生物制品實(shí)用教案

1、 一、生物制品概述 二、疫苗研究及其研制策略 三、生物制品的一般制造(zhzo)方法、質(zhì)量要求 與檢定 四、重要生物制品的制備 五、核酸疫苗第1頁(yè)/共120頁(yè)第一頁(yè)，共120頁(yè)。第一節(jié)：生物制品(shn w zh pn)概述 1 概念及發(fā)展沿革 2 生物制品的分類(fn li) 3 制造生物制品的生物學(xué)及免疫學(xué)基礎(chǔ)第2頁(yè)/共120頁(yè)第二頁(yè)，共120頁(yè)。1 概念(ginin)及發(fā)展沿革 1.1 概念 凡是從微生物及其代謝產(chǎn)物、原蟲、動(dòng)物毒素、人或動(dòng)物的血液或組織直接加工制成，或用現(xiàn)代生物技術(shù)、化學(xué)方法制成，作為預(yù)防、治療、診斷特定傳染病或其他有關(guān)疾病的免疫制劑。 包括各種( zhn)疫苗、抗血清

2、、抗毒素、類毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、診斷試劑等。第3頁(yè)/共120頁(yè)第三頁(yè)，共120頁(yè)。1.2 從疫苗生產(chǎn)(shngchn)看生物制品的發(fā)展 12世紀(jì)，中國(guó)開始用人痘接種預(yù)防天花，從癥狀輕微的天花病人身上人工接染到健康兒童，使其通過產(chǎn)生輕微癥狀的感染獲得免疫力，避免天花引起的嚴(yán)重疾病甚至死亡。 1721年，人痘接種法傳入(chun r)英國(guó)，英國(guó)醫(yī)生琴納注意到感染過牛痘的人不會(huì)再感染天花。經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)，琴納于1796年從一擠奶女工感染的痘皰中，取出皰漿，接種于8歲男孩的手臂上，然后讓其接種天花膿皰液，結(jié)果該男孩并未染上天花，證明其對(duì)天花確實(shí)具有了免疫力。 最早的弱毒活病毒疫苗。第4頁(yè)/共120頁(yè)第四頁(yè)

3、，共120頁(yè)。1.2 從疫苗生產(chǎn)看生物制品(shn w zh pn)的發(fā)展 1798年，醫(yī)學(xué)界正式承認(rèn)“疫苗接種確實(shí)是一種行之有效的免疫方法”。 經(jīng)過一百多年的努力，1980年世界衛(wèi)生組織宣布全球消滅了天花。 1870年，法國(guó)(f u)科學(xué)家巴斯德發(fā)明了第一個(gè)細(xì)菌減毒活疫苗雞霍亂疫苗。巴斯德將此歸納為對(duì)動(dòng)物接種什么細(xì)菌就可以使其不受該病菌感染的免疫接種原理，從而奠定了疫苗的理論基礎(chǔ)。因此人們把巴斯德稱為疫苗之父。第5頁(yè)/共120頁(yè)第五頁(yè)，共120頁(yè)。1.2 從疫苗(ymio)生產(chǎn)看生物制品的發(fā)展 第二代疫苗亞基疫苗的出現(xiàn)，克服了第一代疫苗潛在致病性的問題。 天然或重組成分為主。 第三代疫苗核酸

4、疫苗，調(diào)動(dòng)細(xì)胞免疫和體液免疫兩個(gè)系統(tǒng)，追求最佳效果。 持久(chji)，廣譜，廉價(jià)。第6頁(yè)/共120頁(yè)第六頁(yè)，共120頁(yè)。2 生物制品(shn w zh pn)的分類 1.疫苗等預(yù)防類生物制品：細(xì)菌類疫苗、病毒類疫苗、類毒素和聯(lián)合疫苗。 2.抗毒素及免疫血清：由特定抗原免疫動(dòng)物所得血漿制成的抗毒素或免疫血清，如破傷風(fēng)抗毒素、抗狂犬病血清等，用于治療或被動(dòng)免疫預(yù)防。 3.血液制品：如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子（天然或重組的）、紅細(xì)胞濃縮物等。 4.診斷(zhndun)制品：包括體內(nèi)診斷(zhndun)制品和體外診斷(zhndun)制品。第7頁(yè)/共120頁(yè)第七頁(yè)，共120頁(yè)。3 制造生物

5、制品(shn w zh pn)的生物學(xué)及免疫學(xué)基礎(chǔ) 3.1 生物學(xué)基礎(chǔ) A:細(xì)菌的代謝(dixi)產(chǎn)物。 (1)熱原質(zhì) 主要是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖，注入體內(nèi)能引起發(fā)熱反應(yīng)。 (2)毒素 有內(nèi)毒素和外毒素兩種，均有強(qiáng)烈毒性。 (3)色素 許多細(xì)菌能產(chǎn)生色素，對(duì)其鑒別有用。第8頁(yè)/共120頁(yè)第八頁(yè)，共120頁(yè)。 B:外界環(huán)境因素對(duì)微生物的影響 一方面可創(chuàng)造有利條件，促進(jìn)它們(t men)的生長(zhǎng)繁殖，以制備生物制品；另一方面也可利用對(duì)微生物不利的因素使其發(fā)生變異或殺滅之，以更好地為制造生物制品服務(wù)。 常用的幾個(gè)概念： 消毒；滅菌；無(wú)菌；防腐。第9頁(yè)/共120頁(yè)第九頁(yè)，共120頁(yè)。3.2 免疫學(xué)

6、基礎(chǔ)(jch)3.2.1 機(jī)體的抗感染免疫 1)先天性免疫（非特異性免疫） 包括(boku)： 體表屏障，如皮膚粘膜屏障； 血腦屏障，防御病原微生物及其毒性產(chǎn)物從血流侵入腦組織； 細(xì)胞吞噬作用； 正常體液和組織中的抗菌物質(zhì)。第10頁(yè)/共120頁(yè)第十頁(yè)，共120頁(yè)。2)特異性免疫： 個(gè)體在生命過程中接受抗原刺激后主動(dòng)產(chǎn)生或被動(dòng)獲得的。又稱獲得性免疫。 包括(boku)自動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫。 自自 然然 自自 動(dòng)動(dòng) 免免 疫疫：患患 傳傳 染染 病病，隱隱 性性 感感 染染自自 動(dòng)動(dòng) 免免 疫疫人人 工工 自自 動(dòng)動(dòng) 免免 疫疫：接接 種種 疫疫 苗苗，類類 毒毒 素素自自 然然 被被 動(dòng)動(dòng) 免免

