2020-2021學(xué)年高二生物人教版選擇性必修三：1.2.2-微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)--課件

1、二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 一、選擇培養(yǎng)基1.實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理:人為提供有利于_生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)_或_其他微生物的生長(zhǎng)。2.選擇培養(yǎng)基概念:在微生物學(xué)中,允許_的微生物生長(zhǎng),同時(shí)_其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。3.選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計(jì):(1)原理:分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解產(chǎn)生_。(2)培養(yǎng)基配方設(shè)計(jì):以_為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。目的菌抑制阻止特定種類(lèi)抑制或阻止NH3尿素【激疑】如果要從土壤中分離出固氮微生物,那么對(duì)培養(yǎng)基有什么要求呢?提示:固氮微生物能利用空氣中的N2,因此培養(yǎng)基中不應(yīng)添加氮源,這樣就只有固氮微生物才能生存。二、微生物的選擇培養(yǎng)1.方法:

2、對(duì)樣品進(jìn)行充分稀釋,然后將_涂布到制備好的_培養(yǎng)基上。2.稀釋涂布平板法的操作過(guò)程:(1)_稀釋操作:菌液選擇系列梯度(2)涂布平板操作。取菌液:取_菌液,添加到_。涂布器滅菌:取出浸在_中的涂布器,放在_上燃燒,酒精燃盡后,_涂布器。涂布過(guò)程:用涂布器將菌液_地涂布在培養(yǎng)基表面,涂布時(shí)可_培養(yǎng)皿,使菌液分布_。3.培養(yǎng):待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后,將平板_,放入_中培養(yǎng),觀察。0.1mL培養(yǎng)基表面酒精火焰冷卻均勻轉(zhuǎn)動(dòng)均勻倒置恒溫培養(yǎng)箱 【激疑】在進(jìn)行稀釋操作時(shí),需要在酒精燈火焰附近操作嗎?解釋原因。提示:需要。在進(jìn)行稀釋操作時(shí),如果不在酒精燈火焰附近進(jìn)行,就有可能造成雜菌污染。三、微生物的數(shù)

3、量測(cè)定1.稀釋涂布平板法:(1)統(tǒng)計(jì)依據(jù)。當(dāng)樣品的_足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)_。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。(2)操作。一般選擇菌落數(shù)為_(kāi)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。選用_的樣品液進(jìn)行培養(yǎng),在同一稀釋度下,應(yīng)至少對(duì)_個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù),然后求_。稀釋度活菌30300一定稀釋范圍3平均值2.顯微鏡直接計(jì)數(shù):利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或_,在顯微鏡下觀察、_,然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)四、探究實(shí)踐土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.提出問(wèn)題:如何_土壤中分解尿素的細(xì)菌?每克土壤樣品中含有多少分解尿素的細(xì)菌?分離2.基礎(chǔ)知

4、識(shí):組分含量提供的主要營(yíng)養(yǎng)KH2PO41.4 g_Na2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 g葡萄糖10.0 g_尿素1.0 g_瓊脂15.0 g_H2O定容至1 000 mL水無(wú)機(jī)鹽碳源氮源凝固劑3.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì):(1)土壤取樣:先鏟去_,取距地表_cm的土壤層,將樣品裝入_中。(2)樣品稀釋:一般選用_倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。(3)微生物的培養(yǎng)與觀察:一般在_的溫度下培養(yǎng)12天,每隔_統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目,選取_時(shí)的記錄作為結(jié)果。表層土38紙袋1104、1105、1106303724h菌落數(shù)目穩(wěn)定4.操作提示:選出下列關(guān)于實(shí)驗(yàn)操作的正確說(shuō)法_。本實(shí)驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng),應(yīng)提前制訂好計(jì)劃,提高效率。本實(shí)

5、驗(yàn)用到的器材比較多,應(yīng)該對(duì)試管和平板做好標(biāo)記。取土樣的鐵鏟和取樣紙袋使用前都要經(jīng)過(guò)消毒。為了防止雜菌污染,從酒精中取出的涂布器應(yīng)該直接在酒精燈火焰上充分燃燒滅菌。過(guò)熱的涂布器不能直接放在盛有酒精的燒杯中。5.結(jié)果分析與評(píng)價(jià):結(jié)合實(shí)驗(yàn)過(guò)程,判斷下列實(shí)驗(yàn)分析的正誤:(1)由于使用了選擇培養(yǎng)基,因此本實(shí)驗(yàn)不需要設(shè)置對(duì)照組。( )提示:應(yīng)該設(shè)置未接種的平板和接種在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的平板作為對(duì)照。(2)在同一稀釋度下,至少要涂布3個(gè)平板。 ( )(3)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí),選取菌落數(shù)在 30300 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。( )(4)應(yīng)該仔細(xì)觀察培養(yǎng)基上菌落的形狀、大小、顏色等特征,并要做好記錄。 ( )(5)統(tǒng)

6、計(jì)的分解尿素的細(xì)菌菌落數(shù)目就是樣品中分解尿素的活菌數(shù)目。( )提示:統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目還要經(jīng)過(guò)計(jì)算才能代表樣品中的活菌數(shù)目,而且數(shù)目偏低,因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落?！炯ひ伞窟x擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)分解尿素的細(xì)菌之后,pH會(huì)發(fā)生變化嗎?解釋原因。提示:會(huì)升高。分解尿素的細(xì)菌可以將尿素分解成NH3,導(dǎo)致培養(yǎng)基的pH升高。知識(shí)點(diǎn)一微生物的選擇培養(yǎng)與計(jì)數(shù)方法1.選擇培養(yǎng)的目的:從眾多微生物中分離出需要的特定微生物。2.篩選微生物常用培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基:選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基特殊成分控制某一條件(如唯一氮源)或加入某種物質(zhì)(如青霉素)加入某種指示劑或化學(xué)藥品目的抑制其他微生

