第四章菌種生產(chǎn)

1、第4章 食用菌菌種生產(chǎn)第一節(jié) 菌種概述第二節(jié) 菌種生產(chǎn)設(shè)備 第三節(jié) 菌種培養(yǎng)基第四節(jié) 接種 第五節(jié) 菌種培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定第六節(jié) 菌種保藏與復(fù)壯 第一節(jié) 菌種概述一、菌種概念二、菌種類型三、菌種生產(chǎn)程序返回本章一、菌種概念菌種擔(dān)孢子或子囊孢子野生擴(kuò)大繁殖后的純次生菌絲體栽培來歷野生菌馴化原菌株改良生物技術(shù)創(chuàng)新優(yōu)良菌株擴(kuò)大繁殖用于生產(chǎn)實(shí)行純培養(yǎng)不含任何雜菌基本要求返回本節(jié)二、菌種類型一級(jí)菌種二級(jí)菌種三級(jí)菌種級(jí)別按保藏用種實(shí)驗(yàn)用種生產(chǎn)用種目的狀態(tài)：固體菌種、液體菌種返回本節(jié)（一）級(jí)別不同的菌種1.一級(jí)種（母種）用分離法首次得到的純次生菌絲體 概念概況培養(yǎng)環(huán)境 試管、斜面培養(yǎng)基用途 再生母種擴(kuò)大原種保藏

2、用種菌絲弱而少、不可直接栽培特點(diǎn)返回本節(jié)返回本節(jié)2.二級(jí)種（原種）將母種擴(kuò)大至粗放培養(yǎng)基上形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲較多而壯、適應(yīng)性較強(qiáng)特點(diǎn)用途 擴(kuò)大栽培種大口瓶、較粗放的液體或固體培養(yǎng)基返回本節(jié)返回本節(jié)3.三級(jí)種（栽培種）將原種擴(kuò)大至粗放培養(yǎng)基上形成的菌種概念概況培養(yǎng)環(huán)境菌絲多而壯、適應(yīng)性強(qiáng)特點(diǎn)用途栽培生產(chǎn)菌種袋、較粗放的固體培養(yǎng)基返回本節(jié)返回本節(jié)生產(chǎn)總過程母種栽培種栽培原種子實(shí)體返回本節(jié)返回本節(jié)（二）狀態(tài)不同的菌種用固體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種1.固體 菌種概念特點(diǎn)設(shè)備、工藝簡單菌齡長而不一發(fā)酵率較低用液體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種2.液體 菌種概念特點(diǎn)設(shè)備、工藝較復(fù)雜菌齡短而一致發(fā)酵率高易老化和自溶返回本

3、節(jié)生 長 勢(shì) 的 區(qū) 別液體菌種固體菌種返回本節(jié)返回本節(jié)三、菌種生產(chǎn)程序四大步驟制培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)接種返回本節(jié)第二節(jié) 主要生產(chǎn)設(shè)備一、制培養(yǎng)基設(shè)備二、滅菌設(shè)備三、接種設(shè)備四、培養(yǎng)設(shè)備五、保藏設(shè)備六、菌種廠布局返回本章一、制培養(yǎng)基設(shè)備（一）原料處理設(shè)備切片粉碎兩用機(jī)切片粉碎兩用機(jī)鍘草機(jī)粉碎機(jī)返回本節(jié)拌料機(jī)返回本節(jié)裝袋機(jī)（二）培養(yǎng)基分裝設(shè)備返回本節(jié)裝瓶機(jī)挖瓶機(jī)返回本節(jié)菌種袋頸圈返回本節(jié)菌種瓶返回本節(jié)二、滅菌設(shè)備高壓鍋外鍋：裝水內(nèi)鍋：裝物（有壁管）鍋蓋安全閥排氣閥壓力表返回本節(jié)常壓返回本節(jié)密閉性好要求1.接 種 箱用法清潔、放物品 消毒噴霧熏蒸紫外燈特點(diǎn)簡易、利移動(dòng)對(duì)人體低害效果好、工效低 三、接種設(shè)

