潔凈室空調滅菌方法

1、1潔凈廠房空調系統(tǒng)潔凈廠房空調系統(tǒng)&滅菌法和無菌保證滅菌法和無菌保證2一、潔凈廠房一、潔凈廠房概述藥片是特殊商品，除了必須嚴格控制藥片的成份以外，還必須控制微生物量。隨著科學技術的深化，發(fā)現(xiàn)細菌等微生物在空氣中難以存活，它必須依附在塵埃上才能存活?？茖W家和工程師根據(jù)微生物生存特性，研制不同類型的過濾器，通過多道過濾，最終根據(jù)藥片生存要求，可以達到100,000級，10,000級和100級潔凈度要求。同時，通過冷凍除濕或氯化鈣轉輪除濕方法，達到生產(chǎn)車間舒適或低濕要求，溫度也可通過換熱器控制。3一、潔凈廠房一、潔凈廠房 藥品生產(chǎn)企業(yè)必須有整潔的生產(chǎn)環(huán)境。 廠區(qū)的地面、路面及運輸?shù)炔粦獙λ幤?/p>

2、的生產(chǎn)造成污染。 生產(chǎn)、行政、生活和輔助區(qū)的總體布置應合理，不得互相防礙。 相鄰的廠房之間的生產(chǎn)操作不得相互防礙。 在遵守國家總體工業(yè)規(guī)劃的同時，選擇大氣含塵、含菌濃度低、無有害氣體，自然環(huán)境好的區(qū)域。平面布置合理，人流、物流分開，避免交叉污染。廠區(qū)綠化盡量多種草坪，少種花粉類的植物。41-11-1潔凈廠房設計潔凈廠房設計 藥廠總平面布置和工藝布局的總設計藥廠總平面布置和工藝布局的總設計整潔的生產(chǎn)環(huán)境，人流物流分開，相互不受影響，不會造成交叉污染。 潔凈廠房設計方法潔凈廠房設計方法全封閉全空調，人流物流放開潔凈度通過緩沖逐級提高，達到無菌的要求。100級無菌室的設計，目前國際上一般采用比較經(jīng)濟

3、的做法：通過緩沖達到10萬級，再通過緩沖達到1萬級，最后在1萬級房間局部加層流罩達到100級。51-21-2工藝布局工藝布局 按照生產(chǎn)工藝流程及所要求的空氣潔凈等級進行合的理布局按照生產(chǎn)工藝流程及所要求的空氣潔凈等級進行合的理布局，同一廠房內的生產(chǎn)操作不能相互影響，不同潔凈度區(qū)域之，同一廠房內的生產(chǎn)操作不能相互影響，不同潔凈度區(qū)域之間人員和物流出入，要設緩沖區(qū)，防止交叉污染。間人員和物流出入，要設緩沖區(qū)，防止交叉污染。 取樣室（可設在儲藏區(qū)）、稱量室、備料間空氣潔凈度與生取樣室（可設在儲藏區(qū)）、稱量室、備料間空氣潔凈度與生產(chǎn)要求一產(chǎn)要求一 致。致。 足夠大的中間儲藏室、設備清洗和儲存、衛(wèi)生設備

4、清洗和儲存。 生產(chǎn)區(qū)和包裝區(qū)分開，更衣室分開。 不同潔凈度工作服分別清洗、整理。 取樣室、中心稱量室，采用層流設計。61-31-3 潔凈廠房建筑要求潔凈廠房建筑要求潔凈室（區(qū)）的內表面應平整光滑、無裂縫、接口嚴密、無顆潔凈室（區(qū)）的內表面應平整光滑、無裂縫、接口嚴密、無顆粒物脫落，并能耐受清洗和消毒。墻壁與地面的交界處宜成弧粒物脫落，并能耐受清洗和消毒。墻壁與地面的交界處宜成弧形或采取其他措施，以減少灰塵積聚和便于清潔。形或采取其他措施，以減少灰塵積聚和便于清潔。 潔凈室（區(qū)）內各種管道、燈具、風口以及其他公用設施，在潔凈室（區(qū)）內各種管道、燈具、風口以及其他公用設施，在設計和安裝時，應考慮使

