單純皰疹病毒疫苗講義(共7頁)

1、 生物制品(shn w zh pn)學(xué)課堂作業(yè) 課題(kt)： 單純(dnchn)皰疹病毒疫苗 組長： 陳 畑 組員： 潘 蕓 金宏杰 日期： 2015.04.03 分?jǐn)?shù)： 單純(dnchn)皰疹病毒疫苗講義(jingy)各位同學(xué)(tng xu)，下午好，我們小組要講的課題是單純皰疹病毒疫苗。1986年，日本的HSV（單純皰疹病毒）抗體陰性者日漸增多，120歲陰性者達(dá)70一80%，40歲以上占10%，20多歲介于二者之間。與此同時，生殖器皰疹、新生兒皰疹、皰疹性腦炎等單純疤疹病毒所引起的疾病逐漸增加。在美國，潛伏性(隱匿性)的生殖器皰疹患者達(dá)1000萬人，每年原發(fā)性生殖器疤疹患者達(dá)3050萬人

2、，這已成為嚴(yán)重的社會問題【森良一】。和CVM（巨細(xì)胞病毒）一樣，HSV在人群中感染相當(dāng)廣泛，HSVI人群感染率高達(dá)50% - 90%（多為隱性潛伏性感染）。隨著我國經(jīng)濟(jì)、社會的發(fā)展，我們需要更多地關(guān)注這類只以人為宿主細(xì)胞的病毒，不管在預(yù)防上還是治療上。【展示圖片】首先，我們來認(rèn)識一下單純皰疹病毒：單純皰疹病毒HSV（Herpes simplex virus）屬皰疹病毒亞科【有、三亞科】，是皰疹病毒的典型代表病毒。HSV病毒顆粒（毒粒）呈球形，直徑為120-150nm，完整病毒粒由核心、衣殼、皮層（內(nèi)膜、被膜）及包膜（囊膜）組成，核心含雙股DNA，纏繞成纖絲卷軸（圓柱狀）；衣殼呈二十面體對稱，由

3、162個殼微粒組成，直徑為100nm；衣殼外為一層皮層，最外為包膜上有刺突（或囊膜突起）；包膜表面含有12種糖蛋白【gB、gC、gD、gE、gG、gI、gH、gJ、gK、gL、gM和gN】【書本239】。球形，120-150nm 核心: 線性dsDNA 衣殼: 20面體立體對稱 皮層: 衣殼和包膜之間 包膜: 表面有糖蛋白刺突根據(jù)抗原性的差別，目前把該病毒分為HSVI和HSVII。其中HSV I主要引起腰部以上、生殖器以外的皮膚、黏膜、器官和神經(jīng)系統(tǒng)感染；HSVII主要引起腰部以下的皮膚皰疹和生殖器皰疹。兩個(lin )血清型：HSV-1 和HSV-2 (同源性5070%，測序完成(wn ch

4、ng) )，型間有共同(gngtng)抗原也有特異性抗原，可用型特異性單克隆抗體做ELISA、DNA限制性酶切圖譜分析及DNA雜交實(shí)驗(yàn)等方法區(qū)分型別?；蚪M：150 kb（1.5百萬）, 編碼70多種蛋白與病毒增殖有關(guān)：DNA聚合酶、TK（胸苷激酶）等與細(xì)胞相互作用有關(guān)： 粘附性糖蛋白：gB、gC、gD和gH 融合蛋白：gB等。 免疫逃逸：gC(C3bR)，gE/gL復(fù)合物(IgGFcR)；與結(jié)構(gòu)有關(guān)： 衣殼蛋白 包膜糖蛋白：gC，gL，gE等 與分型有關(guān)： 血清型：gG（型特異性糖蛋白） gG-1代表HSV-1，gG-2為HSV-2它有宿主范圍廣（二倍體細(xì)胞），復(fù)制周期長，致細(xì)胞病變強(qiáng)，易擴(kuò)

5、散，在神經(jīng)節(jié)中常形成潛伏感染等特點(diǎn)。接著，我們來看一看單純皰疹病毒侵染、增殖情況：HSV通過表面的糖蛋白（gB、gC、gD、gH）誘導(dǎo)，與宿主細(xì)胞融合，將自己的核酸轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，在核內(nèi)復(fù)制和裝配，核膜出芽（gH），以胞吐或細(xì)胞溶解方式釋放：立即早期蛋白(immediate early protein或蛋白): 調(diào)節(jié)蛋白，起動和調(diào)節(jié)和基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)；早期蛋白(early protein 或蛋白): DNA復(fù)制有關(guān)的酶和調(diào)節(jié)因子，如DNA聚合酶，胸苷激酶等；晚期蛋白( late protein 或蛋白): 結(jié)構(gòu)蛋白。 HSV可在多種細(xì)胞中增殖【二倍體】，產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)胞腫脹、變圓和產(chǎn)生

