Marfan綜合征FBN1基因新的剪接位點(diǎn)的置換突變

1、Marfan綜合征FBN1基因新的剪接位點(diǎn)的置換突變伍嚴(yán)安,陳喜軍,黃肖利,陳同,陳發(fā)文,陳發(fā)林,黃毅【關(guān)鍵詞】馬凡綜合征;,原纖維卵白摘要:目的對(duì)arfan綜合征(FS)患者的原纖維卵白1基因(FBN1)舉行突變篩查,探究FS患者新的FBN1突變。要領(lǐng)應(yīng)用聚合酶鏈反響(PR)和變性高效液相色譜法(DHPL)對(duì)1例FS患者FBN1的65個(gè)外顯子舉行突變篩查,對(duì)DHPL圖形非常的PR擴(kuò)增片斷用DNA測(cè)序斷定突變位點(diǎn)及性子。用限定性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性闡發(fā)法(RFLP)進(jìn)一步證明突變。結(jié)果創(chuàng)造1種新的FBN1剪接位點(diǎn)的置換突變(Intrn29+4AT)。結(jié)論FBN1的Intrn29+4AT大概為該FS患

2、者的發(fā)病緣故原由。關(guān)鍵詞:馬凡綜合征;原纖維卵白1;基因;突變;色譜法，高效液相；多態(tài)性，限定性片斷長(zhǎng)度馬凡綜合征(arfansyndre,FS)是一種常染色體顯性遺傳性結(jié)締構(gòu)造病,發(fā)病率為1/(500010000),25%30%患者為散發(fā)病例。FS重要累及心血管、骨骼和眼等體系或器官,臨床表示有夾層主動(dòng)脈瘤、二尖瓣脫垂、蜘蛛足樣指趾、晶狀體異位等。FS還可累及肺、皮膚和中樞神經(jīng)體系等器官或體系,臨床表示有自覺(jué)性氣胸、皮膚不克不及說(shuō)明的牽拉體征和腰骶部硬脊膜的擴(kuò)張等。原纖維卵白1(fibrillin1)基因(FBN1)全長(zhǎng)約235kb,由65個(gè)外顯子構(gòu)成,定位于15q21.1。其RNA包羅97

3、49個(gè)核苷酸。自1991年Dietz等提出FBN1突變是FS的致病緣故原由以來(lái),創(chuàng)造的FBN1突變有601種,漫衍于整個(gè)FBN1。原纖維卵白1為相對(duì)分子質(zhì)量320kD的糖卵白,由2871個(gè)氨基酸構(gòu)成,是構(gòu)成細(xì)胞外微纖維(直徑1012n)的重要卵白之一。因此FBN1突變將影響微纖維的布局與成效12。近幾年創(chuàng)造另1種與FS有關(guān)的基因轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子受體2(transfringgrthfatrbetareeptrtype,TGFBR2)基因3。筆者接納聚合酶鏈反響(PR)、變性高效液相色譜(denaturinghighperfraneliquidhratgraphy,DHPL)異源雙鏈闡發(fā)與DNA測(cè)序等

4、要領(lǐng),對(duì)1例FS患者舉行FBN1突變篩查與斷定,探究新的FBN1突變。1工具與要領(lǐng)1.1工具先證者,女,12歲,以“突發(fā)心悸、胸悶半天于2022年11月入福建省立病院心外科。患者身高170,肢展173,體質(zhì)量37kg,有蜘蛛樣指征。心臟二維彩超示主動(dòng)脈竇部增寬,主動(dòng)脈瓣呈二葉啟閉及返流,二尖瓣脫垂;有晶狀體異位和高度近視，臨床診斷為FS。該患者有家屬史,其母有身段瘦高,雙眼白內(nèi)障和晶狀體異位等FS臨床表示。其父臨床表型正常。50名無(wú)關(guān)正常報(bào)酬比擬組。1.2要領(lǐng)PR反響體系50L,含0.2l/LdNTP,1.5l/Lg2+,DNA模板200ng,ExTaqDNA聚合酶(日本TaKaRa公司)1.

5、25U,0.4l/L引物。用基因擴(kuò)增儀(Hea240,珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器公司)舉行PR反響。反響條件:955in,9530s556130s7250s,共30個(gè)循環(huán);72末了延伸10in34。PR產(chǎn)物用含0.5g/L溴化乙錠的1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。擴(kuò)增片斷326bp。限定性?xún)?nèi)切酶為liI,切點(diǎn):5ANNNNGTG3;3GTGNNNNA5,酶切反響時(shí)間16h。第29內(nèi)含子野生型的PR產(chǎn)物不克不及產(chǎn)生酶切反響。假設(shè)存在Intrn29+4AT,可以或許產(chǎn)生酶切反響,并形成93bp和233bp兩個(gè)片斷(圖1)。黑體部門(mén)為引物,下劃線(xiàn)處為突變點(diǎn),歪體為外顯子部門(mén)。:切點(diǎn).圖1FBN1第29內(nèi)含子野生型

