臨床細菌檢驗標本的采集、運送_課件】

1、臨床細菌檢驗標本的處理臨床細菌檢驗標本的采集、運送、保存和處理1、所有標本的采集、運送和處理應在無菌操作，防止污染原則下認真進行。2、已采集標本都應置于防漏、密閉的容器中運送。已采集標本，常規(guī)性細菌學檢驗，不超過1h送實驗室。保存在4也不能超過24hr。3、每份標本都應標記患者姓名、化驗單聯(lián)號、標本來源、檢驗目的、日期及相關(guān)臨床信息。 收到標本認真查對，看標本留取是否合格。4、避免來自寄生菌的污染，應當保證每份標本代表感染過程。如來自皮膚、呼吸道的正常菌叢過早、過度生長，會干擾培養(yǎng)結(jié)果。分離時應區(qū)別標本中是常居菌群的污染還是致病菌。5、分離細菌的目的：查找與疾病相關(guān)的微生物及其對抗生素的敏感性

2、，幫助臨床診斷、治療、預后和流行病學的調(diào)查。6、如疑似對低溫敏感的淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌感染標本應立即處理。腦脊液、生殖道、眼睛、內(nèi)耳標本決不可冷藏。7、根據(jù)標本來源選用培養(yǎng)基及孵育環(huán)境。血液、骨髓標本的處理了解血培養(yǎng)儀所用培養(yǎng)基的種類：需氧（成人、兒童）、厭氧、真菌培養(yǎng)基。標本用量：采血量：成人8-10ml，兒童1-3ml；骨髓用量：1-3ml；真菌：1-5ml； 厭氧菌：3-10ml 。培養(yǎng)儀上陽性報警標本要及時處理：消警、登記報警時間、用注射器抽取培養(yǎng)液接種平板，血平板分離各類細菌特別-溶血鏈球菌，肺炎鏈球菌；巧克力平板于CO2環(huán)境分離嗜血桿菌、奈瑟菌。真菌培養(yǎng)接種兩個T

3、TC-沙氏平板，分別放室溫22及35孵育24-48hr。均需分區(qū)劃線。 然后涂片革蘭染色鏡檢，把鏡檢結(jié)果及時 通知主管醫(yī)師，并填寫初檢結(jié)果臨床通知單。例如：檢到葡萄狀排列G+C,可報告“找到G+C，形似葡萄球菌”。常規(guī)培養(yǎng)5天，認為陰性者，報告無菌生長正常人的血液、骨髓是無菌的，標本中檢出細菌，都應視作病原菌 需排除污染。 腦脊液標本的處理涂片查抗酸桿菌：腦脊液以4000r/min離心30min，取沉淀物涂片，做抗酸染色。涂片查新型隱球菌：將腦脊液離心沉淀物進行墨汁染色，在黑色背景中見到菌體周圍有透明莢膜，有時可見出芽的酵母菌。腦脊液培養(yǎng)用血培養(yǎng)儀，陽性報警標本處理同血培養(yǎng)。注意：涂片檢到平面

4、相對、成雙排列GC,可報告“找到GC, 形似腦膜炎奈瑟菌”。巧克力平板于CO2環(huán)境分離腦膜炎奈瑟菌和嗜血桿菌。尿標本的采集運送和處理中段尿采集：清潔外陰及尿道口周圍，自然排尿，讓尿流不間停，截留中段尿不少于1ml。2hr內(nèi)送交實驗室，在4C也不能超過24hr。實驗室接到標本應立即處理。細菌培養(yǎng)接種血平板和麥康凱，真菌培養(yǎng)選用TTC-沙保羅平板。尿定量培養(yǎng)：用10ul定量接種環(huán)取尿液標本劃線于血平板上呈一條直線，不要劃到底，然后沿直線左右劃線，從上而下一次完成，不可來回劃線和分區(qū)劃線。 置35培養(yǎng)18-24hr，生長菌落數(shù)乘以100，可求出每毫升生長菌落數(shù)。痰直接涂片查細菌、真菌：挑選痰液中膿性

5、或帶血部分，涂成均勻薄片，進行革蘭染色，鏡檢。痰涂片查抗酸桿菌：把痰前處理液加入痰標本中，兩者比例約2：1，混合均勻，放室溫靜置10-20min，待粘液完全液化，倒試管離心3000r/min5-10min，取沉淀物涂片抗酸染色鏡檢。培養(yǎng)基選擇：血平板分離各類細菌特別溶血鏈球菌，肺炎鏈球菌。加萬古巧克力于CO2環(huán)境分離嗜血桿菌、腦膜炎奈瑟菌。麥康凱分離革蘭陰性桿菌。真菌培養(yǎng)接種兩個TTC-沙氏平板，分別放室溫22及35孵育24-48hr。均需分區(qū)劃線。糞便標本的處理涂片檢查：當檢查霍亂弧菌以及菌群失調(diào)優(yōu)勢菌時需作直接涂片檢查。取新鮮標本涂片革蘭染色鏡檢：觀察有無革蘭陰性呈魚群排列的弧菌各種菌在涂

