尿AD7c-NTP在阿爾茨海默病診斷中的價值

1、尿AD7c-NTP在阿爾茨海默病診斷中的價值 本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的 研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含 其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南昌大學或其他教育 機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何 奉獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。 學位論文作者簽名 手寫 ：、智瓤簽字日期： 加，1年歹月如171 學位論文版權使用授權書 本學位論文作者完全了解 南昌大學 有關保存、使用學位論文的規(guī)定， 有權保存并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱 和借閱。本

2、人授權南昌大學可以將學位論文的全部或局部內容編入有關數(shù)據(jù)庫 進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同時 授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到?中國學位論文全文數(shù)據(jù) 庫?，并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息效勞。 保密的學位論文在解密后適用本授權書 學位論文作者簽名 手寫 ：留矗 翩掏彳私 簽字日期：洳11年歲月171 簽字日期：a以1年I-月沙171 學位論文作者畢業(yè)后去向：江西霸宜看昂人即醫(yī)院 工作單位：；西南I躊書人彩匡P彩 ：口為，3，p92 通訊地址：弓z確置者昂袁州巴串口西治黯多 ：弓多占?？贒 IIIJIIIJIIllIlllllll I1lIIrIIP

3、rrlII IIP Y1 摘要 摘要 第一局部：尿液中AD7cNTP對阿爾茨海默病的診斷意義 的診斷意義。 正常老年人尿中AD7cNTP的含量。 190 ngm1 ，而878智能正常老年人該指標正常 190ngm1 。 結論：尿液中AD7cNTP的含量對AD診斷和病情評估有重要的參考價值。 關鍵詞：阿爾茨海默病；輕度認知障礙；AD7C-NTP；尿液；酶聯(lián)免疫吸附法 第二局部：尿AD7cNTP含量預測輕度認知障礙向AD轉化的 意義思X 目的：研究尿中AD7c-NTP預測輕度認知障礙 MCI 向AD轉化的價值。 量，根據(jù)測得值以190ngml為界點分為異常組及正常組，對所有病例進行隨訪， 并在1年

4、后再次全面評估病情及檢測尿中AD7c-NTP含量。 AD7c-NTP含量為123O321年后兩組MMSE評分均有降低，尿 ngrrd， AD7c-NTP含量均有升高 均P 005 。1年后MCI向AD的總轉化率為150 lI 摘要 統(tǒng)計學意義 P 005 。 結論：尿AD7cNTP含量是預測MCI向AD轉化的重要指標。 關鍵詞：輕度認知障礙；阿爾茨海默??；尿液；AD7c-NTP：隨訪 III ABSTRACT valueofurineAD7cNTPin PartI The of diagnosis AlzhermerSdisease thevalueofurine AD7c-NTPin ofA

5、lzhermerS objective：Toexplore diagnosis disease included50 with Methods：The AD，60 withmild subjects patients patients 82 controlsTheAD7c-NTP impairment MCI andage?matchedhealthy cognitive concentrationinurineWasexamined immunosorbent byEnzyme-linked assay ELISA AD7c-NTPconcentrationinurine inAD Resu

6、lts：The Was 220034 ngml inMCI in patients， 153043 ngml controlsTheAD7c-NTPconcentrationinurineincreasedin age-matchedhealthy with AD MCI and controls P 001 The healthy patientscompared patients inurineWasnot differencebetweenMCI AD7c-NTPconcentration significant and controls P 005 TheAD7c-NTPconcent

7、rationinurinein patientshealthy AD moderateAD 1 thaninmild patients 238O3ngm1 Washigher patients 202 027 were with 900ofsubjects AD，433of ngm1 尸 O01 There probable whohadanelevatedAD7c-NTPconcentraiton 190 withMCl ngm1 subjects Therewere878of asdefinite controlwhohada subjectsdiagnosed healthy norma

8、lAD7c-NTPmeasurement 190 ngm1 urineAD7c-NTPisa markerinAD related Conclusion：The biological patients，and tothe ofAD severity words：Alzheimer Key disease；Mildcognitive EIISA IV Abstract PartIIThe effectofurine predicting AD7cNTPon 一 O o - 1 1 COnVerslonlrommilcI t0AlZhermer7S cognitiveimpairment l t1

