第二章生物安全防護

1、1姚振江姚振江流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學系流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學系廣東藥學院廣東藥學院2以前的實驗室.現(xiàn)在的實驗室對個人防護有了新的要求.3生物安全概要生物安全概要簡介實驗室內(nèi)感染生物危害分類感染/生物危害控制溢出響應生物醫(yī)學廢棄物處理總結4什么是生物安全什么是生物安全? ?從業(yè)人員處理生物危害材料時的措施，以避免感染自己、他人或環(huán)境達到此目的主要通過：工程學控制行政管理控制操作與規(guī)程個體防護設備5什么是生物危害什么是生物危害?例如：病毒、細菌、真菌和寄生蟲以及他們的毒素血液和體液, 還有人和動物的組織 變異的細胞系和一些特定類型的核酸 是由生物或者此種生物產(chǎn)生的物質(zhì)引起的對人、是由生物或者此種生物產(chǎn)生的

2、物質(zhì)引起的對人、動物或環(huán)境具有潛在威脅動物或環(huán)境具有潛在威脅6為什么我們關注生物危害物質(zhì)？為什么我們關注生物危害物質(zhì)？可能獲得實驗室感染可能獲得實驗室感染 (LAI)環(huán)境污染環(huán)境污染造成研究的污染造成研究的污染公眾知曉公眾知曉7實驗室感染實驗室感染傳播途徑傳播途徑易感宿主易感宿主感染源感染源經(jīng)皮接種吸入氣溶膠粘膜接觸食入培養(yǎng)物和儲存物研究的動物標本免疫系統(tǒng)免疫狀況年齡8只有只有20% 可查到原因可查到原因80% 是由人為的錯誤造成的20% 是由于設備故障造成的排在前排在前4位的導致感染的事故位的導致感染的事故溢出或濺出注射器及針尖銳的物體，碎玻璃動物或體外寄生蟲的抓傷或咬傷實驗室感染實驗室感染

3、9實驗室感染實驗室感染誰什么哪里何時如何研究者SARS臺灣2003年12月微生物學家西尼羅病毒美國2002年8月劃傷實驗室工作人員流腦美國2000年氣溶膠?實驗室工作人員牛痘病毒歐洲2002年接觸1019791999年間實驗室相關感染（年間實驗室相關感染（LAI）的統(tǒng)計）的統(tǒng)計實驗室感染實驗室感染11暴露的風險暴露的風險有關的病原體體液的類型暴露的途徑暴露的持續(xù)時間暴露過程中的血液量此次暴露病毒的濃度個人保護設備使用12如果發(fā)生了暴露或可能發(fā)生了暴露如果發(fā)生了暴露或可能發(fā)生了暴露開始急救通知你的管理者或指定的人向醫(yī)院的急診部門或大學的衛(wèi)生服務部門報告向職業(yè)衛(wèi)生、傷殘和死亡辦公室報告（電話或網(wǎng)絡

4、）13全面預防全面預防預防血傳病原體傳播的最簡單的行之有效的方法預防血傳病原體傳播的最簡單的行之有效的方法 包括包括:教育教育洗手洗手穿防護設備穿防護設備使用安全的工作規(guī)程使用安全的工作規(guī)程如果不能保證樣品的非感染性，按照感染性樣品處理如果不能保證樣品的非感染性，按照感染性樣品處理If samples cannot be guaranteed non-infective treat as infectious!14生物危害的分類生物危害的分類常見病原體非傳統(tǒng)的病原體重組 DNA組織培養(yǎng)動物工作解剖的標本15BSL 4BSL 3BSL 2BSL 1_水平按箭頭方向由低到高水平按箭頭方向由低到高

5、微生物對人、動物、植物和微生物對人、動物、植物和/或環(huán)境的危險性或環(huán)境的危險性程序和設備需求程序和設備需求 圍堵策略水平需求圍堵策略水平需求 對人員、環(huán)境和社區(qū)的保護程度對人員、環(huán)境和社區(qū)的保護程度生物危害的等級生物危害的等級16危險危險分組分組個體危險個體危險公眾危險公眾危險遏制遏制例子例子1LowLowLevel 1大腸桿菌 細桿菌2ModerateLimitedLevel 2 大腸桿菌 0157:H7, 鏈球菌、沙門氏菌、腺病毒、肝炎病毒A、B、C，流感，麻疹。3HighLowLevel 3 炭疽桿菌，結核分支桿菌，漢坦病毒，HIV，黃熱病度4HighHighLevel 4 拉沙病毒,

