23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗對(duì)預(yù)防嬰幼兒人群下呼吸道感染的意義論文初稿

1、畢業(yè)論文作者： XXX 學(xué)號(hào)： XXXXX學(xué)院：化學(xué)工程學(xué)院專業(yè)：XXXXXX23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗對(duì)預(yù)防嬰幼兒人群題目：下呼吸道感染的意義目 錄1 引言1 TOC o 1-5 h z 肺炎球菌的了解 YY肺炎球菌的帶菌率和易感人群 Y肺炎球菌疫苗的發(fā)展和現(xiàn)狀y2關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)?zāi)康腨2. 2 ELISA 的優(yōu)勢(shì)yELISA的實(shí)驗(yàn)原理yELISA 的檢測(cè)方法 y3 23價(jià)肺炎臨床血清檢測(cè)y實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備YY加抗Y3 .4加顯色液3.5終止讀數(shù)數(shù)據(jù)處理 TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark41 o Current Document 結(jié)論Y HYPERLINK l b

2、ookmark44 o Current Document 致謝Y參考文獻(xiàn)Y附錄一 Y中文摘要人們對(duì)被世界衛(wèi)生組織列為全球兩大“最高度優(yōu)先”可用疫苗來(lái)進(jìn)行預(yù)防的 疾病之一肺炎球菌疾病的認(rèn)識(shí)已有12 0多年歷史，用肺炎球菌疫苗來(lái)預(yù)防肺炎球 菌病也有90余年。隨著研究的不斷進(jìn)展，至今已發(fā)現(xiàn)90余個(gè)不同的肺炎球菌菌型。 最初用單價(jià)和多價(jià)全菌體疫苗接種，有不良反應(yīng)，免疫效果差，后用多種血清型 的莢膜多糖疫苗接種取得了較好效果；近些年來(lái)23價(jià)肺炎的出現(xiàn)讓解決嬰幼兒免 疫原性差的問(wèn)題有了可喜的征兆。英文摘要（空兩行）關(guān)鍵字：肺炎球菌；23價(jià)肺炎；預(yù)防引言2013年11月12日是第五個(gè)“世界肺炎日”，去年世界

3、肺炎日的主題是“創(chuàng) 新，終結(jié)兒童肺炎”。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，肺炎每年造成全球大約200萬(wàn)5歲 以下兒童死亡，不僅是兒童死亡的頭號(hào)殺手，也是老人發(fā)病和死亡的十大疾病之 一。盡管肺炎對(duì)兒童和老人的健康威脅巨大，但由于大部分公眾對(duì)肺炎危害認(rèn)知、 關(guān)注和重視不足，肺炎也被稱為“被遺忘的殺手”。而接種疫苗是預(yù)防肺炎最有效的方法，在每年因患肺炎而死亡的200萬(wàn)兒童 中，絕大部分兒童原本可以通過(guò)接種肺炎疫苗得到有效預(yù)防，為此，世界衛(wèi)生組 織早在1988年曾建議：“發(fā)展中國(guó)家應(yīng)該積極開(kāi)展肺炎疫苗的接種”。目前全球 已有超過(guò)60個(gè)國(guó)家和地區(qū)（包括美國(guó)、英國(guó)、香港、澳門(mén)等地區(qū)）己將肺炎球 菌性疾病的預(yù)防納入兒童免

4、疫規(guī)劃。“無(wú)處不在”的肺炎球菌嚴(yán)重威脅著兒童， 尤其是2歲以下幼兒的健康。在世界肺炎日，讓我們一起關(guān)注肺炎，保護(hù)兒童生 命健康。1. 1肺炎球菌的了解肺炎球菌屬于細(xì)菌，革蘭染色呈陽(yáng)性，菌體常呈對(duì)（肺炎雙球菌）或呈鏈狀 排列（肺炎鏈球菌，菌體外有莢膜，莢膜多糖體具有特異抗原性，根據(jù)血清試驗(yàn) 現(xiàn)已知有86個(gè)亞型。成人致病菌多屬1 9及12型，以第3型毒力最強(qiáng)，而兒童中 為6、14、19、及23型。這些細(xì)菌為上呼吸道正常菌群，只有當(dāng)免疫力降低時(shí)才 開(kāi)始致病。少部分發(fā)生菌血癥或感染性休克，若未及時(shí)恰當(dāng)治療，可導(dǎo)致死亡。 它通常藏匿在人們的鼻咽部，可以通過(guò)咳嗽、打噴嚏、說(shuō)話時(shí)放的飛沫傳播給其 他人；并可