6、核內(nèi)嗜酸性包涵體（表達(dá)外源基因的宿主細(xì)胞）【書本239】。HSV作為抗原，它的致病性與免疫性如何呢？HSV通過患者、健康的病毒攜帶者（病毒常存在于皰疹病灶或攜帶者唾液中）進(jìn)行傳播，途徑有：密切接觸、呼吸道、胎盤（HSVI）、性接觸、產(chǎn)道（HSVII）及破損皮膚侵入人體，入侵后在局部少量復(fù)制，然后進(jìn)入皮膚神經(jīng)元，沿軸突上行至感覺神經(jīng)節(jié)并進(jìn)行病毒DNA合成而潛伏，在適當(dāng)條件下（受到外界刺激，如物理、情感、壓力、發(fā)熱、紫外線照射、組織損傷或免疫抑制等）被激活再返回值感染局部是即出現(xiàn)肉眼可見的水皰疹。局部感染較重時，病毒可沿淋巴管擴(kuò)散，導(dǎo)致淋巴結(jié)炎。若集體免疫功能低下，尤其是細(xì)胞免疫功能缺損時，可導(dǎo)致

7、病毒血癥并引起多器官損害【百度文庫】。偶爾也可發(fā)生嚴(yán)重的全身性疾病，累及內(nèi)臟【百度文庫資源】。盡管抗病毒治療是有效的，潛伏感染還是可以伴隨患者終生，并經(jīng)常復(fù)發(fā)或?qū)е聼o癥狀排毒【林靜染】。其感染(gnrn)類型與臨床表現(xiàn)有以下(yxi)四類：【1】原發(fā)感染(gnrn)：6個月以內(nèi)嬰兒多從母體通過胎盤獲得抗體，初次感染約90%無臨床癥狀，多為隱性感染。HSV-1原發(fā)感染常發(fā)生于1-15歲，常見的有齦口炎，系在口頰粘膜和齒齦處發(fā)生成群皰疹，破裂后，多蓋一層壞死組織。此外可引起唇皰疹、濕疹樣皰疹、皰疹性角膜炎、皰疹性腦炎等。 HYPERLINK /sowiki/%E7%94%9F%E6%AE%96%E

8、5%99%A8?prd=content_doc_search o 生殖器 生殖器皰疹多見于14歲以后由HSV-2引起，比較嚴(yán)重，局部劇痛，伴有發(fā)熱全身不適及淋巴結(jié)炎。HSV-1：皰疹性齦口炎，唇皰疹，皰疹性濕疹，角膜結(jié)膜炎，皰疹性腦炎HSV-2：生殖器皰疹，新生兒皰疹 【2】潛伏感染和復(fù)發(fā)：HSV原發(fā)感染產(chǎn)生免疫力后，將大部分病毒清除，部分病毒可沿 HYPERLINK javascript:linkredwin(神經(jīng)髓鞘); o 神經(jīng)髓鞘 神經(jīng)髓鞘到達(dá)三叉神經(jīng)節(jié)（HSV-1）和脊神經(jīng)節(jié)（HSV-2）細(xì)胞中或周圍星形神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，以潛伏狀態(tài)持續(xù)存在，與機(jī)體處于相對平衡，不引起臨床癥狀。當(dāng)機(jī)體發(fā)

9、熱、受寒、日曬、 HYPERLINK /sowiki/%E6%9C%88%E7%BB%8F?prd=content_doc_search o 月經(jīng) 月經(jīng)、情緒緊張，使用垂體或 HYPERLINK /sowiki/%E8%82%BE%E4%B8%8A%E8%85%BA%E7%9A%AE%E8%B4%A8%E6%BF%80%E7%B4%A0?prd=content_doc_search o 腎上腺皮質(zhì)激素 腎上腺皮質(zhì)激素，遭受某些細(xì)菌病毒感染等，潛伏的病毒激活增殖，沿神經(jīng)纖維索下行至感覺神經(jīng)末梢，至附近表皮細(xì)胞內(nèi)繼續(xù)增殖，引起復(fù)發(fā)性局部皰疹。其特點(diǎn)是每次復(fù)發(fā)病變往往發(fā)生于同一部位。最常見在唇鼻間皮

