細(xì)胞工程基本原理第一節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)的設(shè)施和儀器設(shè)備

1、細(xì)胞工程基本原理第一節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)的設(shè)施和儀器設(shè)備1細(xì)胞工程 (Cell engineering)*按一定設(shè)計(jì)方案，在細(xì)胞、亞細(xì)胞或組織水平上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，獲得重構(gòu)的細(xì)胞、組織、器官及個(gè)體，創(chuàng)造優(yōu)良品種和產(chǎn)品的生物工程。緒論與課程介紹 P1-4細(xì)胞生物學(xué)、生物工程是其基礎(chǔ)5細(xì)胞工程的研究?jī)?nèi)容* 細(xì)胞與組織培養(yǎng)(Cell/Tissue culture)(P1) 細(xì)胞融合或細(xì)胞雜交(Cell fusion/hybridization)： 在自然或人工誘導(dǎo)條件下，兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞 形成一個(gè)細(xì)胞的過程 運(yùn)用：?jiǎn)慰寺】贵w技術(shù) 細(xì)胞核移植(Nuclear transplantation)：利用顯微操作 技術(shù)

2、，將胞質(zhì)與胞核分離，再將不同來源的胞質(zhì)與胞核 重組，形成一個(gè)新的雜合細(xì)胞緒論與課程介紹 P1-46細(xì)胞工程的范疇 染色體工程(Chromosome engineering)： 將單個(gè)染色體、染色體組轉(zhuǎn)入或移出目的細(xì)胞，使目的 細(xì)胞的染色體組發(fā)生變化 胚胎工程(Embryonic engineering)： 以生殖細(xì)胞和胚胎細(xì)胞為對(duì)象，進(jìn)行的細(xì)胞工程操作 運(yùn)用：畜牧業(yè)緒論與課程介紹 P1-47細(xì)胞工程的范疇 干細(xì)胞與組織工程(Tissue engineering)： 將干細(xì)胞與材料科學(xué)相結(jié)合，將自體或異體干細(xì)胞經(jīng)體外 擴(kuò)增后，種植在預(yù)先構(gòu)建好的聚合物支架上，在適宜條件 干細(xì)胞沿聚合物支架遷移、鋪

3、展、生長(zhǎng)、分化，最終發(fā)育 為具有特定形態(tài)和功能的工程組織。 轉(zhuǎn)基因生物與生物反應(yīng)器(P2)： 緒論與課程介紹 P1-48緒論與課程介紹 P1-4細(xì)胞工程發(fā)展的4個(gè)基本階段 P3-4細(xì)胞與組織培養(yǎng)細(xì)胞融合細(xì)胞核移植轉(zhuǎn)基因生物9“細(xì)胞生物學(xué)”與“細(xì)胞工程”的區(qū)別？細(xì)胞生物學(xué) 是研究細(xì)胞的生命活動(dòng)規(guī)律及其機(jī)制的基礎(chǔ)性學(xué)科 研究?jī)?nèi)容： 在分子、細(xì)胞和個(gè)體水平上研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能、表型及其調(diào)控機(jī)制； 著重細(xì)胞活動(dòng)的精細(xì)分子調(diào)節(jié)機(jī)制及復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究 細(xì)胞生物學(xué)：一級(jí)學(xué)科細(xì)胞工程：二級(jí)學(xué)科10主要以細(xì)胞為對(duì)象，以獲得特定的細(xì)胞、組織產(chǎn)品或新型物種的一門綜合性生物技術(shù)。細(xì)胞工程(Cell enginee

4、ring)11前沿性：現(xiàn)代生物技術(shù)的熱點(diǎn)綜合性：多學(xué)科交叉應(yīng)用性：工程類課程，重在產(chǎn)品與技術(shù)爭(zhēng)議性：新技術(shù)給倫理道德帶來的沖擊細(xì)胞工程特點(diǎn)12發(fā)酵工程酶工程基因工程細(xì)胞工程組織工程蛋白質(zhì)工程代謝工程細(xì)胞工程是現(xiàn)代生物工程技術(shù)中最具有現(xiàn)代性和生命力的組成部分，細(xì)胞工程課程在生物工程與生物技術(shù)人才培養(yǎng)中具有重要的作用。該課程是生物工程、生物技術(shù)專業(yè)的核心課程之一。現(xiàn)代生物工程131997年多莉羊口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗、脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗、乙型肝炎疫苗、及干擾素、凝血因子和、生長(zhǎng)激素、免疫球蛋白以及單克隆抗體等。 2001年人耳鼠動(dòng)物細(xì)胞工程的成果14第一章 細(xì)胞工程的設(shè)施與技術(shù)基礎(chǔ) 細(xì)胞培養(yǎng)的設(shè)施