5、能在帶菌者受涼、感冒等抵抗力降低時(shí)趁虛而入，引發(fā)感染，造成肺 炎球菌疾病。一次發(fā)燒，一聲咳嗽，都可能是肺炎、腦膜炎的征兆。導(dǎo)致這些疾 病的罪魁禍?zhǔn)?，就是無(wú)處不在的肺炎球菌。肺炎球菌疾病是由肺炎球菌感染造成 的一系列疾病的統(tǒng)稱。在呼吸道的感染可以引起支氣管炎、肺炎、中耳炎、鼻竇 炎等疾?。蝗绻窝浊蚓秩胙簞t會(huì)引起腦膜炎、敗血癥等更為嚴(yán)重的疾病。1. 2肺炎球菌的三高特點(diǎn)1.2.1高死亡率 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：（1）全球：WHO估計(jì)，每年有70100萬(wàn)5歲 以下兒童死于肺炎球菌疾病，2歲以下兒童的死亡率尤其高1。（2）亞太地區(qū)： 每小時(shí)約有49名兒童死于肺炎球菌肺炎4。（3）中國(guó)：肺炎是中國(guó)5歲以下兒

6、 童死亡的首要病因5；而肺炎球菌是兒童肺炎最主要的致病菌之一 2。全球5 歲以下兒童，通過(guò)疫苗可預(yù)防死亡的病因中肺炎鏈球菌占到28%，排名首位6。高致殘率肺炎球菌是兒童細(xì)菌性腦膜炎的主要致病菌7。研究表明，肺炎 球菌腦膜炎的病死率和后遺癥（癱瘓、智力低下、癲癇、耳聾）發(fā)生率高于其它 常見(jiàn)致病菌，如Hib和腦膜炎雙球菌8。Pikis等報(bào)道，肺炎球菌腦膜炎幸存者 中發(fā)生各種神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的兒童比例9：智力低下占19%，耳聾占17%31%， 癲癇占15%，癱瘓占11%。高發(fā)病率 肺炎是兒童的常見(jiàn)病，一年四季皆可發(fā)生，尤多見(jiàn)于冬春寒冷季 節(jié)，06歲的嬰幼兒患者高達(dá)90%以上。根據(jù)美國(guó)疾病控制中心（CD

7、C）的統(tǒng)計(jì)， 兒童肺炎球菌疾病每年的發(fā)病率相當(dāng)驚人。美國(guó)嚴(yán)重肺炎球菌疾病每年的發(fā)病 率，兒童尤其是2歲以下嬰幼兒的發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出人群平均水平10。這同時(shí)也 反映，2歲以下嬰幼兒是肺炎球菌的主要易感人群。1.3肺炎球菌的帶菌率和易感人群兒童中肺炎球菌的攜帶率比成人更高，嬰幼兒更容易成為肺炎球菌的寄生對(duì) 象。我國(guó)約1/4健康兒童攜帶肺炎球菌。肺炎球菌在兒童中廣泛存在大大增加了 其傳播和感染的機(jī)會(huì)，危險(xiǎn)隨時(shí)可能發(fā)生10美國(guó)疾病控制中心（CDC）以及許多大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查均顯示，低齡兒 童，尤其是以下幾類嬰幼兒容易患病11：（1）兒童（特別是2歲以下嬰幼兒） 免疫力低，容易受到肺炎球菌侵襲。（2）集

