方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的區(qū)別及聯(lián)系

1、-. z.方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的區(qū)別與聯(lián)系任何分析檢測的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，方法驗(yàn)證在其中起著極為重要的作用。方法驗(yàn)證的結(jié)果可以用于判斷分析結(jié)果的質(zhì)量、可靠性和一致性，這是所有質(zhì)量管理體系不可分割的一局部。一般在以下情況下，要求對(duì)分析方法進(jìn)展驗(yàn)證、確認(rèn)或稱證實(shí)或重新驗(yàn)證：1首次用于常規(guī)檢測前；2轉(zhuǎn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室時(shí)；3對(duì)于驗(yàn)證過的方法，其條件或方法參數(shù)發(fā)生變化時(shí)例如，儀器性能參數(shù)發(fā)生改變或樣品基質(zhì)不同時(shí)，并且這種變化超出了方法的原適用*圍。對(duì)實(shí)驗(yàn)室有影響的法規(guī)和質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)一般都要求進(jìn)展方法驗(yàn)證。有的法規(guī)中直接使用驗(yàn)證或確認(rèn)一詞，并列出特定參數(shù)，也有的法規(guī)用這樣的陳述暗示驗(yàn)證要

2、求檢測方法應(yīng)適合于預(yù)期用途。1. 國內(nèi)主要法規(guī)標(biāo)準(zhǔn) 國內(nèi)第三方檢測機(jī)構(gòu)一般均非標(biāo)準(zhǔn)制修訂機(jī)構(gòu)，方法驗(yàn)證或確認(rèn)的來源根本來自資質(zhì)認(rèn)定或?qū)嶒?yàn)室認(rèn)可的要求，主要依據(jù)如下：2.1 AS-CL01:2006l 5.4.2方法選擇：實(shí)驗(yàn)室制定的或采用的方法如能滿足預(yù)期用途并經(jīng)過確認(rèn)，也可使用。所選用的方法應(yīng)通知客戶。在引入檢測或校準(zhǔn)之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些標(biāo)準(zhǔn)方法。如果標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生了變化，應(yīng)重新進(jìn)展證實(shí)。l 5.4.5.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)制定的方法、超出其預(yù)定*圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)大和修改正的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)展確認(rèn)，以證實(shí)該方法適用于預(yù)期的用途。確認(rèn)應(yīng)盡可能全面，以滿足預(yù)定用途或應(yīng)

3、用領(lǐng)域的需要。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)記錄所獲得的結(jié)果、使用確實(shí)認(rèn)程序以及該方法是否適合預(yù)期用途的聲明。l 5.4.5.3 按預(yù)期用途進(jìn)展評(píng)價(jià)所確認(rèn)的方法得到的值的*圍和準(zhǔn)確度，應(yīng)與客戶的需求嚴(yán)密相關(guān)。這些值諸如：結(jié)果的不確定度、檢出限、方法的選擇性、線性、重復(fù)性限和/或復(fù)現(xiàn)性限、抵御外來影響的穩(wěn)健度和/或抵御來自樣品或測試物基體干擾的交互靈敏度。2.2 實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則l 5.3.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確認(rèn)能否正確使用所選用的新方法。如果方法發(fā)生了變化，應(yīng)重新進(jìn)展確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確保使用標(biāo)準(zhǔn)的最新有效版本。l 5.3.5 實(shí)驗(yàn)室自行制訂的非標(biāo)方法，經(jīng)確認(rèn)后，可以作為資質(zhì)認(rèn)定工程，但僅限特定委托方的檢測。2.3 司

4、法鑒定機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則l 5.3.2司法鑒定機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)證實(shí)能否正確使用所選用的標(biāo)準(zhǔn)方法。標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生變化應(yīng)當(dāng)重新進(jìn)展證實(shí)。l 5.3.3司法鑒定機(jī)構(gòu)自行制訂的非標(biāo)準(zhǔn)方法，經(jīng)省級(jí)以上司法行政機(jī)關(guān)指定的組織確認(rèn)后，可以作為資質(zhì)認(rèn)定工程。2.4 AS-CL02:20135.5.1.3 檢驗(yàn)程序確實(shí)認(rèn)：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)以下來源的檢驗(yàn)程序進(jìn)展確認(rèn)：a) 非標(biāo)準(zhǔn)方法；b) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)或制定的方法；c) 超出預(yù)定*圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法；d) 修改正確實(shí)認(rèn)方法。方法確認(rèn)應(yīng)盡可能全面，并通過客觀證據(jù)以性能特征形式證實(shí)滿足檢驗(yàn)預(yù)期用途的特定要求。注：檢驗(yàn)程序的性能特征宜包括：測量正確度、測量準(zhǔn)確度、測量精細(xì)度含測量重復(fù)性

