北京培訓中心_兩蟲全流程ppt課件

1、 水中隱孢子蟲和賈第蟲的檢測愛德士緬因生物制品貿易上海愛德士培訓中心Sep 27,2021流 程選 擇回收率 兩蟲檢測全流程樣品預處置Sample Pretreatment. 染色鏡檢Staining and Microscopy. 免疫磁分別IMS. 過濾. 淘洗. 離心. 樣品預處置過濾加標實驗QC 10L 采樣量樣品預處置過濾樣品預處置過濾 濾芯構造過濾時水流流向淘洗時水流流向 79層多孔網狀泡沫層，兩種規(guī)格交互疊放，由790mm緊縮至30mm，螺栓固定。濾芯兩個過濾層：外層區(qū)域為初濾器，內層濾核為選擇性濾器此構造在提高污水樣品過濾速度的同時，保證有效地捕獲隱孢子蟲卵。淘洗時，目的微生物

2、以反流的方式更方便地進展有效淘洗?？商幹酶邼岫仍?。 取樣流速可達4L/min。樣品預處置過濾 實驗室過濾樣品預處置過濾 現(xiàn)場過濾樣品預處置過濾 現(xiàn)場過濾兩蟲挪動取樣箱樣品預處置過濾 濾器 濾芯 采樣管 水表 保溫袋 自封袋 現(xiàn)場過濾兩蟲挪動取樣箱樣品預處置過濾根據客戶需求合理設計的取樣箱。處理現(xiàn)場采樣問題，并使得現(xiàn)場采樣操作簡便。 處理部分無兩蟲檢測設備的送樣問題。 現(xiàn)場過濾兩蟲挪動取樣箱樣品預處置過濾 現(xiàn)場過濾樣品預處置過濾 現(xiàn)場過濾樣品預處置淘洗 Filta-Max Xpress兩蟲快速法淘洗設備穩(wěn)定的高回收率大于70%。淘洗時間90s，目前全球淘洗速度最快的設備。一鍵操作，操作簡單。

3、不同樣品的結果一致性高，性能穩(wěn)定。樣品預處置離心離心機應放在結實的任務臺或地板上，盡量減少晃動。離心管連同適配器一同配平，保證誤差在0.5g以內，盡量減少擺動。離心機設定2000g離心力，任務時間15分鐘。離心機應選用無剎車系統(tǒng)的自然停頓大約需7分鐘 。 免疫磁分別基于細胞外表抗原能與銜接在磁珠上的特異性單抗相結合，構成抗原-抗體-磁珠免疫復合物，在外磁場中，復合物被吸附而滯留在磁場中，使其與其他物質分別。 定義免疫磁分別免疫磁分別免疫磁分別 試劑盒免疫磁分別樣品量：0.5-0.8ml沉淀混勻時間：1-2小時依次取下L型試管90旋轉2分鐘棄上清1XbufferA沖洗磁珠180旋轉1分鐘棄上清后

4、酸化分別 實驗流程免疫磁分別 沉淀物體積對于沉淀量小于0.5mL的樣品，直接再懸浮成10mL.對于沉淀量大于0.5mL的樣品，按照上述公式，即每0.5mL沉淀懸浮成10mL。比如，2mL沉淀應該懸浮成40mL，詳細免疫磁分別過程可以取其中一分部進展。根據閱歷，20L原水的沉淀量普通1-2mL；100L處置水的沉淀量普通小于0.5mL。免疫磁分別 結果計算如出廠水檢測出3個隱孢子蟲，帶入合計進展計算： Y=310mL)/(10mL100L)=0.03個/L如原水沉淀量2mL，懸浮成40mL，免疫磁分別取了其中10mL，檢出3個隱孢子蟲，帶入并計算： Y=340mL)/(10mL20L)=0.6個