4、備（一）接種環(huán)境返回本節(jié)觀察窗紫外燈 操作孔接種箱返回本節(jié)2.接種室緩沖間：23m2接種間：56m2面積79m2高2.22.5m要求 6個(gè)面平滑兩門錯(cuò)開、平拉式頂裝紫外燈清潔物品放緩沖間消毒 移物至接種間 噴消毒液 10min 后接種消毒液清潔 使用返回本節(jié)返回本節(jié)返回本節(jié)使一定工作區(qū)達(dá)到相對(duì)無菌、無塵狀態(tài)的電器3.超凈工作臺(tái)雙人單人返回本節(jié)要求:前端為導(dǎo)熱性好的金屬材料槍匙鉤鏟鑷耙針環(huán)接種4.接種工具返回本節(jié)固體菌種接種槍液體菌種接種槍返回本節(jié)四、菌種培養(yǎng)設(shè)備1.培養(yǎng)箱培養(yǎng)少量菌種的恒溫電器（2040）返回本節(jié)2.培養(yǎng)室培養(yǎng)大量菌種的恒溫房要求光線暗密閉好、通風(fēng)性強(qiáng)能升溫、降溫（空調(diào)機(jī)）有培

5、養(yǎng)架返回本節(jié)貯藏室遠(yuǎn)離污染源低溫（48）干燥、通風(fēng)、遮光 用前要嚴(yán)格消毒殺蟲地面常撒石灰粉保藏原種、栽培種：五、菌種保藏設(shè)備保藏母種：冰箱（4）左右返回本節(jié)六、菌種廠的布局根據(jù)菌種生產(chǎn)流程合理設(shè)置倉庫配料室滅菌室接種室培養(yǎng)室辦公室栽培棚門口曬料場返回本節(jié)第三節(jié) 菌種培養(yǎng)基一、概述（一）概念及要求（二）培養(yǎng)基的類型二、各級(jí)菌種的培養(yǎng)基（一）母種培養(yǎng)基（二)原種、栽培種培養(yǎng)基三、培養(yǎng)基的滅菌返回本章一、培養(yǎng)基的概述（一）概念及要求概念人工配制的適于菌種生長的營養(yǎng)基質(zhì)要求營養(yǎng)種類、比例、水分、pH適宜； 保持無菌狀態(tài)。返回本節(jié)類型天然：天然有機(jī)物合成：已知成分的化學(xué)藥品半合成：？原料來源狀態(tài)液體：營

6、養(yǎng)液固體固體：天然固體原料固化：加1.5%2%瓊脂表面形狀斜面培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基的類型返回本節(jié)粉狀條狀屬天然植物多糖 融點(diǎn)96以上凝點(diǎn)40 以下冷水中不溶透明度好、粘著力強(qiáng)不被微生物分解利用特性返回本節(jié)返回本節(jié)二、各級(jí)菌種的培養(yǎng)基（一）母種培養(yǎng)基1.通用配方2.配制過程PDA馬鈴薯200g、葡萄糖20g瓊脂1520g、水1000m1返回本節(jié)煮沸20min，取定量濾液制馬鈴薯濾液濾液沸時(shí)加入，融后加余料融化瓊脂調(diào)解pH勿污管口，控制裝量分裝試管準(zhǔn)備滅菌扎捆10%NaOH或HCL返回本節(jié)返回本節(jié)（二）原種、栽培種培養(yǎng)基主料棉籽殼87，麥麩10輔料白糖1，石灰1，過磷酸鈣1配方（%）棉殼、

7、麥麩干混余料溶于水后澆入主料清水翻拌至含水量配制(1)棉籽殼培養(yǎng)基 返回本節(jié)主料 麥粒、玉米粒等98.5%輔料 石膏粉1%,碳酸鈣0.5%調(diào)pH與分裝 pH：一般為8.0左右原種培養(yǎng)基裝大口瓶栽培種培養(yǎng)基裝菌種袋 配方（%）顆粒洗凈，1%石灰水泡脹文火煮沸1520min晾至無明水后拌入余料配制(2)顆粒培養(yǎng)基返回本節(jié)返回本節(jié)栽培種的裝袋返回本節(jié)三、培養(yǎng)基的滅菌（一）母種培養(yǎng)基的滅菌無菌檢驗(yàn)約30條件下空白培養(yǎng)23天滅菌與擺斜面擺斜面擺斜面1kg/cm2(103kpa、121）2030min返回本節(jié)母基滅菌與擺斜面返回本節(jié)（二）原種、栽培種培養(yǎng)基的滅菌高壓滅菌1.5kg/cm2（152kpa、1