5、用中避免出現(xiàn)不易清潔的部位。與墻設計和安裝時，應考慮使用中避免出現(xiàn)不易清潔的部位。與墻壁或天棚的連接部均應密封。壁或天棚的連接部均應密封。 潔凈室（區(qū)）應根據(jù)生產(chǎn)要求提供足夠的照明。主要工作室的照度宜為300勒克斯，對照度有特殊要求的生產(chǎn)部位可設置局部照明。廠房應有緊急照明設施。 潔凈室（區(qū)）安裝的水池、地漏不得對藥品產(chǎn)生污染。100級潔凈 （區(qū)）不得設置地漏。71-41-4空調設計空調設計1-4-1 空氣平衡和流向 空氣從潔凈室流向次潔凈室。 生產(chǎn)區(qū)對外保持正壓（生產(chǎn)區(qū)對外保持正壓（1010PAPA） 活性物質生產(chǎn)室保持負壓。 易產(chǎn)生粉塵的車間為負壓。 開口工段為正壓。（或局部層流） 潔凈設

6、備間為負壓。 潔凈房間對隔層和機房為正壓。 生產(chǎn)車間內辦公室保持正壓。81-41-4空調設計空調設計1-4-2 氣體組織 包裝車間、更衣室、走廊和浴室采用上送上回。 生產(chǎn)車間、灌裝車間、儲藏室采用上送下回。生產(chǎn)車間、灌裝車間、儲藏室采用上送下回。 潔凈車間不得采用走廊回風。 潔凈區(qū)無法采用上送下回時，可采用側送側回，但要注意氣流是否流過生產(chǎn)操作面。 風口設置時，注意氣體流能保護操作面。91-51-5 環(huán)境系統(tǒng)驗證環(huán)境系統(tǒng)驗證1-5-1 環(huán)境控制確認確認100級無菌區(qū)，10,000級和100,000級潔凈區(qū)，輔助潔凈區(qū)室塵埃粒子的控制。 安裝確認環(huán)境控制區(qū)域相應的被批準的設計圖及有關流向圖（空氣

7、流向、壓差、溫度、濕度、人流、物流）。系統(tǒng)描述和設計特征。有關文件有：DOP測試、完整性試驗、環(huán)境參數(shù)文件 儀表校驗文件、操作手冊和標準操作法。101-51-5 環(huán)境系統(tǒng)驗證環(huán)境系統(tǒng)驗證 運行確認確認整個環(huán)境調試、運行時達到設計要求。搜集調試運行時數(shù)據(jù)（溫度、相對濕度、風速、換氣次數(shù)、風壓、風量、空氣流向以及機電設備運行狀態(tài)參數(shù)）。測試總塵埃粒子和菌落數(shù)，證明系統(tǒng)運行達到設計要求。主要性能測試：空氣平衡（空氣總風量、新風量、回風量、空氣流向和空氣分配）；溫度、濕度和照度測試；空氣壓力和控制測試；懸浮粒子數(shù)測試；外界誘導空氣測試；粒子分散和過渡過程持續(xù)時間的測試微生物測試（懸浮菌和沉降菌）。11

8、1-51-5 環(huán)境系統(tǒng)驗證環(huán)境系統(tǒng)驗證1-5-2 驗證 塵埃粒子測定 浮游菌和沉降菌測定 初次測試不合格處理驗證時，總塵埃粒子或空氣菌落數(shù)測試結果超過范圍需在不合格后緊接在原取樣點重做二次，二次結果合格都放入表格內，可認為通過驗證。 重做菌落樣前房間需消毒12說明說明1 塵埃粒子、浮游菌、沉淀菌在驗證區(qū)域滿足潔凈級別要求。2 如果超出標準，每超出標準的取樣點必須重新取樣2次測試。每次重新測試的結果必須符合驗證標準。重新測試的樣品必須盡可能在不合格結果后立刻取樣。3 重新測試取樣之前，必須清潔有菌落樣的區(qū)域。 134 4 驗證取樣條件驗證取樣條件4-1在取樣空氣系統(tǒng)驗證區(qū)域必須連續(xù)運行6小時以上