7、物生長(zhǎng),促進(jìn)目的微生物的生長(zhǎng)與微生物的代謝產(chǎn)物或培養(yǎng)基中的成分發(fā)生特定反應(yīng)用途培養(yǎng)、分離出特定微生物鑒別不同的微生物舉例培養(yǎng)酵母菌和霉菌,可在培養(yǎng)基中加入青霉素,抑制細(xì)菌生長(zhǎng);用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)尿素分解菌可用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有,菌落呈深紫色,并帶有金屬光澤)3.稀釋涂布平板法:(1)主要操作環(huán)節(jié):系列梯度稀釋和涂布平板。(2)系列梯度稀釋和涂布平板后培養(yǎng)結(jié)果如圖所示:(3)計(jì)算公式:每克樣品中的菌株數(shù)= 稀釋倍數(shù)(4)計(jì)數(shù)結(jié)果:由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落,計(jì)算結(jié)果比實(shí)際值偏小。4.稀釋涂布平板法操作注意問(wèn)題:(1

8、)稀釋操作時(shí):每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌;操作時(shí),試管口和移液管應(yīng)在離火焰12 cm 處。(2)涂布平板時(shí)。涂布器浸在體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中,取出時(shí),讓多余酒精在燒杯中滴盡,然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中,以免引燃其中的酒精。酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適,移液管管頭不接觸任何物體。(3)同一稀釋度的樣液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上,經(jīng)涂布、培養(yǎng),計(jì)算出菌落平均數(shù)。5.兩種純化方法的比較:主要方法平板劃線法稀釋涂布平板法主要步驟接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線系列梯度稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器菌體獲取在具有顯著的菌落特征

9、的區(qū)域挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體能否用于計(jì)數(shù)不能計(jì)數(shù)可以計(jì)數(shù),但是操作復(fù)雜,需涂布多個(gè)平板共同點(diǎn)都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面,以獲得單細(xì)胞菌落,達(dá)到分離純化微生物的目的,也可用于觀察菌落特征6.顯微鏡直接計(jì)數(shù):(1)原理:此法利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。 (2)方法:顯微鏡下觀察,細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。(3)計(jì)算公式:每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平均細(xì)菌數(shù)40010 000稀釋倍數(shù)(4)缺點(diǎn):統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活細(xì)菌和死細(xì)菌的總和,計(jì)算結(jié)果比實(shí)際值偏大?！舅仞B(yǎng)案例】(2020全國(guó)卷)某種物質(zhì)S(一種含有C、H、N的

10、有機(jī)物)難以降解,會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染,只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基,甲的組分為無(wú)機(jī)鹽、水和S,乙的組分為無(wú)機(jī)鹽、水、S和Y?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)實(shí)驗(yàn)時(shí),盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用_的方法進(jìn)行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是_。甲、乙培養(yǎng)基均屬于_培養(yǎng)基。(2)實(shí)驗(yàn)中初步估測(cè)搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2107 個(gè)/mL,若要在每個(gè)平板上涂布100 L 稀釋后的菌液,且保證每個(gè)平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)不超過(guò)200個(gè),則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋_倍。(3)在步驟的篩選過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過(guò)某一濃度時(shí),某菌株對(duì)S的降解量反

11、而下降,其原因可能是_(答出1點(diǎn)即可)。(4)若要測(cè)定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù),請(qǐng)寫(xiě)出主要實(shí)驗(yàn)步驟_。(5)上述實(shí)驗(yàn)中,甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同,但都能為細(xì)菌的生長(zhǎng)提供4類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),即_?！窘馕觥勘绢}主要考查培養(yǎng)基的類(lèi)型及其應(yīng)用、無(wú)菌技術(shù)和微生物的分離與計(jì)數(shù)。(1)常用高壓蒸汽滅菌法處理盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶。由圖中過(guò)程可知,甲為液體培養(yǎng)基,乙為固體培養(yǎng)基,所以乙培養(yǎng)基中需要加入的Y為瓊脂。甲和乙培養(yǎng)基可以用于篩選能降解S的菌株,因此均屬于選擇培養(yǎng)基。(2)若要在每個(gè)平板上涂布100 L稀釋后的菌液,且每個(gè)平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)不超過(guò)200個(gè),根據(jù)計(jì)算公式:細(xì)菌細(xì)胞數(shù)=(CV)M可知,

12、稀釋倍數(shù)M=2107VC=21071000100200=104(倍)。(3)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過(guò)某一濃度后,可能會(huì)抑制菌株的生長(zhǎng),從而造成其對(duì)S的降解量下降。(4)要測(cè)定淤泥中能降解S的細(xì)菌的細(xì)胞數(shù),可以取淤泥加無(wú)菌水制成菌懸液,稀釋涂布到乙培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)。(5)甲和乙培養(yǎng)基均含有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源等成分。答案:(1)高壓蒸汽滅菌瓊脂選擇(2)104(3)S的濃度超過(guò)某一值時(shí)會(huì)抑制菌株的生長(zhǎng)(4)取淤泥加入無(wú)菌水,涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后計(jì)數(shù)(5)水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽【誤區(qū)警示】稀釋涂布平板法分離微生物常見(jiàn)誤區(qū)(1)誤認(rèn)為不用涂布均勻:用涂布器涂布平板時(shí)一定要涂布均

13、勻,否則難以得到單菌落。(2)誤認(rèn)為不用冷卻:涂布器使用前應(yīng)進(jìn)行酒精浸泡,然后灼燒滅菌,冷卻之后再涂布,否則會(huì)由于溫度過(guò)高殺死菌種?！舅仞B(yǎng)遷移】(2020棗莊高二檢測(cè))篩選是分離和培養(yǎng)微生物新類(lèi)型常用的手段,下列有關(guān)技術(shù)中不能篩選成功的是()A.在全營(yíng)養(yǎng)的LB培養(yǎng)基(普通培養(yǎng)基)中,篩選大腸桿菌B.在尿素固體培養(yǎng)基中,篩選能夠分解尿素的微生物C.用纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基,篩選能分解纖維素的微生物D.在培養(yǎng)基中加入不同濃度的氯化鈉,篩選抗鹽突變體的微生物【解析】選A。在全營(yíng)養(yǎng)的LB培養(yǎng)基中,幾乎所有細(xì)菌都能生長(zhǎng),不能篩選出大腸桿菌,A錯(cuò)誤;在尿素固體培養(yǎng)基中,只有能分解尿素的微生物才能生長(zhǎng),不