6、埃博拉病毒,馬爾堡病毒Unlikely to cause disease in healthy workers or animalsRarely cause serious human or animal diseaseMay cause serious diseaseLikely to cause very serious disease常見病原體的等級常見病原體的等級17不常見的病原體不常見的病原體p傳播性的海綿體腦病阮病毒疾??；致死性神經(jīng)變傳播性的海綿體腦病阮病毒疾?。恢滤佬陨窠?jīng)變性情況性情況庫賈氏病庫賈氏病, , 新型克雅氏病新型克雅氏病, , 瘋牛病瘋牛病, ,綿羊瘙癢綿羊瘙癢病，慢

7、性消耗性疾病。病，慢性消耗性疾病。p對通常的滅活病毒的破壞方法產(chǎn)生抗性對通常的滅活病毒的破壞方法產(chǎn)生抗性p與危害處理辦公室接觸以評估其需求（防護、程與危害處理辦公室接觸以評估其需求（防護、程序、廢棄物的處理）序、廢棄物的處理）18重組重組DNA危險級別依賴于DNA的來源、載體及宿主 生物安全委員會將幫助研究者作出這方面的判斷遺傳工程 = 在體外將遺傳物質(zhì)從一個細胞參入到另一個細胞19組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)一般可能含有致病微生物的潛在風險一般可能含有致病微生物的潛在風險Level 2人和靈長類的含有支原體的細胞系當使用新的細胞系時要進行詳細的評估其他Level 120動物工作動物工作動物可儲存感染性的

8、微生物（自然的或引進的）等級基于所從事工作的類型對所有從事動物工作的人員都需要進行專門的動物照料培訓所有的工作包括動物的使用必須得到動物委員會的許可21解剖的標本解剖的標本所有的 標本都應考慮其可能存在的感染性微生物考慮標本的類型尤為重要血液, 器官, 組織脊髓, 腦組織來自于感染的病人一般而言，生物2級僅僅依據(jù)于其工作的特性22感染感染/ /生物危害控制生物危害控制工程控制工程控制管理控制管理控制實踐與操作實踐與操作個人防護設備個人防護設備23工程控制工程控制在技術層面上, 通過改變危害的來源以減少 或根除危害的暴露防護:一道 vs二道 防護水平24第一道防護（一級屏障）第一道防護（一級屏障

9、）確保工作人員和直接環(huán)境免受感染性微生物的暴露保護性的外殼 封閉感染性的微生物或動物培養(yǎng)皿, 玻璃罐, 瓶塞等生物安全柜，手套箱和動物籠等裝備 控制的效果取決于防護的完整性控制的效果取決于防護的完整性25第二道防護（二級屏障）第二道防護（二級屏障）保護實驗室外的環(huán)境免遭暴露包括實驗室設計和規(guī)章制度26生物安全防護水平生物安全防護水平防護水平與危險水平相似生物安全委員會將對研究提案進行評估以確保防護水平恰當。一級 二級 三級 四級27一級水平一級水平 最基本的實驗室不需要特別的設計特性不需要生物安全柜可在開放的實驗臺上進行工作28二級水平二級水平 具有生物危害2級的臨床、診斷、研究和教學部門如果

10、具有氣溶膠或濺出的潛在風險，需要一級或二級生物安全柜必須制定處理溢出的應急方案使用權應加以控制29專門的設計和建造一級屏障保護個體二級屏障保護環(huán)境所有工作人員必須進行專門的培訓：病原微生物的使用，個人防護設備，設備、廢棄物處理，還有實踐與操作三級水平三級水平 型型(全密封型全密封型)30四級水平四級水平在一個國家一般只有一個設計規(guī)范異常的嚴格，工作人員完全與感染性材料隔離313233生物安全柜生物安全柜對生物病原物理防護的有效方法，尤其當產(chǎn)生氣溶膠時。高效分子空氣過濾器能以99.97%的效率去除顆粒（最小 0.3微米）有三個主要級別的安全柜（ I, II, III ） 能提供不同水平的保護。3

