ISO15189實驗室認可性能驗證方案說明

1、. .PAGE9 / NUMPAGES9醫(yī)學(xué)實驗室ISO 15189認可性能驗證實驗方案為了滿足目前醫(yī)學(xué)實驗室認可的需求保證實驗室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，特制定本方案。適用于強生VITROS產(chǎn)品的試驗項目的性能驗證，包括V250/V350/V950/FS5.1/V3600/V5600上所能開展的所有定性檢測項目。本方案從準(zhǔn)確度、精密度、參考圍、線性圍以與方法學(xué)比對5個方面對各個試驗項目進行評價。精密度（Precision）：精密度是指在規(guī)定條件下所獲得的檢測結(jié)果的接近程度，表示測定結(jié)果中隨機誤差大小程度的指標(biāo)。精密度通常用不精密度表示。可以分別評價連續(xù)精密度（批精密度）、重復(fù)性不精密度（中間精密度，

2、包括批間、日間精密度等）和再現(xiàn)性精密度。本方案采用批和天間兩種方法對各個試驗項目的精密度進行評價。全部實驗過程使用同批號試劑和質(zhì)控品，并且保證檢測當(dāng)日質(zhì)控在控。批精密度（連續(xù)精密度）：方法：在檢測患者標(biāo)本過程中，連續(xù)運行高低水平質(zhì)控品各20次，記錄檢測結(jié)果。計算批精密度的CV值和SD值。結(jié)果評價（1）廠家評價標(biāo)準(zhǔn)：計算精密度指數(shù)=驗證SD/廠商SD，精密度指數(shù)要求小于等于1，或者實測CV小于等于廠家要求的CV，兩者符合其一即可。具體見精密度評價表格。 （2）按照國際推薦標(biāo)準(zhǔn)：批精密度應(yīng)在CLIA88允許誤差的1/4以，見美國CLIA88能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求。 2、天間精密度（中間精密度）

3、：方法：同樣使用兩個水平的質(zhì)控品，若需復(fù)溶凍干質(zhì)控品做實驗，要注意選擇產(chǎn)品的穩(wěn)定性和瓶間差。要嚴格控制每次復(fù)溶凍干品時的操作手法。連續(xù)測試20天，每天檢測1次。在次過程中不能更換試劑批號與質(zhì)控品批號，是否需要重新定標(biāo)則取決于實驗室。測試完成后記錄檢測結(jié)果。結(jié)果評價（1）廠家評價標(biāo)準(zhǔn): 計算天間的SD與CV值，并計算精密度指數(shù)=驗證SD/廠商SD。精密度指數(shù)要求小于等于1，或者實測CV小于等于廠家要求的CV，兩者符合其一即可。具體見精密度評價表格。 （2）按照國際推薦標(biāo)準(zhǔn)：批精密度應(yīng)在CLIA88允許誤差的1/3以，見美國CLIA88能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求。二、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度(accuracy

4、)指檢測結(jié)果與被測量物真值之間的接近程度。是分析測量圍、分析靈敏度以與生物參考區(qū)間評價的基礎(chǔ)。準(zhǔn)確度的評價方法很多，比如檢測定值參考物質(zhì)，同參考方法進行比對，同有溯源性的檢測系統(tǒng)進行方法學(xué)比對，衛(wèi)生部臨檢中心質(zhì)評的匯報結(jié)果均可以作為評價準(zhǔn)確性的方法之一。本方案采用測定定值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的方法來評價各個檢測項目的準(zhǔn)確度。定值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用廠家定值標(biāo)準(zhǔn)品。方法：試驗期間保證機器狀態(tài)正常，保證試驗當(dāng)日室質(zhì)控在控。按廠家要求準(zhǔn)備各個項目的新批號定標(biāo)品（要與定標(biāo)時使用的定標(biāo)品批號不同）各一套，按照標(biāo)準(zhǔn)復(fù)溶。記錄該新批號定標(biāo)品的定值。在設(shè)備上檢測各個定標(biāo)品（多水平）的相關(guān)項目，每個水平重復(fù)2次，記錄檢測結(jié)果，將檢

5、測結(jié)果錄入準(zhǔn)確度評價表格。結(jié)果評價：廠家標(biāo)準(zhǔn)： 按照各定標(biāo)品各水平的定值和不確定度（廠家提供），來確定準(zhǔn)確度的偏倚圍。計算實測均值的各項目各水平定標(biāo)品的偏倚，與偏倚圍相比較，來判斷偏倚是否可以接受。詳見準(zhǔn)確度評價表，實測的均值如果落在該限度，則為其準(zhǔn)確度認為可被接受。按照國際推薦標(biāo)準(zhǔn)：準(zhǔn)確度偏倚應(yīng)該在CLIA88允許誤差的1/2以，見美國CLIA88能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求。參考圍驗證參考 NCCLSC28一A2文件，本方案僅對廠家提供的或者實驗室正在使用的各個項目的參考圍進行驗證。方法：（1）選擇20個能夠代表實驗室的健康總體的標(biāo)本。 （2）保證試驗系統(tǒng)運行正常，依照標(biāo)準(zhǔn)操作程序檢測標(biāo)本。