14、能分解尿素的微生物因缺乏氮源不能生長(zhǎng),能夠篩選分解尿素的微生物,B正確;在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上,只有能分解纖維素的微生物才能生長(zhǎng),不能分解纖維素的微生物因缺乏碳源不能生長(zhǎng),能篩選分解纖維素的微生物,C正確;在培養(yǎng)基中加入不同濃度的氯化鈉,能篩選抗鹽突變體微生物,D正確。 【補(bǔ)償訓(xùn)練】下列關(guān)于測(cè)定土壤中微生物數(shù)量的敘述,不正確的是()A.顯微鏡直接計(jì)數(shù)計(jì)算的結(jié)果比實(shí)際值偏大B.當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),一個(gè)活菌會(huì)形成一個(gè)菌落C.采用平板計(jì)數(shù)法獲得的菌落數(shù)往往少于實(shí)際的活菌數(shù)D.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),只要菌落數(shù)目在30300的平板都可以計(jì)數(shù),并以它們的平均值作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果【解析】選D。顯微鏡直接計(jì)數(shù)統(tǒng)

15、計(jì)的結(jié)果一般是活細(xì)菌和死細(xì)菌的總和,計(jì)算結(jié)果比實(shí)際值偏大,A正確;當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),一個(gè)活菌會(huì)形成一個(gè)菌落,B正確;采用平板計(jì)數(shù)法獲得的菌落有可能是由多個(gè)細(xì)菌形成的,所以往往少于實(shí)際的活菌數(shù),C正確;統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),應(yīng)選擇同一稀釋倍數(shù)下涂布的菌落數(shù)量為30300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),D錯(cuò)誤。知識(shí)點(diǎn)二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.分離菌種的原理:在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上,只有能產(chǎn)生脲酶的微生物才能分解尿素,而缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,會(huì)因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)繁殖。2.實(shí)驗(yàn)流程示意圖:3.實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程:流程具體操作操作提示土壤取樣先鏟去表層土,取距地表 38 cm的土壤層,

16、將樣品裝入紙袋中適宜在富含有機(jī)質(zhì),酸堿度接近中性的潮濕土壤中取樣取樣用的鐵鏟和取樣的紙袋使用前都需要滅菌制備培養(yǎng)基分別配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照組,用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇的作用流程具體操作操作提示樣品的稀釋和涂布火焰旁稱取土壤樣本將稀釋倍數(shù)為103107的稀釋液涂布平板。每個(gè)稀釋度至少涂布三個(gè)平板作為重復(fù)組注意無(wú)菌操作 對(duì)所用的平板、試管做好標(biāo)記初次實(shí)驗(yàn)對(duì)于稀釋的范圍沒(méi)有把握,可選擇一個(gè)較為寬泛范圍103107倍的稀釋液流程具體操作操作提示培養(yǎng)、觀察和計(jì)數(shù)將涂布好的平板和空白平板放在適宜溫度下的培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)每隔24 h統(tǒng)計(jì)一次菌落

17、數(shù)目,比較牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等,并做好記錄當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí),選取菌落數(shù)在30300 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)空白平板作為對(duì)照,檢測(cè)培養(yǎng)基制備是否合格觀察時(shí)還要記錄不同菌落的形狀、大小、顏色等在同一稀釋度下,至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行計(jì)數(shù),然后求出平均值,并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中活菌的數(shù)目4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析:內(nèi)容現(xiàn)象結(jié)論有無(wú)雜菌污染的判斷對(duì)照的培養(yǎng)皿中無(wú)菌落生長(zhǎng)未被雜菌污染培養(yǎng)基中菌落數(shù)偏高被雜菌污染菌落形態(tài)多樣,菌落數(shù)偏高培養(yǎng)基中混入其他雜菌選擇培養(yǎng)基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有篩選作用樣品的稀釋操作得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)

18、目在30300的平板操作成功重復(fù)組的結(jié)果若選取同一種土樣,統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)接近5.鑒定原理:分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為NH3,使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),pH升高。在選擇培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,培養(yǎng)某種細(xì)菌,若指示劑變紅,可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。【特別提醒】實(shí)驗(yàn)中的兩種“對(duì)照組”與“重復(fù)組”(1)兩種對(duì)照組作用比較。判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”,需將未接種的培養(yǎng)基(空白對(duì)照組)同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”,需設(shè)置完全培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)進(jìn)行接種培養(yǎng),觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目,進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。(2)重復(fù)組的設(shè)置及作用:為排除偶然因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾,在每一稀釋

19、度下宜設(shè)置3個(gè)平板作為重復(fù)組,選擇菌落數(shù)均在30300且數(shù)目相差不大的三個(gè)平板,用“平均值”代入計(jì)數(shù)公式計(jì)算活菌數(shù)?！舅仞B(yǎng)案例】巴氏芽孢桿菌是一類(lèi)具有較高脲酶活性,能夠分解尿素的細(xì)菌,廣泛分布在土壤、堆肥及污水中。這種細(xì)菌能夠?qū)⒌手械哪蛩胤纸獬砂睉B(tài)氮被植物吸收,對(duì)土壤的肥力有著重要作用。研究人員擬從土壤樣品中分離該類(lèi)細(xì)菌,如圖所示為操作流程,表示操作步驟。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)制備培養(yǎng)基時(shí),按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分,將其溶解、定容后,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的_,及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝,并進(jìn)行_滅菌。(2)步驟富集培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基按用途來(lái)分應(yīng)為_(kāi)培養(yǎng)基,步驟的主要目的是_。(3)在步驟的培養(yǎng)基中加入_