8、28.1）滅菌12h 返回本節(jié)常壓滅菌100滅菌10h左右再悶12h要求攻頭、控中、保尾 返回本節(jié)第四節(jié) 菌種的接種一、無菌操作二、母種的接種 (一）分離法 1.組織分離 2.孢子分離（二）轉(zhuǎn)管法三、原種、栽培種的接種返回本章概念：菌種移至新培養(yǎng)基上的過程關(guān)鍵：無菌操作接種在嚴(yán)格消毒滅菌條件下進(jìn)行的操作概念一、無菌操作接種環(huán)境消毒滅菌酒精棉球消毒雙手開啟的管口、瓶口靠近燈焰拔出的棉塞勿觸及任何地方動(dòng)作快，接種時(shí)間勿太長要點(diǎn)必備返回本節(jié)返回本節(jié)u特點(diǎn)簡便，易成功保持原菌種性狀重復(fù)多易退化不適于耳類1.組織分離組織PDA次生菌絲培養(yǎng)（一）分離法u步驟返回本節(jié)步驟選種菇外觀典型、大小適中、無病蟲害、

9、八成熟、第12茬的子實(shí)體取接組織縱剖（撕）菇體尖頭鑷取柄蓋交界處綠豆粒大的組織放入新斜面中部種菇消毒用燃燒的酒精棉球迅速擦拭返回本節(jié)2.孢子分離(有性繁殖）孢子特點(diǎn)菌齡小生命力強(qiáng)變異率高孢 子分離法難度較大單孢分離多孢分離較簡易單孢分離的菌落返回本節(jié)多孢分離概念使許多孢子在同一培養(yǎng)基上，萌發(fā)后自由交配成次生菌絲的方法步驟種菇消毒采收孢子接種孢子整菇插種法鉤懸法孢子印法返回本節(jié)(1)種菇 消毒菌柄去2/3苞被有：75%酒精棉球擦0.25%新潔爾滅浸23min無菌紗布吸干表面水分 無返回本節(jié)(2)采收孢子整菇插種法種菇插在孢子收集器中使孢子散落于培養(yǎng)皿內(nèi)的方法用前滅菌25、24h現(xiàn)孢子粉取出分離材

10、料培養(yǎng)皿蓋嚴(yán)返回本節(jié)鉤懸法25、24h現(xiàn)孢子粉取出分離材料返回本節(jié)孢子印法返回本節(jié)(3)接種孢子用接種環(huán)蘸孢子液或孢子粉涂布于平板上返回本節(jié)返回本節(jié)（二）轉(zhuǎn)管法注意種塊勿太大原老種塊勿再接入傳代次數(shù)勿太多將母種移入新的過程概念過程接種環(huán)取綠豆粒大母種移入新斜面中部返回本節(jié)轉(zhuǎn)管返回本節(jié)三、原種、栽培種的接種接原種用接種耙取蠶豆大母種放于瓶中料面上返回本節(jié)返回本節(jié)接栽培種用接種匙（鑷、鏟）取棗大原種放于袋的兩端或瓶中料面上表面老菌絲及老種塊勿接入返回本節(jié)栽培種接種返回本節(jié)第五節(jié) 菌種培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定一、菌種培養(yǎng)（一）培養(yǎng)條件（二）技術(shù)環(huán)節(jié)二、菌種質(zhì)量鑒定（一）母種質(zhì)量鑒定（二）原種和栽培種質(zhì)量鑒定返

11、回本章(一)培養(yǎng)條件場所清潔空氣清新光線暗空氣濕度60%70%溫度約25返回本節(jié)（二）技術(shù)環(huán)節(jié)1.母種培養(yǎng)及時(shí)挑揀污染管分離的母種要純化出菇試驗(yàn) 使用控制菌齡（即將長滿斜面）培養(yǎng)時(shí)間510天返回本節(jié)母種培養(yǎng)返回本節(jié)2.原種栽培種的培養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)間：約30天勿堆放過擠及時(shí)挑揀污染瓶（袋）栽培種的菌袋缺氧時(shí)可刺孔增氧控制菌齡（菌絲長滿后710天使用）返回本節(jié)返回本節(jié)刺孔點(diǎn)返回本節(jié)返回本節(jié)二、菌種質(zhì)量的鑒定形態(tài)特征、生理特性、栽培性狀、經(jīng)濟(jì)效益等鑒定項(xiàng)目（一）母種質(zhì)量的鑒定、菌絲白、整齊、粗壯、有彈性、萌發(fā)快等1.外觀好差絲干燥、收縮、自溶產(chǎn)生紅褐色液體等返回本節(jié)退化母種好母種返回本節(jié)2.鑒定耐干濕性試