10、膚與粘膜交界處出現(xiàn)成群的小皰疹。皰疹性角膜炎、皰疹性宮頸炎等亦可反復(fù)發(fā)作?！?】先天性感染與新生兒感染：HSV通過胎盤感染，影響胚胎 HYPERLINK /sowiki/%E7%BB%86%E8%83%9E?prd=content_doc_search o 細(xì)胞 細(xì)胞有絲分裂，易發(fā)生流產(chǎn)、造成胎兒畸形、 HYPERLINK /sowiki/%E6%99%BA%E5%8A%9B%E4%BD%8E%E4%B8%8B?prd=content_doc_search o 智力低下 智力低下等先天性疾病。約40-60%的新生兒在通過HSV-2感染的產(chǎn)道時可被感染，出現(xiàn)高熱、 HYPERLINK /sowi

11、ki/%E5%91%BC%E5%90%B8?prd=content_doc_search o 呼吸 呼吸困難和中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，其中60-70%受染新生兒可因此而死亡，幸存者中后遺癥可達(dá)95%?！?】致癌關(guān)系(gun x)：一些調(diào)查研究(ynji)表明HSV-1和HSV-2可能分別與唇癌、外陰癌及子宮頸癌有關(guān)(yugun)，特別HSV-1作為宮頸癌的病因，曾受到人們重視，研究表明人乳頭瘤病毒與該癌有直接關(guān)系，因此宮頸癌成因也許是復(fù)雜的。常見的幾種疾病包括：HSV角膜結(jié)膜炎、急性皰疹性口齦炎、生殖器皰疹、尿路感染、皰疹性腦膜炎、皮膚皰疹、皰疹性甲溝炎、HSV感染與“感染性腰腿痛綜合征”、新生兒皰

12、疹感染與全身播散性皰疹感染。病毒侵犯細(xì)胞潛伏部位所致疾病HSV-1 (HHV-1)皮膚粘膜上皮細(xì)胞三叉 神經(jīng)節(jié)，頸上神經(jīng)節(jié)齦口炎、唇皰疹、角膜結(jié)膜炎、皰疹性腦炎、腦膜炎HSV-2 (HHV-2)皮膚粘膜上皮細(xì)胞骶神經(jīng)節(jié)新生兒皰疹、生殖器皰疹、宮頸癌 (致癌?)和其他病毒疫苗（如水痘病毒疫苗，人巨細(xì)胞病毒疫苗等等）一樣，HSV的疫苗也被關(guān)注著，下面我們看一下HSV的疫苗：單純皰疹病毒疫苗屬于治療性疫苗【旨在打破機(jī)體的免疫耐受，提高機(jī)體的免疫應(yīng)答，其機(jī)理可能是通過改善和加強(qiáng)疫苗靶抗原的攝入、表達(dá)、處理、提呈和激活免疫應(yīng)答，從根本上喚起機(jī)體對靶抗原的免疫應(yīng)答能力【書本286】?！科渲委熜砸呙缪芯壳闆r

13、滅活病毒疫苗 將細(xì)胞培養(yǎng)中的病毒通過甲醛或熱等處理滅活，再經(jīng)過或不經(jīng)過一系列純化獲得的疫苗。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有預(yù)防生殖器皰疹的保護(hù)作用，但未臨床，且存在致癌可能性、成本高問題【林靜染】?！?、減毒活疫苗（有骨髓灰質(zhì)炎和水痘疫苗的成功為先導(dǎo)） 由活病毒不斷在細(xì)胞中培養(yǎng)繁殖、傳代，直到得到毒力很弱的病毒株，以達(dá)到神經(jīng)毒性減弱，保持增殖與免疫原性的目的。但研究發(fā)現(xiàn)減毒活疫苗不穩(wěn)定，存在返祖現(xiàn)象【傅錦堅】。Ps：1、2種疫苗的危險性HSV有致癌可能性，不宜用于人體【3、復(fù)制/基因缺失活疫苗 構(gòu)建復(fù)制受限的疫苗（由于I、II型測序工作已完成）集活疫苗和滅活疫苗的優(yōu)點(diǎn)于一身，較安全，有良好的免疫原性 eg. 最近