5、和儀器設(shè)備 細(xì)胞培養(yǎng)的條件無菌操作基礎(chǔ)-清洗與消毒15第一節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)的設(shè)施和儀器設(shè)備16細(xì)胞培養(yǎng)的設(shè)施和儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)與要求： 嚴(yán)格的無菌環(huán)境 無微生物污染 不受其它有害因素的影響細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則：無菌操作室最好單獨(dú)設(shè)置，設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè) 常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室 培養(yǎng)、儲(chǔ)存位于中間清洗、消毒在另一側(cè)1718無菌操作室培養(yǎng)室制備室：通常是單獨(dú)的，對(duì)無菌的要求不如上述嚴(yán)格，培養(yǎng)基等的制備清洗室：器皿等清洗消毒滅菌室儲(chǔ)藏室：液氮罐、冰箱、培養(yǎng)基、消毒后培養(yǎng)器皿常于一室，即常稱的細(xì)胞培養(yǎng)室動(dòng)物工程實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及六項(xiàng)工作室19常用儀器與設(shè)備（P9）濾器，酸缸超凈工作臺(tái)CO2培養(yǎng)箱顯微操作

6、儀、倒置顯微鏡液氮罐自動(dòng)雙重純水蒸餾器，純水儀冰箱培養(yǎng)器皿：培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板離心設(shè)備：離心機(jī)、離心管、移液管/吸管/移液器搖床水純化裝置壓力蒸汽消毒器電熱干燥箱細(xì)胞計(jì)數(shù)器/儀、計(jì)數(shù)板20工作原理利用鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣濾過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒而凈化。凈化空氣徐徐通過工作臺(tái)面，使工作臺(tái)內(nèi)構(gòu)成無菌環(huán)境。 超凈工作臺(tái)21超凈工作臺(tái)：也稱凈化工作臺(tái) （形成氣流屏障）。常見類型（P9） 側(cè)流式（垂直式，吸氣型） 外流式（水平層流式，面向操作者流動(dòng)，吹氣型）超凈工作臺(tái)22側(cè)流式超凈工作臺(tái)2324無菌操作間：一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置：超凈工作臺(tái)及二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、倒置

7、顯微鏡等。緩沖間放置：電冰箱、冷藏器及消毒好的無菌物品等。實(shí)驗(yàn)室布局2526 CO2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為37 ，5CO2 使用CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)注意的問題： 用螺旋口瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，需將瓶蓋微 松，以保證通氣。 保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈。定期消毒 （90，14hrs)。 箱內(nèi)火菌蒸餾水3000毫升蒸餾水槽中以 保持箱內(nèi)濕度，避免培養(yǎng)液蒸發(fā)。CO2培養(yǎng)箱27二氧化碳培養(yǎng)箱控制中心(包括鍵盤、顯示器、指示器等) 28二氧化碳培養(yǎng)箱的結(jié)構(gòu)29大容量細(xì)胞培養(yǎng)箱細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶機(jī)30倒置顯微鏡31自動(dòng)雙重純水蒸餾器純水儀純水裝置32過濾裝置-過濾除菌各種培養(yǎng)用液只能用過濾的方法進(jìn)行除菌消毒處理。微孔濾膜濾器是目前

8、應(yīng)用最廣泛的過濾裝置33液氮容器冰箱冰箱與液氮罐34壓力蒸汽消毒器35壓力蒸汽消毒器36移液器37常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。 培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板381個(gè)10cm培養(yǎng)皿 個(gè)6cm培養(yǎng)皿1個(gè)6cm培養(yǎng)皿 = 2個(gè)3cm培養(yǎng)皿1個(gè)3cm培養(yǎng)皿 = 1個(gè)6孔板1個(gè)6孔板 個(gè)12孔板 = 4-6個(gè)24孔板經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)39生物安全的責(zé)任和義務(wù) 保證培養(yǎng)物不受污染，更要保證培養(yǎng)物不對(duì)人和環(huán)境造成 污染和危害 從事致病性微生物實(shí)驗(yàn)的科研、教學(xué)、生產(chǎn)單位，實(shí)驗(yàn)室 必須有防止致病性微生物擴(kuò)散的制度和人體防衛(wèi)措施實(shí)驗(yàn)室的生物安全(補(bǔ)充)40 據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對(duì)個(gè)體或人群的危害程度分為