12、驗(yàn)接入母種正常生長原種培養(yǎng)基含水量50%70%耐高溫性試驗(yàn)仍正常生長適溫培養(yǎng)7天 3035 鍛煉24h 再適溫培養(yǎng)返回本節(jié)出菇試驗(yàn)栽培出菇快產(chǎn)量高品質(zhì)好抗逆性強(qiáng)返回本節(jié)（二）原種、栽培種質(zhì)量的鑒定具有菌絲白（符合該菌種的顏色）均勻、粗壯、有菇香味接種后萌發(fā)快菌種種類品種名稱菌種級(jí)別代 時(shí)生產(chǎn)廠家接種日期用于生產(chǎn)沒有無雜色、無黃水、無結(jié)皮、無原基、無干縮脫壁等現(xiàn)象返回本節(jié)產(chǎn)生原基返回本節(jié)黃水污染返回本節(jié)第六節(jié) 菌種保藏與復(fù)壯一、菌種保藏 （一）保藏目的及原理 （二）常用保藏法 （三）保藏注意二、菌種復(fù)壯 (一）菌種的衰退 （二）復(fù)壯方法 （三）防衰措施返回本章一、菌種保藏（一）保藏目的及原理目的

13、原理創(chuàng)造不利于菌種生長的一切條件，使其代謝處于休眠狀態(tài)。使菌種不生長不死亡不污染不降低或不喪失其優(yōu)良性以盡量延長使用時(shí)間返回本節(jié)低溫干燥無氧缺營養(yǎng)不利條件返回本節(jié)（二）常用保藏法以母種形式保藏特點(diǎn)簡便保藏時(shí)間短易污染及退化不適于草菇等菌類 1.斜面低溫法斜面菌種置46冰箱中（36個(gè)月）返回本節(jié)返回本節(jié)2.礦油保藏法無菌檢驗(yàn) ？注入種管淹沒斜面約1cm礦油處理滅菌：152kpa、30min去水：4050烘至無色透明 口堵膠塞用時(shí)轉(zhuǎn)管再轉(zhuǎn)管返回本節(jié)返回本節(jié)3.自然基質(zhì)保藏法基質(zhì)的處理麥粒浸透、煮熟麩皮拌濕裝管防衰老保藏時(shí)間長轉(zhuǎn)接后生長旺易污染，滅菌要徹底特點(diǎn)滅菌接種培養(yǎng)干燥器去水返回本節(jié)（三）保藏

14、注意u用保種培養(yǎng)基u及時(shí)保藏（菌絲占斜面2/3）u最好換膠塞u用時(shí)活化u嚴(yán)防棉塞受潮返回本節(jié)二、菌種的復(fù)壯概念 確?；蚧謴?fù)菌種優(yōu)良性能的措施 （一）菌種的衰退形態(tài)改變、生長慢、抗逆性差、產(chǎn)量及質(zhì)量下降表現(xiàn)根源內(nèi)因 菌種的遺傳物質(zhì)發(fā)生了負(fù)變 外因 傳代過多，條件不適宜返回本節(jié)（二）復(fù)壯法1.繁殖交替法2. 經(jīng)常改變培養(yǎng)條件 3.轉(zhuǎn)管時(shí)只取尖端菌絲組織分離母種孢子分離再生母種栽培子實(shí)體返回本節(jié)（三）防衰措施保證菌種的純培養(yǎng)嚴(yán)格控制傳代次數(shù)用適宜菌齡的菌種用適宜培養(yǎng)條件及保藏條件返回本節(jié)本章主要內(nèi)容1.菌種類型（母種、原種、栽培種的作用）2.高壓鍋、接種箱、接種室的構(gòu)造及使用3.培養(yǎng)基（PDA、顆粒培養(yǎng)基的配制方法）4.接種（無菌操作、各級(jí)菌種的接種法）5.菌種保藏（目的與原理、3種方法）6.菌種復(fù)壯（簡易復(fù)壯法、防衰措施）返回本節(jié)1.設(shè)計(jì)菌種廠的依據(jù)是什么？2. 怎樣防止菌種的衰退？3.怎樣判斷菌種的衰退？4.自然基質(zhì)保藏法是怎樣進(jìn)行的？有何優(yōu)缺點(diǎn)？1.黃毅.食用菌栽培. 北京：高等教育出社，19982.中國食用菌菌種網(wǎng)http:/作業(yè)題1.栽培時(shí)為何不用母種作菌種？2.母種擴(kuò)成原種的目的是什么？3.怎樣使用接種箱？4.菌種的基本要求是