2-1_微生物的實驗室培養(yǎng)ppt課件

1、 巴斯德鵝頸瓶實驗 .專題2 微生物的培育與運用課題1 微生物的實 驗室培育.(一) 概念、特點： 個體難以用肉眼察看的一切微小生物之統(tǒng)稱。微生物包括細菌、病毒、真菌、和少數(shù)藻類等。但有些微生物是肉眼可以看見的，像屬于真菌的蘑菇、靈芝等。 構(gòu)造都相當簡單,個體多數(shù)非常微小.通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才干看到，有的甚至沒有細胞構(gòu)造.且體內(nèi)普通不含有葉綠素.不能進展光協(xié)作用.微生物的類群微生物原核類:真核類非細胞類：細菌、支原體、放線菌、藍藻個體微小、構(gòu)造簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生生物如：草履蟲、變形蟲等病毒、類病毒、朊病毒微生物的共同特點：.細菌細菌：單細胞不分枝

2、的原核微生物。細菌細胞微小而透明，通常用適當染料染色后顯微鏡察看圖1-1 常見的三種細菌典型形狀A(yù).球菌 B.桿菌 C.弧菌.球菌弧菌桿菌.細菌細菌.細菌 *細胞壁構(gòu)造特點：堅韌且有彈性細胞壁有哪些功能？ 固定細胞外形； 維護細胞免受外力的損傷； 阻攔大分子物質(zhì)進人細胞； 使細胞具有致病性及對噬菌體的敏感性。傷寒桿菌細胞壁中含毒素.芽孢 有些細菌在一定的條件下，細胞里面構(gòu)成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜如溫度、水分適宜的時候，芽孢又可以萌生，構(gòu)成一個細菌

3、.菌 落單個或少數(shù)細菌在固體培育基上大量繁衍時，就會構(gòu)成一個肉眼可見的，具有一定形狀構(gòu)造的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要根據(jù)。有鞭毛細菌常構(gòu)成邊緣不規(guī)那么的菌落；具有莢膜的菌落外表較透明，邊緣光滑整齊；有芽孢 的菌落外表枯燥皺褶；有些能產(chǎn)生色素的細菌菌落還顯出艷麗的顏色 。.幾種菌落及其形狀.菌 落細菌的菌落特征因種而異 .細菌的營養(yǎng)類型 根據(jù)細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌autotroph異養(yǎng)菌heterotroph腐生菌寄生菌 大部分病原菌.放線菌1、構(gòu)造：單細胞原核分支狀的菌絲基內(nèi)菌絲、氣生菌絲.鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素

4、微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/3是由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng) 用:.如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形狀構(gòu)造酵母菌和霉菌青霉.生殖腐生生活孢子生殖.病毒的構(gòu)造.病毒 .SARS病毒、 禽流感病毒.朊病毒蛋白質(zhì)病毒.1.培育基內(nèi)所含的根本物質(zhì)(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)無機鹽二培育基.：凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)。無機碳源：CO2；NaHCO3等有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等構(gòu)成細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物異養(yǎng)微生物的能源.概念.來源：.作用：1.微生物的碳源.無機氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是可以為微生物提供N元素的營

5、養(yǎng)物質(zhì)。主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物。2.微生物的氮源.概念：.來源：.作用：3.生長因子.常見的生長因子：.概念：.作用：微生物生長不可短少的微量有機物。酶和核酸的組成成分。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。.(1)特殊營養(yǎng)物質(zhì)- ?如：培育乳酸桿菌需求在培育基中添加維生素(2)pH值如:培育霉菌需酸性、培育細菌需中性或微堿性(3)氧氣的含量如:培育厭氧微生物時需求提供無氧的條件2.培育基內(nèi)所需的其他條件練習生長因子.練習1多項選擇1、以下細菌中，能利用含碳無機物作碳源的是A 光合細菌 B 根瘤菌 C 硝化細菌 D 乳酸菌2、培育大腸桿菌的培育基中，必需含有的碳源和氮源是A 糖、有機

6、酸等 B 二氧化碳、碳酸鹽C 蛋白質(zhì) D 無機氮化物3、以下表達不正確的選項是A 培育基是為微生物的生長繁衍提供營養(yǎng)的基質(zhì)B 液體培育基和固體培育基所含的最根本物質(zhì)不一樣C 微生物在固體培育基上生長時，可以構(gòu)成肉眼可見的單個細菌A.CA.CB.C.(1)按物理形狀分 液體培育基 固體培育基3.分類參與凝固劑如瓊脂.固體培育基：菌落，菌苔.液體培育基：外表生長均勻混濁生長沉淀生長.半固體培育基：無動力 有動力(彌散)(能否運動) .3.分類(2)按用途分 選擇培育基 鑒別培育基-選擇菌種-鑒別菌種.連線以下選擇培育基分別酵母菌、霉菌等真菌：分別金黃色葡萄球菌：分別固氮菌：分別自養(yǎng)型微生物：無氮培