8、體看護(hù)的兒童（幼兒園/托兒所）高 帶菌率增加了肺炎球菌在兒童（特別是集體看護(hù)的兒童）中傳播和感染的機(jī)會(huì)。（33）特殊體質(zhì)兒童12：早產(chǎn)兒，低出生體重兒；有慢性疾病的兒童； 有免疫功能缺陷的兒童。1.4肺炎球菌疫苗的發(fā)展和現(xiàn)狀肺炎球菌莢膜多糖疫苗1927年發(fā)現(xiàn)：給小鼠注射肺炎球菌莢膜多糖能和死菌全菌疫苗一樣得到免 疫保護(hù)。1930年報(bào)道了肺炎球菌莢膜多糖對(duì)人的免疫原性。其后不久其他研究 者也獲得了同樣的結(jié)果，從而特異性莢膜多糖的免疫原性得到了證實(shí)，開(kāi)始了對(duì) 肺炎球菌多糖疫苗的研究。1938年用1型和2型肺炎球菌莢膜多糖2價(jià)疫苗，劑量為每種多糖各1mg， 首次作4萬(wàn)名受試者大規(guī)模接種現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，雖然

9、接種組的發(fā)病率低于對(duì)照組， 但是由于細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)不夠完善，對(duì)免疫效果未作出完全肯定的結(jié)論。1945年明 確地肯定了 4價(jià)肺炎球菌多糖疫苗的效果。4價(jià)疫苗含有1型、2型、5型和7 型肺炎球菌多糖各3060Lg在軍事訓(xùn)練基地隨機(jī)抽8586名男性青年為預(yù)防接種 試驗(yàn)組同樣另抽8449名注射生理鹽水（安慰劑）作為對(duì)照組。對(duì)參加試驗(yàn)的人員 觀察6個(gè)月。在接種組中發(fā)生4例由疫苗中含加試驗(yàn)的人員觀察6個(gè)月。在接種 組中發(fā)生4例由疫苗中含例都發(fā)生在接種后2周之內(nèi)并在大部分接種者產(chǎn)生抗莢 膜抗體時(shí)間之前。這兩組疫苗中不含有的菌型引起肺炎的發(fā)病率沒(méi)有差異，即保 護(hù)是型特異的。疫苗中含有的肺炎球菌型的帶菌者，接種組比

10、在對(duì)照組少，從而 且證明了人群免疫力能降低菌型疾病的發(fā)病率。在這次試驗(yàn)中除注射部位有些疼 痛和少數(shù)發(fā)熱反應(yīng)外，未觀察到顯著的接種不良反應(yīng)。1947年報(bào)道了含1型、2型和3型肺炎球菌多糖2價(jià)和3價(jià)疫苗對(duì)以50歲 以上為主的人群免疫效果。在6年期間里隨機(jī)挑選5750人進(jìn)行免疫，5153人作 為對(duì)照組。結(jié)果顯示，由免疫菌型引起的菌血癥和非菌血癥病例數(shù)減少90%以上。 另外一些關(guān)于類似疫苗研究表明，多至6種莢膜多糖的疫苗可以應(yīng)用而不出現(xiàn)抗 原間的干擾或不良反應(yīng)，并且一次注射抗原后，有1 /31/2人數(shù)的最高抗體水 平能保持58年。雖然有兩種6價(jià)疫苗已被批準(zhǔn)用于臨床（用于成人的含1型、2 型、3型、5型

11、、7型和8型莢膜抗原；用于兒童的含1型、4型、6型、14型、 18型和19型莢膜抗原）。但由于當(dāng)時(shí)對(duì)青霉素治療肺炎球菌病的效果抱著過(guò)于 樂(lè)觀的態(tài)度，從而使得這兩種疫苗未能廣泛應(yīng)用，大約30年之后（即60年代初） 已停止使用。此時(shí)，盡管使用了抗生素治療，但肺炎球菌病的病死率仍居高不下， 并且隨著耐藥菌株數(shù)的日益增加，人們開(kāi)始再次關(guān)注肺炎球菌多糖疫苗的研發(fā)。1978年，14價(jià)肺炎球菌多糖疫苗在美國(guó)正式上市，其中包括1型、3型、4 型、6A型、6B型、7F型、8型、9N型、12F型、14型、18C型、19F型、20型 和23F型。1983年23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗研制成功并投放市場(chǎng)，其中包括1型、 2