9、1sease the effectof Objective：To urineAD7cNTPonconversionfrom explorepredicting mild AlzhermerSdisease to cognitiveimpairment Methods：60with weredivided MCl into2 tothevalue patients groupsaccording inthe ITheconcentrationofurineAD7cNTP acquiredpart inabnormalWas group above andnormal toorbelow were

10、 190ngml equal group 190ngm1Thosepatients followedforl conversionratefromMCItoADin2 WaS up yearThe observed groups Results：TheconcentrationofurineAD7c-NTPinabnormal Was192 group 01 normalwas123032 scorein2 2ngml，andgroup ngm1The subjectsMMSE after1 Waslowerthanthe andthe groups year baseline， urine

11、AD7c-NTPconcentrationWas thanthe higher baseline111etotalconversionrate fromMCItoADWas15O 960 Theconversion ratefromMCItoADWas 269 726 inabnormal 59 234 in normal conversion group，and groupThe ratefromMCItoADwasdifferent betweenabnormaland significantly group normal group iSa Conclusion：TheurineAD7c

12、-NTP ofMCItoAD predictor conversionThe concentrationofurineAD7cjNTP riskofMCIconvertto higher predictshigher AD words：Mild Key cognitiveimpairment；Alzheimer ELISA；Followup V 目錄 目 錄 第l章前言l 第2章阿爾茨海默病患者尿液中AD7c-NTP含量的研究3 第1節(jié)材料與方法3 11研究對象?3 12試劑與儀器“4 13試驗方法5 14統(tǒng)計方法6 第2節(jié)結果7 21AD組、MCI組和正常對照組的比擬7 22輕度AD組與中重

13、度AD組的比擬7 23尿液AD7cNTP含量診斷AD的敏感性和特異性“7 第3節(jié)討論8 第4節(jié)結論?11 第3章尿AD7cNTP含量預測輕度認知障礙向AD轉化的意義?12 2 第1節(jié)材料與方法1 11研究對象12 12試劑與儀器13 3 13實驗方法?l 14統(tǒng)計方法?14 5 第2節(jié)結果?1 5 21隨訪結果1 22 5 MMSE評分?l 5 2-3尿AD7cNTP含量l 24尿AD7cNTP含量與年齡、MMSE評分、病程的相關分析16 7 第3節(jié)討論l Vl 目錄 第4節(jié)結論20 參考文獻2l 致謝 攻讀學位期間的研究成果 綜述早期阿爾茨海默病的診斷方法23 附量表31 V 第1章前言 神

14、行為改變等為主要I臨床表現(xiàn)的慢性進行性神經系統(tǒng)退行疾病，是癡呆的主要 類型。隨著社會老年齡化現(xiàn)象日益嚴重，AD的患病率也明顯升高，且每增加5 歲，患病率呈指數(shù)級增長。歐美等11個國家聯(lián)合研究報道，歐洲60歲以上老 年人AD的患病率為O3108，女性患病率略高于男性Ilj。到2006年我國 65歲及以上老年人口達134億，65歲以上老年人AD患病率男性為34，女 性為77，AD總患病率為59【2】。據(jù)此估算，我國的AD患者近600萬人， 預計2030年該數(shù)字將達1200萬人。隨著持續(xù)的人口老齡化進程，AD已成為 老年人繼心血管疾病、腫瘤和腦卒中之后的第四位死因，嚴重危害老年人的健 康。此外，AD

15、還需要巨額的治療和護理費用，英國每年用于AD的醫(yī)護費用 為1lO億美元，而美國更高達839億美元【31。隨著癡呆人數(shù)每20年翻一番，費 用也將成倍增長。因此，阿爾茨海默病成為世界各國的熱點研究課題。 阿爾茨海默病的核心病癥為認知功能缺損，可涉及記憶、學習、定向力、 理解、判斷、計算、語言、視空間結構等功能，其智能損害的程度足以影響患 者日常生活能力及社會職業(yè)功能。常常伴有精神、行為及人格的異常。病理特 征為神經元外老年斑 senileplagues，SP 沉積、神經元內神經纖維纏結 neurofibrillarytangles，NFTs 形成、膽堿能神經元大量喪失。AD的發(fā)病機制 和病因至今尚