7、育基的培育基不含有機物的培育基高濃度食鹽培育基參與青霉素的培育基.伊紅-美藍培育基金屬光澤深紫色菌落.3.分類(3)按成分分 天然培育基 合成培育基-成分未知，來源有限-成分知.血清中含有：多種蛋白質(zhì)白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等多種金屬離子； 激素；促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。各種生長因子轉(zhuǎn)移蛋白不明成分 人工合成培育基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁衍，還需補充一定量的天然培育基如血清。.三無菌技術(shù)1、獲得純真培育物的關(guān)鍵: 2、無菌技術(shù)包括的四大方面(參看教材15頁)3、消毒與滅菌(1)消毒：概念：運用較為溫暖的物理或化學(xué)方法僅殺死物體外表或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物。包

8、括芽孢和孢子嗎？方法:煮沸消毒法巴氏消毒法:如牛奶的消毒化學(xué)藥劑消毒:酒精、氯氣、石碳酸、煤酚皂溶液等紫外線消毒(不包括芽孢和孢子)防止外來雜菌的入侵.2滅菌概念：運用劇烈的理化要素殺死物體內(nèi)外一切的微生物，包括芽孢和孢子。方法：a 灼燒滅菌 b 干熱滅菌 c 高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌微生物的接種工具 (接種環(huán)、接種針)或其他金屬器具直接在火焰的充分熄滅層灼燒留意適用范圍.干熱滅菌 160170 ；12h能耐高溫的需求堅持枯燥的物品( 玻璃器皿)高壓蒸汽滅菌 100kPa 121 15-30min通常用于培育基的滅菌. 請他判別以下資料或器具能否需求消毒或滅菌。假設(shè)需求，請選擇適宜的方法。1培育細

9、菌用的培育基與培育皿2玻棒、試管、燒瓶和吸管3實驗操作者的雙手4注射器5新穎牛奶6自來水7實驗室的空氣思索.四、實驗操作(一)制備牛肉膏蛋白胨培育基(用于培育細菌)牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏 5.0g蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g瓊脂 20.0g將上述物質(zhì)溶解后，添加自來水，定容至1000mL.1計算、稱量2溶化3調(diào)pH：pH764過濾：這一步可以省去。5分裝：分裝過程中留意不要使培育基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超越三角燒瓶容積的一半為宜。6加塞7包扎操作步驟.8滅菌: 將50ml培育基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸

10、氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121，滅菌1530min。將培育皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160170 下滅菌2h。.倒平板技術(shù)1.將滅過菌的培育皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培育基的錐形瓶，左手撥出棉塞。1234.倒平板技術(shù)2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速經(jīng)過火焰。1234.倒平板技術(shù)12343.用左手的拇指和食指將培育皿翻開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培育基(約1020mL)倒入培育皿，左手立刻蓋上培育皿的皿蓋。.倒平板技術(shù)12344.等待平板冷卻凝固，大約需510min。然后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。. 9倒平板: 待培育基冷卻到50 左右時，在

11、酒精燈附近倒平板。倒平板操作見課本2d后察看平板，無雜菌污染才可用來接種. 10無菌檢查： 將滅菌的培育基放入37的溫室中培育2448小時，以檢查滅菌能否徹底。. 1.培育基滅菌后，需求冷卻到50 左右時，才干用來倒平板。他用什么方法來估計培育基的溫度？ 答：可以用手觸摸盛有培育基的錐形瓶，覺得錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進展倒平板了。問題討論. 2.為什么需求使錐形瓶的瓶口經(jīng)過火焰？ 答：經(jīng)過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基。.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培育基外表的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培育基外表的水分更好地揮發(fā)

12、，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基，呵斥污染。. 4.在倒平板的過程中，假設(shè)不小心將培育基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培育微生物嗎？為什么？ 答：空氣中的微生物能夠在皿蓋與皿底之間的培育基上繁殖，因此最好不要用這個平板培育微生物。.二、實驗操作一制備牛肉膏蛋白胨固體培育基計算稱量溶化滅菌倒平板二純化大腸桿菌接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法三將接種后的培育基和一個未接種的培育基放入37恒溫箱中培育12h和24h后，察看并記錄定容調(diào)PH .三、課題延伸：菌種的保藏1、斜面保藏 暫時保管2、甘油保藏 長期保管練習.倒平板.1.培育基滅菌后，需求冷卻到50 左右時，才干用來倒平板。

13、他用什么方法來估計培育基的溫度？問題討論 答：可以用手觸摸盛有培育基的錐形瓶，覺得錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進展倒平板了。2.為什么需求使錐形瓶的瓶口經(jīng)過火焰？ 答：經(jīng)過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基。.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，假設(shè)不小心將培育基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培育微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培育基外表的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培育基外表的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基，呵斥污染。 答：空氣中的微生物能夠在皿蓋與皿底之間的培育基上繁殖，因此最好不要用這個平