9、，層流必須運行30分鐘以上、在取空氣有菌量的區(qū)域，必須在取樣消毒。一旦驗證開始，系統(tǒng)必須每天24小時，一周7天運行。4-2 動態(tài)是指灌裝機運行（但無粉灌入），測試區(qū)內有操作人員存在的情況下取樣。4-3 靜態(tài)是指在生產(chǎn)完成后，測試區(qū)無人的情況下，經(jīng)過15分鐘-20分鐘的凈化后，再對測試區(qū)進行取樣。4-4記錄整個驗證時期的溫度、濕度和壓差的操作參數(shù)。4-5高效過濾器每年必須進行完整性測試和記錄。 14E-5E-5 歐洲和美國的歐洲和美國的GMPGMP對環(huán)境控制要求對環(huán)境控制要求1 1概論概論歐洲共同體藥物控制局（MACThe Medicines Control Agency）環(huán)境控制要求，驗證環(huán)境

10、控制要達到A，B，C，D條件。美國標準209E中提出無菌100級，清潔10,000級和輔助100,000級的微粒和微生物控制要求。2 2A A，B B，C C，D D分級定義分級定義A級高風險操作區(qū)，即直接影響操作的區(qū)域。像隧道滅菌烘箱、無菌灌裝、瓶子開口處、高壓滅菌冷卻區(qū)等需用100級層流。直接影響產(chǎn)品質量，稱A級。B級 間接影響無菌操作區(qū)，直接環(huán)繞A級區(qū)域的地方，像無菌灌裝房間、高壓滅菌冷卻房間。 C和D級進入無菌生產(chǎn)區(qū)的過度性潔凈區(qū)。準備間、更衣間和緩沖間。153 3 歐洲潔凈級別要求歐洲潔凈級別要求 潔凈級別潔凈級別 總平均粒子數(shù)總平均粒子數(shù) 浮游菌浮游菌 沉淀菌沉淀菌歐洲（EU）20

11、9E美國 0.5M5MCFU/M3CFU/4 HoursA級（靜態(tài)） 100級 25P/ft3或875P/M3011A級（動態(tài)） 100級 100P/ft3或3500P/M3011B級（靜態(tài)） 100級 100P/ft3或3500P/M3022B級（動態(tài)） 10,000級 10,000P/ft3或350,000P/M358P/ft3或200P/M3555C級（靜態(tài)） 10,000級 10,000P/ft3或350,000P/M358P/ft3或 200P/M3 2020C級（動態(tài)） 100,000級 100,000P/ft3或3,500,000P/M3580P/ft3或 20,00P/M3 5

12、050D級（靜態(tài)） 100,000級 100,000P/ft3或3,500,000P/M3580P/ft3或 20,00P/M3 10050 165 5 驗證取樣標準驗證取樣標準5-1空氣有菌量應用生物空氣取樣器取樣，使用標準TSA培養(yǎng)基盤。5-2 所有工作水平面的空氣有菌量和顆粒取樣應在工作活動平面層流方向取樣（灌裝線瓶子開口處，及離地750-1000mm）。5-3 每個取樣點的工作水平取樣1ft3的空氣樣，測試大于等于0.5m的顆粒總數(shù)。計算每立方英尺的空氣顆粒平均數(shù)。5-4在A，B，C和D級的每個房間的工作水平應取樣5次，每次1立方英尺，測總顆粒數(shù)。17E-6E-6 日常生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)控日常