6、片中所占相對比例、推斷主要優(yōu)勢菌有革蘭陽性芽生孢子和假菌絲即報告檢出酵母樣菌。真菌也可濕片檢查。一般培養(yǎng)：直接挑取標本中膿血部分接種SS平板和血平板嚴格按照三區(qū)劃線，保證有單個菌落的分離，置35培養(yǎng)。真菌培養(yǎng)：將標本接種兩個TTC-沙氏平板及血平板，置25-30和35孵育24-48hr。真菌性腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見有白色假絲酵母菌。對化驗單上明確要求做霍亂弧菌培養(yǎng)以及霍亂弧菌快檢陽性的均應做霍亂弧菌培養(yǎng)，以便確診和做進一步分型。方法是取一環(huán)大便標本或堿性蛋白胨水增菌液接種堿性平板或TCBS平板及血平板，要求三區(qū)劃線，然后置35孵箱中孵育。眼耳鼻喉拭子標本的處理根據(jù)這些部位感染細菌的特點

7、，須用血平板和巧克力平板作分離培養(yǎng)，必要時加選麥康凱，需分區(qū)劃線。巧克力平板在CO2 環(huán)境中孵育，利于肺炎鏈球菌、嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌的生長。涂片檢查：將拭子直接在玻片上涂片，革蘭染色鏡檢查細菌、真菌，如果查真菌還可以濕片直接在高倍鏡下檢查芽生孢子和假菌絲。正常人的眼內(nèi),中耳及鼻竇內(nèi)是無菌的。膿液標本的處理（病灶分泌物）1、涂片檢查：膿液標本在培養(yǎng)的同時均須涂片，涂片的結(jié)果一方面為臨床提供最初的診治依據(jù)，另一方面可作為分離培養(yǎng)的質(zhì)量指標。2、涂片直接做革蘭染色，鏡下可觀察細菌和酵母樣菌。涂片做抗酸染色鏡檢查抗酸桿菌。3、淋病奈瑟菌涂片，注意細菌形態(tài)是否典型，革蘭陰性球菌，平面相對、成雙排列分

8、布在細胞內(nèi)或外。4、培養(yǎng)：血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板是基礎(chǔ)的分離培養(yǎng)基，另外應接種巧克力平板，置CO2環(huán)境中孵育，可分離嗜血桿菌和奈瑟菌。以分區(qū)劃線法接種。注意：對無菌部位的感染，從分泌物中分離到細菌，一般均有臨床意義。燒傷創(chuàng)面膿液或分泌物中，以銅綠假單胞菌最多見，次為金黃色葡萄球菌，再次為變形桿菌，而大腸埃希菌、肺炎克雷伯、糞產(chǎn)堿桿菌及白色念珠菌感染亦不少見。無菌體液標本的處理1、無菌體液是指血液骨髓和腦脊液外的羊膜液、后穹隆穿刺液、透析液、心包液、腹膜穿刺液和滑膜液。2、涂片檢查：這類標本因原部位是無菌的，只要檢出細菌即可做出診斷。所以，直接涂片很重要。3、標本如為漿液，可先經(jīng)3000r/

9、min離心，取沉淀涂片。如為膿液，可直接涂片。涂片固定后，作革蘭染色和抗酸染色。4、胸水和腹水的涂片在觀察時應予注意是單一菌種，還是混合菌感染。因為胸腔和腹腔內(nèi)器官的感染往往是混合菌引起的。胸水涂片中如見到梭形革蘭陰性桿菌，說明有厭氧菌的感染可能，在報告中應表示出來。5、涂片做抗酸染色很重要，不少感染有結(jié)核性的，另外奴卡菌和放線菌是部分抗酸性的，作抗酸染色也有利于發(fā)現(xiàn)這類細菌的存在。6、培養(yǎng)：無菌體液含細菌數(shù)量較少，必須做增菌培養(yǎng)。一般注入培養(yǎng)瓶上血培養(yǎng)儀，標本處理如血液。如果標本量太少接種完平板后，可用自配葡萄糖管增菌。7、培養(yǎng)基的選擇：接種血平板，分離一般細菌，巧克力平板置CO2環(huán)境中以分

10、離嗜血桿菌，麥康凱瓊脂分離革蘭陰性桿菌。如果真菌培養(yǎng)接種TTC-沙氏平板。需分區(qū)劃線接種。生殖系統(tǒng)標本的處理1、淋病奈瑟菌涂片檢查：將拭子直接在玻片上涂片，革蘭染色鏡檢，如看到白細胞內(nèi)有革蘭陰性雙球菌，呈雙腎形，即可根據(jù)形態(tài)作出初步報告。2、如果查真菌可以用生理鹽水制濕片直接鏡檢看芽生孢子和假菌絲，也可以革蘭染色鏡檢。3、查抗酸桿菌可直接涂片做抗酸染色鏡檢。4、細菌培養(yǎng)：接種血平板，分離一般細菌，麥康凱瓊脂平板分離革蘭陰性桿菌，巧克力平板放5%-10% CO2環(huán)境中可分離淋病奈瑟菌 。以分區(qū)劃線法接種，置35孵育。5、 真菌培養(yǎng)：將標本接種兩個TTC-沙氏平板及血平板，分別放室溫22及35孵育