14、板培育微生物。.第四課時.1、平板劃線法.問題討論 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作終了時，依然需求灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上能夠存在的微生物污染培育物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線終了后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而經(jīng)過劃線次數(shù)的添加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線終了后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細菌污染環(huán)境和感染操作者。.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進展劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作

15、第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開場劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開場，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的添加而逐漸減少，最終能得到由單個細菌繁衍而來的菌落。.2.稀釋涂布平板法:(1)系列稀釋操作:.問題討論 涂布平板的一切操作都應(yīng)在火焰附近進展。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進展無菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證“無菌。例如，酒精燈與培育皿的間隔要適宜、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。.涂布平板操作討論:涂布平板的一切操作都應(yīng)在火焰附近進展。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要

16、求，想一想，第2步應(yīng)如何進展無菌操作？提示：應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證“無菌。例如，酒精燈與培育皿的間隔要適宜、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。.前往菌落：單個或少數(shù)細菌在固體培育基上大量繁衍時，就會構(gòu)成一個肉眼可見的，具有一定形狀構(gòu)造的子細胞群體，叫做菌落。不同的細菌的菌落特征不同菌落是鑒定菌種的重要根據(jù)。.(2)碳源可作為碳源的物質(zhì)有:含碳無機物: 、 、 、 含碳有機物：蛋白質(zhì)脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同異養(yǎng)型微生物的碳源為自養(yǎng)型微生物的碳源為碳酸鹽碳酸氫鹽二氧化碳糖類主要含碳有機物有機碳含碳無機物無機碳.(3)氮源可作為氮源的物質(zhì)有:含氮無機物： 、 、 、含

17、氮有機物：蛋白胨牛肉膏尿素前往固氮微生物所利用的氮源是氮氣氨氣硝酸鹽氨鹽氮氣.思索:1)無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培育物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？ 2)消毒和滅菌有何不同？3)為什么消毒牛奶要用巴氏消毒法?4)請他判別以下資料或器具能否需求消毒或滅菌。假設(shè)需求，請選擇適宜的方法。培育細菌用的培育基與培育皿玻棒、試管、燒瓶和吸管實驗操作者的雙手消毒滅菌條件溫和強烈作用范圍物體表面或內(nèi)部一部分,不包括芽孢和孢子物體內(nèi)外所有微生物,包括芽孢和孢子無菌技術(shù)還能有效防止操作者本身被微生物感染。滅菌 滅菌 消毒營養(yǎng)成分不被破壞.?思索1溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一同加熱? 答:加瓊脂的

18、目的是什么?答:可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,減少誤差作為凝固劑.思索2在滅菌前, 用牛皮紙、舊報紙包緊盛有 培育基的錐形瓶的目的是什么？答: 培育皿能否用高壓蒸汽滅菌？答:?在滅菌時能防止水蒸汽凝結(jié)時浸濕棉塞,在取出培育基錐形瓶時也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用不能,由于培育皿要堅持枯燥,應(yīng)該用干熱滅菌.練習2:1.獲得純真培育物的關(guān)鍵是A 將用于微生物培育的器皿.接種器具和培育基等器具進展滅菌B 接種純種細菌C 適宜環(huán)境條件下培育D 防止外來雜菌的入侵2.以下操作與無菌技術(shù)無關(guān)的是A 接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B 接種前用火焰燒灼接種針C 培育在50左右時擱置斜面D 在

19、酒精燈的火焰旁完成3.外科手術(shù)器械和罐頭食品的處置,要以可以殺死什么為規(guī)范A 球菌 B 桿菌 C 螺旋菌 D 芽孢DCD. 4.某學(xué)校計劃開辟一塊食用菌栽培基地,以豐富學(xué)生的勞動技術(shù)課內(nèi)容,首先對食用菌實驗室進展清掃和消毒處置,預(yù)備食用菌栽培所需的各種原料和器具,然后從菌種站購來各種食用菌菌種.請回答以下問題:(1)對買回來的菌進展擴展培育,首先制備試管培育基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培育基所需的原料 。其中提供氮源的主要 是 ；提供能源的主要物質(zhì)是 ；瓊脂的作用是 ，它不提供營養(yǎng)。(2)微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培育基時各成分要有適宜的 ,在燒杯參與瓊脂后要不停地 ,防止 .牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂牛肉膏蛋白胨凝固劑比例攪拌瓊脂糊底引起燒杯破裂.(3)將配制好的培育基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中,加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入 中滅菌,壓力為 ,溫度為 ,時間 ,滅菌終了拔掉電源,待鍋內(nèi)壓力 ,將試管取出. (4)運用高壓蒸汽滅菌鍋時留意,先向鍋內(nèi)倒入 ,把鍋內(nèi)水加熱煮沸并將基中原有冷空氣徹底排除后將鍋密閉.(5) 從一支試管向另一支試管接種時留意,接種環(huán)要在酒精燈 焰滅菌.并且待接種環(huán) 后沾取菌種,試管口不能分開酒精燈火焰附近,將接種的試管放入