13、生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)控1 1無菌生產(chǎn)區(qū)環(huán)境監(jiān)控無菌生產(chǎn)區(qū)環(huán)境監(jiān)控1-11-1生產(chǎn)潔凈級別劃分生產(chǎn)潔凈級別劃分潔凈級別潔凈級別適應室（區(qū)）適應室（區(qū)）EU209EA級（靜態(tài)）100級 無菌灌裝機、滅菌隧道、高壓無菌斧出料冷卻車A級（動態(tài)）100級 同上B級（靜態(tài)）100級 無菌灌裝室（區(qū)）、高壓滅菌斧的冷卻室（區(qū)）B級（動態(tài)）10,000級 同上C級（靜態(tài)）10,000級 進高壓滅菌斧準備間、清洗設備室、消毒、更衣、緩沖、走廊C級（動態(tài)）100,000級 同上D級（靜態(tài)）100,000級 洗瓶、隧道、洗衣房、更衣室、第一緩沖室、進洗室前緩沖室181-51-5 環(huán)境系統(tǒng)驗證環(huán)境系統(tǒng)驗證1-5-3 歐美潔凈級

14、別比較潔凈級別潔凈級別 總平均粒子數(shù)總平均粒子數(shù) 浮游菌浮游菌 沉沉淀菌淀菌歐洲（EU）209E美國 0.5M5MCFU/M3CFU/4 HoursA級（靜態(tài)） 100級 25P/ft3或875P/M3011A級（動態(tài)） 100級 100P/ft3或3500P/M3011B級（靜態(tài)） 100級 100P/ft3或3500P/M3022B級（動態(tài)） 10,000級 10,000P/ft3或350,000P/M358P/ft3或200P/M355C級（靜態(tài)） 10,000級 10,000P/ft3或350,000P/M358P/ft3或 200P/M3 2020C級（動態(tài)） 100,000級 10

15、0,000P/ft3或3,500,000P/M3580P/ft3或 20,00P/M3 5050D級（靜態(tài)） 100,000級 100,000P/ft3或3,500,000P/M3580P/ft3或 20,00P/M3 1005019滅菌法和無菌保證滅菌法和無菌保證 滅菌的定義：將物體上的所有微生物包括細菌芽孢全部殺死或除去的措施 。 滅菌法是指殺死或除去所有微生物的方法，是滅菌藥劑生產(chǎn)的主要過程，對于注射劑尤為重要。微生物包括細菌、真菌、病毒等，凡有生命的地方都有微生物存在，微生物繁殖很快。細菌的芽胞具有較強的的抗熱力，不易殺死，因此滅菌效果，應以殺死芽胞為標準。在藥劑中選擇滅菌方法，與微生

16、物學上的要求不盡相同，不但要達到滅菌的目的，而且要保證藥物的穩(wěn)定性。常見的滅菌法有熱壓滅菌、干熱滅菌、紫外線照射滅菌、過濾除菌和化學藥劑滅菌。 20F與Fo值在滅菌中的意義與作用 微生物致死間曲線與D值 ：人們對微生物死亡的動力學研究表明，其死亡速度屬一級過程，在一定溫度下符合下述方程式中N。為原始微生物數(shù)，Nt為殘存的微生物t時殘存的微生物。殘存數(shù)的對數(shù)時間作圖，得一條直線，直線的斜率K2.303，K為速度常數(shù)，單位為時間。21F與Fo值在滅菌中的意義與作用 為了方便起見，引用D，并定義D為一定溫度下殺死被滅菌物品中微生物數(shù)的90(降低一個對數(shù)值 )所需時間，可描述為：22F與Fo值在滅菌中

17、的意義與作用滅菌方法 微生物溫度 介質或樣品 D值（min） 蒸汽滅菌 嗜熱脂肪芽孢桿菌1055葡萄糖水溶液 87.8蒸汽滅菌嗜熱脂肪芽孢桿菌1215葡萄糖水溶液2.4蒸汽滅菌嗜熱脂肪芽孢桿菌121注射用水3.0蒸汽滅菌梭狀芽孢桿菌1055葡萄糖水溶液1.3干熱滅菌枯草芽胞桿菌135紙16.6紅外線滅菌枯草芽胞桿菌160玻璃板18D值因微生物的種類、環(huán)境、滅菌溫度不同而各異,下表為不同滅菌法不同微生物的D值 ： 23F與Fo值在滅菌中的意義與作用 Z值：一旦在不同溫度下對特定的微生物的在特定介質或環(huán)境中求得D值后，就可用logD值對溫度作圖，在一定溫度范圍內，logD與T呈直線關系，直線的斜率