6、（3）運行該20份標(biāo)本，記錄結(jié)果，將結(jié)果填入?yún)⒖紖^(qū)間驗證表格。結(jié)果評價如果20個參考個體中不超過2例的檢測值在驗證的參考限之外，廠商或提供參考區(qū)間的實驗室報告的95%參考區(qū)間可以接受。如果3例以上超出界限，再選擇20個參考個體進行驗證，若少于或等于2個觀測值超過原始參考值，則可接受，若還有3個超出參考限，需要重新檢查各種條件，決定是否建立自己的參考區(qū)間。線性圍分析測量圍即定量檢測項目的線性圍，是整個檢測系統(tǒng)（包括儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、操作程序、檢驗人員等）對應(yīng)于系列分析濃度的儀器最終輸出的信號間是否呈恒定比例的性能，是一個很重要的儀器性能分析指標(biāo)。本實驗通過測定不同配比比例的高低值新鮮患

7、者標(biāo)本，以驗證實測值和理論值的線性關(guān)系，來評估每個檢測項目的線性圍。方法：實驗室人員必須十分熟悉儀器的操作、質(zhì)量控制和定標(biāo)方法，以與正確的收集樣本。試驗期間保證儀器狀態(tài)良好下，質(zhì)控在控。全部實驗數(shù)據(jù)盡可能在較短的時間收集，如可能，單個分析試驗最好在一天做完。用于驗證線性圍的標(biāo)本類型應(yīng)與臨床測試所用的標(biāo)本類型一樣或相類似，所有標(biāo)本應(yīng)不含廠家所標(biāo)定的干擾因素（如溶血、黃疸、脂血等）。如果上述條件不可避免，則應(yīng)在最后的報告中注明在評價實驗中所用的標(biāo)本處理方法或基質(zhì)類型。注意：收集的高濃度標(biāo)本應(yīng)盡可能的接近線性圍高限。按照線性評價表格要求配比標(biāo)本。將H 和L 樣品按: 5L 、4L+IH 、3L+2H

8、 、2L十3H 、lL十4H 、5H 關(guān)系各自配制棍合，形成系列評價樣品。難以收集到低限樣品，可收集高值樣品，用相應(yīng)稀釋液作系列不同程度稀釋，形成系列評價樣品。在線性評價表格記錄檢測結(jié)果。結(jié)果評價：將數(shù)據(jù)填入線性評價表格，以X表示各樣品的預(yù)期值，以Y表示各樣品的實測值，得出散點圖。若所有實驗點呈明顯直線趨勢，用直線回歸對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，得直線回歸Y=bX+a，若r20.95，斜率b在1.000.03圍，可直接判斷測定方法在實驗所涉與的濃度圍成線性。五、用患者標(biāo)本進行方法比對與偏倚評估實驗室準(zhǔn)備用一個新的檢測系統(tǒng)或測定方法(或新的試劑盒、新儀器進行病人標(biāo)本測定前，應(yīng)與原有的檢測系統(tǒng)或者公認的參考方

9、法-起檢測一批病人標(biāo)本，從測定結(jié)果間的差異了解新檢測系統(tǒng)或方法引人后的偏倚。如果偏倚不大，或者偏倚量在允許誤差圍，說明兩檢測系統(tǒng)或方法對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，新檢測系統(tǒng)或方法替代原有檢測系統(tǒng)或方法不會對臨床引人明顯偏倚，這樣的實驗稱為方法學(xué)比較實驗。在方法學(xué)比較中，常將新方法稱為實驗方法，與之比較的方法稱為比較方法。試驗方法：各種儀器處于良好的工作狀態(tài)，嚴格按SOP操作。檢驗人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各個環(huán)節(jié)，熟悉評價方案。 在整個實驗中，保持實驗方法和比較方法都處于完整的質(zhì)量控制之下，始終對實驗結(jié)果有校準(zhǔn)措施。實驗時間至少做5天，時間長一些更好，可以客觀反映實際情況。至少做40份病人

10、標(biāo)本，多一點更好。盡可能使50%的實驗標(biāo)本分析物的含量不在參考區(qū)間，各個標(biāo)本分析物含量越寬越好。不要使用對任一方法有干擾的標(biāo)本。每份標(biāo)本應(yīng)有足夠的量，以便使實驗方法和比較方法都能做雙份測定。例如，第l次序號為1 、2.3.4 、5.6 、7 、8 ，第2次序號為8 、7 、6 、5 ， 4 、3 、2.1 。兩方法都按此實驗。應(yīng)在2個小時兩種方法對同批標(biāo)本分別開始實驗，最好使用當(dāng)天采集的標(biāo)本。實驗結(jié)束后，記錄數(shù)據(jù)。保留原始數(shù)據(jù)。結(jié)果評價：不采用已明確有人為誤差的結(jié)果。將所有無明顯誤差的實驗結(jié)果記錄下來。但是，若兩種方法結(jié)果的各自差值大于任一方法的批不精密度，應(yīng)查對標(biāo)本，并重新實驗。若找不出原因