12、型、3型、4型、5型、6B型、7F型、8型、9N型、9V型、10A型、11A型、 12F 型、14 型、15B 型、17F 型、18C 型、19A 型、19F 型、20 型、22F 型、23F 型和33F型。目前美國(guó)藥典、歐洲藥典和英國(guó)藥典都已收載。23價(jià)肺炎球菌多 糖疫苗每人份含上述23種血清型莢膜多糖各25Lg，每劑0.5mL，皮下或肌內(nèi)注 射。雖然大部分多糖在水溶液中穩(wěn)定，但因具有磷酸二酯鍵的多糖可能不具穩(wěn)定 性。這些多糖隨著時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸水解同時(shí)分子變小，最終使抗原性降低。對(duì)各 型多糖的化學(xué)組成各國(guó)藥典都有明確規(guī)定，用凝膠過(guò)濾法測(cè)定分子大小其中不應(yīng) 含有雜質(zhì)。肺炎球菌多糖在很廣的劑量范

13、圍內(nèi)對(duì)人體都具有免疫原性。早期研究 證明需要約1010個(gè)肺炎球菌能有規(guī)律地誘發(fā)抗體應(yīng)答，后來(lái)證明，這個(gè)數(shù)目的 細(xì)菌能產(chǎn)生3040Lg莢膜多糖，并且與25Lg或更大劑量的莢膜多糖所引起的抗 體應(yīng)答的強(qiáng)弱幾乎沒(méi)有差別。在美國(guó)，23個(gè)型的肺炎球菌莢膜型可覆蓋90%的耐藥菌株和85%90%的流行 菌株;在芬蘭可覆蓋95%的流行菌株；而在挪威北部則可覆蓋88%的流行菌株。多 次試驗(yàn)結(jié)果顯示，接種23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗對(duì)人體是安全的。對(duì)初種23價(jià)肺 炎球菌多糖疫苗5年以上的老年人再次接種，結(jié)果比初次免疫易于發(fā)生較為嚴(yán)重 的局部不良反應(yīng)，如紅斑、腫脹等。但另一試驗(yàn)顯示，對(duì)15名5679歲的老年 人以14價(jià)肺

14、炎球菌多糖疫苗初種6年后復(fù)種23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗，初種和復(fù) 種后均未見(jiàn)全身不良反應(yīng)，僅有5人在接種局部出現(xiàn)輕微的潰瘍和觸痛。這表明 老年人再次接種23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗是安全的。23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗能獲得最好的費(fèi)用效益比由美國(guó)Sisk等13完成的一項(xiàng)肺炎球菌多糖疫苗的成本效益研究結(jié)果表明， 對(duì)全年齡組人群和所分析地區(qū)的病例進(jìn)行免疫接種來(lái)預(yù)防肺炎球菌菌血癥可降 低醫(yī)療費(fèi)用。對(duì)在1993年未接種疫苗的2300萬(wàn)65歲人群進(jìn)行接種，將可贏得大 約7800萬(wàn)人年健康壽命并節(jié)省19400萬(wàn)美元花費(fèi)。研究認(rèn)為，不論是從健康還是 從經(jīng)濟(jì)的角度來(lái)看，目前肺炎球菌多糖疫苗在老年人中使用是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。 Her

15、man等14的分析結(jié)果提示，當(dāng)耐藥菌株更加流行時(shí)肺炎球菌多糖疫苗的 成本效益將增加。耐青霉素球菌肺炎增加30%，費(fèi)用節(jié)省增加10%。除了大于 85歲的老人和5年前接種過(guò)肺炎球菌多糖疫苗的人，肺炎球菌多糖疫苗對(duì)所有研 究年齡組的人群都具有很好的成本效益。2003年起，四川大學(xué)華西醫(yī)院董碧蓉教授對(duì)23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗預(yù)防老年人下 呼吸道感染作臨床試驗(yàn)，結(jié)果證明，23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗能夠真正有效地幫助 患有慢性阻塞性肺病老年人，及那些伴有心血管疾病的慢性肺部疾病患者，能降 低肺炎球菌性肺炎發(fā)生的危險(xiǎn)，減少抗生素的使用，降低由于治療產(chǎn)生的醫(yī)療費(fèi) 用，提高生活質(zhì)量和健康水平。1.4.2國(guó)內(nèi)23價(jià)肺炎