5、和測量中間精細(xì)度、測量不確定度、分析特異性含干擾物、分析靈敏度、檢出限和定量限、測量區(qū)間、診斷特異性和診斷靈敏度。2.5 AS-CL08:2013l 5.4.4.2 鑒定機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)展確認(rèn)以證實(shí)該方法適用于預(yù)期的用途，并保存使用確實(shí)認(rèn)程序、所獲得的結(jié)果、以及該方法是否滿足預(yù)期鑒定目的的評(píng)價(jià)等記錄。l 5.4.4.3 按預(yù)期用途對(duì)鑒定方法進(jìn)展確認(rèn)時(shí)，鑒定機(jī)構(gòu)應(yīng)有證據(jù)證明對(duì)影響結(jié)果的因素進(jìn)展了評(píng)價(jià)。所確認(rèn)的鑒定方法的值*圍和準(zhǔn)確度應(yīng)與客戶的需求嚴(yán)密相關(guān)，諸如：結(jié)果的不確定度、檢出限、方法的選擇性、線性、重復(fù)性限和/或復(fù)現(xiàn)性限、抵御外來影響的穩(wěn)健度和/或抵御來自檢材/樣本基體干擾的交互靈敏度

6、。2.6 其他AS-CL52:2014AS-CL01應(yīng)用要求：5.4.2在引入檢測或校準(zhǔn)方法之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)其能否正確運(yùn)用這些標(biāo)準(zhǔn)方法的能力進(jìn)展驗(yàn)證，驗(yàn)證不僅需要識(shí)別相應(yīng)的人員、設(shè)施和環(huán)境、設(shè)備等，還應(yīng)通過試驗(yàn)證明結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，如精細(xì)度、線性*圍、檢出限和定量限等方法特性指標(biāo)，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)展實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)。AS-CL10:2012檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在化學(xué)檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明：5.4.2 方法的選擇：b) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)首次采用的檢測方法進(jìn)展技術(shù)能力的驗(yàn)證，如檢出限、回收率、正確度和精細(xì)度等。如果在驗(yàn)證過程中發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)方法中未能詳述但影響檢測結(jié)果的環(huán)節(jié)，應(yīng)將詳細(xì)操作步驟編制成作業(yè)指導(dǎo)書，作

7、為標(biāo)準(zhǔn)方法的補(bǔ)充。當(dāng)檢測標(biāo)準(zhǔn)發(fā)生變更涉及到檢測方法原理、儀器設(shè)施、操作方法時(shí)，需要通過技術(shù)驗(yàn)證重新證明正確運(yùn)用新標(biāo)準(zhǔn)的能力。 5.4.5 方法確認(rèn)： a) 任何對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法的偏離，都必須進(jìn)展實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)，即使所采用的替代技術(shù)可能具有更好的分析性能。 b) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過試驗(yàn)方法的檢出限、精細(xì)度、回收率、適用的濃度*圍和樣品基體等特性來對(duì)檢測方法進(jìn)展確認(rèn)。AS-CL09:2013要求：標(biāo)準(zhǔn)方法引入檢測之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些方法，并未清晰說明如何證實(shí)，而對(duì)非標(biāo)方法確實(shí)認(rèn)提供的參考資料，比方SN/T 3266-2012食品微生物檢驗(yàn)方法確認(rèn)技術(shù)規(guī)*；AS-CL18:2013規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)方法必要時(shí)

8、才進(jìn)展技術(shù)驗(yàn)證；AS-CL44:2013和AS-CL56:2014僅規(guī)定非標(biāo)準(zhǔn)方法包括實(shí)驗(yàn)室自制定方法才需要確認(rèn)；AS-CL55:2014僅規(guī)定：以軟件方式、物理方式或采樣方式等標(biāo)準(zhǔn)未明確的方法進(jìn)展低輻照度試驗(yàn)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)該方法進(jìn)展確認(rèn)。除化學(xué)領(lǐng)域明確規(guī)定應(yīng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)展確認(rèn)或驗(yàn)證外，其他領(lǐng)域僅要求對(duì)非標(biāo)方法進(jìn)展確認(rèn)或驗(yàn)證，或者未做規(guī)定，而且對(duì)確認(rèn)和驗(yàn)證是否有區(qū)別也未作說明。但是AS-CL52:2014是與AS-CL01:2006同步應(yīng)用的，具有等同效力，因此其他領(lǐng)域如未對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)或驗(yàn)證進(jìn)展規(guī)定的，應(yīng)參考AS-CL52執(zhí)行。2. 國外主要法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)2.1 美國FDAcGMP藥品動(dòng)態(tài)生產(chǎn)質(zhì)量