11、4在生物安全柜內(nèi)安全操作在生物安全柜內(nèi)安全操作使用前使用前:確保生物安全柜經(jīng)過檢驗關閉紫外燈，打開熒光燈用適宜的消毒劑消毒工作臺面將最基本的條目放入安全柜在工作之前，讓排風機運轉 5-10 分鐘35使用中使用中:確保材料和器材放置在接近安全柜內(nèi)的后部，尤其是產(chǎn)生氣溶膠的設備，不要阻擋通風口。使用技術減少飛濺和氣溶膠的產(chǎn)生。總的工作流程應該是從清潔區(qū)域到污染區(qū)域。減少運動以免阻礙氣流在生物安全柜內(nèi)打開火焰存在著爭議。在生物安全柜內(nèi)安全操作在生物安全柜內(nèi)安全操作36使用后使用后:保持排風機工作至少5分鐘以清潔安全柜移走和消毒用過的器材和材料消毒安全柜臺面關閉排風機和熒光燈，打開紫外燈。在生物安全柜

12、內(nèi)安全操作在生物安全柜內(nèi)安全操作37保養(yǎng)保養(yǎng):2次/天 -擦拭工作臺面1次/周 擦拭紫外燈1次/月 擦拭所有的垂直面1次/年 紫外燈強度驗證 - 用甲醛氣體去除沾染 (ORM)- 認證 (ORM)在生物安全柜內(nèi)安全操作在生物安全柜內(nèi)安全操作38行政管理控制行政管理控制危險評估醫(yī)學監(jiān)測培訓/教育資源檢查符號 & 標志根據(jù)程序、信息和方法將暴露危險降至最低39風險評估風險評估確定防護的種類,方法和所需的安全設備使用者的職責, 能從ORM得到的幫助考慮的方面有:實驗設計,方法,個人的經(jīng)驗和知識情況等http:/www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl/lbg-ldmbl

13、/pdf/lbg-3e-draft.pdf *行政管理控制行政管理控制40醫(yī)學監(jiān)測醫(yī)學監(jiān)測 用醫(yī)學方法監(jiān)測環(huán)境污染對人類健康的影響，觀察人群健康水平和人體對環(huán)境污染的生物學效應。培訓培訓 & & 教育教育實驗室專門的政策和規(guī)程生物安全培訓行政管理控制行政管理控制41檢查檢查日常的自查生物安全檢查清單此外, 檢查實驗室以確保其按照規(guī)程或 指導方針工作并提供反饋意見行政管理控制行政管理控制42標記標記 & & 標簽標簽生物危害標記必須粘貼在使用生物危害材料的實驗室的門上生物危害標簽應貼在使用生物病原的容器、設備和儲存裝置上行政管理控制行政管理控制43實踐和規(guī)程實踐和規(guī)程總的安全指導方針好的微生物學

14、實踐洗手專門的規(guī)程離心機注射器、針頭和其他的尖銳物移液管混勻器、研磨器、超聲破碎儀、冷凍真空干燥器接種環(huán)冷凍切片機44一般實驗室安全指導方針一般實驗室安全指導方針基本的常識,你必須了解你所面對的實驗室的危險，并且經(jīng)過正確的培訓以便處理這些危險。最基本的是知道所有的實驗危險舉出5個例子?b i o s a f et y使用移液管和移液器使用接種環(huán)分離血清打開安瓶使用離心機45良好的微生物實踐良好的微生物實踐 (GMP) (GMP)基本的使用標準適用于所有的微生物學實驗工作目的預防實驗室人員和環(huán)境被污染預防實驗或樣本被污染無菌操作、減少氣溶膠產(chǎn)生、控制污染、個人防護、應急反應。46洗手洗手預防感染