7、疫疫：經(jīng)經(jīng) 胎胎 盤盤，初初 乳乳特特 異異 性性 免免疫疫被被 動(dòng)動(dòng) 免免 疫疫人人 工工 被被 動(dòng)動(dòng) 免免 疫疫：注注射射抗抗毒毒素素，丙丙種種球球蛋蛋白白，細(xì)細(xì)胞胞因因子子第11頁(yè)/共120頁(yè)第十一頁(yè)，共120頁(yè)。人工免疫 人為的給機(jī)體輸入抗原以調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，或直接輸入免疫血清，使獲得某種特殊抵抗力，用以預(yù)防或治療某些疾病者，稱人工免疫。人工主動(dòng)免疫(artificial active immunization)：是指給機(jī)體接種抗原性物質(zhì)如疫苗，類毒素等，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生(chnshng)特異性免疫力的方法。3.2.2 人工免疫(rn n min y)第12頁(yè)/共120頁(yè)第十二

8、頁(yè)，共120頁(yè)。人人 工工 自自 動(dòng)動(dòng) 免免 疫疫 和和 人人 工工 被被 動(dòng)動(dòng) 免免 疫疫 的的 比比 較較區(qū)區(qū) 別別 點(diǎn)點(diǎn)人人 工工 自自 動(dòng)動(dòng) 免免 疫疫人人 工工 被被 動(dòng)動(dòng) 免免 疫疫接接 種種 物物疫疫 苗苗 ， 類類 毒毒 素素抗抗 體體 （ 抗抗 毒毒 素素 ， 丙丙 球球 ）免免 疫疫 出出 現(xiàn)現(xiàn) 時(shí)時(shí) 間間慢慢 ， 1-4周周快快 ， 立立 即即免免 疫疫 力力 維維 持持 時(shí)時(shí) 間間長(zhǎng)長(zhǎng) （ 數(shù)數(shù) 月月 -數(shù)數(shù) 年年 ）較較 短短 （ 2周周 -數(shù)數(shù) 周周 ）用用 途途主主 要要 用用 于于 預(yù)預(yù) 防防多多 用用 于于 緊緊 急急 預(yù)預(yù) 防防 和和 治治 療療人工被動(dòng)免疫

9、 (artificial passive immunization) : 是給人體(rnt)注射含特異性抗體的免疫血清或細(xì)胞因子等制劑，使受者迅速獲得特異性免疫力的方法。第13頁(yè)/共120頁(yè)第十三頁(yè)，共120頁(yè)。3.3 人工自動(dòng)(zdng)免疫類生物制品疫苗（Vaccine）：細(xì)菌，病毒(bngd)，螺旋體，立克次體和類毒素等抗原性生物制品統(tǒng)稱為疫苗。 安全 有效 實(shí)用分類1）死疫苗（death vaccine）:選用免疫原性強(qiáng)的微生物標(biāo)準(zhǔn)株經(jīng)大量培養(yǎng)后，用物理或化學(xué)方法將其殺死或滅活而制成的預(yù)防制劑。如霍亂、百日咳、傷寒、鉤端螺旋體疫苗。優(yōu)點(diǎn)：主要誘導(dǎo)特異性抗體產(chǎn)生，安全缺點(diǎn)：不能繁殖，需多

10、次刺激，注射局部和全身反應(yīng)嚴(yán)重第14頁(yè)/共120頁(yè)第十四頁(yè)，共120頁(yè)。2）減毒活疫苗（live-attenuated Vaccine） 用人工定向變異或從自然界篩選得到的毒力高度減弱或基本無(wú)毒的病原微生物制成的預(yù)防制劑。 優(yōu)點(diǎn)：一次免疫即可獲得長(zhǎng)久免疫力，類似自然狀態(tài)(zhungti)下的輕型或隱性感染。誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫。缺點(diǎn)：不易保存，存在回復(fù)突變的危險(xiǎn) 如卡介苗 牛痘 麻疹等死死疫疫苗苗活活疫疫苗苗制制劑劑性性狀狀殺殺死死的的病病原原微微生生物物弱弱毒毒或或無(wú)無(wú)毒毒的的病病原原微微生生物物接接種種量量及及次次數(shù)數(shù)量量大大，2-3 次次量量小小，1 次次保保存存及及有有效效期期易易保

11、保存存，較較穩(wěn)穩(wěn)定定，有有效效期期一一年年不不易易保保存存，4 度度數(shù)數(shù)周周失失效效免免疫疫效效果果較較差差，維維持持?jǐn)?shù)數(shù)月月至至一一年年較較好好，維維持持 1-5 年年或或更更長(zhǎng)長(zhǎng)第15頁(yè)/共120頁(yè)第十五頁(yè)，共120頁(yè)。3）類毒素（Toxid） 細(xì)菌(xjn)外毒素經(jīng)0.3-0.4%甲醛處理，使其毒性減弱而保留其免疫原性。 白百破：白喉類毒素+ 百日咳桿菌死疫苗+破傷風(fēng)類毒素4）新型疫苗（1）亞單位疫苗（Subunit Vaccine） 是去除病原體中與激發(fā)保護(hù)性免疫無(wú)關(guān)的甚至有害的成分，保留有效免疫原成分制作的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：免疫效果高， 不良反應(yīng)少（2）合成肽疫苗 (synthetic p

12、eptide vaccine) 將具有保護(hù)性免疫力的人工合成肽與適當(dāng)載體結(jié)合后，再加入佐劑制成的疫苗。 乙肝病毒多肽疫苗第16頁(yè)/共120頁(yè)第十六頁(yè)，共120頁(yè)。（3）基因工程疫苗DNA 疫苗（DNA Vaccine） 是用編碼病原體有效免疫原的基因與細(xì)菌質(zhì)粒構(gòu)建的重組(zhn z)體直接免疫機(jī)體，轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，使其表達(dá)保護(hù)性抗原，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：體內(nèi)可持續(xù)表達(dá)，免疫效果好，維持時(shí)間長(zhǎng)。缺點(diǎn)：其機(jī)制和安全性尚不完全清楚，一些問題有待解決。重組(zhn z)抗原疫苗(recombinant antigen vaccine) 是利用DNA重組(zhn z)技術(shù)制備的只含保護(hù)