9、管理規(guī)*和GLP臨床前研究實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)*等法規(guī)要求必須進(jìn)分析方法的驗(yàn)證。美國cGMPs 在211.165(e)和211.194 兩小節(jié)中提出了驗(yàn)證要求：l 165(e)：應(yīng)用檢測方法時(shí)，應(yīng)建立并記錄準(zhǔn)確度、靈敏度、專屬性以及重現(xiàn)性。這類驗(yàn)證及文件制作應(yīng)按194(a)(2)完成；l 194(a)(2)：實(shí)驗(yàn)室的記錄應(yīng)包含用于樣品檢測的每個(gè)方法的聲明。聲明中應(yīng)指明建立方法的數(shù)據(jù)位置，這些數(shù)據(jù)應(yīng)能證明該檢測方法在應(yīng)用于產(chǎn)品檢測時(shí)符合特定的準(zhǔn)確度和可靠性標(biāo)準(zhǔn)要求。所有檢測方法的適用性應(yīng)在實(shí)際應(yīng)用條件下得到證實(shí)；l 194(b)：如對(duì)應(yīng)用于檢測的已確認(rèn)方法有任何變更，應(yīng)保存完整的變更記錄。該記錄中應(yīng)

10、包含變更原因以及相關(guān)數(shù)據(jù)，以證實(shí)方法變更后的樣品檢測結(jié)果至少能到達(dá)原方法一樣的準(zhǔn)確度和可靠性；l FDA GLP 法規(guī)21 CFR 第58 局部并未用到驗(yàn)證一詞，但是依據(jù)58.113 中的要求，檢查員需要檢查驗(yàn)證研究記錄：應(yīng)采用適宜的分析方法進(jìn)展檢測，其中適宜的即意味著驗(yàn)證。并且FDA 的生物分析方法驗(yàn)證指南中規(guī)定臨床前毒理研究也屬于驗(yàn)證*圍；l FDA 關(guān)于生物利用度和生物等效性要求的法規(guī)21 CFR 320第29節(jié)中規(guī)定：(a) 用于體內(nèi)生物利用度研究以檢測體液或排泄物中活性藥物成分或治療成分檢測的分析方法，或用于急性藥理作用檢測的方法，應(yīng)證明其具有準(zhǔn)確性和足夠的靈敏度以及恰當(dāng)?shù)木?xì)度，能

11、滿足體內(nèi)的活性藥物成分/治療成分或其代謝產(chǎn)物的實(shí)際濃度的檢測要求。2.2 藥品檢查協(xié)定和藥品監(jiān)察檢查合作方案(PIC/S)PIC/S 的使命是領(lǐng)導(dǎo)制定、實(shí)施和維護(hù)國際性的、統(tǒng)一的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)*GMP標(biāo)準(zhǔn)以及藥品領(lǐng)域檢查工作質(zhì)量體系。這一使命通過以下手段得以實(shí)施：制定和推廣統(tǒng)一的GMP 標(biāo)準(zhǔn)和指導(dǎo)文件；培訓(xùn)主管部門、尤其是檢查員；評(píng)審檢查活動(dòng)；以及促進(jìn)主管部門和國際組織的合作和網(wǎng)絡(luò)化。目前，約有50個(gè)政府組織參加了PIC/S，包話所有的歐盟成員國。許多新的成員國還沒有按照PIC/S GMPs建立自己的GMP 法規(guī)。PIC/S 的GMP 與歐盟的GMP 指令非常相似。兩個(gè)文件都在第6.1.5