15、的單純有效的方法之一如果經(jīng)常正確的執(zhí)行如果經(jīng)常正確的執(zhí)行何時洗手？開始任何操作之前離開實驗室之前當手有明顯的污物時在安全柜內(nèi)完成任何實驗之前和之后每次脫掉手套時在觸及臉和嘴之前下班時Level 1 lab - a non antiseptic soap can be usedLevel 2 lab - requires antiseptic hand washing solutions47安全使用離心機安全使用離心機使用前裂紋？ 過滿？ 平衡？蓋子或塞子安置正確？轉速能達到？使用可封閉的轉子 使用后離心完全停止？溢出或滲漏？使氣溶膠沉降（30分鐘）or 在生物安全柜內(nèi)打開48注射劑及針注射劑及

16、針盡可能避免使用在生物安全柜內(nèi)完成感染性材料的操作使用注射器時小心抽吸保護從塞子退出的針不要弄彎、切斷或翻新針處理所有使用過的針和注射器，將其放入黃色的尖銳物體盛放器內(nèi)49移液管移液管禁用嘴吸移液管所有的生物危害材料的移液管都應在生物安全柜內(nèi)使用。不要使液體溢出，使用移液管裝置。避免飛濺，沿管壁將液體慢慢注入試管或瓶內(nèi)不要用抽-吸混勻溶液?？稍俣仁褂玫囊埔汗軕椒胖迷谝严镜臏\盤上50混勻器、研磨器、超聲破碎器和冷凍干燥器混勻器、研磨器、超聲破碎器和冷凍干燥器盡可能地在BSC內(nèi)操作，再打開前靜置5分鐘以使氣溶膠沉降。安全地混勻 不要用玻璃混勻罐 使用后立即清除污染冷凍真空干燥器 使用玻璃制造

17、的真空部件時，確保使用前無損壞。 使用后所有的表面都要消毒 盡可能使用真空蒸發(fā)套51接種環(huán)接種環(huán)在開放的火焰上滅菌可能產(chǎn)生含有活微生物的氣溶膠柄越短，越能減少震動一次性的塑料接種環(huán)是較好的替代52冷凍干燥器冷凍干燥器在準備冰凍切片時戴手套，當使用冷凍干燥器時戴厚手套。經(jīng)常性的去污 (70%乙醇or 專門的消毒劑)防備和上鎖!53個體防護設備個體防護設備個體防護設備是非常重要的防護屏障，也是最后一道防護線監(jiān)督者和使用者的職責就是確保使用個體防護設備監(jiān)督者和使用者的職責就是確保使用個體防護設備護目鏡手套實驗室外衣 鞋 54個體防護設備個體防護設備考慮的標準阻斷暴露的途徑提供保護的級別容易使用只有當

18、正確的選擇、適合、小心使用和個體培訓才能產(chǎn)生效果確保離開實驗室前脫下個體防護設備55個體防護設備個體防護設備鞋襪鞋襪應該穿包裹腳趾的鞋，在一些較高級防護的實驗室和動物設施部門穿靴子。實驗室外衣實驗室外衣長袖達膝的外衣有彈性的袖口后背系帶的長大衣定期清洗56個體防護設備個體防護設備手套手套對于從事生物病原的人使用乳膠、腈、乙烯樹脂材料的手套測驗的手套不應再用，實用的手套能消毒再用，如果它們沒有變形的征兆。考慮彈性和手掌的長度雙層手套危險處理辦公室對那些具有過敏的人提供幫助，找到替換材質(zhì)的手套。 在公共場所不要帶實驗手套57個體防護設備個體防護設備眼和臉防護眼和臉防護護目鏡、安全眼鏡可以保護眼睛面罩可以保護面部皮膚呼吸罩呼吸罩58溢出溢出溢出反應不同主要基于： 溢出的是什么？ 溢出多少？ 在哪里溢出的? 對環(huán)境潛在的風險是什么？ 溢出物應該被立即清理（除非產(chǎn)生了氣溶膠），確保正確的去除污染方法確保恰當?shù)氖褂脗€體防護設備，清除設備容易使用59溢出溢出 一般清理一般清理用吸收性物質(zhì)蓋住溢出區(qū)域用恰當?shù)南緞?0%漂白劑）浸泡溢出區(qū)