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文檔簡(jiǎn)介
1、選修三重要知識(shí)點(diǎn)整理第一章 基因工程1.限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)主要從原核生物(用于切割外源DNA,保護(hù)自身)中分離純化出來(lái),識(shí)別序列由6個(gè)核苷酸(或4、5、8個(gè))組成。末端種類(lèi):平末端和黏性末端2.DNA連接酶效率低3.運(yùn)載體 (1)作用:作為運(yùn)載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞內(nèi)。利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。(2)種類(lèi):質(zhì)粒、噬菌體的衍生物和動(dòng)植物病毒等。(3)條件:有一個(gè)或多個(gè)限制酶切位點(diǎn)能自我復(fù)制有標(biāo)記基因(4)一般來(lái)說(shuō),天然載體往往不能滿足人類(lèi)的所有要求,因此在基因工程中,對(duì)某些天然的載體進(jìn)行人工改造。4.基因工程中形成的重組DNA是DNA分子片段的連接,而不是合成DN
2、A分子或轉(zhuǎn)錄合成mRNA的過(guò)程5.DNA連接酶:不需要模板DNA聚合酶:需要模板 DNA復(fù)制時(shí) 都形成磷酸二脂鍵6.基因操作程序:獲取目的基因構(gòu)建表達(dá)載體(核心)導(dǎo)入受體細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與鑒定獲得目的基因(1)基因組文庫(kù)(所有的)部分基因文庫(kù)(部分的),如cDNA文庫(kù)(2)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因原理:DNA復(fù)制 指數(shù)方式增加需要:模板DNA,原料(游離的四種脫氧核苷酸),引物,DNA聚合酶()人工合成(基因較?。┗瘜W(xué)合成:DNA合成儀(已知序列)反轉(zhuǎn)錄法:未知序列構(gòu)建表達(dá)載體(核心):目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因?qū)胧荏w細(xì)胞()植物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法:雙子葉植物、裸子植物的體細(xì)胞或受精卵
3、基因槍法花粉管通道法()動(dòng)物細(xì)胞:顯微注射技術(shù)受體細(xì)胞:受精卵(a含有目的基因表達(dá)所需的物質(zhì);b具有全能性)()微生物細(xì)胞:原核生物(繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少)作為受體細(xì)胞大腸桿菌:Ca處理細(xì)胞(感受態(tài)細(xì)胞)目的基因的檢測(cè)與鑒定)檢測(cè):DNA分子雜交技術(shù)(原理:堿基互補(bǔ)配對(duì))目的基因作探針轉(zhuǎn)錄出mRNA翻譯成蛋白質(zhì):抗原抗體雜交)鑒定:個(gè)體生物學(xué)水平.逆轉(zhuǎn)錄形成的目的基因不含內(nèi)含子原因:mRNA形成時(shí)切掉了內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的RNA內(nèi)含子:能轉(zhuǎn)錄不能翻譯外顯子:能轉(zhuǎn)錄能翻譯真核生物基因編碼區(qū):內(nèi)含子和外顯子原核和真核生物的非編碼區(qū):對(duì)遺傳起調(diào)控作用(啟動(dòng)子和終止子).植物基因工程技術(shù)提高農(nóng)
4、作物的抗逆能力改良農(nóng)作物的品質(zhì)利用植物生產(chǎn)藥物.殺蟲(chóng)的基因:Bt毒蛋白基因(我國(guó)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉)、蛋白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物凝集素基因10.病原微生物:病毒、真菌、細(xì)菌等。11.轉(zhuǎn)基因玉米:賴氨酸含量比對(duì)照提高30%12.動(dòng)物基因工程:導(dǎo)入生長(zhǎng)素基因-提高生長(zhǎng)速度導(dǎo)入腸乳糖酶基因-改善畜產(chǎn)品品質(zhì)生產(chǎn)藥物-乳腺生物反應(yīng)器或乳房生物反應(yīng)器優(yōu)點(diǎn):易提取、產(chǎn)量高、質(zhì)量好、成本低轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體優(yōu)點(diǎn):抑制抗原基因的表達(dá)、或除去抗原決定的基因、無(wú)免疫排斥反應(yīng)13.工程菌第一種基因工程藥物-重組人胰島素細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。我國(guó)生產(chǎn):白細(xì)胞介素-2、干擾素(糖蛋白,為我國(guó)第一個(gè)