12、 局部以一樣的文字規(guī)定了分析方法驗(yàn)證的要求：分析方法應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證。申請(qǐng)上市許可的所有檢測均應(yīng)按照批準(zhǔn)的方法進(jìn)展。在PIC/S 的實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場檢查指南中包含檢查員檢查質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室時(shí)的一些提問。這些問題包括：l 方法驗(yàn)證是不是驗(yàn)證總體方案的一局部？l 有沒有通用的方法驗(yàn)證SOP？方法驗(yàn)證報(bào)告是否經(jīng)過正式批準(zhǔn)？l 是否明確驗(yàn)證目的？l 是否按ICH規(guī)定的參數(shù)對(duì)每一種方法進(jìn)展完整的驗(yàn)證并記錄？l 是否規(guī)定了每種方法的承受限度并能符合該限度規(guī)定？2.3 國際協(xié)調(diào)會(huì)議ICH 國際協(xié)調(diào)會(huì)議ICH發(fā)起于1990 年，聚集了歐盟、日本和美國的監(jiān)管機(jī)構(gòu)和這三個(gè)地區(qū)的制藥行業(yè)專家，一起討論產(chǎn)品注冊(cè)方面的科學(xué)和技術(shù)問題

13、。 ICH 出版的指導(dǎo)原則，有些被成員國如歐盟寫入法律，有些被國家權(quán)力機(jī)構(gòu)如美國FDA推薦為指南。其中，最為重要的ICH 文件是活性藥物成分的GMP 指南。在第12章中規(guī)定了方法驗(yàn)證的要求：應(yīng)對(duì)分析方法進(jìn)展驗(yàn)證，所用方法收載于相關(guān)的藥典或其他認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)參考文件中的除外。所有檢測方法均應(yīng)在實(shí)際使用條件下證實(shí)其適用性；實(shí)施分析驗(yàn)證的程度應(yīng)能反映分析的目的以及活性藥物成分的生產(chǎn)工藝狀況；開場驗(yàn)證分析方法前，應(yīng)考慮對(duì)分析設(shè)備進(jìn)展適當(dāng)確實(shí)認(rèn)。2.4 美國藥典USP美國藥典USP為具體的應(yīng)用制定方法，并針對(duì)FDA 監(jiān)管的行業(yè)內(nèi)不同的分析特點(diǎn)制定通則。根據(jù)聯(lián)邦食品藥品和化裝品法案501 局部的規(guī)定，USP

14、方法構(gòu)成法定標(biāo)準(zhǔn)。USP 制定了兩個(gè)與方法驗(yàn)證有關(guān)的通則。通則是法定方法的驗(yàn)證。該通則中給出了用于新方法驗(yàn)證的各種參數(shù)。通則中的建議可以被藥品實(shí)驗(yàn)室用作自行制定方法的驗(yàn)證。 通則是法定方法確實(shí)認(rèn)。該通則用于實(shí)施藥典和標(biāo)準(zhǔn)方法的實(shí)驗(yàn)室。這些內(nèi)容也適用于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用其他實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證過的方法。2.5 ISO/IEC 17025同AS-CL01:2006檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則以上國內(nèi)外法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)中屢次出現(xiàn)驗(yàn)證、確認(rèn)和證實(shí)三個(gè)術(shù)語，由于國內(nèi)翻譯問題，經(jīng)常在標(biāo)準(zhǔn)中將確認(rèn)和驗(yàn)證混用或等同。正確的翻譯：Verification譯成確認(rèn)或證實(shí)，Validation譯成驗(yàn)證，建議參考美國USP。導(dǎo)致很多實(shí)驗(yàn)室認(rèn)為

15、方法確認(rèn)或驗(yàn)證困難重重原因有四：1法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)的翻譯問題，導(dǎo)致理解存在偏差，比方AS-CL01:2006中5.4.2所描述的證實(shí)即與確認(rèn)同義；2局部法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)未作詳細(xì)說明，比方實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則；3方法確認(rèn)和方法驗(yàn)證定義不清，概念搞混；4國人缺乏研究心態(tài)，有點(diǎn)困難就逃避，懶惰之心嚴(yán)重。3. 驗(yàn)證和確認(rèn)的定義3.1 方法驗(yàn)證Validation of methodUSP：方法驗(yàn)證是一個(gè)通過實(shí)驗(yàn)室研究來證明程序的性能參數(shù)符合期望的分析應(yīng)用要求的過程。ICH：分析方法驗(yàn)證的目的是顯示分析方法適用于它所期望的應(yīng)用目的。FDA：方法驗(yàn)證是一個(gè)闡述分析方法適合于其使用目的的過程。3.2方法確認(rèn)Verific