11、24-48hr。醫(yī)院感染環(huán)境監(jiān)測標本的處理各類環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護人員手培養(yǎng)菌落總數(shù)衛(wèi)生標準環(huán)境類別 范圍 標準 空氣cfu/m物體表面cfu/cm2手培養(yǎng)cfu/cm2層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房 10 5 5普通手術(shù)室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護性隔離室、供應室無菌區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護病房200 5 5兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應室清潔區(qū)、急診室、化驗室、500 1010各類普通病房和房間傳染病科及病房 1515空氣中微生物的采集與檢測采樣時間 ：選擇消毒處理后與進行醫(yī)療活動之前期間采樣。 采樣高度 ：與地面垂直高度80-150cm。 布點方法：室內(nèi)面積

12、30m2，設(shè)一條對角線上取3點，即中心一點、兩端各距墻1m處各取一點；室內(nèi)面積30m2，設(shè)東、西、南、北、中5點，其中東、西、南、北點均距墻1m。 采樣方法：用7cm直徑的普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點暴露10分，或用9cm直徑普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點暴露5min。標本處理：收到平板后立即放35 孵育24hr。結(jié)果判斷：根據(jù)奧氏公式：C (cfu/m)=50000NAT N - 菌落數(shù) cfu/平板 ， A - 平板面積 cm2， T - 平板暴露時間 min。如果使用7cm直徑的平板，暴露10min，則C=130N。醫(yī)療器械滅菌效果的檢測采樣時間 ：在消毒或滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。 注射器的

13、檢測：以無菌操作方法取注射器吸5ml無菌葡萄糖管液抽吸幾次后，將葡萄糖管液再打進試管，然后置35孵育24hr后取出，取一環(huán)接種血平板，再放35孵育24hr后無菌生長為合格。輸液器的監(jiān)測：以無菌操作將5ml無菌葡萄糖管液注入輸液器中，使葡萄糖管液再流進試管，置35孵育24hr后取出，取一環(huán)接種血平板，再放35孵育24hr后無菌生長為合格。小件醫(yī)療器械的檢測：將縫合針、手術(shù)刀片等直接放入5ml無菌葡萄糖管，充分混勻后然后置35孵育24hr后取出，取一環(huán)接種血平板，再放35孵育24hr后無菌生長為合格。物體表面采樣檢測采樣時間 ：選擇消毒處理后4h內(nèi)進行采樣。 采樣面積： 被采表面100cm2,取全

14、部表面；被采表面100cm2,取100cm2 。 采樣方法：用55cm的標準滅菌規(guī)格板,放在被檢物體表面,用浸有無菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返各涂抹10次,剪去手接觸部分,將棉拭子放入裝2ml無菌生理鹽水的試管中送檢。門把手等小型物體則采用棉拭子直接涂抹物體的方法采樣。標本處理：收到標本后應充分混勻，取20ul液體接種血平板，用接種環(huán)像接種尿標本一樣劃線， 然后置35 孵育24hr。判斷標準：、類區(qū)域：細菌總數(shù)5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域細菌：總數(shù)10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域細菌：總數(shù)15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、

15、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門菌。醫(yī)護人員手培養(yǎng)采樣時間 ：在接觸病人和從事醫(yī)療活動前采樣或消毒后立即采樣。 采樣面積及方法： 被檢人五指并攏，將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉試子在手的每個掌面從指根到指端來回涂擦10次后，并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉試子，剪去手接觸部位，將棉試子放入裝有2ml無菌生理鹽水的試管內(nèi)送檢。標本處理：收到標本后應充分混勻，取20ul液體接種血平板，用接種環(huán)像接種尿標本一樣劃線， 然后置35 孵育24hr。判斷標準：、類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)5cfu/cm2，并未檢出金葡、大腸、銅綠為消毒合格。類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)10cfu/cm2，并未檢出金葡、大

16、腸為消毒合格。類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)15cfu/cm2，并未檢出金葡、大腸為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌、大腸埃希菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。 消毒液染菌量的監(jiān)測采樣時間：采取更換前使用中的消毒液與無菌器械保存液。采樣量及方法：在無菌條件下，用無菌吸管吸取1毫升被檢液，加入9毫升稀釋液中混勻送檢。不同的消毒劑加入相應的中和劑，對于醇類與酚類消毒液，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可，對于含氯消毒液、含碘消毒液、過氧化物消毒液，需在肉湯中加入中和劑0.1%硫代硫酸鈉；對于醛類消毒液，需在肉湯中加入0.3%甘氨酸。標本處理：收到標本后應充分混勻，取200ul