13、性抗原的純化疫苗。優(yōu)點(diǎn)：不含活的病原體和病毒核酸，安全有效，成本低廉。 目前獲準(zhǔn)使用的有乙型肝炎疫苗。第17頁(yè)/共120頁(yè)第十七頁(yè)，共120頁(yè)。重組載體疫苗(recombinant vector vaccine) 是將編碼病原體有效免疫原的基因插入載體（減毒的病毒或細(xì)菌疫苗株）基因組中，接種后，隨疫苗株在體內(nèi)的增殖，大量所需的抗原得以表達(dá)。如果將多種病原體的有關(guān)基因插入載體，則成為可表達(dá)多種保護(hù)性抗原的多價(jià)疫苗。 載體：痘苗病毒轉(zhuǎn)基因植物疫苗 用轉(zhuǎn)基因方法，將編碼有效免疫原的基因?qū)肟墒秤弥参锛?xì)胞的基因組中，免疫原即可在植物的可食用部分穩(wěn)定的表達(dá)和積累，人類和動(dòng)物通過攝食達(dá)到免疫接種的目的。常

14、用(chn yn)的植物有蕃茄、馬鈴薯、香蕉等。第18頁(yè)/共120頁(yè)第十八頁(yè)，共120頁(yè)。（一）特異性免疫治療劑1）抗毒素 利用類病毒注射動(dòng)物(dngw)，產(chǎn)生特異性抗體，經(jīng)采血、分離、純化后制成的產(chǎn)品。 2）抗病毒血清 用病毒作抗原免疫動(dòng)物制備的含有(hn yu)抗體的血清生物制品。3.4 人工(rngng)被動(dòng)免疫類生物制品還有：抗菌血清、免疫球蛋白、免疫核糖核酸等第19頁(yè)/共120頁(yè)第十九頁(yè)，共120頁(yè)。（二）非特異性免疫(miny)治療劑-免疫(miny)調(diào)節(jié)劑1）轉(zhuǎn)移因子2）白細(xì)胞介素6）小棒桿菌(gnjn)3）胸腺素4）細(xì)胞(xbo)毒T細(xì)胞(xbo)5）卡介苗7）干擾素第20頁(yè)/

15、共120頁(yè)第二十頁(yè)，共120頁(yè)。第二節(jié)：疫苗研究及其研制(ynzh)策略 疫苗的現(xiàn)代定義為：一切通過注射或黏膜途徑接種，可以(ky)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)特定致病原的特異性抗體或細(xì)胞免疫，從而使機(jī)體獲得保護(hù)或消滅該致病原能力的生物制品統(tǒng)稱為疫苗，包括蛋白質(zhì)、多糖、核酸、活載體或感染因子。 預(yù)防用生物制品按所用材料一般分細(xì)菌性疫苗、病毒性疫苗及類毒素三大類。第21頁(yè)/共120頁(yè)第二十一頁(yè)，共120頁(yè)。1 1 接種接種(jizhng)(jizhng)目的及作用目的及作用 接種目的 防止病原體進(jìn)入機(jī)體 建立抗感染免疫 口服或注射疫苗 激發(fā)宿主產(chǎn)生(chnshng)抗病原體的抗體 暴露于病原體也不會(huì)生病 進(jìn)

16、入機(jī)體的病原體被抗體失活第22頁(yè)/共120頁(yè)第二十二頁(yè)，共120頁(yè)。2 2 疫苗疫苗(ymio)(ymio)的種類的種類 從疫苗研制技術(shù)(jsh)又可將疫苗分為傳統(tǒng)疫苗和新型疫苗兩大類。 2.1常規(guī)疫苗 1）疫苗 （1）活疫苗：減毒活疫苗（卡介苗） （2）死疫苗（百日咳、霍亂等） 2）類毒素 破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素 3）自身疫苗 由病人自身病灶中分離出的病原體制成的死疫苗。第23頁(yè)/共120頁(yè)第二十三頁(yè)，共120頁(yè)。2.2 新型(xnxng)疫苗 1）亞單位疫苗 一類保留(boli)病原體中有效免疫原成分，而除去無(wú)效成分和有毒成分的化學(xué)純疫苗。 乙肝亞單位疫苗 2）化學(xué)疫苗 用化學(xué)方法提取病

17、原體中有效免疫原成分體制成的化學(xué)純疫苗，比亞單位疫苗更為簡(jiǎn)單。 肺炎鏈球菌莢膜多糖 3）多肽疫苗 人工合成的高免疫原性多肽片段制成的疫苗。 乙型肝炎表面抗原的各種合成肽段第24頁(yè)/共120頁(yè)第二十四頁(yè)，共120頁(yè)。 4）基因工程疫苗 利用(lyng)基因工程構(gòu)建重組基因序列，表達(dá)免疫原性強(qiáng)、無(wú)毒性的多肽制成的疫苗。 乙型肝炎基因工程疫苗 5）DNA疫苗 用編碼抗原基因制成的疫苗。 流感病毒核蛋白DNA疫苗 通常也習(xí)慣地將遺傳重組疫苗、合成肽疫苗和抗獨(dú)特型抗體疫苗包括在新型疫苗范疇。 第25頁(yè)/共120頁(yè)第二十五頁(yè)，共120頁(yè)。3 3 疫苗疫苗(ymio)(ymio)的基本成分、性質(zhì)和特征的基本

18、成分、性質(zhì)和特征 3.1 疫苗的基本成分 疫苗的基本成分包括抗原、佐劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、滅活劑及其他活性成分。 抗原，是疫苗最主要的有效活性成分，它決定了疫苗的特異免疫原性。構(gòu)成(guchng)抗原的三個(gè)基本條件：異物性、特異性和一定的理化特性。第26頁(yè)/共120頁(yè)第二十六頁(yè)，共120頁(yè)。 可用作抗原的生物活性物質(zhì)有：滅活病毒或細(xì)菌、活病毒或細(xì)菌通過實(shí)驗(yàn)室多次傳代得到的減毒株、病毒或菌體提純物、有效蛋白成分、類毒素、細(xì)菌多糖、合成多肽以及近年來(lái)發(fā)展DNA疫苗所用的核酸等。 佐劑，能增強(qiáng)抗原的特異性免疫(miny)應(yīng)答。目前常用的有鋁佐劑和油制佐劑。第27頁(yè)/共120頁(yè)第二十七頁(yè)，共120頁(yè)。