16、未明確，也不能有效地預防AD的發(fā)生，臨床上的治療也僅屬于 改善病癥和延緩病情進展，沒有高效特異性治療方法，所以AD的早期診斷是 早期治療和預防的關鍵。 輕度認知障礙 mildcognitive impairment，MCI 是介于正常老化和癡呆過 disease， 渡狀態(tài)的一種認知功能損害狀態(tài)，因其向阿爾茨海默病 Alzheimers AD 的高轉化率而受到廣泛關注，被認為可能是阿爾茨海默病的前期。MCI 轉變?yōu)锳D的年轉換率大約為1015，而相同年齡的正常老年人每年僅有 12轉化為ADt41。因此，對于輕度認知障礙階段的研究對于AD的早期診 斷具有重要的意義。 第1章前言 目前，確診AD的金

17、標準是病理學檢查，但一般僅用于尸檢，臨床應用非 13 常局限。目前較公認的用于AD診斷的生物學標志有腦脊液中的A42和tau 粉樣蛋白前體蛋白 APP 水解產生，是老年斑的主要成分。但是腦脊液中A1342 在AD、克雅氏病、Lewy體癡呆、額顳葉癡呆以及正常壓力腦積水患者中均降 低，這就說明A1342得降低并不能將AD患者與其他腦內有A13沉積疾病的患者 區(qū)分開來【5】。在AD患者腦脊液中T-tau是升高的，但將其單獨作為診斷指標的 特異性不高。Ptau是形成NFTs的組主要的物質，在AD和其他疾病鑒別診斷 中，腦脊液Ptau的診斷敏感性為70，特異性達89161。上述指標單獨運用于 診斷不甚

18、理想，并且均需抽取患者腦脊液進行檢測，在很大程度上限制了臨床 應用，尤其是在早期診斷中的作用。 近年來發(fā)現(xiàn)的AD7c-NTP是一種神經絲蛋白，在神經元中表達，定位于神 經細胞發(fā)生的軸突，在AD患者腦脊液及尿液中均有升高，并且與癡呆的嚴重 敏感性均到達較高水平。與腦脊液檢查相比，無創(chuàng)的檢查方法更容易被患者及 家屬接受，血液或尿液的檢測更易于臨床推廣。因此，本課題擬研究AD和MCI 斷中的價值，以期找到一種簡單、平安、快速、可靠的AD早期診斷方法。 2 第2章尿液中AD7c-NTP對阿爾茨海默病的診斷意義 第1節(jié)材料和方法 11研究對象 2021年3月至2021年3月南昌大學第二附屬醫(yī)院神經內科神

19、經內科就診的 患者及南昌市社區(qū)60歲以上老年人志愿者。 所有研究對象均取得知情同意，進行詳細的病史采集、?？企w檢、行頭顱 CT或M融檢查及神經精神量表評價；血壓、心電圖正常，血常規(guī)、尿液分析、 血糖、血脂均在正常范圍內。 111阿爾茨海默病 AD 組 入組標準：所有患者均符合美國國立神經病語言障礙卒中研究所和 床診斷要點為： 1 發(fā)病年齡4090歲，多在65歲以后。 2 有多項認知缺陷，表 現(xiàn)為：記憶缺損 學習新信息的能力缺損或不能回憶以前所學的信息 ；至 少存在以下認知障礙之一：失語、失用、失認、執(zhí)行能力障礙；已導致社交 或職業(yè)功能缺陷，影響生活。 3 病程半年以上，特點是隱匿性起病，持續(xù)加

20、重， 無緩解趨勢。 4 量表檢查：簡易精神狀況評定量表 MMSE ：文盲姜17，小 中樞神經系統(tǒng)疾病，如心腦血管疾病、帕金森病、硬膜下血腫、正常顱壓腦積 水、腦腫瘤、亨廷頓病等；可導致癡呆的系統(tǒng)性疾病，如甲狀腺功能減退、 神經梅毒、感染、維生素或葉酸缺乏、低鈣血癥等；譫妄，重性抑郁，昏迷 等精神障礙所致認知功能缺陷。符合以上條件者入選AD組，共50例，其中男 年。根據(jù)病情嚴重程度分為：輕度AD組：共25例，男性13例，女性12例， 第2章尿液中AD7cNTP對阿爾茨海默病的診斷意義 2分。 112輕度認知障礙組 MCI 組 準。臨床診斷要點為： 1 存在由患者或知情者提供的記憶障礙主訴。 2