20、指示劑,根據(jù)培養(yǎng)基是否變紅來(lái)鑒定是否為尿素分解菌。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿,菌落數(shù)分別為163個(gè)、158個(gè)、159個(gè),則可以推測(cè)富集培養(yǎng)后的菌液中每毫升含活菌數(shù)為_(kāi)個(gè),運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值_。(4)要進(jìn)一步分離純化巴氏芽孢桿菌采用步驟_法進(jìn)行操作,在該操作過(guò)程中接種工具至少要灼燒_次?！窘忸}導(dǎo)引】解答本題的兩個(gè)關(guān)鍵知識(shí)點(diǎn):(1)培養(yǎng)基滅菌的方法:常用高壓蒸汽滅菌。(2)培養(yǎng)基種類(lèi)的判斷:富集培養(yǎng)目的是增加巴氏芽孢桿菌的濃度,所使用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基?！窘馕觥?1)制備培養(yǎng)基時(shí),操作過(guò)程為計(jì)算、稱量、溶化、配制培養(yǎng)液、調(diào)節(jié)pH、分裝、包扎、滅菌、倒平板,培養(yǎng)基需要進(jìn)行高壓

21、蒸汽滅菌。(2)圖中步驟富集培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基,目的是增加巴氏芽孢桿菌的濃度(數(shù)量)。(3)鑒別尿素分解菌時(shí)需要使用酚紅指示劑,根據(jù)培養(yǎng)基是否變紅來(lái)鑒定是否為尿素分解菌。富集培養(yǎng)后的菌液中每毫升含活菌數(shù)為(163+158+159)30.1103=1.6106個(gè),用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),由于一個(gè)菌落可能是兩個(gè)或多個(gè)微生物細(xì)胞的后代形成的,所以統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值偏低。(4)圖中分離純化巴氏芽孢桿菌采用的方法是平板劃線法,圖中劃線區(qū)域共4個(gè),所以該操作過(guò)程中接種工具至少要灼燒4+1=5次。答案:(1)pH高壓蒸汽(濕熱)(2)選擇增加巴氏芽孢桿菌的濃度(數(shù)量)(3)酚紅1.61

22、06偏低(4)平板劃線5【誤區(qū)警示】從土壤中分離微生物的注意事項(xiàng)(1)一般步驟:土壤取樣、選擇(富集)培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株。(2)選擇分離過(guò)程中需要使用選擇培養(yǎng)基,要做到全過(guò)程無(wú)菌操作。(3)常用的固體培養(yǎng)基上的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法。【素養(yǎng)探究母題追問(wèn)】(1)科學(xué)思維分析與綜合上題步驟中用到的培養(yǎng)基的氮源是什么物質(zhì)?提示:步驟中用到的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基,目的是增加巴氏芽孢桿菌的濃度(數(shù)量),應(yīng)該以尿素為氮源。(2)科學(xué)思維演繹與推理某同學(xué)發(fā)現(xiàn)他涂布的培養(yǎng)基上菌落數(shù)目過(guò)多連成一片,請(qǐng)你幫他分析可能的原因并提出合理的處理措施。提示:可能是稀釋倍數(shù)不夠,導(dǎo)致菌液濃度過(guò)

23、高,可以通過(guò)增大稀釋倍數(shù)解決。 【素養(yǎng)遷移】尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料,但若不經(jīng)細(xì)菌的分解,就不能更好地被植物利用。下列有關(guān)土壤中尿素分解菌的分離和培養(yǎng)的敘述,正確的是()A.培養(yǎng)基中加入尿素作為唯一碳源,該培養(yǎng)基是鑒別培養(yǎng)基B.測(cè)定土壤中分解尿素的細(xì)菌數(shù)量和測(cè)定土壤中放線菌的數(shù)量可采用相同的稀釋度C.細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成氨,氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),pH升高D.利用稀釋涂布平板法可以直接完成土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離計(jì)數(shù)和純化鑒定【解析】選C。培養(yǎng)基中加入尿素作為唯一碳源,該培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基,A錯(cuò)誤;因?yàn)橥寥乐懈黝?lèi)微生物的數(shù)量不同,故為獲得不同類(lèi)型的微生物,要按不同的稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離,

24、B錯(cuò)誤;細(xì)菌合成的脲酶能將尿素分解成氨,氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),pH升高,可加入酚紅指示劑進(jìn)行檢測(cè),C正確;鑒定分解尿素的細(xì)菌應(yīng)該用加酚紅的鑒別培養(yǎng)基,D錯(cuò)誤?！狙a(bǔ)償訓(xùn)練】在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí),A同學(xué)從對(duì)應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落,而其他同學(xué)只篩選出大約50個(gè)菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有()土樣不同培養(yǎng)基被污染操作失誤沒(méi)有設(shè)置對(duì)照A.B.C.D.【解析】選A。土樣不同、培養(yǎng)基被污染和操作失誤都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,對(duì)照的設(shè)置對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有影響。【課堂回眸】課堂檢測(cè)素養(yǎng)達(dá)標(biāo)【概念診斷】1.下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)的描述正確的是_。分離分解尿素的細(xì)菌要使用以尿素為唯一氮源的選

25、擇培養(yǎng)基對(duì)微生物計(jì)數(shù)可以使用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種微生物使用顯微鏡直接計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果比樣品中的實(shí)際活菌數(shù)偏高在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,應(yīng)遵循平行重復(fù)原則,同一稀釋倍數(shù)下至少涂布三個(gè)平板進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí)要每隔24 h統(tǒng)計(jì)一次菌落的數(shù)目獲得菌落數(shù)目為30300的平板就說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作成功【解析】選。在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上,只有能利用尿素的微生物才能生長(zhǎng),正確;對(duì)微生物計(jì)數(shù)使用稀釋涂布平板法接種微生物,平板劃線法無(wú)法計(jì)數(shù),錯(cuò)誤;使用顯微鏡直接計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)的是活菌和死菌的數(shù)量,結(jié)果比樣品中的實(shí)際活菌數(shù)偏高,正確;在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,應(yīng)遵循平行重復(fù)原則,同一稀釋倍數(shù)下至少涂布三個(gè)平板,正確;進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí)要每