16、球菌多糖疫苗發(fā)展和使用現(xiàn)狀我國(guó)肺炎球菌感染的報(bào)道雖然屢見(jiàn)不鮮，但長(zhǎng)期以來(lái)，特別是上世紀(jì)80年代 以前準(zhǔn)確的發(fā)病率不清楚，系統(tǒng)研究不多。19811985年，在衛(wèi)生部領(lǐng)導(dǎo)下，由 中國(guó)藥品生物制品檢定所負(fù)責(zé)組織全國(guó)18個(gè)省、市29個(gè)單位的協(xié)作組，參加7WHO 對(duì)引起嚴(yán)重感染的肺炎球菌莢膜型的監(jiān)測(cè)0的國(guó)際協(xié)作項(xiàng)目，為我國(guó)肺炎球菌菌 型分布及感染狀況積累了資料。1981年5月 1985年7月，我國(guó)從病人不同標(biāo)本中 共分離712株肺炎球菌，按WHO推薦的丹麥方法和標(biāo)準(zhǔn)分成42個(gè)型（群），其中5 型最多，其次是6型、1型、19型、23型、2型及3型等8個(gè)型（群）共453株，占63.6%， 沒(méi)有發(fā)現(xiàn)40型、4

17、2型和47型。不同病種的主要血清型不同，肺炎主要為1型、5型、 14型和6型，腦膜炎以2型、5型、6型、1型、27型和14型為主，中耳炎則以19型、 6型、5型、23型、3型和14型為常見(jiàn)。肺炎球菌的主要流行菌型有時(shí)會(huì)發(fā)生變異。 因此，菌型監(jiān)測(cè)是一項(xiàng)十分重要的工作，它是確定肺炎球菌疫苗血清型的組合， 積極預(yù)防肺炎球菌疾病的重要科學(xué)依據(jù)。1995- 1996年，中國(guó)藥品生物制品檢定 所用美國(guó)默沙東公司和法國(guó)巴斯德梅里厄公司生產(chǎn)的23價(jià)肺炎疫苗接種了 14 0名 557 0歲健康人，以進(jìn)行安全性與免疫原性考核。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除少數(shù)人在接種局部 有輕度紅腫及疼痛外，其余均無(wú)任何不良反應(yīng)，而局部癥狀也在48

18、h內(nèi)全部消失。 接種后1個(gè)月，檢測(cè)其體內(nèi)抗體水平，總抗體GMT增加24倍，與國(guó)外報(bào)道相似， 表明該疫苗免疫原性較好。成都生物制品研究所于1996年開(kāi)始對(duì)23價(jià)肺炎球菌多 糖疫苗開(kāi)展一系列研究。1999年連續(xù)3批試樣品經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定 全部合格，產(chǎn)品主要質(zhì)量指標(biāo)達(dá)到5歐洲藥典6的標(biāo)準(zhǔn)。該疫苗于2001年1月獲國(guó) 家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）簽發(fā)的臨床研究批件。2005年1月4日經(jīng)SFDA批 準(zhǔn)，23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗獲得新藥證書(shū)。預(yù)計(jì)不久即可獲得生產(chǎn)文號(hào)。目前肺炎球菌疫苗由純化的23型肺炎球菌多糖組成。盡管該疫苗覆蓋了致病 型的大部分，但它不能預(yù)防所有肺炎球菌型引起的疾病。而且與

19、其他多糖一樣， 肺炎球菌多糖抗原是非T-淋巴細(xì)胞依賴性抗原，2歲以下嬰幼兒不能對(duì)疫苗產(chǎn)生 保護(hù)性抗體應(yīng)答，而該年齡段人群是肺炎球菌感染的高危人群。為了能在2歲以 下的嬰幼兒中控制肺炎球菌疾病，需要發(fā)展更有免疫原性的疫苗。因此，蛋白多 糖結(jié)合疫苗和肺炎球菌蛋白疫苗，包括肺炎球菌溶血素、神經(jīng)氨酸苷酶、肺炎球 菌表面粘附蛋白A（PsaA）和肺炎球菌表面蛋白A（PspA）已被認(rèn)為是候選的抗原，可 在嬰幼兒中產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答。2.關(guān)于 ELISA實(shí)驗(yàn)?zāi)康拿嘎?lián)免疫吸附測(cè)定 （enzyme-linked immunosorbent assay 簡(jiǎn)稱ELISA） 是在免疫酶技術(shù) （immunoenzymat