21、經神經 心理測試證實記憶障礙存在，其他認知功能相對完好或輕度受損，日常生活能 知障礙的中樞神經系統(tǒng)疾病，如心腦血管疾病、帕金森病、硬膜下血腫、正常 顱壓腦積水、腦腫瘤、亨廷頓病等；可導致癡呆的系統(tǒng)性疾病，如甲狀腺功 能減退、神經梅毒、感染、維生素或葉酸缺乏、低鈣血癥等；譫妄，重性抑 郁，昏迷等精神障礙所致認知功能缺陷。符合以上條件者入選MCI組，共60 276 年。 113正常對照組 嚴重的心、肝、腎等疾??；急慢性感染；自身免疫性疾病及嚴重貧血、腫 瘤、外傷等任何可能導致神經功能紊亂的疾病；其他神經系統(tǒng)疾??；精神 病；有癡呆家族遺傳史者；兩周內使用過影響免疫功能的藥物，如皮質類 固醇或非甾體抗

22、炎藥等。選擇年齡性別相匹配智能檢查正常的健康老年人82 例，男性45例，女性37例，60-86歲，平均 7129602 歲。 12試劑與儀器 人AD7c-NTPELISA試劑盒：上海西唐生物科技 4 第2章尿液中AD7cNTP對阿爾茨海默病的診斷意義 DRAGONWellscanMK3 酶標儀：芬蘭Thermo公司，型號DENLEY 4MK2 洗板機：芬蘭Themlo公司，型號Wellwash 數(shù)字顯示隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海躍進醫(yī)療器械廠，型號PYXDHS 離心機：上海安亭科學儀器廠，型號TGL168 移液槍：芬蘭TIlemo公司，型號labsystems規(guī)格20-200ul 13實驗方法

23、 131標本采集處理 留取研究對象晨尿的中段尿，選取清亮的標本，經尿液分析測定。如有以下中 任何一種異常即為不合格標本：尿蛋白異常；尿液中WBC、RBC異?；?有細菌生長；尿中有結晶；尿比重異常；pH異常；尿糖、酮體、硝酸 鹽、膽紅素或尿膽原陽性。合格的標本進行離心 400rmin，離心5min ，過濾， 取上清液以2mlEP管置于一80冰箱密封保存?zhèn)溆茫瑥娜∧虻酱嫒氡湓?h 內完成。 132尿d 70-NTP的測定 linkedimmunosorbent 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗 enzyme assay,ELISA ， 嚴格按照試劑盒說明書逐步進行，具體步驟如下： 1 準備工作：將

24、試劑盒從28的冰箱內取出，平衡至室溫。將待測標本置 于4C冰箱內融化。配制標準品液濃度為025，05，10，20，4On,m1，待做標準曲線。 2 加樣：取出已包被的96孔板，各參加標準品或待測樣品lOOul，設空白孔， min。 半透膜封存，將反響板充分混勻后置37恒溫箱溫育120 3 洗板：用洗滌液將反響板充分洗滌5次，向濾紙上印干。 4 加第一抗體：每孔中參加第一抗體工作液100ul，半透膜封存，將反響板 rain。 充分混勻后置37恒溫箱60 5 洗板：用洗滌液將反響板充分洗滌5次，向濾紙上印干。 6 加酶標抗體：每孔加酶標抗體工作液100ul，半透膜封存，將反響板置37 min 恒溫

25、箱30 第2章尿液中AD7c-NTP對阿爾茨海默病的診斷意義 7 洗板：用洗滌液將反響板充分洗滌5次，向濾紙上印干。 8 加底物：每孔參加底物工作液100ul，半透膜封存，置37恒溫箱暗處 min。 反響15 9 終止：每孔參加100ul終止液混勻。 10 測值：15min內用酶標儀在450nm處測吸光值。 14統(tǒng)計方法 用SPSSl70統(tǒng)計軟件進行運算，數(shù)據(jù)以均數(shù)標準差 iS 表示，對 AD組、MCI組與J下常對照組的數(shù)據(jù)進行方差分析及差異q檢驗；對輕度AD 組與中重度AD組的進行t檢驗。P 005有統(tǒng)計學意義。 6 第2章尿液中AD7c-NTP對阿爾茨海默病的診斷意義 第2節(jié)結果 21 A