19、3.2 疫苗的基本性質(zhì) 包括免疫原性、安全性、穩(wěn)定性。 免疫原性：指疫苗接種進(jìn)入機(jī)體后引起機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間。 影響(yngxing)的因素包括機(jī)體的因素和疫苗的因素。從疫苗的角度看是由疫苗的抗原決定的。包括抗原的強(qiáng)弱、大小和穩(wěn)定性以及抗原的理化性質(zhì)。第28頁(yè)/共120頁(yè)第二十八頁(yè)，共120頁(yè)。4 4 疫苗制備疫苗制備(zhbi)(zhbi)的基本過程的基本過程 疫苗因種類不同，其制備方法也不相同，但總的來(lái)說，經(jīng)典疫苗制備的基本過程包括：選擇適宜的培養(yǎng)基或細(xì)胞，進(jìn)行菌、毒株大量繁殖，收集(shuj)培養(yǎng)物，提純，半成品檢定，稀釋，分裝，成品檢定。 基因工程技術(shù)使疫苗研制方法發(fā)生了

20、革命性的變化。第29頁(yè)/共120頁(yè)第二十九頁(yè)，共120頁(yè)。5 5 疫苗疫苗(ymio)(ymio)的研制策略的研制策略當(dāng)代(dngdi)疫苗滅活疫苗殺死的病原體減活疫苗活的，無(wú)毒力的病原體第30頁(yè)/共120頁(yè)第三十頁(yè)，共120頁(yè)。生產(chǎn)(shngchn)過程u組織培養(yǎng)病原體u純化病原體u失活或減活u并沒失去激發(fā)(jf)免疫的能力第31頁(yè)/共120頁(yè)第三十一頁(yè)，共120頁(yè)。局限性u(píng)不是所有的病原體都能用組織培養(yǎng)u細(xì)胞培養(yǎng)價(jià)格昂貴u產(chǎn)量(chnling)、生產(chǎn)率低u需要特殊的安全預(yù)防措施u失活或減活都必須100u保存期限短，需低溫保藏u不能預(yù)防所有的疾病第32頁(yè)/共120頁(yè)第三十二頁(yè)，共120頁(yè)。r

21、DNA技術(shù)對(duì)疫苗(ymio)研究的促進(jìn)u減活疫苗通過清除致病基因?qū)崿F(xiàn)u基因工程疫苗，無(wú)致病性載體攜帶(xidi)致病病原體的抗原性決定簇u非組織培養(yǎng)，克隆基因和過量表達(dá)蛋白作為疫苗（亞單位疫苗）第33頁(yè)/共120頁(yè)第三十三頁(yè)，共120頁(yè)。多種基因工程疫苗研制(ynzh)策略u(píng)亞單位(dnwi)疫苗u肽疫苗u減活疫苗uDNA疫苗第34頁(yè)/共120頁(yè)第三十四頁(yè)，共120頁(yè)。5.1 亞單位(dnwi)疫苗u通常是整個(gè)病原體制備減活或滅活疫苗u免疫反應(yīng)(fnyng)的激發(fā)通常是通過病原體的外u 殼蛋白起作用第35頁(yè)/共120頁(yè)第三十五頁(yè)，共120頁(yè)。動(dòng)物(dngw)病毒 ？是不是需要(xyo)完整的病

22、原體第36頁(yè)/共120頁(yè)第三十六頁(yè)，共120頁(yè)。亞單位(dnwi)疫苗u激發(fā)免疫反應(yīng)僅僅需要病原體外殼蛋白u(yù)利用病原體的某些(mu xi)成分而不是整個(gè)病原體是“亞基”疫苗。第37頁(yè)/共120頁(yè)第三十七頁(yè)，共120頁(yè)。亞單位(dnwi)疫苗u優(yōu)點(diǎn)u 采用純化蛋白保證疫苗安全性和穩(wěn)定性u(píng)缺點(diǎn)u 純化成本(chngbn)高u 分離的蛋白不具有與病原體相同的構(gòu)象，因此可能沒有相應(yīng)的抗原性第38頁(yè)/共120頁(yè)第三十八頁(yè)，共120頁(yè)。u單純皰疹病毒（HSV）u 性傳播疾病u 潛在致癌性u(píng) 腦炎和嚴(yán)重的眼部感染u亞單位(dnwi)疫苗可能是最有效的u 減活或失活率必須是100，否則，人群有感染危險(xiǎn)亞單位(

23、dnwi)疫苗（example）第39頁(yè)/共120頁(yè)第三十九頁(yè)，共120頁(yè)。亞單位(dnwi)疫苗（example）uHSVu 抗原(kngyun)靶位是哪里？u HSV外膜糖蛋白gD第40頁(yè)/共120頁(yè)第四十頁(yè)，共120頁(yè)。HSV gD第41頁(yè)/共120頁(yè)第四十一頁(yè)，共120頁(yè)。HSV gD糖蛋白疫苗(ymio)u分離基因( jyn)u克隆表達(dá)u純化表達(dá)的蛋白u(yù)膜蛋白難以純化分離u 變異，去除膜綁定第42頁(yè)/共120頁(yè)第四十二頁(yè)，共120頁(yè)。變異(biny)修飾后的HSV糖蛋白第43頁(yè)/共120頁(yè)第四十三頁(yè)，共120頁(yè)。HSV gD糖蛋白疫苗(ymio)u亞單位疫苗生產(chǎn)u 克隆表達(dá)u 大量表

24、達(dá)u 純化(chn hu)u實(shí)驗(yàn)室中對(duì)HSV-1和HSV-2均有效 u臨床試驗(yàn)中低效第44頁(yè)/共120頁(yè)第四十四頁(yè)，共120頁(yè)。5.2 肽疫苗(ymio)u亞單位疫苗采用完整的蛋白u(yù)包含(bohn)多個(gè)抗原決定簇u肽疫苗u某個(gè)抗原蛋白上的某一區(qū)域 u單一的抗原決定簇或者表位 第45頁(yè)/共120頁(yè)第四十五頁(yè)，共120頁(yè)。含表面抗原的膜綁定蛋白(dnbi)第46頁(yè)/共120頁(yè)第四十六頁(yè)，共120頁(yè)。肽疫苗(ymio)u需要與其它(qt)分子相連接避免迅速降解u乙肝核心抗原（HBcAg）u高免疫原性載體蛋白u(yù)自裝配成顆粒第47頁(yè)/共120頁(yè)第四十七頁(yè)，共120頁(yè)。肽疫苗(ymio)結(jié)構(gòu)第48頁(yè)/共1