20、ic techniques） 的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù)，ELISA過(guò)程包括抗原（抗體）吸附在固相載體 上稱為包被，加待測(cè)抗體（抗原），再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體（抗原），生成抗原（抗 體）待測(cè)抗體（抗原）酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物，再與該酶的底物反應(yīng)生成 有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體（抗原）的量。待測(cè)抗體（抗原） 的定量與有色產(chǎn)生成正比。2.2 ELISA的優(yōu)勢(shì)ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所 引起的傳染病、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原 和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特 異、簡(jiǎn)

21、單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查， 而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本，因此，也適合于血清流行病學(xué) 調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以 也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日 益擴(kuò)大，可概括四個(gè)方面：1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。2、研究抗酶 抗體的合成。3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。ELISA實(shí)驗(yàn)原理用于免疫酶技術(shù)的酶有很多，如過(guò)氧化物酶，堿性磷酸酯酶，BD一半 乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰膽堿酯酶，6一磷酸葡萄糖脫氧酶等。 常用于ELI

22、SA法的酶有辣根過(guò)氧化物酶，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過(guò)氧 化物酶為多。由于酶摧化的是氧化還原反應(yīng)，在呈色后須立刻測(cè)定，否則空氣中 的氧化作用使顏色加深，無(wú)法準(zhǔn)確地定量。辣根過(guò)氧化物酶（HRP）是一種糖蛋白，每個(gè)分子含有一個(gè)氯化血紅素（protonhemin） 區(qū)作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示。氯化血紅 素輔基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶 的濃度和純度計(jì)算式是（已知HRP的A （1cm 403nm 1%） =25，式中1% 指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶濃度以mg/ml 計(jì)算是 HRP 的 A（ ）HR

23、P 純度（RZ ） =A403nm/A275nm 純度 RZ（ReinheitZahl)值越大說(shuō)明酶內(nèi)所含雜質(zhì)越少。高純度HRP的RZ值在左右，最高可達(dá)。用于ELISA檢測(cè)的HRP的RZ值要求在以上。ELISA的基本原理有三條：抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表 面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；(2)抗原或抗體可通過(guò)共 價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；(3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是 否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正 比例的，因此，可以按底

24、物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。2.4 ELISA的檢測(cè)方法常用的四種方法直接法測(cè)定抗原(即下章講述的方法)將抗原吸附在載體表面；加酶標(biāo)抗體，形成抗原一抗體復(fù)合物；加底物，底物的降解量=抗原量。間接法測(cè)定抗體將抗原吸附于固相載體表面；加抗體，形成抗原-抗體復(fù)合物；加酶標(biāo)抗體；加底物，測(cè)定底物的降解量=抗體量。雙抗體夾心法測(cè)定抗原將抗原免疫第一種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面；加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物；加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復(fù)合物；加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體)；加底物，底物的降解量=抗原量。競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原(1)將抗體吸附在固相載體表面；加入酶標(biāo)抗原；加入酶標(biāo)抗原和待

25、測(cè)抗原；加底物，對(duì)照孔與樣品孔底物降解量的差=未知抗原量。結(jié)論肺炎鏈球菌是引起獲得性肺的最重要病原菌，同時(shí)，也是引起中耳炎、腦膜 炎和菌血癥的主要病原菌。據(jù)估計(jì)，在全球范圍內(nèi)每年由肺炎鏈球菌引起的腦膜 炎32萬(wàn)多例，菌血癥63萬(wàn)多例，中耳炎1400萬(wàn)多例，肺炎2000萬(wàn)多例15。 據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球每年有超過(guò)120萬(wàn)人死于肺炎鏈球，菌感染，其中大 多數(shù)發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。在發(fā)達(dá)國(guó)家如美國(guó)，肺炎鏈球菌仍然是導(dǎo)致死亡的十大 原因之一，50%的社區(qū)獲得性肺炎及10%的院內(nèi)感染肺炎是由肺炎鏈球菌引起 16。在我國(guó)，肺炎是常見(jiàn)病之一，每年有250萬(wàn)人患肺炎鏈球菌性肺炎，并造 成其中121 5萬(wàn)人死亡

