S006紅細胞ABO血型(反定型)鑒定標準化操作規(guī)程

1、文件名紅細胞ABO血型（反定型）鑒定標準化操作規(guī)程文件名紅細胞ABO血型（反定型）鑒定標準化操作規(guī)程編制人審核人批準人批準日期修改日期簽字修改日期簽字復(fù)審日期簽字復(fù)審日期簽字紅細胞ABO血型（反定型）鑒定標準化操作規(guī)程一、目的為保證血液及血液成分的紅細胞ABO血型在臨床上同型輸注，確保臨床輸血安全、有效，根據(jù)臨床輸血技術(shù)規(guī)范第十五條特制定本標準化操作規(guī)程。二、方法采用試管法檢測紅細胞ABO血型（反定型）。三、原理用已知的A1、B、O標準紅細胞測定被檢者血清中有無相應(yīng)的抗A或抗B抗體，結(jié)合正定型結(jié)果判斷ABO血型。四、適用范圍適用于輸血前患者與獻血者紅細胞ABO血型（反定型）確認。五、儀器設(shè)備普

2、通離心機；血型專用離心機；六、試劑1、試劑名稱：人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒；2、試劑生產(chǎn)廠家：xx血液生物醫(yī)藥有限公司；3、批準文號：國藥準字S20060059；4、包裝規(guī)格：A1、B、O試劑各1支，10ml/支；5、貯藏條件；2-8保存，不能冰凍。6、有效期：自檢定合格之日起2個月；7、試劑性能：外觀、溶血率%、特異性、抗原性均符合檢定規(guī)程要求。七、檢測樣本要求1、標本類型：靜脈血（EDTA抗凝劑:血液=1:10）。2、標本采集：見輸血科標本管理標準化操作規(guī)程。3、標本儲存和運輸：新鮮血28c貯存時間不超過72小時。4、標本拒收狀態(tài)：標識不準確、標本稀釋、細菌污染，嚴重溶血等不能測定。

3、八、操作步驟1、取10mmx60mm潔凈小試管3支，分別標明A1型細胞、B型細胞、O型細胞，用滴管分別加入受檢者血清1滴于試管，再分別用滴管加入A1、B、O型試劑紅細胞懸液1滴。2、，搖動試管，立即以1000rpm離心1min或3400rpm離心15s。3.先觀察是否有溶血，溶血可能是陽性結(jié)果，或者是細菌污染；將試管輕輕搖晃，使沉于管底的紅細胞浮起，觀察細胞扣情況，并判斷凝集強度（見下表）。如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。紅細胞ABO血型（反定型）結(jié)果凝集強度判斷對照表紅細胞凝集反應(yīng)描述凝集強度鏡下可見少數(shù)紅細胞凝集，而絕大多數(shù)紅細胞仍呈分散分混合凝集外觀布溶血，上精液中

4、有游離血紅蛋白溶血紅細胞凝集成一大塊，血清清晰透明4+紅細胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰3+紅細胞凝塊分散成許多小塊，周圍可見到游離紅細胞2+肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細胞鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細胞±鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布陰性4、ABO血型（反定型）表現(xiàn)型反應(yīng)格局表受檢者血型受檢者血清+試劑紅細胞O細胞A細胞B細胞A0-+B0+-O0+AB0-九、控制質(zhì)量新進1、對批號的試劑應(yīng)作親和力與效價驗定。2、此檢測項目應(yīng)參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的室間質(zhì)評，且成績合格;3、每次做血型鑒定應(yīng)采用血漿質(zhì)控品做室內(nèi)質(zhì)量控制，且要求在控。4、嚴格執(zhí)行查對制度，判斷結(jié)果

5、后應(yīng)仔細核對、記錄，避免筆誤等引起的差錯，如有疑問應(yīng)鏡下觀察紅細胞形態(tài)或用其他介質(zhì)重新檢測。5、檢測標本應(yīng)在28c保存留一周，以備復(fù)查。6、試驗中應(yīng)同時檢測。型紅細胞，若產(chǎn)生陽性反應(yīng)，則需要添加自身對照試驗，如自身對照為陽性，表明是自身冷凝集素導(dǎo)致，如為陰性則表明被檢者血清或血漿中可能存在ABO系統(tǒng)以外的其他系統(tǒng)的抗體干擾。十、生物參考區(qū)間ABO血型：A型，B型，。型，AB型；十一、干擾因素1、冷凝集素：在惡性腫瘤或病原體感染后有時冷反應(yīng)性自身抗體可異常增高造成溶血。2、自身抗體：紅細胞被自身抗體強烈致敏后將干擾ABO定型，且自身抗體的存在會導(dǎo)致交叉配血不合。3、弱凝集：當患者紅細胞上抗原異常