26、隔24 h統(tǒng)計(jì)一次菌落的數(shù)目,正確;應(yīng)是在同一稀釋倍數(shù)下,獲得菌落數(shù)目為30300 的平板,且差距不能過(guò)大,說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作成功,錯(cuò)誤。2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素【解析】選D。合成脲酶的微生物能夠分解尿素,所以碳源是葡萄糖,氮源是尿素。3.用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)()可以用相同的培養(yǎng)基 都需要使用接種環(huán)進(jìn)行接種 都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行接種 都可以用來(lái)計(jì)數(shù)活菌A.B.C.D.【解析】選C。平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基,可以使用相同的培養(yǎng)基,正確;平板劃線法采用接種環(huán)進(jìn)行操作,而

27、稀釋涂布平板法采用涂布器進(jìn)行操作,錯(cuò)誤;純化時(shí),要進(jìn)行無(wú)菌操作,需要在酒精燈火焰旁接種,避免空氣中的微生物混入培養(yǎng)基,正確;平板劃線法一般用于分離而不是計(jì)數(shù),錯(cuò)誤。4.(2020浙江7月選考改編)下列關(guān)于微生物培養(yǎng)及利用的敘述,錯(cuò)誤的是()A.利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物,而保留利用尿素的微生物B.配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)根據(jù)微生物的種類(lèi)調(diào)整培養(yǎng)基的pHC.酵母菌不能直接利用糯米淀粉發(fā)酵得到糯米酒D.適宜濃度的酒精可使醋酸菌活化【解析】選A。本題主要考查微生物的培養(yǎng)條件和應(yīng)用。尿素固體培養(yǎng)基上,由于不能利用尿素做氮源的微生物不能生長(zhǎng)繁殖,而保留利用尿素的微生物,并非迅速殺死其他微生物,A項(xiàng)錯(cuò)誤

28、;不同的微生物所需的pH不同,所以配制培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)根據(jù)微生物的種類(lèi)調(diào)整培養(yǎng)基的pH,B項(xiàng)正確;酵母菌不能直接利用淀粉,應(yīng)用酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化,再用酵母菌發(fā)酵得到糯米酒,C項(xiàng)正確;醋酸菌在有氧條件下能利用酒精產(chǎn)生醋酸,所以適宜濃度的酒精可以使醋酸菌活化,D項(xiàng)正確。5.下列關(guān)于菌種計(jì)數(shù)方法的敘述不正確的是()A.當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落B.應(yīng)該選取培養(yǎng)基表面菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為有效數(shù)據(jù)C.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般采用密度較大的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)D.在某一濃度下涂布三個(gè)平板,以它們的平均值作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果【解析】選C。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面一個(gè)活菌會(huì)

29、形成一個(gè)菌落,A正確;應(yīng)該選取培養(yǎng)基表面菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為有效數(shù)據(jù),B正確;為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選取菌落數(shù)在30300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),C錯(cuò)誤;在某一濃度下涂布三個(gè)平板,若三個(gè)平板統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)差別不大,則應(yīng)以它們的平均值作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果以減小實(shí)驗(yàn)誤差,D正確。【思維躍遷】6.自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的。人們?cè)谘芯课⑸飼r(shí)一般要將它們分離提純,然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定。下面是有關(guān)土壤中分解尿素的細(xì)菌分離和計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程,請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題。(1)若取土樣6 g,應(yīng)加入_mL的無(wú)菌水配制成稀釋10倍土壤溶液。因土壤中細(xì)菌密度很大,需要不斷加以稀釋,配制成101107不同濃度的土壤溶液。將1031

30、07倍的稀釋液分別吸取0.2 mL加入固體培養(yǎng)基上,用涂布器將菌液鋪平,每個(gè)稀釋度下至少涂布3個(gè)平板,這種接種方法稱為_(kāi)。將接種的培養(yǎng)皿放置在37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448 h,觀察并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù),結(jié)果如下表,其中_倍的稀釋比較合適,由此計(jì)算出每克土壤中的菌落數(shù)為_(kāi)。這種方法測(cè)定的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_(填“低”或“高”)。稀釋倍數(shù)103104105106107菌落數(shù)/個(gè)1號(hào)平板4783672772652號(hào)平板4963542612083號(hào)平板509332254293(2)若研究尿素分解菌的群體生長(zhǎng)規(guī)律,可采用平板劃線法分離土壤中的尿素分解菌。操作時(shí),接種環(huán)通過(guò)灼燒滅菌,在第二次及以后劃線時(shí)

31、,總是從上一次的末端開(kāi)始劃線。這樣做的目的是_。將分離純化后的單個(gè)菌落進(jìn)行液體培養(yǎng),可采用定期取樣的方法進(jìn)行計(jì)數(shù)。若以一個(gè)大方格(體積為0.1 mm3)有25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行計(jì)算,設(shè)5個(gè)中方格中總菌數(shù)為45,菌液稀釋倍數(shù)為102 ,那么原菌液的菌群密度為_(kāi)個(gè)/mL。 【解析】(1)根據(jù)題意分析,需要稀釋10倍的土壤溶液,因此應(yīng)該將6 g土樣加入54 mL的無(wú)菌水進(jìn)行配制;將103107倍的稀釋液分別吸取0.2 mL加入固體培養(yǎng)基上,用稀釋涂布平板法將菌液用涂布器涂布到固體培養(yǎng)基上;估算樣品中的活菌數(shù)時(shí),往往選取菌落數(shù)在30到300之間的平板,分析表格中數(shù)據(jù)可知,稀釋倍數(shù)為105的平板菌