26、D組、MCl組和正常對照組的比擬 三組性別及年齡構成差異無顯著性，其尿中AD7c-NTP含量分別為 220 無顯著性 pO05 見表1 。 表l總AD組與MCI組及正常對照組尿液中AD7c-NTP含量比擬 注：奉與MCI組及正常對照組比擬P 001；宰宰與正常對照組比擬P 005 22輕度AD組與中重度AD組的比擬 兩組性別及年齡構成差異無顯著性，其尿中AD7c-NTP含量分別為 202 027 、 238_+031 ngml，有顯著差異 P 001 見表2 。 表2輕度AD組與中重度AD組尿液中AD7c-NTP含量比擬 注；幸與輕度AD組比擬P 001 8 第2章尿液中AD7c-NTP對阿爾

27、茨海默病的診斷意義 23尿AD7c-NTP含量診斷AD的敏感性和特異性 以智能正常組為對照組，尿液中各個不同的AD7c-NTP含量為診斷界值， 其診斷AD的敏感性隨l?特異性的增加而呈現(xiàn)上升趨勢。其中，以190 ngml 作為診斷標準時，其診斷的敏感性為920，同時特異性可以到達878。MCI 患者有26例 433 尿中AD7c-NTP含量也升高。 見圖1 圖l尿AD7cNTP含量診斷AD的敏感性和特異性 8 第2章尿液中AD7c-NTP對阿爾茨海默病的診斷意義 第3節(jié)討論 AD是成年人癡呆的最主要病因，隨著人口的老齡化，其發(fā)病率逐年上升， 65歲以上人群患病率大約為510。目前，AD診斷主要

28、依據(jù)臨床表現(xiàn)和頭 顱CT、M對等影像學檢查以及神經心理檢查量表等綜合評價，臨床診斷率低。 AD從出現(xiàn)病癥到確診一般要經過3年左右，因此尋找高敏感度、特異度、無 創(chuàng)的生物學指標以提高早期診斷率，將為藥物干預及延緩病程提供時機。 近年的研究發(fā)現(xiàn)，一種分子量為41KD的跨膜磷蛋白AD7cNTP，在神經 元胞體中表達，定位于神經細胞發(fā)生的軸突，大量存在于AD患者腦中的神經 la 元纖維纏結 Neurofibrillary Monte等瞵j tangles，NFTs 。最早于1997年由de 在正常成人額葉和顳葉皮質的神經元中可檢測到AD7c-NTP的mRNA的表達， 低水平的AD7c-NTP的mRNA

29、轉錄產物在AD患者腦膠質細胞中也可檢測到， 而在胰腺、腎臟、肝臟、脾臟、胃腸道 不同區(qū)域 、卵巢、輸卵管、子宮、甲 狀腺、肺、骨骼肌、睪丸和胸腺等其他器官那么沒有表達【9J。AD患者的腦組織、 腦脊液及尿液中AD7cNTP的表達水平選擇性升高，對于AD的早期診斷敏感 性及特異性均在90以上，并且與病情嚴重程度正相關【7J。 本研究說明AD患者尿液中AD7c-NTP含量較智能正常健康老年人明顯升 高，中晚期AD組中該指標較早期AD組明顯增高，此結果與國外報道在一定 程度上是相符的【lOl，提示尿液中AD7c-NTP含量可能成為很好的AD診斷的輔 助指標。國內外用ELSIA法檢測AD及血管性癡呆、

30、帕金森病等其他非AD疾 1-16。 斷靈敏性為80-,923，特異性為894-968t1 本研究發(fā)現(xiàn)，在以190 ngml為AD診斷界點的敏感性為90O，特異性為 878，兩者能夠同時保持較高的診斷敏感性和特異性，有助于提高AD的診斷 率，在對老年人進行AD風險的臨床評估也具有重要的意義。與其他研究相比擬， 本研究以智能正常老年人組含量為對照組，不包括另一研究對象MCI組，而其 他研究中多以非AD疾病組及正常對照組共同為對照組，而且研究對象的例數(shù)、 患者疾病嚴重程度等等均有差異，從而造成最正確診斷界點與其他研究的差異。 MCI是介于正常衰老和癡呆之間的一種認知功能損害狀態(tài)，被認為是AD 9 第