25、20頁(yè)第四十八頁(yè)，共120頁(yè)。肽疫苗(ymio)局限u表位必須由相鄰的氨基酸組成u并非所有的肽都能激發(fā)免疫反應(yīng)（可能需要2個(gè)或者更多）u肽必須含有與其(yq)在病原體內(nèi)相同的構(gòu)象u激發(fā)有效免疫所需肽疫苗的數(shù)量可能是失活病原體的1000倍第49頁(yè)/共120頁(yè)第四十九頁(yè)，共120頁(yè)。5.3 減活疫苗（Attenuated）u減活疫苗u通常更有效(yuxio)（較前兩種疫苗）u但不能含有任何毒力第50頁(yè)/共120頁(yè)第五十頁(yè)，共120頁(yè)。減活疫苗新的減活疫苗rDNA 技術(shù)(jsh)提供遺傳改造(gizo)手段第51頁(yè)/共120頁(yè)第五十一頁(yè)，共120頁(yè)。病原體修飾(xish)制備減活疫苗u無(wú)致病能力的病

26、原體做載體，攜帶和表達(dá)來(lái)自靶病原體的抗原決定簇u致病性病原體被修飾，改造或去除(q ch)致病基因第52頁(yè)/共120頁(yè)第五十二頁(yè)，共120頁(yè)。減活疫苗優(yōu)勢(shì)(yush)u僅病原體的抗原決定簇被克隆進(jìn)入非致病性病原體載體，無(wú)致病可能u致病基因的消除(xioch)大大降低病原體毒力恢復(fù)的可能性u(píng)完整的病原體比亞單位疫苗和肽疫苗有更強(qiáng)的免疫原性第53頁(yè)/共120頁(yè)第五十三頁(yè)，共120頁(yè)?；魜y(hulun)疫苗的設(shè)計(jì)（example）u霍亂(hulun)u病原體是霍亂(hulun)弧菌u典型病癥（發(fā)燒，腹瀉，脫水）u通過污染的飲用水傳染第54頁(yè)/共120頁(yè)第五十四頁(yè)，共120頁(yè)。霍亂(hulun)疫苗的

27、設(shè)計(jì)u霍亂u分泌腸毒素到小腸u5個(gè)B亞基 受體u1個(gè)A亞基 毒素u區(qū)域A1 毒性(d xn)活性區(qū)u區(qū)域A2 與B亞基相連第55頁(yè)/共120頁(yè)第五十五頁(yè)，共120頁(yè)。霍亂疫苗(ymio)設(shè)計(jì)u毒性區(qū)域A1u疫苗靶位u去掉A1區(qū)，將病原體移回細(xì)菌，產(chǎn)生(chnshng)無(wú)致病性的霍亂疫苗第56頁(yè)/共120頁(yè)第五十六頁(yè)，共120頁(yè)?；?jyn)敲除策略第57頁(yè)/共120頁(yè)第五十七頁(yè)，共120頁(yè)?；?jyn)敲除策略第58頁(yè)/共120頁(yè)第五十八頁(yè)，共120頁(yè)。基因(jyn)敲除策略第59頁(yè)/共120頁(yè)第五十九頁(yè)，共120頁(yè)。6 疫苗(ymio)的發(fā)展前景 治療性疫苗 大劑量高度純化的微生物抗原和

28、能提高(t go)免疫功能的其他組分組合而成的治療性疫苗，抗原量大，免疫原性強(qiáng)，對(duì)免疫系統(tǒng)有較強(qiáng)的刺激作用，而且疫苗通過不同的途徑把微生物抗原遞呈給免疫系統(tǒng)，能更有效地誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，且可消除免疫耐受。 第60頁(yè)/共120頁(yè)第六十頁(yè)，共120頁(yè)。6 疫苗(ymio)的發(fā)展前景 目前，已有治療性疫苗治療麻風(fēng)、慢支、皰疹病毒感染、愛滋病和乙肝等疾病的臨床試驗(yàn)報(bào)告。腫瘤(zhngli)疫苗也是研究的熱點(diǎn)之一。 通過食物攝取的疫苗和個(gè)性化疫苗。 多價(jià)聯(lián)合疫苗。第61頁(yè)/共120頁(yè)第六十一頁(yè)，共120頁(yè)。第十三章 生物制品(shn w zh pn)（之二）第62頁(yè)/共120頁(yè)第六十二頁(yè)，共120頁(yè)。 一、

29、生物制品概述 二、疫苗研究及其研制策略 三、生物制品的質(zhì)量要求與檢定( jindng) 四、生物制品的一般制造方法 五、重要生物制品的制備 六、核酸疫苗第63頁(yè)/共120頁(yè)第六十三頁(yè)，共120頁(yè)。第三節(jié) 生物制品(shn w zh pn)質(zhì)量要求與檢定 生物制品質(zhì)量的特殊重要性 所有預(yù)防制品都是直接用于大量健康(jinkng)人群（兒童） 所用治療制品都是通過非胃腸途徑直接用于患者 診斷試劑，其質(zhì)量則關(guān)系到能否對(duì)患者或試樣做出特異、敏感的正確診斷和分析 生物制品的質(zhì)量 安全性 有效性 可接受性第64頁(yè)/共120頁(yè)第六十四頁(yè)，共120頁(yè)。 生物制品的GMP管理藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范 GMP（Goo

30、d Manufacturing Practices for Drugs）：是對(duì)生物制品生產(chǎn)全過程的質(zhì)量管理，涉及人員、廠房和設(shè)備、原料采購(gòu)入庫(kù)、檢驗(yàn)、發(fā)料，加工，在制品及半成品檢驗(yàn)，分包裝，成品檢定，出品銷售，運(yùn)輸，用戶意見及使用(shyng)反應(yīng)處理等在內(nèi)的全過程的質(zhì)量管理。 主要包括以下三個(gè)方面：人員、廠房和設(shè)備和原材料（硬件）、管理制度和要求（軟件） 第65頁(yè)/共120頁(yè)第六十五頁(yè)，共120頁(yè)。 3.1 生物制品的標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)化 3.1.1 生物制品規(guī)程 3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)品 3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 3.2 生物制品的質(zhì)量檢定 3.2.1 生物制品的理化檢定 3.2.