32、落數(shù)在這一范圍;每克土壤中的菌落數(shù)為(277+261+254)3 1050.26=2.2107。稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí),由于菌落之間會(huì)相互重疊,因此測(cè)定的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。(2)用平板劃線法分離土壤中的尿素分解菌時(shí),為了將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得(不連續(xù))單個(gè)菌落,在第二次及以后劃線時(shí),總是從上一次的末端開(kāi)始劃線。若以一個(gè)大方格(體積為0.1 mm3)有25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行計(jì)算,設(shè)5個(gè)中方格中總菌數(shù)為45,菌液稀釋倍數(shù)為102 ,那么原菌液的菌群密度=4550.110-3102=2.25108個(gè)/mL。答案:(1)54稀釋涂布平板法1052.2107低(2)將聚集

33、的菌體逐步稀釋以便獲得(不連續(xù))單個(gè)菌落2.25108 【拓展探究】7.反芻動(dòng)物的瘤胃中有許多能分解尿素的微生物。為了研究利用尿素配制的反芻動(dòng)物飼料,以替代部分蛋白質(zhì)飼料,降低飼料成本,進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)尿素是尿素分解菌的氮源,因此在配制培養(yǎng)基時(shí)_。A.葡萄糖在培養(yǎng)基中含量越多越好B.尿素在培養(yǎng)基中含量越少越好C.尿素分解菌無(wú)固氮能力,故培養(yǎng)基中的氮源為尿素D.尿素分解菌有固氮能力,故培養(yǎng)基中尿素為無(wú)機(jī)氮(2)瘤胃中的尿素分解菌能將尿素分解成_,其中的_可用于合成微生物蛋白,該蛋白質(zhì)是反芻動(dòng)物的優(yōu)質(zhì)氮源。(3)為研究瘤胃中尿素分解菌的種類(lèi),實(shí)驗(yàn)者配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基

34、,該培養(yǎng)基從功能上屬于_培養(yǎng)基?？稍谂囵B(yǎng)基中加入_指示劑以初步鑒定這些菌能夠分解尿素,為確證這些菌是尿素分解菌,可通過(guò)酶活性測(cè)定及基因數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),只有具有脲酶活性和_基因的菌,才是真正的尿素分解菌。(4)研究發(fā)現(xiàn),如果只飼喂尿素配制的飼料,會(huì)導(dǎo)致反芻動(dòng)物氨中毒,請(qǐng)根據(jù)高中所學(xué)知識(shí)分析其原因是_?！窘馕觥?1)尿素既可以作為尿素分解菌的氮源,也可以作為其碳源,葡萄糖在培養(yǎng)基中并不是越多越好,A項(xiàng)錯(cuò)誤;添加尿素的目的是篩選尿素分解菌,其他微生物不能很好地生活在該培養(yǎng)基上,尿素在培養(yǎng)基中不是越少越好,過(guò)少就失去選擇作用,過(guò)多又會(huì)使細(xì)胞失水死亡,B項(xiàng)錯(cuò)誤;尿素分解菌沒(méi)有固氮能力,故培養(yǎng)基中需要添加尿素

35、作為有機(jī)氮源,C項(xiàng)正確,D項(xiàng)錯(cuò)誤。(2)尿素分解菌能將尿素分解成CO2和NH3,其中的NH3可用于合成微生物蛋白,為反芻動(dòng)物提供優(yōu)質(zhì)氮源。(3)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基,尿素分解菌可以生存,而其他微生物不能存活,因此該培養(yǎng)基從功能上屬于選擇培養(yǎng)基;可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑以初步鑒定這些菌能夠分解尿素;為確證這些菌是尿素分解菌,可通過(guò)酶活性測(cè)定及基因數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),只有具有脲酶活性和脲酶基因的菌,才是真正的尿素分解菌。(4)如果只飼喂尿素配制的飼料,會(huì)導(dǎo)致反芻動(dòng)物氨中毒,原因是氨會(huì)使瘤胃液pH增大。 答案:(1)C(2)CO2和NH3NH3(3)選擇酚紅脲酶(4)氨會(huì)使瘤胃液pH增大課時(shí)素養(yǎng)評(píng)價(jià)三

36、微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)【基礎(chǔ)達(dá)標(biāo)】 (20分鐘70分)一、選擇題(共8小題,每小題5分,共40分)1.通過(guò)選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng);在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng);在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出()大腸桿菌霉菌放線菌固氮細(xì)菌A.B.C.D.只有【解析】選A。缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng),而固氮細(xì)菌能生長(zhǎng);在培養(yǎng)基中加青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌等原核生物細(xì)胞壁的合成,而霉菌屬于真核生物,故能生長(zhǎng);在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌

37、的生長(zhǎng),對(duì)放線菌的生長(zhǎng)無(wú)影響。2.稀釋涂布平板法是微生物培養(yǎng)中的一種常用的接種方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.操作中需要將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋B.需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面C.不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落D.操作過(guò)程中對(duì)培養(yǎng)基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理【解題關(guān)鍵】解答本題需明確梯度稀釋的目的以及防止雜菌污染的做法?！窘馕觥窟xC。若菌液濃度過(guò)大,形成的菌落連在一起,得不到單個(gè)的菌落。【互動(dòng)探究】(1)題中如果不同稀釋度的菌液接種后都不能得到單細(xì)胞菌落,原因是什么?提示:可能是稀釋度不夠,聚集在一起的微生物沒(méi)能被分散成單個(gè)細(xì)胞。(2)題中如果不進(jìn)行D

38、項(xiàng)操作,培養(yǎng)基上得到的菌落可能有哪些變化?提示:菌落種類(lèi)和數(shù)目增多。3.下列是關(guān)于“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述,其中錯(cuò)誤的是()A.利用稀釋涂布平板法準(zhǔn)確估計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)B.若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用,需設(shè)置接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對(duì)照C.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置,25 恒溫培養(yǎng)2448小時(shí)D.選擇菌落數(shù)在30300之間的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)【解析】選C。利用稀釋涂布平板法準(zhǔn)確估計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),稀釋倍數(shù)太低,菌落太多會(huì)長(zhǎng)在一起,稀釋倍數(shù)太高,平板上菌落數(shù)目過(guò)少,都不易進(jìn)行計(jì)數(shù),A正確;若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用,需設(shè)