18、logD2logD1T2T1， 由于此斜率為負值，為避免引入負數(shù)，而提出Z值的概念，ZTT1logD2logD1，故定義Z值為降低一個logD值需的溫度數(shù)，也可以認為Z值是降低微生物數(shù)90所需要的溫度數(shù)。24F與Fo值在滅菌中的意義與作用25F與Fo值在滅菌中的意義與作用 不同溶液以嗜熱脂肪芽孢村菌測定Z值 溶液Z值5葡萄糖水溶液10.3注射用水8.45葡萄糖乳酸鹽林格氏溶液11.3PH7磷酸緩沖液7.626F與Fo值在滅菌中的意義與作用 F值與Fo值數(shù)學表達或可表示如下： t是測量被滅菌物溫度的時間間隔， F為在一定溫度（T），給Z值所產(chǎn)生的滅菌效力與參比溫度（To）給定Z值所產(chǎn)生的滅菌效果

19、相同時所相當?shù)臅r間（equivalent time）以分為單位。 27F與Fo值在滅菌中的意義與作用 Fo值 ：為一定滅菌溫度（T）Z值為121，并假設特別耐濕熱的微生物指示劑（嗜熱脂肪芽胞桿菌）的Z值為10，則 顯然，F(xiàn)o值為一定滅菌溫度（T）Z值為10 所產(chǎn)生的滅菌效果力相同時所相當?shù)臅r間（分）。也就是說Fo是將各種滅菌溫度使微生物的致死力轉換為滅菌物品完全暴露于121使微生物致死效力。 28滅菌法和無菌保證滅菌法和無菌保證 Fo值的計算對于驗證滅菌效果極為有用，故用Fo來監(jiān)測滅菌效果肯有重要的意義。由于Fo是將不同滅菌溫度折算到相當于121濕熱滅菌時的效力，故Fo值可作為滅菌過程的比較參

20、數(shù)。 當產(chǎn)品以121濕熱滅菌時，滅菌器內的溫度雖能迅速升到121，而被菌物品內部則不然，通過由于包裝材料性能及其他因素影響而使。升溫度各異，而Fo將隨著產(chǎn)品溫度（T）變化而呈指數(shù)的變化。故溫度即使很小的差別（如0.1-1）,將對Fo值產(chǎn)生顯著的影響。所以要求測定滅菌物品內的實際溫度。 29滅菌法和無菌保證滅菌法和無菌保證 為了使Fo測定準確，先應選擇靈敏度高，重現(xiàn)性好，精密度為0.1的熱電偶，并對熱電偶進行校驗。滅菌時應將熱電偶的探針置于被測物的內部，經(jīng)滅菌器通向柜外的濕度記錄儀，有些滅菌記錄儀（digistrip recolder）附有Fo計算器，在滅菌過程中和滅菌后，自動顯示Fo值。 另外

21、，還應考慮一些其他因素對Fo值的影響，有人對溶液粘度，容器充填量及容器在滅菌器內的數(shù)量與排布進行了研究。結果發(fā)現(xiàn)對Fo均有影響，而以后者影響最大。故要注意滅菌器內各層、四角、中間位置熱分布是否均勻，并進行實際測定，作出合理排布，以便測得Fo值更可靠。 30滅菌方法滅菌方法無菌保證值（Sterility Assurance Level即SAL）：我國及歐美藥典都把無菌保證值（ SAL ）不得大于百萬分之一作為最終滅菌產(chǎn)品無菌保證的要求，即SAL106在Fo的計算時則使用以下定義： 無菌保證值（ SAL ）lg（微生物存活概率）6（F0 D污 lgN污）/ D污6F0D污（lgN污+6） 其中D污