9、4類： 一類：引起非常嚴(yán)重疾病的微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全病原微生物的分類 二類：引起嚴(yán)重疾病，較易直接或間接人與人、動(dòng)物與人、 動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物 三類：可引起人與動(dòng)物疾病，但不構(gòu)成嚴(yán)重威脅，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室 感染很少引起嚴(yán)重疾病，且能有效治療和預(yù)防的微生物 四類：一般不會(huì)引起人與動(dòng)物疾病的微生物41 據(jù)對(duì)病原微生物的生物安全防護(hù)水平，按國(guó)家實(shí)驗(yàn)室生物安全認(rèn)可準(zhǔn)則， 將實(shí)驗(yàn)室分為4級(jí)(細(xì)則略) BSL-1：不得從事高致病病原微生物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的生物安全實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí) BSL-2：不得從事高致病病原微生物實(shí)驗(yàn) BSL-3：可從事高致病病原微生物實(shí)驗(yàn)，須經(jīng)國(guó)家認(rèn)可 BSL-4：可從事高致

10、病病原微生物實(shí)驗(yàn)，須經(jīng)國(guó)家認(rèn)可42第二節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)的條件補(bǔ)充材料及參閱P42-5143恒定的細(xì)胞生長(zhǎng)溫度 合適的氣體環(huán)境優(yōu)質(zhì)血清 合適的細(xì)胞培養(yǎng)基無菌無毒的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境 培養(yǎng)細(xì)胞的體外生存條件441. 恒定的溫度:37 人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.50.5，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)人體細(xì)胞在39-40 1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)當(dāng)溫度在43以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡452. pH：當(dāng)pH低于或高于時(shí)的生長(zhǎng)會(huì)受到影響，甚至死亡。 酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑: 酸性培養(yǎng)液呈橙黃色 堿性培養(yǎng)液呈深紅色 細(xì)胞耐酸性比

11、耐堿性大一些463. 氣體有調(diào)節(jié)pH值的作用。開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需用的各種成分。474. 營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基保證細(xì)胞滲透壓培養(yǎng)液里的成分要滿足細(xì)胞進(jìn)行代謝所需要的各種營(yíng)養(yǎng)成分：12種必需氨基酸多種非必需氨基酸碳水化合物(主要是六碳糖)維生素?zé)o機(jī)鹽類48動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展過程天然培養(yǎng)基階段合成培養(yǎng)基階段無血清培養(yǎng)階段49動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的基本要求營(yíng)養(yǎng)成分氨基酸單糖維生素?zé)o機(jī)鹽促生長(zhǎng)因子及激素適宜的滲透壓：260-320mOsm/kg50天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。優(yōu)點(diǎn)

12、：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：來源受限。成分復(fù)雜，影響對(duì)某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。易發(fā)生支原體污染。 4.1 天然培養(yǎng)基511951年厄爾開發(fā)了供動(dòng)物細(xì)胞體外生長(zhǎng)的人工合成培養(yǎng)基(MEM)合成培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的目前已設(shè)計(jì)出許多種培養(yǎng)基，如DMEM、MEM、IMDM、 RPMI-1640、 M199、Ham12、McCoys 5A等4.2 合成培養(yǎng)基52合成培養(yǎng)基優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對(duì)固定，成本低缺點(diǎn)： 缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要4.2 合成培養(yǎng)基53培養(yǎng)基的配制舉例RPMI-1640培養(yǎng)粉 1袋碳酸氫鈉

13、2.0 g青、鏈霉素 各100單位毫升加三蒸水至 1000ml，調(diào)節(jié)pH值至4過夜，過濾除菌54無血清培養(yǎng)基的主要研制策略：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中補(bǔ)充各種必需因子，如激素、生長(zhǎng)因子 、結(jié)合蛋白 、貼壁和擴(kuò)展因子等無血清培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和替代血清的補(bǔ)充成分組成1975年，Sato首次成功地用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)了垂體細(xì)胞株，近20多年來已報(bào)道了幾十種細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中成功地生長(zhǎng)和增殖4.3 無血清培養(yǎng)基55無血清培養(yǎng)基的組成及其主要補(bǔ)充成分（1）激素和生長(zhǎng)因子（2）結(jié)合蛋白（3）貼壁因子和擴(kuò)展因子（4）低分子量營(yíng)養(yǎng)因子4.3 無血清培養(yǎng)基56可提高產(chǎn)品的表達(dá)水平、簡(jiǎn)化了提純、鑒定 各種細(xì)胞產(chǎn)物的程序使