14、一種缺乏gH基因的單純皰疹病毒株被用做新的HSV疫苗。這種缺失病毒在宿主細(xì)胞中能完成一個完整的復(fù)制周期，但其釋放出來的子代病毒由于缺乏gH而不具備感染性（缺少粘附、融合、出芽等條件），我們稱之為非感染性單周期(DISC)病毒。（將胸苷激酶(jmi)（TK）基因(jyn)去除（ I期臨床），阻礙早期蛋白的合成。突變(tbin)株病力下降，免疫原性下降，同時缺失的II型株能引起急性疾病和再激活，復(fù)發(fā)性人生殖器HSVII疾?。?、包膜蛋白（提純的gB、gD）亞單位疫苗 能引起體液免疫和細(xì)胞免疫gB、gD蛋白表面較多【陳斯勇】，多用其制亞單位疫苗?？衫肈NA重組技術(shù)，在大腸桿菌、酵母、哺乳動物細(xì)胞

15、和桿狀病毒等多種表達(dá)系統(tǒng)中分別或聯(lián)合表達(dá)各種HSV表面糖蛋白，制成亞單位疫苗。對女性比對男性有較好的預(yù)防保護(hù)作用。并有相關(guān)文獻(xiàn)gB、gC、gD、gE和gI五種糖蛋白混合制成的多價亞單位疫苗對致死劑量攻擊和潛伏感染的保護(hù)作用可能會比單用gB或gD或兩者同時使用效果要好?！?、gB、gD基因重組痘苗病毒疫苗（gB、gD是HSV誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的主要抗原） 重組載體疫苗兼具減毒疫苗和亞單位疫苗的優(yōu)點(diǎn)，同時能避免 HSV的毒性、潛伏性、活化以及激活原癌基因（致癌性）等問題。在免疫接種時，這些病毒或細(xì)菌的載體能表達(dá)具有免疫原性的蛋白，并且相關(guān)基因編碼產(chǎn)物能誘導(dǎo)廣泛的體液免疫和細(xì)胞免疫【高健】。我們可

16、以將一些HSV基因插入到能完整復(fù)制的病毒或細(xì)菌載體上，如痘苗病毒、腺病毒、水痘一帶狀皰疹病毒、腺相關(guān)病毒和鼠傷寒桿菌等。這樣載體病毒或細(xì)菌就能在體內(nèi)表達(dá)相應(yīng)的HSV蛋白，起到免疫作用。其中g(shù)D誘生中和抗體的能力最強(qiáng)?！局泻涂贵w是一種用于防止細(xì)胞被某種抗原或感染源侵害的抗體,其原理是通過抑制乃至中和它們的某種生化作用；大多數(shù)的抗體都是通過與抗原結(jié)合，激發(fā) HYPERLINK /wiki/%E7%99%BD%E7%BB%86%E8%83%9E o 白細(xì)胞 白細(xì)胞來處理抗原所在的外來物，并最終將其消滅。而中和抗體和結(jié)合抗體的區(qū)別在于，前者中和抗原的生化作用，而后者則與之結(jié)合變成一種有待處理的標(biāo)志?！?/p>

17、【6、多肽疫苗 多肽構(gòu)成了抗原表位配體呈遞系統(tǒng)(LEAPs)，能誘導(dǎo)Thl型與Th2型免疫反應(yīng)。HsV-1和HsV一2的gD都包含一段保守多肽鏈(gDs) ，可以誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，并產(chǎn)生中和抗體【林靜染】。目前該疫苗仍在J臨床前研究中?！?、核酸疫苗/DNA疫苗疫苗的最新革命性發(fā)展是核酸疫苗。它是用包含病毒基因的DNA質(zhì)粒（編碼HSVgC、gD、gE的質(zhì)粒）接種體內(nèi)，在體內(nèi)表達(dá)相應(yīng)病毒蛋白從而誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。動物實(shí)驗(yàn)顯示接種HSV DNA疫苗，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生HSV特異的體液免疫和細(xì)胞免疫，但不能達(dá)到明顯清除病毒的效果，免疫反應(yīng)較弱，保護(hù)能力有限。質(zhì)粒表達(dá)體系能抑制原發(fā)感染，減少潛伏感染，但臨床未達(dá)預(yù)期【林靜染】。目前滅活全病毒疫苗已被淘汰，基因突變型減毒活疫苗、重組亞單位疫苗、多肽疫苗、表達(dá)HSV抗原的異病毒載體疫苗、復(fù)制缺損型疫苗以及DNA疫苗仍應(yīng)用于HSV疫苗的研究。新一代疫苗 更新的