26、(以50歲以上中老年人和1歲以下嬰兒為主)。同時(shí)，肺 炎鏈球菌還可引發(fā)腦膜炎、中耳炎、心內(nèi)膜炎和敗血癥等感染性疾病。嬰幼兒化 膿性中耳炎患者中1 /3為肺炎鏈球菌感染，復(fù)發(fā)率高達(dá)40%。中國(guó)約1/4健康 兒童鼻咽部攜帶有肺炎球菌，肺炎已成為5歲以下兒童死亡的首要原因。這是上 海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸科陸權(quán)教授在2010年舉行的“一分鐘關(guān)注一一兒 童肺炎球菌疾病知識(shí)學(xué)堂全國(guó)巡講團(tuán)”啟動(dòng)會(huì)上披露的數(shù)據(jù)。根據(jù)23種引起 85%90%的引起中國(guó)約1/4健康兒童鼻咽部攜帶有肺炎球菌，肺炎已成為5歲以 下兒童死亡的首要原因。而肺炎球菌感染疾病的血清型研制而成的23價(jià)肺炎球 菌多糖疫苗，具有很好的安全性，

27、成人和2歲兒童接種后會(huì)產(chǎn)生可靠的免疫力， 在人群中保護(hù)率達(dá)50%80%，具有較好的成本效益比，是兒童和成人預(yù)防肺炎 球菌感染的有效措施，推薦用于60歲以上老年人和2歲以上體弱兒童和慢性疾 病患者。因?yàn)榉窝浊蚓杉纳诮】等吮茄什康酿つど?，通過(guò)空氣飛沫或直接吸 入的方式在人與人之間傳播，在人群密集的幼兒園、養(yǎng)老院、醫(yī)院等地方易傳播。 肺炎球菌可引起肺炎、支氣管炎、中耳炎、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎、敗血癥 等感染性疾病。肺炎球菌引起的肺炎四季皆可發(fā)病，以冬季發(fā)病最多。入冬后， 不小心“惹”上呼吸道疾病的孩子就猛地多了起來(lái)，特別是肺炎在不知不覺(jué)中， 竟已成為威脅兒童身體健康的一大“槍手”。據(jù)中華預(yù)防

28、醫(yī)學(xué)會(huì)近日公布的數(shù)字 顯示，全球因肺炎引起兒童死亡的人數(shù)已經(jīng)超過(guò)艾滋病、麻疹和瘧疾的死亡人數(shù) 總和。加之肺炎球菌疾病是一組可能引發(fā)嚴(yán)重后果的感染性疾病接種肺炎球菌疫 苗，已經(jīng)逐漸被公認(rèn)是預(yù)防嬰幼兒肺炎球菌感染的最有效措施加之其耐藥性日益 增加，給治療帶來(lái)一定的困難，建議從寶寶月齡滿三個(gè)月后，就應(yīng)開(kāi)始按照建議 時(shí)段，及時(shí)進(jìn)行接種。可見(jiàn)23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗的研發(fā)對(duì)預(yù)防嬰幼兒人群下 呼吸道感染是很有意義。致謝參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)祝雯.警惕無(wú)處不在的肺炎球菌N.文匯報(bào)，2008-07-09.中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)呼吸學(xué)組.兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南（試行）J.中華兒科雜志，2007, 45:83-90.W

29、HO. Weekly Epidemiol Rec, 2007, 82:93-104.UNICEF/WHO. Pneumonia: The forgotten killer of children,2006 Sep.王艷萍，等.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2005, 39:260-264.CDC. Vaccine preventable deaths and the global immunization vision and strategy, 2006-2015.MMWR, 2006, 55: 511-515.王慕逖，主編.兒科學(xué)M.第5版.P392.Baraff LJ, et al, Pediatric Infect Dis J, 1993, 12: 389-394.Pikis A et al. Clin Pediatr, 1996, 35:72-78.王雅君.肺炎是5歲以下兒童死亡首因N.上海商報(bào)，2008-07-07.CDC. MMWR, 2000, 49:37-38.邢玉樹(shù).肺炎球菌嚴(yán)重威脅兒童健康N.北京晨報(bào)，2007-12-01.SiskJE, M oskow itzA J, WhangW, et a.l Cost- effect iveness of vacc-i nation against pneum ococcal bacterem ia among elder