14、細(xì)胞產(chǎn)品易于純化有利于體外培養(yǎng)細(xì)胞的分化避免血清組分對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的影響避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染可避免血清批次間的質(zhì)量變動(dòng)，保證細(xì)胞培養(yǎng)和 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性、準(zhǔn)確性、可重復(fù)性和穩(wěn)定性無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)57無血清培養(yǎng)基的缺點(diǎn)培養(yǎng)基的保存和應(yīng)用不如傳統(tǒng)的合成培養(yǎng)基方便細(xì)胞的適用范圍窄細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中易受某些機(jī)械因素和 化學(xué)因素的影響58無血清培養(yǎng)基的應(yīng)用領(lǐng)域研究細(xì)胞的分化條件用于激素、生長(zhǎng)因子和藥物等與細(xì)胞相互作用的研究用于從多種細(xì)胞混雜的培養(yǎng)基中選擇目的細(xì)胞腫瘤病理學(xué)和病因?qū)W的研究用于生產(chǎn)疫苗、單克隆抗體和生物活性蛋白等生物制品用于干細(xì)胞的研究59向無血清培養(yǎng)液中添加能促進(jìn)細(xì)胞系生

15、長(zhǎng)的補(bǔ)加物 都是獨(dú)特的。適用于某種細(xì)胞株的培養(yǎng)液，很可能不適合另一種 細(xì)胞株的生長(zhǎng)。即使同源組織的不同細(xì)胞株，所需補(bǔ)加物也不同無血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣無血清培養(yǎng)基應(yīng)用的局限605. 血清提供有利于細(xì)胞生長(zhǎng)增殖所需的生長(zhǎng)因子、激素， 提供合成培養(yǎng)基所缺乏的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提供可識(shí)別金屬、激素、維生素和脂質(zhì)的結(jié)合蛋白， 對(duì)這些物質(zhì)起到穩(wěn)定和調(diào)節(jié)作用；結(jié)合蛋白還可消除某些 毒素和金屬對(duì)細(xì)胞的毒性作用為貼壁細(xì)胞的附著提供適當(dāng)?shù)馁N壁因子和擴(kuò)展因子提供蛋白酶抑制劑，使細(xì)胞免受蛋白酶的損傷提供 pH 緩沖物質(zhì)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH影響培養(yǎng)系統(tǒng)中的某些物理特性如：剪切力、黏度、 滲透壓和氣體傳遞速度61主要的血

16、清類型胎牛血清 (fetal bovine serum， FBS)新生牛血清 (new calf serum， NCS)馬血清 (horse serum ，HS)胎牛血清是從母牛剖腹取出的胎牛中分離出的血清價(jià)格昂貴、質(zhì)量最好優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌、 支原體、病毒污染62血清質(zhì)量好壞是細(xì)胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵5小牛血清的培養(yǎng)基對(duì)大多數(shù)細(xì)胞可以維持細(xì)胞 不死，但支持細(xì)胞生長(zhǎng)一般需加10血清血清與細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞需要較高濃度的小牛血清或胎牛血清；對(duì)于 腫瘤細(xì)胞，當(dāng)研究生長(zhǎng)因子、激素對(duì)其影響時(shí)，需要 極低濃度血清或無血清63血清的滅活(消除補(bǔ)體活性):56 ，30分鐘血清的保存、滅活

17、血清貯存:20-70，4可短時(shí)貯存約一個(gè)月。血清分裝：可將4045mL分裝于無菌50mL離心管或消毒玻璃瓶*血清結(jié)凍時(shí)體積增加約10%，須預(yù)留空間，以防污染或容器凍裂血清過濾：商業(yè)血清為無菌，不需再無菌過濾。 若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，37溶解幾分鐘，將血清加入 培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清64血清的保存、滅活血清解凍 (逐步解凍法): -20或70至4冰箱 溶解一天，至室溫下全溶后再分裝在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)， 使溫度均一，減少沉淀的發(fā)生勿直接由20直接至37解凍，因溫度改變太大， 容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀65在一些基礎(chǔ)研究中，往往影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果血清中含有某些不利于