31、2章尿液中AD7c-NTP對阿爾茨海默病的診斷意義 差異有統(tǒng)計學意義，但與智能正常健康組相比并無統(tǒng)計學意義?？赡艿脑驗椋?1AD7c-NTP主要存在于腦內老年斑中，MCI患者腦組織機構、解剖、功能的 改變與AD患者和智能正常老年人均不相同，其中的老年斑數(shù)量缺乏，因此不 能表達顯著增高的AD7c-NTP。2MCI患者于正常老化患者無法準確區(qū)分，兩 者之間的指標多有重疊，還未找到明確的可用于臨床診斷的生化指標。3MCI 患者的血腦屏障尚未嚴重破壞。研究證實lI，腦內升高的NTPS來自于血清， 是通過受損的血腦屏障進入到腦組織。當大量的產生的AD7c-NTP無法及時清 除可透過受損的血腦屏障進入腦

32、組織，并且越來也多的AD7c-NTP很可能通過 腎小球的過濾進入尿液。MCI患者尿液中AD7c-NTP含量較AD患者明顯降低， 提示MCI患者的血腦屏障可能未受到嚴重損壞。4本實驗研究入組要求及尿液 標本要求嚴格，有任何一項異常即為不合格，而許多老年人合并某些心、肺、 腎等臟器的慢性疾病，未納入研究，因此，可能對結果造成一定影響。尿液 有一定的臨床參考價值 本研究所采用的酶聯(lián)免疫吸附法具有準確性高，簡便，可操作性強以及不 需過夜及長時間孵育等優(yōu)點，并且尿液檢測具有無創(chuàng)性，更易被患者接受，使 得尿液AD7c-NTP含量檢測在AD的早期診斷、鑒別診斷及病情評估中有著重 要的意義。 10 第2章尿液

33、中AD7cNTP對阿爾茨海默病的診斷意義 第4節(jié)結論 尿AD7c-NTP含量檢測在AD的診斷和病情評估中有重要的意義。 第3章尿AD7c-NTP含量預測輕度認知障礙向AD轉化的意義 第1節(jié)材料和方法 11研究對象 2021年3月至2021年3月南昌大學第二附屬醫(yī)院神經內科神經內科就診 的患者及南昌市社區(qū)60歲以上老年人志愿者中診斷為輕度認知障礙者。 所有研究對象均取得知情同意，進行詳細的病史采集、專科體檢、行頭顱 CT或MRI檢查及神經精神量表評價；血壓、心電圖正常，血常規(guī)、尿液分析、 血糖、血脂均在正常范圍內。 入組標準：所有病例符合美國Mayo神經病學研究中心的Petersen診斷標 準。

34、臨床診斷要點為： 1 存在由患者或知情者提供的記憶障礙主訴。 2 經神經 心理測試證實記憶障礙存在，其他認知功能相對完好或輕度受損，日常生活能 27分； 4 日常生活能力量表20項 ADL 26分； 知障礙的中樞神經系統(tǒng)疾病，如心腦血管疾病、帕金森病、硬膜下血腫、IF常 顱壓腦積水、腦腫瘤、亨廷頓病等；可導致癡呆的系統(tǒng)性疾病，如甲狀腺功 能減退、神經梅毒、感染、維生素或葉酸缺乏、低鈣血癥等；譫妄，重性抑 郁，昏迷等精神障礙所致認知功能缺陷。符合以上條件者入選MCI組，共60 276 年。 AD診斷標準：符合美國國立神經病語言障礙卒中研究所和Alzheimer病及 發(fā)病年齡4090歲，多在65歲

35、以后。有多項認知缺陷。已導致社交或職 業(yè)功能缺陷，影響生活。除外任何可能導致認知功能缺陷的軀體及精神疾病。 4分。 12 第3章尿AD7c-NTP含量預測輕度認知障礙向AD轉化的意義 12試劑與儀器 人AD7c-NTPELISA試劑盒：上海西唐生物科技 DRAGON WellscanMK3 酶標儀：芬蘭Thermo公司，型號DENLEY 4MK2 洗板機：芬蘭Thermo公司，型號Wellwash 數(shù)字顯示隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海躍進醫(yī)療器械廠，型號PYXDHS 離心機：上海安亭科學儀器廠，型號TGL168 移液槍：芬蘭Thermo公司，型號labsystems規(guī)格20200ul 13實驗方

36、法 131尿AD7c-NTP的測定 linkedimmunosorbent 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗 enzyme assay, ELISA ，嚴格按照試劑盒說明書逐步進行，具體步驟如下： 1 準備工作：將試劑盒從28的冰箱內取出，平衡至室溫。將待測標本置 于4。C冰箱內融化。配制標準品液濃度為025，05，10，20，40ngml，待做標準曲 線。 2 加樣：取出已包被的96孔板，各參加標準品或待測樣品100ul，設空白孔， min。 半透膜封存，將反響板充分混勻后置37。C恒溫箱溫育120 3 洗板：用洗滌液將反響板充分洗滌5次，向濾紙上印干。 4 加第一抗體：每孔中參加第一抗體工作