22、為污染菌的D121值，N污為滅菌前污染菌的數(shù)量。 在生產(chǎn)實踐中，耐熱性差的產(chǎn)品，在F0小于8時，只要強化工藝控制手段，仍能達到無菌的標準，相反當工藝失控時，即使F0大于8，也不一定能達到無菌要求。31滅菌法和無菌保證滅菌法和無菌保證 因產(chǎn)品熱穩(wěn)定性較差，所選滅菌程序為：10960min，所以在生產(chǎn)過程中應嚴格對微生物進行控制。 首先在灌裝開始和結束各取樣10瓶，置于100下曝熱10min，進行需氧和厭氧條件培養(yǎng)，應不長菌，證明產(chǎn)品中不存在耐熱孢子，可設定產(chǎn)品中污染菌的耐熱性（D121）不超過0.5。 故使用D121為0.7的枯草芽孢桿菌做為生物指示劑，進行生物挑戰(zhàn)試驗。以確認產(chǎn)品的無菌保證值S

23、AL達到6。 32滅菌方法滅菌方法根據(jù)公式 F0D污（lgN污+6）= DBi（lgNBi+1） 其中D污為污染菌的D121值，N污為滅菌前污染菌的數(shù)量， DBi為生物指示劑的D121值，NBi為生物指示劑的用量。F0值的計算：查得L為0.063，故F00.063603.78加上升溫及降溫階段，實際F0可達5以上。為保險起見，取F04.9進行計算污染菌數(shù)的控制計算：F0D污（lgN污+6） 將F04.9和D污0.3代入，得 lgN污（4.9-0.56）/0.53.75 N污5.6103生物指示劑用量計算：F0DBi（lgNBi+1） 將F04.9和DBi0.6代入，得lgNBi（4.9-0.7

24、）/0.76 N污1.010633滅菌方法滅菌方法 常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、氣體滅菌法、輻射滅菌法和過濾除菌法?？筛鶕?jù)被滅菌物品的特性采用一種或多種方法組合滅菌。只要產(chǎn)品允許，應盡可能選用最終滅菌法（即產(chǎn)品分裝至包裝容器后再滅菌）滅菌。若產(chǎn)品不適合采用最終滅菌法，可選用過濾除菌法或無菌生產(chǎn)工藝達到無菌保證要求，只要可能，應對非最終滅菌的產(chǎn)品作補充性滅菌處理（如流通蒸汽滅菌）。 34滅菌方法滅菌方法 一、濕熱滅菌法 本法系指將物品置于滅菌柜內利用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法 。該法滅菌能力強，為熱力滅菌中最有效、應用最廣泛的

25、滅菌方法。藥品、容器、培養(yǎng)基、無菌衣、膠塞以及其它遇高溫和潮濕不發(fā)生變化或損壞的物品，均可用本法滅菌。流通蒸汽不能完全殺滅細菌孢子，一般可作為不耐熱無菌產(chǎn)品的輔助滅菌手段。 35滅菌方法滅菌方法 濕熱滅菌條件采用的程序多種，但必須保證物品滅菌后的SAL10-6。對熱穩(wěn)定的物品，可采用過度殺滅法，其SAL應10-12。熱敏感產(chǎn)品的標準滅菌時間F0可低于8min，但應在生產(chǎn)全過程中，對產(chǎn)品中污染的微生物嚴加監(jiān)控，并采取各種措施防止耐熱菌污染及降低微生物污染水平，確保被滅菌產(chǎn)品達到無菌保證要求。36滅菌方法滅菌方法 濕熱滅菌工藝驗證時，應進行熱分布試驗、熱穿透試驗和生物指示劑驗證試驗。以確定滅菌柜空載及不同裝載時腔室中的熱分布狀況及可能存在的冷點；在空載條件下，確認121時腔室各點的溫度差值應1；使用插入實際物品或模擬物品內的溫度探頭，確認滅菌柜在不同裝載時，最冷