18、細(xì)胞生長(zhǎng)的毒性物質(zhì)或抑制物質(zhì)，對(duì)某些細(xì)胞的體外培養(yǎng)有去分化作用血清中大量成分復(fù)雜的蛋白質(zhì)給疫苗、細(xì)胞因子、單克隆抗體等細(xì)胞產(chǎn)品的分離純化帶來很大困難細(xì)胞培養(yǎng)中血清可能引發(fā)的問題666. 抗生素在培養(yǎng)基配制后，培養(yǎng)基內(nèi)添加適量抗菌素，以抑制可能存在的細(xì)菌的生長(zhǎng)通常是青霉素P.鏈霉素S.聯(lián)合使用。培養(yǎng)基內(nèi)P.S.最終使用濃度為每毫升100單位或微克676. 抗生素建議：常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中盡可能不使用抗生素培養(yǎng)污染源很多(比如組織培養(yǎng))，或者珍貴細(xì)胞株才 使用抗生素作脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞最好提前于無抗生素的 培養(yǎng)基培養(yǎng)，防細(xì)胞死亡680.01M PBS* (pH7.4, 高壓滅菌)組分含量(g/L

19、)NaCl8.0KCl0.2Na2HPO4Na2HPO47H2ONa2HPO412H2O1.44 2.683.58KH2PO40.24H2O10007. 緩沖液1PBS(Phosphate-Buffered Sallines)69Hanks 平衡鹽溶液(Hanks Balanced Salt Solutions, HBSS)成分含量(g/L):CaCl2(無水氯化鈣)KClKH2PO4MgCl26H2O0.140.400.060.10HBSS708. 消化液作用：分離組織和分散細(xì)胞常用消化液：胰蛋白酶二乙胺四乙酸二鈉(EDTA)通常使用濃度: 0.25% Trypsin: 0.25g in P

20、BS 0.02%-0.03% EDTA:0.02-0.03g EDTA；過濾；-20 保存71胰蛋白酶(簡(jiǎn)稱胰酶)：黃白色粉末，易潮解，冷暗干燥處保存 用無Ca2+、Mg2+的PBS緩沖液配制目前應(yīng)用的胰蛋白酶主要來自牛或豬的胰腺胰酶的主要作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解，離散細(xì)胞 胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去 細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細(xì)胞骨架，從而使細(xì)胞分離胰酶簡(jiǎn)介8.1 胰蛋白酶72胰酶對(duì)細(xì)胞的分離作用與細(xì)胞的種類和細(xì)胞的特性有密切關(guān)系 胰蛋白酶液濃度越高，作用越強(qiáng)，但超過一定限度會(huì)損傷細(xì)胞通常：胰蛋白酶液消化時(shí)間：2-10分鐘用含血清培養(yǎng)液可終止其對(duì)細(xì)胞的消化作用8.1

21、胰蛋白酶73EDTA是一種化學(xué)螯合劑，對(duì)細(xì)胞毒性小，價(jià)格低廉，使用方便通常與胰蛋白酶溶液混合使用(混合液)，使用濃度見前注意：使用EDTA 處理細(xì)胞后，一定要用Hanks 液沖洗干凈，因殘留的EDTA 會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。 8.2 EDTA4Na 溶液74第三節(jié) 無菌操作基礎(chǔ)-清洗與消毒75器皿的清洗和消毒P17-20清洗的目的：去雜質(zhì)；去微生物清洗的要求：干凈；無油跡；無殘留物消毒的目的：防微生物污染76器皿的清洗 玻璃器皿的清洗浸泡： 清水浸泡-軟化與溶解附著物 鹽酸浸泡-中和堿性物質(zhì)刷洗：泡酸：有效去雜質(zhì)洗液(清潔液)的配制：次強(qiáng)液：重鉻酸鉀 120g, 濃硫酸：200ml 水： 1000m

22、l強(qiáng)洗液：重鉻酸鉀 63g, 濃硫酸：1000ml 水： 200ml沖洗：去殘留物、去酸液77器皿的清洗 膠塞的清洗水洗：去滑石粉；去雜質(zhì)洗衣粉或2%NaOH煮沸：去蛋白1%HCl中和78器皿的清洗 塑料制品的清洗使用過的要及時(shí)浸泡不可反復(fù)使用 不銹鋼器皿的清洗去污洗衣液清洗，不可泡酸79器皿的消毒 物理滅菌法紫外線消毒：破壞微生物的核酸、蛋白質(zhì)；產(chǎn)生臭氧電離輻射消毒：X射線、g 射線破壞微生物的核酸、蛋白質(zhì)濕熱(高壓蒸汽)消毒：最廣泛、最有效干熱消毒：電熱烤箱法，主要適于玻璃器皿過濾除菌：，可去較大分子；可去細(xì)菌80 化學(xué)滅菌法適于不能用物理消毒法滅菌的物品和場(chǎng)地器皿的清洗1新潔爾滅: 實(shí)驗(yàn)臺(tái)、細(xì)胞間地