小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本 制作與觀察

1、 遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)用品 實(shí)驗(yàn)步驟 繪圖 思考題2 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握動(dòng)物骨髓染色體標(biāo)本制備基本過程，了解操作步驟的原理3實(shí)驗(yàn)原理 小鼠骨髓細(xì)胞中的造血干細(xì)胞是生成各種血細(xì)胞和原始細(xì)胞，具有高度的分裂能力，本實(shí)驗(yàn)采用這一材料，通過前處理，低滲，固定，制片，染色等步驟制得染色體標(biāo)本，可觀察到許多處于分裂中期的染色體，可以進(jìn)行染色體組型分析。 4實(shí)驗(yàn)原理 制備方法包括以下幾個(gè)要點(diǎn): 1.用一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成，使細(xì)胞分裂停滯在中期,使中期染色體停留在赤道面處 2.用低滲法使將細(xì)胞膨脹,以至于在滴片時(shí)細(xì)胞被脹破,使細(xì)胞的染色體鋪展到載玻片上 3.空氣干燥法可使使細(xì)胞的染

2、色體在載片上展平,經(jīng)Giemsa染色后便可觀察到染色體的顯微圖象 5實(shí)驗(yàn)用品1材料：小白鼠 2器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 鑷子 玻璃吸管 10ml刻度的離心管 離心機(jī) 載玻片 蓋玻片 顯微鏡 濾紙 擦鏡紙 紗布 恒溫水浴鍋 3藥品：0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1） 2%檸檬酸鈉 改良石炭酸品紅6實(shí)驗(yàn)步驟預(yù)處理 取股骨 沖洗骨髓 離心 低滲 離心 固定 離心 滴片染色 觀察 7實(shí)驗(yàn)步驟1預(yù)處理：實(shí)驗(yàn)前2.5-3小時(shí)，按每克體重注射0.02ml，給小白鼠腹腔注射秋水仙素。 2取股骨：斷頸處死小鼠后，剔去肌肉組織，洗凈3沖洗骨髓：剪去兩端的股骨頭，吸取

3、 10ml 2%檸檬酸鈉，注射 器針頭插入股骨一端,反復(fù)沖洗兩根股骨，洗液收集到10ml的離心管中8 實(shí)驗(yàn)步驟4 離心： 1000r/min 離心10 min ,棄上清5 低滲：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37水浴低滲30 min ，中間（約15 min ）再吹散一次，使細(xì)胞分散，懸浮于溶液中 6離心：1000r/min離心10 min，棄上清7固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管輕 輕吹勻，進(jìn)行固定，中間（約15 min ）再吹散一次9實(shí)驗(yàn)步驟8. 離心： 1000r/min 離心10 min ,留1 ml 左右上清，輕輕吹打成細(xì)胞懸液9. 滴片：用吸管吸取細(xì)胞懸液，高度30-40 cm，滴在預(yù)冷的載玻片上，在酒精燈火焰上微微加熱，室溫晾干 10. 染色：改良石炭酸品紅染色10-20 min11. 觀