5、/L染色鏡檢 染色試劑盒單克隆熒光抗體染色試劑復染液封固劑DAPI染色試劑陽參1倍洗脫緩沖液染色鏡檢 異硫氰酸熒光素 (Fluorescein isothiocyanate, FITC)分子量為389.4，最大吸收光波長為490495nm，最大發(fā)射光波長為525530nm，呈現(xiàn)亮堂的黃綠色熒光。FITC是在熒光素的根底上經過化學反響添加硫氰酸基團得到的，硫氰酸基團可以和生物活性物質，例如蛋白質上的伯胺基團反響構成硫脲鍵，從而實現(xiàn)對生物活性物質的熒光標志。能和各種抗體蛋白結合，結合后的抗體不喪失與一定抗原結合的特異性，并在堿性溶液中具有劇烈的黃綠色熒光。經過在熒光顯微鏡下察看或流式細胞儀分析可對

6、相應抗原進展定性、定位或定量的檢測。儲存條件：4避光保管。染色鏡檢 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)一種可以與DNA強力結合的熒光染料，常用與熒光顯微鏡觀測。由于DAPI可以透過完好的細胞膜，它可以用于活細胞和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡察看下，DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發(fā)。當DAPI與雙股DNA結合時，最大吸收波長為358nm，最大發(fā)射波長為461nm，其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。能快速進入活細胞中與DNA結合，因此DAPI對生物體而言，也被視為一種毒性物質與致癌物。運用過程中應留意操作與丟棄的處置程序。染

7、色鏡檢 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)濃度2mg/mL，用時需求5000倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。染色鏡檢 鏡檢染色鏡檢 兩蟲孢囊與卵囊特征賈第蟲孢囊外形：卵形或橢圓形直徑：11-14um染色鏡檢 兩蟲孢囊與卵囊特征隱孢子蟲卵囊外形：類似球直徑：4-6um染色鏡檢 兩蟲孢囊與卵囊特征蘋果綠外殼：充要條件大小和外形染色鏡檢FITC染色DAPI染色DIC察看染色鏡檢染色鏡檢染色鏡檢如何提高回收率 采用商售PBS淘洗液試劑品牌貨號PBSSigmaP4417-50TABNaOHFluka38215-1EA-RHClFluka35335-1LT

8、ween20SigmaP7949-100ML如何提高回收率 采用商售HCL和NaOH試劑，或標配所需酸堿如何提高回收率 對容器和管子進展?jié)櫹催\用0.05%的吐溫20或者吐溫80，對于樣品接觸的一切容器都進展?jié)櫹?，將潤洗的液體也參與樣品。如何提高回收率 離心后，謹慎去除上清液可采取虹吸，棄去上清。管子上插上槍頭，使得震動最小。如何提高回收率 謹慎清洗玻片隱孢子蟲和賈第蟲能夠在染色過程被沖走，為了防止此情況發(fā)生，請悄然的移走玻片上的液體。如何提高回收率 玻片枯燥過程可影響回收率IMS過程中的酸假設沒有有效中和可以破壞賈第蟲的孢囊外表，引起賈第蟲染色過程中的變化。這可以導致鏡檢過程中賈第蟲的漏檢?？?/p>

9、速將樣品枯燥以及冷藏樣品可以保證賈第蟲的外表不受損壞 。為了優(yōu)化此步驟，確保樣品一旦中和后，快速在37條件下枯燥最長枯燥時間1小時，并立刻染色。假設IMS中和后需求延遲染色，需求快速在37枯燥玻片后立刻放入冰箱冷藏過夜。否那么，需求在規(guī)范的家用冰箱冷藏過夜。在冷室中枯燥玻片能夠由于濕度環(huán)境使得玻片不易枯燥。如何提高回收率 免疫磁分別對于一些水樣，很大一部分的隱孢子蟲和賈第蟲能夠會脫漏在IMS磁珠上，在酸化過程中沒有得到回收。此時進展二次酸化可以有效提高回收率。IMS分別過程中，二次酸化分別非常有用。對于回收率比較低沒有滿足回收率規(guī)范的樣品，可以將其IMS過程廢棄的上清液進展搜集，對這些廢液再次進展免疫磁分別過程，以滿足回收率。可以將廢液搜集到免疫磁分別之前用的 50mL的離心管中，這可以防止錯誤的標志樣品，他可以分辨哪個樣品具有較低的回收率然后做一個二次的免疫磁分別。非常多的干擾免疫磁分別的物質在第一次免疫磁分別過程中都被去除掉了，所以第二輪免疫磁分別回收率能夠會戲劇性的更高。