35min，于激發(fā)光波長，于激發(fā)光波長338nm、發(fā)射光波長、發(fā)射光波長420nm處測定熒光強(qiáng)度。處測定熒光強(qiáng)度。標(biāo)準(zhǔn)系列熒光強(qiáng)度分別減去標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，對標(biāo)準(zhǔn)系列熒光強(qiáng)度分別減去標(biāo)準(zhǔn)空白熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的抗壞血酸含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或進(jìn)行相關(guān)計(jì)算應(yīng)的抗壞血酸含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或進(jìn)行相關(guān)計(jì)算，其直線回歸方程供計(jì)算時(shí)使用。，其直線回歸方程供計(jì)算時(shí)使用。（5）結(jié)果計(jì)算：）結(jié)果計(jì)算：式中式中 X-試樣中抗壞血酸及脫氫抗壞血酸總含量，試樣中抗壞血酸及脫氫抗壞血酸總含量，mg/100g； c-由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得或由回歸方程算得試樣溶液濃度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得或由回歸方程算得試樣溶液濃度，g/mL m-試樣的質(zhì)量，試樣的質(zhì)量，g； V-熒光反應(yīng)所用試樣體積，熒光反應(yīng)所用試樣體積，mL； F-試樣溶液的稀釋倍數(shù)。試樣溶液的稀釋倍數(shù)。1000100FmcVX1000100fmpVX沸。沸。（一）脂溶性維生素的主要理化性質(zhì)（一）脂溶性維生素的主要理化性質(zhì)1000100mX水溶性維生素的理化性質(zhì)水溶性維生素的理化性質(zhì)維生素維生素B B