37、液100ul，半透膜封存，將反響板 min。 充分混勻后置37恒溫箱60 5 洗板：用洗滌液將反響板充分洗滌5次，向濾紙上印干。 6 加酶標抗體：每孔加酶標抗體工作液100ul，半透膜封存，將反響板置37 min 恒溫箱30 第3章尿AD7c-NTP含量預測輕度認知障礙向AD轉化的意義 7 洗板：用洗滌液將反響板充分洗滌5次，向濾紙上印干。 8 加底物：每孔參加底物工作液100ul，半透膜封存，置37恒溫箱暗處反 min。 應15 9 終止：每孔參加100ul終止液混勻。 10 測值：15min內用酶標儀在450rim處測吸光值。 132隨訪 AD7c-NTP J下常組。所有病例在2021年3

38、月至2021年3月間進行隨訪調查。病 人在1年后再次進行病情評估，且用相同方法再次測定尿中AD7c-NTP含量。 14統(tǒng)計方法 學處理，作X2檢驗、f檢驗、Pearson相關分析，P 005有統(tǒng)計學意義。 14 第3章尿AD7cNTP含量預測輕度認知障礙向AD轉化的意義 第2節(jié)實驗結果 21隨訪結果 60例患者在1年隨訪期間無死亡病例，均未發(fā)生腦卒中及其他嚴重臟器疾 病，未向其他類型癡呆轉化，無脫落病例，其中共有8例MMSE評分有12分 提高，8例MMSE評分不變，其余44例均下降。共有9例進展為AD 占15O ， 兩組進展為AD病例數(shù)進行卡方檢驗，X2 512，P 0024，差異有統(tǒng)計學意義

39、 P 005 。 見表3 22 MMSE評分 本相同 P O05 。1年后再次MMSE評分發(fā)現(xiàn)，兩組得分均有下降，差異有統(tǒng) 計學意義 P 005 。 見表3 23尿AD7eNTP含量 對隨訪前后兩組尿AD7c-NTP含量進行配對t檢驗，兩組均有升高，差異 有統(tǒng)計學意義， P 005 。 見表3 表3隨訪前后結果 注：?入組時，P 005；。隨訪前后，P 005 第3章尿AD7c-NTP含量預測輕度認知障礙向AD轉化的意義 24相關分析 關，相關系數(shù)r 043，p 005 見表4 。 表5MMSE評分、AD7c-NTP含量相關分析 AD7c-NTP含量 r值P值 注：幸p 005 16 第3章尿

40、AD7c-NTP含量預測輕度認知障礙向AD轉化的意義 第3節(jié)討論 隨著社會的開展，人類壽命的延長，人口老齡化急劇加重，阿爾茨海默病 在65歲以上老年人的患病率達510，是癡呆最重要的原因之一。由于缺乏 預防和治療的特效藥物，臨床治療僅以推遲或延緩病情為主。而多數(shù)癡呆患者 起病隱匿，病程漫長，當患者或家屬予以重視而來?？凭驮\時，往往病情已經 相當嚴重，錯過了最正確的治療時機。輕度認知障礙 MCI 是指認知功能已受損， 但未達癡呆，其社會職業(yè)和日常生活能力未受影響的狀態(tài)，被認為是癡呆的前 期表現(xiàn)。只要時間足夠，大多數(shù)甚至所有的MCI患者最終可能進展為癡呆，特 別是AD8】。因此，是早期診斷AD和早

41、期干預治療的重要時期。根據(jù)MCI的 病因，臨床表現(xiàn)及影像學和轉歸存在多樣性，又可分為三個亞型Il州：遺忘型 有記憶障礙的MCI更容易開展為AD。本研究對象主要為遺忘型MCI，對此類 患者進行隨訪，深入研究，有利于早期發(fā)現(xiàn)和篩選出AD的高危人群，對預防和 推遲AD的發(fā)生具有重要意義。 目前有許多工具已經用于預測MCI向AD轉化的研究，如神經心理學、血 液和腦脊液生化指標、基因和神經影像學等。使用神經心理學量表檢測檢測認 知功能的變化，如MMSE延遲回憶量表120】、聽覺詞語學習預測延遲回憶量表 和威斯康辛情節(jié)控制量表【2ll等均有一定價值，但預測的敏感性和特異性不高。 結構MRI測量顳角體積和海