31、2 生物制品的安全檢定 3.2.3 生物制品的效力檢定第66頁(yè)/共120頁(yè)第六十六頁(yè)，共120頁(yè)。 3.1.1 生物制品規(guī)程 中國(guó)生物制品規(guī)程是我國(guó)生物制品生產(chǎn)(shngchn)、檢定、經(jīng)營(yíng)和使用的技術(shù)法規(guī)，是監(jiān)督檢 驗(yàn)生物制品質(zhì)量的法定標(biāo)準(zhǔn)。 3.1 生物制品(shn w zh pn)的標(biāo)準(zhǔn)化第67頁(yè)/共120頁(yè)第六十七頁(yè)，共120頁(yè)。3.1 生物制品(shn w zh pn)的標(biāo)準(zhǔn)化 3.1.2 生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 定義：系指用于生物制品效價(jià)、活性或含量測(cè)定的或其特性鑒別、檢查的生物標(biāo)準(zhǔn)品或生物參考物質(zhì)。 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，由WHO制備(zhbi)、審定和分發(fā) 國(guó)家生物標(biāo)準(zhǔn)品，由國(guó)家鑒定機(jī)構(gòu)制備(

32、zhbi)、審定和分發(fā)種類：國(guó)際(guj)標(biāo)準(zhǔn)品國(guó)際(guj)參考品國(guó)際(guj)生物參考試劑種類：v國(guó)家生物標(biāo)準(zhǔn)品v國(guó)家生物參考品v國(guó)家生物參考試劑第68頁(yè)/共120頁(yè)第六十八頁(yè)，共120頁(yè)。第69頁(yè)/共120頁(yè)第六十九頁(yè)，共120頁(yè)。第70頁(yè)/共120頁(yè)第七十頁(yè)，共120頁(yè)。 3.1.2 生物制品標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)物質(zhì) 標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)物質(zhì)的審批 檢定所組織檢定 衛(wèi)生部生物制品標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)化委員會(huì)審查 衛(wèi)生部審批 發(fā)放比準(zhǔn)證書 標(biāo)簽及說明書 標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)物質(zhì)的索取與保管3.1 生物制品(shn w zh pn)的標(biāo)準(zhǔn)化第71頁(yè)/共120頁(yè)第七十一頁(yè)，共120頁(yè)。第72

33、頁(yè)/共120頁(yè)第七十二頁(yè)，共120頁(yè)。第73頁(yè)/共120頁(yè)第七十三頁(yè)，共120頁(yè)。3.2 生物制品(shn w zh pn)的質(zhì)量檢定 3.2.1 生物制品的理化檢定 3.2.2 生物制品的安全(nqun)檢定 3.2.3 生物制品的效力檢定第74頁(yè)/共120頁(yè)第七十四頁(yè)，共120頁(yè)。3.2 生物制品的質(zhì)量(zhling)檢定 3.2.1 生物制品的理化檢定 參照生物制品化學(xué)檢定規(guī)程(guchng) 物理性狀檢查 蛋白質(zhì)含量測(cè)定 防腐劑含量測(cè)定 純度檢查 其它外觀真空度及溶解(rngji)時(shí)間半微量定氮法酚試劑法紫外吸收法苯酚含量測(cè)定汞類防腐劑含量測(cè)定氯仿含量測(cè)定游離甲醛含量測(cè)定區(qū)帶電泳免疫電

34、泳凝膠層析水份含量測(cè)定氫氧化鋁與磷酸鋁含量測(cè)定磷含量測(cè)定O-乙?；繙y(cè)定第75頁(yè)/共120頁(yè)第七十五頁(yè)，共120頁(yè)。 3.2.2 生物制品的安全檢定 一般安全性檢查(jinch) 殺菌、滅活和脫毒情況的檢查(jinch) 外源性污染檢查(jinch) 過敏性物質(zhì)檢查(jinch)3.2 生物制品的質(zhì)量(zhling)檢定第76頁(yè)/共120頁(yè)第七十六頁(yè)，共120頁(yè)。第77頁(yè)/共120頁(yè)第七十七頁(yè)，共120頁(yè)。 殺菌(sh jn)、滅活和脫毒情況的檢查 活毒檢查 滅活疫苗 解毒檢查 類毒素 殘余毒力實(shí)驗(yàn) 活疫苗3.2 生物制品(shn w zh pn)的質(zhì)量檢定第78頁(yè)/共120頁(yè)第七十八頁(yè)，共

35、120頁(yè)。殘余毒力和毒性物質(zhì)檢查過敏性物質(zhì)的檢查3.2.3 生物制品的效力檢定免疫力試驗(yàn)活菌數(shù)和活病毒滴度測(cè)定類毒素和抗毒素的單位測(cè)定血清學(xué)實(shí)驗(yàn)(shyn)其他有關(guān)效力的檢定和評(píng)價(jià)第79頁(yè)/共120頁(yè)第七十九頁(yè)，共120頁(yè)。第四節(jié)：生物制品的一般制造(zhzo)方法4.1 病毒類疫苗制造方法 疫苗制備(zhbi)工藝各異，但主要程序一致。第80頁(yè)/共120頁(yè)第八十頁(yè)，共120頁(yè)。疫苗(ymio)制備工藝流程第81頁(yè)/共120頁(yè)第八十一頁(yè)，共120頁(yè)。4.1.1毒種的選擇(xunz)和減毒毒株必須(bx)滿足的條件抗原性典型形態(tài)，感染特定組織人工繁殖，不產(chǎn)生毒素?zé)o毒力回復(fù)不被病毒感染第82頁(yè)/共

36、120頁(yè)第八十二頁(yè)，共120頁(yè)。4.1.2 病毒(bngd)繁殖 （1）活體動(dòng)物(dngw)培養(yǎng)：牛痘 牛皮下，乙腦 鼠腦等。生產(chǎn)中已淘汰。 （2）雞胚培養(yǎng)。較動(dòng)物(dngw)管理方便。易受支 原體，沙門菌污染。 （3）組織培養(yǎng)。廣泛用于病毒培養(yǎng)。 （4）細(xì)胞培養(yǎng)。第83頁(yè)/共120頁(yè)第八十三頁(yè)，共120頁(yè)。培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式(fngsh)及類型 貼附生長(zhǎng)型細(xì)胞 為能附著于底物（支持物）表面生長(zhǎng)的細(xì)胞。包括非淋巴組織的細(xì)胞和許多異倍體體系的細(xì)胞都屬于這一類型。當(dāng)這類細(xì)胞從活體體內(nèi)轉(zhuǎn)移到體外培養(yǎng)(piyng)時(shí)，必須貼附于底物才能生長(zhǎng)。從形態(tài)上大體分為上皮細(xì)胞型和成纖維細(xì)胞型。VEGF929兔腎

