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文檔簡介
1、1科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊,以便通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人凝血因子醫(yī)用蛋白,其技術(shù)路線如圖:(1)由過程獲得的A為_。(2)在核移植之前,必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核,目的是_。受體應(yīng)選用_期卵母細(xì)胞。(3)進(jìn)行胚胎移植時(shí),代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生_,這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。(4)采用胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆,理論上可獲得無限個轉(zhuǎn)基因綿羊,這是因?yàn)開。答案(1)含目的基因的表達(dá)載體(2)保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細(xì)胞M中期(3)免疫排斥反應(yīng)(4)整合有目的基因的成纖維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)解析(1)依據(jù)圖示,為表達(dá)載體構(gòu)建過
2、程,A為含有目的基因的表達(dá)載體。(2)在核移植前,去掉受體卵母細(xì)胞核的目的是保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細(xì)胞;受體細(xì)胞應(yīng)選用減中期的卵母細(xì)胞。(3)在胚胎移植時(shí),代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本不發(fā)生免疫排斥反應(yīng),這為重組胚胎的存活提供了可能。(4)由于整合有目的基因的成纖維細(xì)胞可以進(jìn)行傳代培養(yǎng),故理論上可獲得無限個轉(zhuǎn)基因綿羊。2某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z),每只小鼠免疫5次,每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(jià)(能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù)),結(jié)果如下圖所示。若要制備雜交瘤細(xì)胞,需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條),并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)
3、的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中,再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合,經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測,得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞。回答下列問題:(1)制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時(shí),所用免疫小鼠的血清抗體效價(jià)需達(dá)到16000以上,則小鼠最少需要經(jīng)過_次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中,最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是_小鼠,理由是_。(2)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后,融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外,可能還有_,體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是_。(3)雜交瘤細(xì)胞中有_個細(xì)胞核,染色體數(shù)目最多是_條。(4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活,原因是_
4、。答案(1)4YY小鼠的血清抗體效價(jià)最高(2)B淋巴細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞相互融合形成的細(xì)胞細(xì)胞融合是隨機(jī)的,且融合率達(dá)不到100%(3)1100(4)不能無限增殖解析本題考查動物單克隆抗體技術(shù)的原理及應(yīng)用。(1)由圖看出,到第4次免疫時(shí),Y和Z的血清抗體效價(jià)已達(dá)到要求,即16000以上,而前3次免疫后,3只小鼠的血清抗體效價(jià)均未達(dá)到要求。從第3次開始,Y小鼠的血清抗體效價(jià)最高,所以Y小鼠最適合用于制備B淋巴細(xì)胞。(2)僅考慮細(xì)胞之間的兩兩融合。該融合體系中有5種類型的細(xì)胞:2種未融合型(B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞),3種融合型(B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞骨
5、髓瘤細(xì)胞),由此可看出細(xì)胞融合具有隨機(jī)性。(3)雜交瘤細(xì)胞是B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的,有1個細(xì)胞核,核內(nèi)染色體數(shù)為4060100。(4)B淋巴細(xì)胞不能無限增殖,所以經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活。3人乳頭狀瘤病毒(HPV)與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān),抗HPV的單克隆抗體可以準(zhǔn)確檢測出HPV,從而及時(shí)監(jiān)控宮頸癌的發(fā)生,以下是以HPV衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體的過程,請據(jù)圖回答:(1)單克隆抗體制備過程中涉及的細(xì)胞工程技術(shù)有_。(2)若要分析雜交瘤細(xì)胞中染色體,可通過_等過程制成裝片,然后在顯微鏡下觀察。雜交瘤細(xì)胞中染色體數(shù)目與普通淋巴細(xì)胞相比具有的特點(diǎn)是_,在HAT培養(yǎng)基上存活的細(xì)胞可能包括
6、_(填下列序號)。無抗體分泌的細(xì)胞抗HPV抗體的分泌細(xì)胞其他無關(guān)抗體的分泌細(xì)胞(3)對于抗體檢測呈_性的雜交克隆應(yīng)盡早進(jìn)行克隆化,克隆化的方法最常用的是有限稀釋法,即稀釋細(xì)胞到310個/mL,每孔加入細(xì)胞稀釋液_mL0.1/(1/10),使每個孔內(nèi)不多于一個細(xì)胞,達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的。(4)由上述過程生產(chǎn)出的單克隆抗體不能直接用于人體,理由是_。(5)科學(xué)家從某些無限增殖細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中分離出了無限增殖調(diào)控基因(prG),該基因能激發(fā)動物細(xì)胞分裂,這為單克隆抗體的制備提供了更多的思路。除本題描述的一種制備單克隆抗體技術(shù)外,請?jiān)俸喴獙懗鲆环N制備單克隆抗體的思路_。答案(1)動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融
7、合(2)解離、漂洗、染色和制片染色體數(shù)目加倍(3)陽0.1(4)小鼠形成的抗體對人體來說是抗原,存在著排異反應(yīng)(5)通過基因工程向漿細(xì)胞中導(dǎo)入prG;利用核移植技術(shù)將漿細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核的無限增殖細(xì)胞中(答對其一即可)解析(2)利用顯微鏡觀察有絲分裂過程中的染色體,需先制作臨時(shí)裝片;雜交瘤細(xì)胞中含有漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的染色體,所以比普通淋巴細(xì)胞的染色體數(shù)目多一倍;在HAT培養(yǎng)基上生存的細(xì)胞均為雜交細(xì)胞,這些雜交細(xì)胞中有分泌HPV抗體的細(xì)胞,有分泌其他抗體的細(xì)胞,也有不能分泌抗體的細(xì)胞。(3)抗體檢驗(yàn)呈陽性,說明該雜交瘤細(xì)胞可產(chǎn)生所需抗體;為保證每個小孔不多于一個細(xì)胞,根據(jù)濃度可推斷加入細(xì)胞稀釋液的量:設(shè)加入細(xì)胞稀釋液的最大量是X,則10個/mLX1個,
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