6、可能會導(dǎo)致減弱的或缺少的凝集反應(yīng)，如亞型紅細胞抗原性較弱、新生兒、老年人及少數(shù)惡病質(zhì)患者紅細胞抗原形成不足或敏感性降低。4、細菌性凝集：常見有類B凝集，A型或。型病人因大腸桿菌O86感染，從而使紅細胞上獲得類B抗原，能與抗B抗體發(fā)生凝集，表現(xiàn)為B或AB型。其不受溫度影響，病情好轉(zhuǎn)類B凝集即消失。另外紅細胞被細菌或細菌酶污染，紅細胞上的T抗原被激活，與供血者中抗T抗體發(fā)生凝集。5、混合外觀凝集現(xiàn)象：主要見于患者有近期輸血史、骨髓移植、胎盤出血、白血病或其他原因如嵌合現(xiàn)象、A3亞型及Tn多凝集反應(yīng)。6、不規(guī)則抗體：可通過測定唾液中的血型物質(zhì)來鑒定ABO血型。7、亞型：亞型紅細胞抗原性較弱易產(chǎn)生弱凝

7、集；8、假凝集：常見于某些肝病、傳染病、多發(fā)性骨髓瘤、霍金氏病、心肌梗塞、感染等?。?、血漿樣本血型鑒定時應(yīng)注意排除纖維蛋白原和補體的干擾；十二、注意事項1、檢測標本必須正確有標識，其血液量、紅細胞或血漿的質(zhì)量符合實驗要求和受血者當前的免疫學(xué)狀態(tài)；2、輸血前檢查要求是輸血前3天內(nèi)的血樣（預(yù)防受血者在輸血前的3個月之內(nèi)可能有妊娠或輸血等免疫史而可能產(chǎn)生不規(guī)則抗體）。3、標本血液離體后要求盡快送檢，至檢測完畢最長不能超過3d,每次檢測后受血者和供血者的血標本應(yīng)在2c8c保存7天；4、每批次試劑均應(yīng)進行效價測定，試劑使用前應(yīng)仔細檢查試劑的貯存條件是否符合要求、是否變質(zhì)失效；5、注意離心力、溫度、紅細

8、胞濃度及抗原抗體的比例對試驗結(jié)果的影響；6、患者使用的藥物影響的處理：如果使用右旋糖酊、PVP等治療，應(yīng)注意將紅細胞洗滌；如果受者使用肝素治療，則應(yīng)用硫酸魚精蛋白對抗，使樣本凝結(jié)；7、疑存在冷凝集素的病人標本的血型鑒定時應(yīng)用37C生理鹽水洗滌3次再測定，并放37C免疫微柱孵育器10分鐘后觀察結(jié)果。8、疑存在自身抗體的病人標本的正定型血型鑒定時應(yīng)用37c45c生理鹽水洗滌紅細胞三次或者用放散后的紅細胞（放散方法需不破壞紅細胞結(jié)構(gòu)）；9、疑為亞型應(yīng)通過亞型定型試劑來具體定型。鑒定血型時要注意正反定型的結(jié)合，加用抗H和抗A、B型標準血清、A2紅細胞等檢查唾液中的血型物質(zhì)，必要時作吸收放散試驗以確定。若血清中存在不規(guī)則抗體可在反定型用O細胞加以鑒定，有些亞型因為抗原的某些位點缺失，也會產(chǎn)生相對于缺失抗原位點的抗體，這些抗體的產(chǎn)生有助于亞型的判定。10、疑為紅細胞被細菌或細菌酶污染產(chǎn)生的假凝集可置37c免疫微柱孵育器10分鐘后觀察結(jié)果，此種凝集在4c和37c之間隨著溫度的升高凝集程度逐漸減弱，在37c時最弱或消失。11、出現(xiàn)混合外觀凝集的情況時一般要核對標本，必要時可重新抽取血樣；12、紅細胞出現(xiàn)弱凝集、假凝集應(yīng)進行紅細胞形態(tài)顯微鏡鏡檢，假凝集用生理鹽水稀釋或洗滌紅細胞可使凝集消失。13、注意血漿因抗凝不完全