37、原代細(xì)胞第84頁(yè)/共120頁(yè)第八十四頁(yè)，共120頁(yè)。 懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞 少數(shù)細(xì)胞類型在體外培養(yǎng)是不需要附著于底物而于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)，來(lái)源于血液、淋巴組織的細(xì)胞，許多腫瘤細(xì)胞（包括雜交瘤細(xì)胞）和某些轉(zhuǎn)化細(xì)胞均屬于這一類型。這些細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)中生長(zhǎng)良好，可以是單個(gè)細(xì)胞或細(xì)小的細(xì)胞團(tuán)，細(xì)胞呈圓形。細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)于培養(yǎng)基中，細(xì)胞生長(zhǎng)空間(kngjin)大，具有能夠提供增殖大量細(xì)胞、傳代方便、易于收獲的優(yōu)點(diǎn)。SP20第85頁(yè)/共120頁(yè)第八十五頁(yè)，共120頁(yè)。維持細(xì)胞培養(yǎng)所需的最佳條件 在大規(guī)模培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的過程中，最根本的是使細(xì)胞的培養(yǎng)條件達(dá)到最優(yōu)化，盡可能消除或減輕環(huán)境對(duì)細(xì)胞的影響，維持細(xì)胞高存活力

38、和高效表達(dá)，同時(shí)又要充分考慮細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物(chnw)的后續(xù)純化。第86頁(yè)/共120頁(yè)第八十六頁(yè)，共120頁(yè)。配制細(xì)胞生長(zhǎng)最適合的培養(yǎng)基 常用(chn yn)維持液和生長(zhǎng)液 Eagle、RPM1640,DEME等作為維持液，加入牛血清為生長(zhǎng)液。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境 影響細(xì)胞培養(yǎng)的主要因素有:CO2、溶氧(DO)、溫度、pH值、葡萄糖、氨、乳酸、甲基乙二醛(MG)、培養(yǎng)基成分等。第87頁(yè)/共120頁(yè)第八十七頁(yè)，共120頁(yè)。 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境 最適CO2水平為4%10%， 溶氧維持在20%50%， 溫度大多數(shù)在37， pH值在7.07.4之間。 控制細(xì)菌污染，加入青霉素、鏈霉素 培養(yǎng)時(shí)間24天。 葡萄糖是細(xì)胞培

39、養(yǎng)過程中主要(zhyo)的能量來(lái)源，必須維持在一定水平。第88頁(yè)/共120頁(yè)第八十八頁(yè)，共120頁(yè)。4.1.3 疫苗的滅活原則：充分破壞疫苗的毒力，盡量減少疫苗免疫力損失。0.20.4的甲醛或酚溶液。4.1.4 疫苗的純化去除存在的動(dòng)物組織，降低接種不良反應(yīng)。4.1.5 凍干(dn n) 升華，不使疫苗融解。疫苗穩(wěn)定性提高1倍以上。第89頁(yè)/共120頁(yè)第八十九頁(yè)，共120頁(yè)。4.2 細(xì)菌類疫苗和類毒素的一般(ybn)制造方法 細(xì)菌類疫苗(ymio)和類毒素均由細(xì)菌培養(yǎng)開始， 制備的主要程序相似。 細(xì)菌類疫苗(ymio)對(duì)菌體進(jìn)一步加工 類毒素對(duì)細(xì)菌分泌的外毒素加工第90頁(yè)/共120頁(yè)第九十頁(yè)，

40、共120頁(yè)。疫苗和類毒素制備(zhbi)工藝流程第91頁(yè)/共120頁(yè)第九十一頁(yè)，共120頁(yè)。4.2.1 菌種的選擇(xunz)抗原性典型形態(tài)，培養(yǎng)特性和理化特性易于在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)，不產(chǎn)生(chnshng)毒素培養(yǎng)過程中毒性小或無(wú)毒力回復(fù)制備毒素時(shí)澤培養(yǎng)過程中產(chǎn)生(chnshng)大量的典型毒素第92頁(yè)/共120頁(yè)第九十二頁(yè)，共120頁(yè)。4.2.2培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)要求碳、氮源和無(wú)機(jī)鹽等必需外，有時(shí)(yush)需添加生長(zhǎng)因子。結(jié)核桿菌以甘油為碳源，百日咳桿菌需要谷氨酸，胱氨酸為氮源。4.2.3 培養(yǎng)條件控制 氧分壓、溫度、pH、避光4.2.4 殺菌徹底殺死細(xì)菌不影響防病效力4.2.5 稀釋、分裝和

41、凍干含防腐劑的NS稀釋，無(wú)菌分裝。第93頁(yè)/共120頁(yè)第九十三頁(yè)，共120頁(yè)。4.3 生物制品(shn w zh pn)的分包裝 4.3.1 分裝 分裝前，檢定合格，標(biāo)簽完整，明確。 防止錯(cuò)批，混批。 無(wú)菌操作，實(shí)際裝量多于標(biāo)簽示量。 4.3.2 包裝 破漏檢查。 載名名稱(mngchng)、批號(hào)、亞批號(hào)、有效期等。第94頁(yè)/共120頁(yè)第九十四頁(yè)，共120頁(yè)。第五節(jié) 重要生物制品(shn w zh pn)的制備 乙型肝炎疫苗的制備 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）屬嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae）。 HBV的發(fā)現(xiàn)源于表面抗原的研究。 1963年Blum

42、berg首先在澳大利亞土著人血清中發(fā)現(xiàn)一種新抗原，稱為澳大利亞抗原（Australia antigen）；直至1968年確定這種抗原與血清型肝炎密切相關(guān)，稱為肝炎相關(guān)抗原（hepatitis associated antigen，HAA）；1970年D.S. Dane在肝炎患者血清中發(fā)現(xiàn)具有傳染性的顆粒，即Dane顆粒（Danes particle）。從而HBV被確認(rèn)。 HBV是乙型肝炎病原體，主要經(jīng)輸血(sh xu)、注射、性行為和母嬰傳播。起病徐緩，部分患者可轉(zhuǎn)為慢性，少數(shù)還可導(dǎo)致肝硬化和肝癌。第95頁(yè)/共120頁(yè)第九十五頁(yè)，共120頁(yè)。乙肝病毒發(fā)病(f bng)區(qū)域第96頁(yè)/共120頁(yè)第