5、批量生產(chǎn)的藥物)、乙肝疫苗14.體外基因治療和體內(nèi)基因治療:都處于初期臨床試驗(yàn)階段15.基因工程是在兩個(gè)物種間轉(zhuǎn)移基因,克服了兩個(gè)物種間由于生殖隔離不能進(jìn)行基因交流的障礙,能定向培育生物新品種。16.基因重組:1)有性生殖時(shí):非等位基因的重新組合 2)DNA的拼接技術(shù)-基因工程17.基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)18.蛋白質(zhì)工程:第二代基因工程基因修飾或基因合成第二章 細(xì)胞工程1.植物的組織培養(yǎng)離體的組織、器官或細(xì)胞 愈傷組織 植物體2.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)生殖方式:無(wú)性生殖脫分化再分化外植體固體培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng):蔗糖、礦質(zhì)元素(無(wú)機(jī)鹽)激素:生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素(也有赤霉素)注:愈傷組織
6、之后需要給予光照條件原理:植物細(xì)胞的全能性去除細(xì)胞壁的方法:酶解法(纖維素酶和果膠酶)誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法:物理法:離心、振動(dòng)和電激化學(xué)法:聚乙二醇(PEG)生長(zhǎng)素含量細(xì)胞分裂素:誘導(dǎo)脫分化和根原基形成生長(zhǎng)素含量細(xì)胞分裂素:誘導(dǎo)再分化和芽原基形成 一、植物細(xì)胞工程雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志:生成新的細(xì)胞壁植物體細(xì)胞雜交的原理:細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性意義:克服不同物種遠(yuǎn)緣雜交的障礙3 植物細(xì)胞工程的應(yīng)用(1)微型繁殖 意義:保持親本優(yōu)良性狀、快速繁殖(2)作物脫毒 取材部位:莖尖、根尖(分生區(qū))(3)人工種子:由胚狀體和人工種皮(營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、殺菌劑)(4)單倍體育種(5)細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)例
7、如:從愈傷組織中提取紫草素二、動(dòng)物細(xì)胞工程(一)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1、過(guò)程:原代培養(yǎng) 幼齡動(dòng)物的組織塊 分散成單個(gè)細(xì)胞 細(xì)胞懸液 細(xì)胞貼壁 接觸抑制胰蛋白酶或膠原蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶?jìng)鞔囵B(yǎng)2、原理:細(xì)胞的增殖10代以內(nèi),保持正常的二倍體核型3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件:無(wú)菌、無(wú)毒 營(yíng)養(yǎng):糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、 無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清(液體培養(yǎng)基)溫度和PH 氣體環(huán)境(CO2、O2 ) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)原理目的結(jié)果培養(yǎng)液成分細(xì)胞增殖細(xì)胞全能性獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白脫毒植株、微型繁殖、人工種子獲得新植株獲取大量細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物無(wú)機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸、葡萄糖、血清液體培養(yǎng)基蔗糖、