39、置接種了的沒(méi)有選擇作用的細(xì)菌通用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對(duì)照,B正確;將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置,3037 恒溫培養(yǎng)2448小時(shí),C錯(cuò)誤;計(jì)數(shù)時(shí)通常選擇菌落數(shù)在30300之間的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù),D正確。 【補(bǔ)償訓(xùn)練】下列關(guān)于能分解尿素的細(xì)菌的說(shuō)法,正確的是 ()A.能分解尿素的原因是能合成蛋白酶B.分離該種細(xì)菌時(shí)以尿素作為唯一碳源C.環(huán)境中含有大量的尿素誘導(dǎo)該細(xì)菌產(chǎn)生了分解尿素的特性D.用以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養(yǎng)基培養(yǎng)該菌后不會(huì)使酚紅指示劑變紅【解析】選D。酶具有專一性,分解尿素的細(xì)菌之所以能分解尿素是因?yàn)槟芎铣?、分泌脲?A項(xiàng)錯(cuò)誤;分離能分解尿素的細(xì)菌時(shí)以尿素作為唯一氮源,B項(xiàng)

40、錯(cuò)誤;環(huán)境中含有大量的尿素對(duì)分解尿素的細(xì)菌起了選擇作用,而非誘導(dǎo)作用,C項(xiàng)錯(cuò)誤;該菌產(chǎn)生的脲酶把尿素分解為氨后,使pH升高,可使酚紅指示劑變紅,但添加酸堿緩沖劑后,阻止了pH的升高,因此培養(yǎng)基不使酚紅指示劑變紅,D項(xiàng)正確。4.關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中,下列操作需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行的一組是()土壤取樣稱取土壤稀釋土壤溶液涂布平板微生物的培養(yǎng)A.B.C.D. 【解析】選D。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行無(wú)菌操作,其中土壤取樣是在室外進(jìn)行,微生物的培養(yǎng)是在恒溫箱中進(jìn)行,其余過(guò)程都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行,D項(xiàng)正確。5.某學(xué)者欲研究被石油污染過(guò)的土壤中細(xì)菌數(shù)量,并從中篩選

41、出能分解石油的細(xì)菌。下列操作錯(cuò)誤的是()A.利用平板劃線法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)B.以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選C.采用稀釋涂布平板法分離菌種D.稱取和稀釋土壤時(shí)應(yīng)在酒精燈火焰旁【解析】選A。平板劃線法能對(duì)細(xì)菌分離純化,但不能對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù),稀釋涂布平板法可以分離菌種還可進(jìn)行計(jì)數(shù),A錯(cuò)誤。6.下列有關(guān)微生物分離、純化及計(jì)數(shù)的敘述,錯(cuò)誤的是()A.常用富含纖維素的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)纖維素分解菌B.平板劃線法通過(guò)連續(xù)劃線將聚集的菌種分散并計(jì)數(shù)C.稀釋涂布平板法通過(guò)系列梯度稀釋可將微生物分散D.用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比稀釋涂布平板法得到的結(jié)果偏大 【解析】選B。纖維素是纖維素分解菌的碳源,因此常用富含

42、纖維素的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)纖維素分解菌;平板劃線法通過(guò)連續(xù)劃線將聚集的菌種分散,但不能用于微生物的計(jì)數(shù);稀釋涂布平板法通過(guò)系列梯度稀釋可將微生物分散并計(jì)數(shù);用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)微生物時(shí),會(huì)將死的微生物計(jì)數(shù)在內(nèi),因此導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果往往偏大。7.(2020紹興高二檢測(cè))為研究泡菜腌制過(guò)程中起作用的微生物的種類(lèi)及比例,需要進(jìn)行分離培養(yǎng)。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.配制培養(yǎng)基時(shí),需要加適量的凝固劑B.接種方法可選擇平板劃線分離法或稀釋涂布平板法C.需要設(shè)置未經(jīng)接種的空白對(duì)照D.培養(yǎng)需要在無(wú)氧條件下進(jìn)行【解析】選B。配制培養(yǎng)基時(shí),需要加適量的凝固劑,制成固體培養(yǎng)基,用于微生物的分離,A正確;要研究微生物的種類(lèi)及比例

43、,應(yīng)選用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種,B錯(cuò)誤。需要設(shè)置未經(jīng)接種的空白對(duì)照,排除培養(yǎng)基被雜菌污染的可能,C正確;乳酸菌屬于厭氧菌,需要在無(wú)氧條件下培養(yǎng),D正確。8.(2020濟(jì)南高二檢測(cè))如圖為分離和純化分解甲醛細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)過(guò)程,其中LB培養(yǎng)基能使菌種成倍擴(kuò)增,以下說(shuō)法正確的是() A.需要對(duì)活性污泥做滅菌處理B.中LB培養(yǎng)基應(yīng)以甲醛為唯一碳源C.目的菌種異化作用類(lèi)型為厭氧型D.經(jīng)處理后,應(yīng)選擇瓶中甲醛濃度最低的一組進(jìn)一步純化培養(yǎng)【解析】選D。該實(shí)驗(yàn)是從活性污泥中分離和純化分解甲醛細(xì)菌,則活性污泥不能滅菌,A錯(cuò)誤;LB培養(yǎng)基使菌種成倍擴(kuò)增,應(yīng)用完全培養(yǎng)基培養(yǎng),B錯(cuò)誤;圖示分解甲醛細(xì)菌進(jìn)行振蕩培養(yǎng),屬于需