43、九十六頁(yè)，共120頁(yè)。乙型肝炎病毒(bngd)形態(tài)與結(jié)構(gòu) 完整的HBV顆粒亦稱Dane顆粒，直徑為42nm，具有雙層核殼結(jié)構(gòu)：核心顆粒：直徑為28nm。 顆粒內(nèi)部(nib)：DNA和DNA多聚酶。 顆粒表面（內(nèi)衣殼）：含有HBcAg 和HBeAg 。外殼（包膜）：厚7nm。 脂質(zhì)雙層：含有HBsAg、PHSAr 和PreSAg蛋白質(zhì)第97頁(yè)/共120頁(yè)第九十七頁(yè)，共120頁(yè)。乙肝病毒傳染(chunrn)途徑第98頁(yè)/共120頁(yè)第九十八頁(yè)，共120頁(yè)。乙肝病毒檢測(cè)(jin c)第99頁(yè)/共120頁(yè)第九十九頁(yè)，共120頁(yè)。HBV感染血清(xuqng)標(biāo)志及其臨床意義HBsAgHBeAg抗HBc 抗

44、HBe抗HBs結(jié) 果 解 釋IgMIgG-+感染過HBV或接種過乙肝疫苗,有免疫力+-/+-肝功正常為無(wú)癥狀攜帶者;肝功異常為正患乙肝;+-+-（小三陽(yáng)）正患乙肝,肝炎趨向好轉(zhuǎn)，有傳染性+/-+-正患肝炎,或趨于恢復(fù)，有傳染性+/-（大三陽(yáng)）正患乙肝,病毒復(fù)制,傳染性強(qiáng)-+/-+乙型肝炎恢復(fù)期第100頁(yè)/共120頁(yè)第一百頁(yè)，共120頁(yè)。乙肝疫苗的制備(zhbi)血源疫苗 特點(diǎn): (1)血源取得困難; (2)疫苗(ymio)需經(jīng)安全試驗(yàn),故費(fèi)用大,生產(chǎn)周期達(dá)65周. (3)現(xiàn)已淘汰。第101頁(yè)/共120頁(yè)第一百零一頁(yè)，共120頁(yè)。乙肝疫苗的制備人工合成(rn n h chn)多肽疫苗 工藝過程:

45、人工合成HBsAg的P25多肽,并在124與137位半胱氨酸殘基之間引入-S-S-,使成環(huán)狀多肽,用其免疫動(dòng)物后,50%出現(xiàn)抗體應(yīng)答。 特點(diǎn):純凈,不會(huì)污染其他病毒,無(wú)傳染性,原材料來(lái)源(liyun)方便,但目前生產(chǎn)成本高,難以大量生產(chǎn)。第102頁(yè)/共120頁(yè)第一百零二頁(yè)，共120頁(yè)。乙肝疫苗的制備(zhbi)基因工程疫苗工藝路線:(1) 將HBV的DNA片段插入到質(zhì)粒并引入到E.coli中,使其復(fù)制表達(dá)抗原物質(zhì)。(2) 將HBV的DNA片段插入到牛痘病毒,再由此病毒重組體感染細(xì)胞,可分泌HBsAg。(3)用一含HbsAg的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化中國(guó)倉(cāng)鼠(cn sh)卵巢細(xì)胞(CHO),在該細(xì)胞中表達(dá)Hbs

46、Ag蛋白,釋放于培養(yǎng)液中,從培養(yǎng)液中提純抗原蛋白。第103頁(yè)/共120頁(yè)第一百零三頁(yè)，共120頁(yè)。 曾研究過用真核和原核細(xì)胞作為表達(dá)宿主，包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞、酵母、細(xì)菌和病毒(bngd)等。 目前大規(guī)模生產(chǎn)的表達(dá)系統(tǒng)有釀酒酵母、畢赤酵母和漢遜酵母等基因工程疫苗，其次為CHO細(xì)胞基因工程疫苗，還有HBsAg+PreS2或HBsAg+PreS1+ PreS2（CHO細(xì)胞和酵母表達(dá)系統(tǒng)）。第104頁(yè)/共120頁(yè)第一百零四頁(yè)，共120頁(yè)。第六節(jié) 核酸(h sun)疫苗6.1 概念它是利用基因重組技術(shù)直接將編碼某種抗原蛋白(dnbi)的外源基因（DNA）與質(zhì)粒重組后，直接導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，并通過宿

47、主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)合成抗原蛋白(dnbi)，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白(dnbi)的免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。第105頁(yè)/共120頁(yè)第一百零五頁(yè)，共120頁(yè)。6.2 發(fā)展(fzhn)歷史 1990年Wolff等偶然發(fā)現(xiàn)給小鼠肌肉注射外源性重組質(zhì)粒后，質(zhì)粒被攝取并能在體內(nèi)至少兩個(gè)月穩(wěn)定地表達(dá)所編碼蛋白。 1991年Willams等發(fā)現(xiàn)外源基因輸入體內(nèi)的表達(dá)產(chǎn)物可誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答。 1992年Tang等將表達(dá)人生長(zhǎng)激素的基因質(zhì)粒DNA導(dǎo)入小鼠皮內(nèi)，小鼠產(chǎn)生特異性抗體，從而提出了基因免疫的概念。 1993年Ulmer等證實(shí)小鼠肌肉注射含有編碼甲型流感病毒核蛋白（NP）的重組質(zhì)粒后，可有效地保

48、護(hù)小鼠抗不同亞型、分離時(shí)間相隔34年的流感病毒的攻擊。隨后的大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都說明在合適的條件下，DNA接種后既能產(chǎn)生細(xì)胞免疫又能引起體液(ty)免疫。 1994年在日內(nèi)瓦召開的專題會(huì)議上將這種疫苗定名為核酸疫苗。核酸疫苗的出現(xiàn)與發(fā)展是疫苗發(fā)展史上的第三次革命。第106頁(yè)/共120頁(yè)第一百零六頁(yè)，共120頁(yè)。6.3 DNA疫苗表達(dá)(biod)抗原VIII III IV12gene(DNA)RNAantigen(protein)u基因指導(dǎo)其編碼抗原的產(chǎn)生u抗原激活免疫(miny)反應(yīng)u產(chǎn)生抗體u細(xì)胞免疫(miny)第107頁(yè)/共120頁(yè)第一百零七頁(yè)，共120頁(yè)。6.4 DNA疫苗(ymio)用于基因治療ex vivoin vivo1) purification of target cells2) gene transfer3) re-infusion of modified