水產(chǎn)品中天然毒素及檢驗方法

1、水產(chǎn)品天然毒素及其檢測技術(shù)水產(chǎn)品天然毒素分類魚類毒素貝類毒素河豚毒素河豚毒素 1.1西加毒素西加毒素 1.2其他等其他等麻痹性毒素麻痹性毒素腹瀉性毒素腹瀉性毒素神經(jīng)性毒素神經(jīng)性毒素失憶性毒素失憶性毒素兩類重要水產(chǎn)品天然毒素兩類重要水產(chǎn)品天然毒素不夠美觀1.1 河豚毒素河豚毒素 毒素來源毒素來源 河豚毒素河豚毒素(TTX)主要存在于魚綱硬骨魚亞綱豚形目的近百種河豚魚和其他生物體內(nèi)近百種河豚魚和其他生物體內(nèi),是一種生物堿類是一種生物堿類天然毒素天然毒素。 中毒機理中毒機理：河豚毒素阻抑神經(jīng)和肌肉的電信號傳導，阻止肌肉、神經(jīng)細胞膜的離子通道，使神經(jīng)末梢及神經(jīng)中樞麻痹，使機體不能運動。毒素量大時，迷走

2、神經(jīng)麻痹，呼吸減慢至停止，迅速死亡。河豚毒素的檢驗方法河豚毒素的檢驗方法生物檢測法：小鼠生物檢測法和組織培養(yǎng)分析法小鼠生物檢測法和組織培養(yǎng)分析法。儀器檢測法：熒光檢測法是檢測方法之一, 主要是利用河豚毒素加堿水解后生成C9 堿, 該物質(zhì)在特定波長發(fā)熒光, 從而可進行檢測。薄層層析(TLC)用于河豚毒素的定量測定。高效液相色譜(HPLC)反相色譜, 用硅膠柱作固定相。免疫檢測法：主要有單克隆抗體法(McAb)應用原理是指在特異性抗原刺激機體后，產(chǎn)生相應抗體。抗原與抗體都是蛋白質(zhì)，抗體為免疫球蛋白。它們之間可以相互識別，并發(fā)生結(jié)合反應，從而確定是否有毒。盡量用圖解方式表達1.2 西加毒素西加毒素

3、西加魚毒西加魚毒(ciguatera)(ciguatera)是指加勒比海地是指加勒比海地區(qū)除河豚中毒之外的所有魚肉中毒現(xiàn)象，區(qū)除河豚中毒之外的所有魚肉中毒現(xiàn)象，它包含它包含雪卡毒素雪卡毒素(CTX)(CTX)、刺尾魚毒素刺尾魚毒素(MTX) (MTX) 。 西加西加毒素毒素在魚的內(nèi)臟中濃度比較高。在魚的內(nèi)臟中濃度比較高。西加毒素( c iguatox in, CTX)是20世紀60年代從毒爪哇裸胸鱔肝臟中提取發(fā)現(xiàn)的, 它是深海藻類分泌的毒素, 被熱帶或亞熱帶食草性魚類蓄積并在魚體內(nèi)被氧化而成的一類強毒性聚醚類毒素, 通過食物鏈逐級傳遞和積累, 最終傳遞給人類。據(jù)報道全世界每年至少2萬人不同程度

4、的遭受CTX的傷害, 食入0. 1 Lg的CTX 可使一個成年人致病。CTX中毒最顯著的特征是干冰的感覺和熱感顛倒, 即當觸摸熱的東西會感覺冷, 把手放入水中會有觸電或摸干冰的感覺。盡量用圖解方式表達CTX的檢測方法生物毒性試驗( 小白鼠法)方法的原理是對毒素采用適宜的提取方法, 將樣品中的毒素轉(zhuǎn)移到提取液中; 通過向固定種系和體重的小白鼠腹腔注射樣品提取液, 記錄小白鼠的存活時間以計算樣品毒素的量。高效液相色譜分析(HPLC)方法的原理是利用毒素分子結(jié)構(gòu)上的羥基反應生成熒光性物質(zhì), 然后在FLD上檢測, 線性較好, 極限濃度可達3. 5 ng /kg。細胞毒性試驗( cell bioassa

5、y)細胞毒性試驗是CTX 主要作用于神經(jīng)末梢和中樞神經(jīng)節(jié)利用毒素對細胞的毒性來檢測毒素的一種技術(shù)。免疫學測定法( immunoassays)該方法是利用抗原與抗體專一、特異結(jié)合的特點, 從而對毒素進行定性定量的檢測。盡量用圖解方式表達2 2 貝類毒素貝類毒素 定義：貝類動物因攝取有毒藻類而在體內(nèi)積累的毒素。 種類：麻痹性貝類毒素（PSP）、腹瀉性貝類毒素（DSP）、神經(jīng)毒性貝類毒素（NSP）、失憶性貝類毒素（ASP）。 2.1麻痹性貝類毒素（麻痹性貝類毒素（PSP） 麻痹性貝類毒素專指攝食有毒的渦鞭毛藻,蓮狀原膝溝藻,塔馬爾原膝溝藻被毒化的雙殼貝類所產(chǎn)生的生物毒素。 按結(jié)構(gòu)可分為氨甲?；惗舅?/p>

6、如石房蛤毒素、新石房蛤毒素、膝溝藻毒素及氨甲酰N磺基類毒素?；瘜W結(jié)構(gòu)示意圖？2.2 腹瀉性毒素（腹瀉性毒素（DSP）腹瀉型貝類中毒一般分布于生長環(huán)境中的浮游生物，特別是赤潮生物鰭藻有關(guān)，在赤潮區(qū)生長的貝類很容易積累腹瀉型貝類毒素。化學結(jié)構(gòu)示意圖？2.3 神經(jīng)性貝類毒素（神經(jīng)性貝類毒素（NSP）引起人產(chǎn)生以神經(jīng)麻痹為主的中毒癥狀，毒性較低，未見有死亡報道。神經(jīng)性貝毒分布范圍較小，主要分布在美國佛羅里達海岸和墨西哥灣沿岸，以及歐洲和新西蘭?；瘜W結(jié)構(gòu)示意圖？2.4 記憶缺損貝類毒素（記憶缺損貝類毒素（ASP）ASP 的主要成分是一種具有生理活性的氨基酸類物質(zhì)-軟骨藻酸（Domoic acid，DA）

7、是浮游植物代謝的產(chǎn)物，他能提高鈣離子的滲透性，使細胞長時間處于去極化的興奮狀態(tài)而導致死亡8。ASP 能夠?qū)е骂^暈眼花，短時期內(nèi)失去記憶力，但在人體內(nèi)的降解速度也快。目前許多國家對貝類中DA 的控制標準為20 g/g?；瘜W結(jié)構(gòu)示意圖？貝類毒素的檢測方法一、生物測定法：小鼠生物測定法(MBA)、家蠅或蝗蟲生物檢驗法、細胞毒性測試法（也稱組織培養(yǎng)分析法）二、物理、化學檢測法：HPLC-FDL原理是將PSP毒素分子的環(huán)結(jié)構(gòu)在堿性條件下氧化再酸化生成熒光生色團，進行熒光檢測。此外還有液一質(zhì)聯(lián)用技術(shù)、薄層色譜（TLC）法三、免疫檢測法 免疫學方法檢測貝毒的技術(shù)已經(jīng)得到了初步的應用，但是免疫技術(shù)和貝毒本身存在的一些問題,如產(chǎn)生抗體的交叉反應、系列標準毒素的缺乏以及像酶聯(lián)免疫吸附試驗、鈉離子通道受體結(jié)