44、氧型細(xì)菌,C錯(cuò)誤;經(jīng)處理后,瓶中甲醛濃度降低,甲醛濃度最低的一組中分解甲醛細(xì)菌純度最高,可進(jìn)一步純化培養(yǎng),D正確?！净?dòng)探究】上題中從到在操作過(guò)程中的關(guān)鍵是什么?提示:無(wú)菌操作:接種環(huán)需要灼燒滅菌,并等待接種環(huán)冷卻后挑取菌種,防止菌種被高溫殺死;操作完成后需將接種環(huán)在火焰上灼燒,以殺滅殘留的微生物。二、非選擇題(共2小題,共30分)9.(16分)(2020烏魯木齊高二檢測(cè))2020年,疫情期間,外賣(mài)成交量迅速攀升,外賣(mài)餐食的微生物污染狀況也越來(lái)越多地受到人們的關(guān)注。研究人員通過(guò)實(shí)驗(yàn)探究了同種外賣(mài)餐食送達(dá)時(shí)的溫度與其中的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的數(shù)量關(guān)系。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題:(1)測(cè)量送達(dá)餐食的

45、溫度時(shí),應(yīng)測(cè)量餐食_(填“表面”或“中心”)部位的溫度。(2)通常采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù),在配制培養(yǎng)基時(shí)需加入_作為凝固劑,并用_法進(jìn)行接種。(3)檢測(cè)金黃色葡萄球菌時(shí),通常在培養(yǎng)基中加入一定量的NaCl,像這樣允許特定種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱為_(kāi)培養(yǎng)基。為避免培養(yǎng)基中的菌落數(shù)太多影響計(jì)數(shù),可對(duì)樣品進(jìn)行適度的_。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)為_(kāi)范圍的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往會(huì)比活菌的實(shí)際數(shù)目低,原因是_。(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,送達(dá)溫度與菌落數(shù)量呈負(fù)相關(guān),因此送達(dá)溫度較_的餐食,合格率較高。 【解析】(1)餐食的表面溫度較低,測(cè)量送達(dá)餐食的溫度時(shí),應(yīng)測(cè)量餐食中心部位的溫度。(2

46、)固體培養(yǎng)基需要加入凝固劑瓊脂,稀釋涂布平板法可以用來(lái)對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),從而得知細(xì)菌的數(shù)目。(3)金黃色葡萄球菌有較高的耐鹽性,通常在培養(yǎng)基中加入一定量的NaCl可以篩選金黃色葡萄球菌,像這樣允許特定種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中的菌落數(shù)太多會(huì)影響計(jì)數(shù),因此可對(duì)樣品進(jìn)行適度的稀釋。菌落太少誤差較大,菌落太多容易聚集成一個(gè)菌落,因此為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)為30300范圍的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往會(huì)比活菌的實(shí)際數(shù)目低,原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞聚集在一起,平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。(4)送達(dá)溫度與菌落數(shù)量呈負(fù)相關(guān),因此送達(dá)溫度較高的餐食,說(shuō)明含菌量較少,合格率較高。答案

47、:(1)中心(2)瓊脂稀釋涂布平板(3)選擇稀釋30300當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞聚集在一起,平板上觀察到的只是一個(gè)菌落(4)高 10.(14分)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況,某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量,并進(jìn)行了細(xì)菌分離和培養(yǎng)等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中細(xì)菌含量。將1 mL水樣稀釋1 000倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液。經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37,據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)個(gè)。(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí),接種環(huán)通過(guò)_滅菌,為了將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落,在第二次及以后的劃

48、線時(shí),一定要_,示意圖A和B中,_表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。通常,對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù)_對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定和分類(lèi)。(3)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻,一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng),另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是:振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中_的含量,同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高_(dá)的利用率?！窘馕觥?1)由題意知,1 mL水樣中的菌落數(shù)是(39+38+37)30.11 000 =3.8105,每升水樣中的活菌數(shù)為3.8105103=3.8108(個(gè))。(2)接種環(huán)用灼燒法進(jìn)行滅菌。在第二次及以后的劃線時(shí),總是從上

49、一次劃線的末端開(kāi)始劃線,這樣做的目的是通過(guò)劃線次數(shù)的增加,將聚集的菌體逐漸稀釋分散,使每次劃線時(shí)菌體的數(shù)目逐漸減少,以便獲得由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的單個(gè)菌落。圖A是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果,圖B表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果?？梢砸罁?jù)菌落的形狀、大小等特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定和分類(lèi)。(3)振蕩培養(yǎng)可以增加液體培養(yǎng)基的氧氣含量,同時(shí)還能使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。答案:(1)3.8108(2)灼燒從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線B菌落的形狀、大小等特征(3)溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)【能力提升】(10分鐘30分)1.(5分)(不定項(xiàng))如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌

50、的示意圖,有關(guān)敘述正確的是() A.在配制步驟、的培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)先調(diào)pH后高壓蒸汽滅菌B.步驟采用涂布平板法接種,并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素C.步驟挑取中不同種的菌落分別接種,比較細(xì)菌分解尿素的能力D.步驟純化分解尿素細(xì)菌的原理是將聚集的細(xì)菌分散,可以獲得單細(xì)胞菌落【解題關(guān)鍵】明確以下兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn):(1)配制培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)該在滅菌之前調(diào)節(jié)pH。(2)培養(yǎng)基的選擇:以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。【解析】選A、C、D。在配制步驟、的培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)先調(diào)pH后高壓蒸汽滅菌,A正確;要篩選出能高效分解尿素的細(xì)菌,所選用的培養(yǎng)基要以尿素為唯一氮源,但牛肉膏和蛋白胨中都含有尿素,因此步驟所用的培養(yǎng)基中不能含有牛肉膏蛋白胨,B錯(cuò)誤;步驟挑取中不同種的菌落分別接種,比較細(xì)菌分解尿素的能力,C正確;步驟純化分解尿素細(xì)菌的原理是將聚集的細(xì)菌分散,可以獲得單細(xì)胞菌落,D正確。【方法規(guī)律】篩選微生物的三種方法(1)單菌落挑取法:利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面,直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方