8、礦質(zhì)元素、維生素、植物激素、有機(jī)添加劑固體培養(yǎng)基(二)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植(卵母細(xì)胞:減二中期)原理:動(dòng)物細(xì)胞核的全能性(三)動(dòng)物細(xì)胞融合1、誘導(dǎo)方法:聚乙二醇、電激、滅活的病毒2、原理:細(xì)胞膜的流動(dòng)性(四)單克隆抗體1、原理:免疫原理、動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)2、 細(xì)胞類(lèi)型(種)、融合的細(xì)胞類(lèi)型(種)、雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):無(wú)限增殖、產(chǎn)生單一抗體、優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)量大、應(yīng)用:診斷試劑、 治療疾病和運(yùn)載藥物(生物導(dǎo)彈)第三章胚胎工程1.精子的發(fā)生:從初情期-生殖機(jī)能衰退(哺乳動(dòng)物的睪丸的曲細(xì)精管里)1)精原細(xì)胞有絲分裂大量精原細(xì)胞其中部分初級(jí)精母細(xì)胞2)初級(jí)
9、精母細(xì)胞MM四個(gè)單倍體精子細(xì)胞3)變形:形似蝌蚪,分頭頸尾。細(xì)胞核-精子頭部的主要部分高爾基體-精子頭部的頂體中心體-精子的尾部線粒體-聚集在尾的基部形成線粒體鞘其他物質(zhì):濃縮為原生質(zhì)滴,脫落和。2.卵子的發(fā)生 1)場(chǎng)所:卵巢內(nèi),輸卵管中2)時(shí)間:從性別分化到生殖機(jī)能衰退3)過(guò)程:卵原細(xì)胞有絲分裂大量卵原細(xì)胞其中部分初級(jí)卵母細(xì)胞(被卵泡細(xì)胞包圍)形成卵泡減分成熟卵子M:排卵前后完成(進(jìn)入輸卵管),產(chǎn)生1個(gè)極體和1個(gè)次級(jí)卵母細(xì)胞M:精子與卵子結(jié)合時(shí),生成成熟卵子和1個(gè)第二極體4)卵子是否受精的重要標(biāo)志卵黃膜和透明帶的間隙可觀察到兩個(gè)極體3.排卵:卵子從卵泡中排出4.受精場(chǎng)所:輸卵管中1)精子獲能
10、2)卵子準(zhǔn)備:進(jìn)一步成熟,達(dá)到減二中3)過(guò)程頂體反應(yīng),釋放頂體酶,穿越放射冠透明帶反應(yīng)-防止多精入卵的第一道屏障卵黃膜封閉作用-防止多精入卵的第二道屏障入卵后,尾部脫離,核膜破裂,形成雄原核同時(shí)卵子被激活,完成減二分裂,形成雌原核5.卵裂期:透明帶內(nèi)進(jìn)行,胚胎總體積略減小,細(xì)胞行有絲分裂6.桑椹胚(32個(gè)),之前每個(gè)細(xì)胞都具全能性7.囊胚:內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 發(fā)育成各種組織 滋養(yǎng)層 胎膜 胎盤(pán)8.透明帶破裂:孵化9.原腸胚: 內(nèi)細(xì)胞團(tuán)表層細(xì)胞 外胚層(細(xì)胞分化最旺盛) 下方細(xì)胞 內(nèi)胚層 包圍的原腸腔10.體外受精1)卵母細(xì)胞采集和培養(yǎng)促性腺激素處理(小)已屠宰母畜卵卵巢中采集超聲波探測(cè)儀用真空泵吸取2)精子采集和獲能采集:假陰道法手握法電刺激法獲能:培養(yǎng)法化學(xué)誘導(dǎo)法:肝素或鈣離子載體11.胚胎早期培養(yǎng):無(wú)機(jī)鹽 有機(jī)鹽 維生素 激素 氨基酸 核苷酸 血清等12.胚胎移植:1)供受體生殖器官的生理變化相同,相同生理環(huán)境2)處于游離態(tài)3)不發(fā)生免疫排斥4)可與受體子宮正常生理和組織聯(lián)系13.胚胎移植基本程序:1)供受體選擇處理2)配種或人工受精3)胚胎收集,檢查,保存4)移植5)檢查14.胚胎的分割:桑葚胚或囊胚15.胚胎干細(xì)胞(ES或EK):1)特點(diǎn):體積小,細(xì)胞
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