11、，應(yīng)保留數(shù)據(jù)備考。整個實驗一定要有部質(zhì)量控制，失控時結(jié)果必須重做。對實驗數(shù)據(jù)的初步篩查：設(shè)比較方法測定結(jié)果為X 值，實驗方法測定結(jié)果為Y 值。在方法學(xué)比對表格上錄入檢測數(shù)據(jù)，若有40個標(biāo)本，則有 80個 X 和 Y 的結(jié)果。檢查每一方法現(xiàn)份測定值有無離群表現(xiàn)，先計算每一標(biāo)本每一方法成對結(jié)果的差值和差值的均值。以4 倍的各方法差值的均值為判斷限，各方法標(biāo)本的成對差值都應(yīng)在限值，說明雙份測定結(jié)果符合要求。若原數(shù)據(jù)僅40 例病人標(biāo)本的結(jié)果，剔除的數(shù)據(jù)應(yīng)另做實驗補上。若有1 例以上需剔除，應(yīng)檢查原因是標(biāo)本原因，其他數(shù)據(jù)仍可使用。無法找出原因，則保留使用所有數(shù)據(jù)。若最大差異超過臨床允許誤差，應(yīng)從儀器、試

12、劑、方法上尋找原因，停止繼續(xù)實驗。（5）在方法學(xué)比對表格上，以X均值、Y 均值和(Y-X)、X作圖，通過這兩種圖了解線性關(guān)系，即有無明顯離群點，是否呈恒定變異等情況。如果實驗結(jié)果具良好線性關(guān)系，繼續(xù)處理數(shù)據(jù)。（6）X 、Y 關(guān)系實驗點有無離群表現(xiàn)先看圖在無明顯離群點。若無，可作以后的統(tǒng)計；若有，應(yīng)對X 、Y 配對值作離群值計算。將每一個標(biāo)本兩個方法的前后兩個測定值一一對應(yīng)，求出第1 個X 與第1 個Y 的差值和第2 個X 與第2 個Y 的差值，并計算出所有標(biāo)本總的平均差值，以4 倍的平均差值為判斷限值。所有差值都不應(yīng)超出限值。若有，為離群點，僅一點離群點，剔除。有一點以上離群點，需查原因，判斷

13、是否保留數(shù)據(jù)。若原因不清，不能隨意剔除，全部保留作統(tǒng)計分析，或者用一批新標(biāo)本重做評價。凡有剔除的，應(yīng)另用標(biāo)本補做。標(biāo)本分析物含量分布是否適當(dāng)?shù)臋z驗。相關(guān)系數(shù)r 常用來表示兩個變量間互相關(guān)系密切的程度。在直線回歸統(tǒng)計時，除所有實驗點和回歸線間的離散度會影響r 值的大小外，實驗點對應(yīng)的分析物含量分布寬度也會明顯影響r 值的大小。若實驗點過于密集，盡管離散度不大，但r 值偏小。因此，可用r 檢驗X 取值圍是否適當(dāng)。一般要求r 大于或等于0.975 (或r2大于或等于0. 95) ，認為X 圍是適合的。若r 小于0.975時，應(yīng)再多做實驗，擴大數(shù)據(jù)圍。（8）線性回歸統(tǒng)計可用直線回歸分析來估計斜率和截距

14、。數(shù)據(jù)以回歸式Y(jié)=bX十a(chǎn),表示這些數(shù)據(jù)的直線趨.這是以X 方法為準(zhǔn)，Y 方法與之配合的關(guān)系式。式中b 為斜率,a為截距。兩方法理想狀態(tài)的回歸式應(yīng)為Y=X，即b =1 ， a=0。根據(jù)臨床使用要求，可在各個臨床醫(yī)學(xué)決定水平濃度 Xc 處，了解Y 方法引人后相對于X方法的系統(tǒng)誤差(SE) , SE = | (b -1)Xc + a |。（9）以美國CLIA88能力比對檢驗的分析質(zhì)量要求允許誤差的1/2為判斷依據(jù)，由方法學(xué)比較評估的系統(tǒng)誤差(SE)不大于允許誤差，認為系統(tǒng)誤差在可接受水平。備注：1、各個實驗室應(yīng)該根據(jù)自己的實際情況，建立性能驗證的方法和標(biāo)準(zhǔn)。該方法適用于科室所有生化設(shè)備的驗證。2、上述試驗方案可用于強生 Vitros 系列產(chǎn)品，僅供實驗室參考。參考文獻：臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)，仁豐 ，科學(xué)技術(shù)文獻臨床檢驗方法學(xué)評價 ，有業(yè) 秀明，人民衛(wèi)生NCCLS， Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved GuidelineSecond Ed