16、ation of methodUSP：USP-NF所收載方法的使用者不需要驗(yàn)證這些方法的準(zhǔn)確性和可靠性，但需要確認(rèn)這些方法在實(shí)際使用條件下的適應(yīng)性。USP：確認(rèn)包括所涉及方法的性能參數(shù)，如那些在中描述的，以建立恰當(dāng)?shù)?、相?yīng)的數(shù)據(jù)，而不是重復(fù)驗(yàn)證的過程。FDA：出現(xiàn)在USP中的方法被認(rèn)為已驗(yàn)證，對(duì)于法定方法，廠家必須說明該方法在實(shí)際使用情況下的狀態(tài)?？傮w來講，方法驗(yàn)證是說明方法適合于它使用目的的一個(gè)過程，方法確認(rèn)是通過已驗(yàn)證的方法進(jìn)展檢測的條件確實(shí)適合于該已驗(yàn)證方法的過程。、4. 方法驗(yàn)證參數(shù)和試驗(yàn)4.1 方法驗(yàn)證的參數(shù)USP規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用試驗(yàn)方式進(jìn)展方法驗(yàn)證：應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)室的研究制定成一定的分

17、析方法驗(yàn)證程序，證明方法的性能參數(shù)符合預(yù)期的分析應(yīng)用要求。不同國家和國際委員會(huì)的工作組都對(duì)方法驗(yàn)證所要求的試驗(yàn)作出了規(guī)定，這些在文獻(xiàn)中都有闡述。不幸的是，一些定義在不同的組織間差異很大。為了到達(dá)標(biāo)準(zhǔn)化的目的，ICH 來自美國、歐洲和日本的行業(yè)和監(jiān)管機(jī)構(gòu)代表定義了分析方法驗(yàn)證的參數(shù)、要求和方法。表1 典型化學(xué)分析方法驗(yàn)證參數(shù)的選擇檢測限/檢出限定量限正確度/回收率精細(xì)度重復(fù)性和再現(xiàn)性選擇性/專屬性適用性/穩(wěn)健性/穩(wěn)定性線性/靈敏度/*圍定性方法S+-+-C+-+-定量方法S+-+C+備注：S=篩選方法Screening methods；C=確證方法Confirmatory methods+=必選

18、參數(shù)；表2 國內(nèi)外對(duì)方法驗(yàn)證參數(shù)的要求 參數(shù)對(duì)相關(guān)參數(shù)做出要求的法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)定量限USP、ICH、ISO/IEC17025、Ch.P 2010版、SN/T 3266-2012、化礦金專業(yè)化學(xué)分析方法驗(yàn)證程序試行CA、食品化裝品專業(yè)化學(xué)分析方法驗(yàn)證程序CA、食品化裝品專業(yè)生物檢測方法確認(rèn)驗(yàn)證程序CA、化學(xué)分析方法驗(yàn)證程序征求意見稿，AQSIQ、化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則CFDA、農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南征求意見稿，農(nóng)業(yè)部檢測限/檢出限不含農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南征求意見稿，農(nóng)業(yè)部，其他同定量限準(zhǔn)確度/正確度/回收率同定量限精細(xì)度l 重復(fù)性l 中間精細(xì)度l 再現(xiàn)性復(fù)現(xiàn)性、重現(xiàn)性

19、同定量限；不含USP，其他同定量限；ICH、化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則CFDA；同定量限。專屬性/選擇性/特異性同定量限；幾個(gè)術(shù)語的定義存在一樣或相近之處，USP、ICH稱為專屬性，ISO/IEC17025稱為選擇性，*些標(biāo)準(zhǔn)稱為特異性，*些標(biāo)準(zhǔn)將選擇性定義為包容性和排他性的組合。耐用性/適用性/穩(wěn)健性/穩(wěn)定性不含SN/T 3266-2012和農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南征求意見稿，農(nóng)業(yè)部，其他同定量限；不同標(biāo)準(zhǔn)采用的術(shù)語存在差異，但其定義一樣或相近線性同定量限*圍/測定*圍不含SN/T 3266-2012和農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南征求意見稿，農(nóng)業(yè)部，其他同定量限靈敏度不含化