42、馬結構f22】、顳葉萎縮的溝間距123J以及腦室擴大的體 積和全腦萎縮的體積的年變化率【24】等可檢測MCI病人的疾病進展情況，早期預 測轉化。擴散張量成像MRI技術 DTIMRI 顯示左側海馬彌散系數(shù)升高與MCI 轉化為AD明顯相關【25】。氫質子磁共振波譜 1HMRS 口-動態(tài)監(jiān)測多種重要的腦 肌醇 mI 等在預測MCI的轉化中顯示了巨大的應用價值【2犯71。多項SPECT和 PET的研究發(fā)現(xiàn)，顳頂區(qū)、扣帶回后部及海馬區(qū)血流減低高度預示MCI進展為 AD的可能性較大128-30。但是在認知功能正常的老年人腦結構也可能出現(xiàn)類似的 改變，診斷的敏感性和特異性不夠理想，并且影像學檢查價格昂貴限制

43、其在臨 床的應用。腦脊液中中Tau蛋白升高和A142下降在預測MCI轉化中最具價 第3章尿AD7c-NTP含量預測輕度認知障礙向AD轉化的意義 值，Tau蛋白水平與神經纖維纏結有關，反響腦神經元和軸索變性，而Al-42降 低那么反響淀粉樣蛋白的沉積和老年斑的形成，在預測轉化中的敏感性和特異性 均較耐叫J。目前公認的AD的危險因素APOE等位基因4也被認為是重要的MCI 轉化為AD預測因子【32。此外，其他生物學指標如高同型半胱氨酸、異前列腺 素、低密度脂蛋白等的也在MCI中存在異常，是否對MCI預測轉化還有待進一 步研究。 經元胞體中表達，其功能與神經炎的發(fā)生及細胞的死亡有關。研究發(fā)現(xiàn)【8】用

44、異 元細胞發(fā)生許多與AD患者腦神經元相似的變化，如線粒體功能受損，P53和 增強與tau蛋白過度磷酸化引起的細胞骨架損傷呈正相關，而與AB聚集無相關 性。此外，AD7c-NTP表達的增加出現(xiàn)在組織學尚未完全變性的神經元。在疾病 早期， AD7c-NTP在AD患者的腦組織、腦脊液及尿液中即有選擇性升高，且 的MCI患者尿AD7c-NTP含量增高，而907的非癡呆對照組中其含量正常。 含量升高，與Goodman等的研究結果接近。我們的研究發(fā)現(xiàn)，MCI患者尿 AD7cNTP含量可預測MCI向AD的轉化。 通過隨訪發(fā)現(xiàn)，60例患者在1年后，9例 15O 轉化為AD，無轉化為 其他類型癡呆病例，甚至有7

45、例 117 MMSE評分提高，雖然大局部患者 733 評分未明顯下降，仍需進行更長時間的隨訪分析。本研究中，患者 MMSE評分提高原因可能為：治療改善作用；測試方法習得作用；測試本身的 不穩(wěn)定性作用等等多因素共同影響。僅有心理測驗得分提高而無大腦病理狀態(tài) 的改善只是偽逆轉，以心理測驗成績提高而認為病情好轉可能使醫(yī)患雙方不予 重視而放棄進一步干預治療。也有研究表吲弘J，相當數(shù)量被診斷為MCI的患者 經過10年的隨訪也沒有轉化為癡呆。因此有更多研究需深入進行。 含量對MCI轉化為AD的價值。因此，今后我們仍需延長對MCI患者的隨訪 18 及各類 19 第3章尿AD7c-NTP含量預測輕度認知障礙向

46、AD轉化的意義 第4節(jié)結論 尿AD7c-NTP含量是預測MCI向AD轉化的重要指標。 參考文獻 參考文獻 ME，eta1Rates 1】LaunerLJ，Andersen andriskfactorsfordementiaandAJzheimers K，Dewey disease：resultsfromEURODEM Incidence Researchand pooledanalysesEURODEM Group Work Studiesof GroupsEuropeanDementia【J】Neurology,1999，52 1 ：7884 GERoman a1Dementia in ZX

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