20、學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則CFDA和農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南征求意見稿，農(nóng)業(yè)部，其他同定量限注：1依據(jù)GB/T 3358.2-2009統(tǒng)計(jì)學(xué)詞匯及符號(hào)第2局部：應(yīng)用統(tǒng)計(jì) IDT ISO3534-2:2006和GB/T6379.1-2004測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精細(xì)度)第1局部:總則與定義 IDT ISO5725-1:1994中規(guī)定準(zhǔn)確度的定義為正確度和精細(xì)度的組合，而國內(nèi)目前局部標(biāo)準(zhǔn)中包括上表的準(zhǔn)確度僅等同GB/T 3358.2-2009中的正確度，所以上表的準(zhǔn)確度與正確度同義，此差異主要是由于國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)制訂引用術(shù)語不嚴(yán)謹(jǐn)造成。2回收率是表示準(zhǔn)確度/正確度的一項(xiàng)指標(biāo)；3

21、再現(xiàn)性亦稱復(fù)現(xiàn)性、重現(xiàn)性；4由于重復(fù)性和再現(xiàn)性條件均為精細(xì)度的兩種極端條件，因此引出中間精細(xì)度這一術(shù)語，具體定義見GB/T 3358.2-2009。AS-CL01:2006和AS-CL10:2012對(duì)方法確認(rèn)的具體參數(shù)描述已經(jīng)與表1類似，但確認(rèn)終究不是驗(yàn)證，因此一般要求對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法參照表1進(jìn)展驗(yàn)證，而標(biāo)準(zhǔn)方法確實(shí)認(rèn)則適當(dāng)采用簡化程序。至于每項(xiàng)參數(shù)的驗(yàn)證試具體如何操作，可參考本文后的相關(guān)參考文獻(xiàn)，這里不做過多闡述。4.2 方法驗(yàn)證的步驟*個(gè)具體方法的有效性應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)加以證明，一般使用與常規(guī)分析的未知樣品接近的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)展驗(yàn)證試驗(yàn)。其準(zhǔn)備和執(zhí)行應(yīng)按照驗(yàn)證方案進(jìn)展，最好寫成作業(yè)指導(dǎo)書。圖1為方法

22、驗(yàn)證的參考步驟。圖1 方法驗(yàn)證常規(guī)步驟5. 方法確認(rèn)證實(shí)ISO/IEC 17025 要求：應(yīng)優(yōu)先使用以國際、區(qū)域或國家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布的方法。，這些標(biāo)準(zhǔn)方法被認(rèn)為已經(jīng)得到驗(yàn)證。因此，許多技術(shù)人員錯(cuò)誤地認(rèn)為標(biāo)準(zhǔn)方法不需要在實(shí)驗(yàn)室中做任何進(jìn)一步的驗(yàn)證、證實(shí)或試驗(yàn)即可投入使用。US FDA CGMP 法規(guī)在21 CFR 211.194 (a)(2)中規(guī)定：如果應(yīng)用的方法收載于現(xiàn)行的美國藥典或其他認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)方法中，或在批準(zhǔn)的新藥應(yīng)用中有詳細(xì)方法且未改變這一參考方法時(shí)，有指明方法和參考文獻(xiàn)的聲明即滿足要求。所有檢測方法的適用性應(yīng)在實(shí)際應(yīng)用條件下得到證實(shí)。ISO/IEC 17025 在5.4.2 中有類似的要求：

23、在引入檢測或校準(zhǔn)之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些標(biāo)準(zhǔn)方法。如果標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生了變化，應(yīng)重新進(jìn)展證實(shí)。這里明確了標(biāo)準(zhǔn)方法只要不發(fā)生變更，不需要進(jìn)展驗(yàn)證，但實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確認(rèn)其有能力成功運(yùn)行該方法。當(dāng)決定選擇什么樣的證實(shí)方式最好時(shí)，問題又來了。是否需要重做局部驗(yàn)證試驗(yàn)還是全部的驗(yàn)證試驗(yàn)都要重做，或者僅僅系統(tǒng)適用性試驗(yàn)或質(zhì)控樣品結(jié)果滿意是否足夠，這些都不清楚。USP 在通則法定方法確實(shí)認(rèn)中答復(fù)了這些問題，給出的建議適用于法定方法和標(biāo)準(zhǔn)方法的實(shí)施，關(guān)鍵的建議有：1.通過系統(tǒng)適用性試驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)室和系統(tǒng)的性能2.評(píng)價(jià)方法的臨界性和復(fù)雜性3.選擇最重要的方法性能參數(shù)4.根據(jù)方法的臨界性和復(fù)雜性，重復(fù)13 個(gè)最為重要的驗(yàn)證試驗(yàn)ISO/IEC 17025在5.4.5.2中也給出相應(yīng)的注解