6、擴(kuò)增片斷序列略Fig1Sequenefaplifiatinfragentfrintrn29fFBN12結(jié)果2.1DHPL圖形闡發(fā)比擬組及患者父親的FBN1第29外顯子PR擴(kuò)增產(chǎn)物在DHPL上表現(xiàn)單峰,但患者及其母出現(xiàn)低矮、寬大的雙峰圖形(圖2)。P:先證者;:先證者母親;F:先證者父親;N:正凡人.圖2FBN1第29外顯子DHPL圖略Fig2DHPLhratgrafrexn29fFBN12.2DNA測(cè)序FBN1第29外顯子PR擴(kuò)增產(chǎn)物為預(yù)期的214bp。測(cè)序表現(xiàn)患者與其母的FBN1有Intrn29+4AT。其父第29外顯子表現(xiàn)正常序列(圖3)。重復(fù)擴(kuò)增并舉行DNA測(cè)序,結(jié)果雷同。2.3RFLP

7、FBN1第29內(nèi)含子PR產(chǎn)物用liI限定性?xún)?nèi)切酶切后電泳表現(xiàn),患者與其母為兩條帶,片斷長(zhǎng)度為326bp與233bp,比擬組和患者父親為單一條帶,長(zhǎng)度為326bp(圖4)。:Intrn29+4位置.P:先證者;:先證者母親;F:先證者父親.圖3FBN1第29外顯子測(cè)序結(jié)果略Fig3DNAsequeningresultsfthePRprdutsfrexn29fFBN1a:100bpDNAarker;F:先證者父親;:先證者母親;P:先證者,N:正凡人.圖4FBN1第29內(nèi)含子PR產(chǎn)物RFLP電泳圖略Fig4RFLPeletrphretgrafthePRprdutsfrintrn29fFBN13討論

8、3.1關(guān)于FBN1剪接位點(diǎn)的突變?nèi)缃褚褕?bào)道的FBN1突變包羅了置換、缺失、插入、重復(fù)等堿基變革,導(dǎo)致錯(cuò)義突變、移碼突變、無(wú)義突變與剪接位點(diǎn)突變等多種情勢(shì)突變。這些突變均能引起FS。比年報(bào)道FBN1剪接位點(diǎn)的突變導(dǎo)致FS的占13%16%,突變位置為內(nèi)含子的7+579。內(nèi)含子中的剪接位點(diǎn)對(duì)付轉(zhuǎn)錄后形成有成效的RNA至關(guān)緊張,其突變是造成遺傳病的一個(gè)緊張緣故原由。本文報(bào)道的FBN1第29內(nèi)含子單堿基的置換(Intrn29+4AT)位于Intrn29和Exn29的剪接位點(diǎn)。DNA測(cè)序及RFLP證明該家屬內(nèi)2例患者有雷同突變,而未抱病者和50名正凡人表現(xiàn)正常結(jié)果,高度提示該突變(Intrn29,+4AT

9、)大概是該FS家屬抱病的緣故原由。經(jīng)UD數(shù)據(jù)庫(kù)(.ud.be:2030/)檢索,尚未見(jiàn)雷同報(bào)道。3.2關(guān)于用DHPL篩查FBN1突變DHPL異源雙鏈闡發(fā)法是比年來(lái)才生長(zhǎng)起來(lái)的一項(xiàng)新的基因突變篩查技能10。與其他相干技能比擬,該要領(lǐng)具有敏捷度高、特異性強(qiáng)、主動(dòng)化程度高和本錢(qián)低廉等長(zhǎng)處。筆者用PRDHPL篩查,對(duì)DHPL圖形非常的標(biāo)本再舉行DNA測(cè)序的要領(lǐng),檢測(cè)FS患者的FBN1突變,獲得滿(mǎn)足結(jié)果。PRDHPLDNA測(cè)序有望成為檢測(cè)FBN1基因突變的常用要領(lǐng)。(鳴謝:引物由美國(guó)JhnsHpkins大學(xué)醫(yī)學(xué)院Dietz傳授惠贈(zèng),特致謝意!)參考文獻(xiàn)：1lldBerudG,LeBurdellesS,A

10、desL,etal.UpdateftheUDFBN1utatindatabaseandreatinfanFBN1plyrphisdatabaseJ.Huutat,2022,22(3):199208.2RbinsnPN,BsP,KatzkeS,etal.utatinsfFBN1andgentypephentyperrelatinsinarfansyndreandrelatedfibrillinpathiesJ.Huutat,2002,20(3):153161.3izuguhiT,lldBerudG,AkiyaaT,etal.HeterzygusTGFBR2utatinsinarfansyndre

11、J.NatGenet,2022,36(8):855860.4黃肖利,伍嚴(yán)安,陳發(fā)林,等.馬凡綜合征兩種新的原纖維卵白1基因突變J.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,2022,21(6):562565.5atyasG,DePaepeA,HallidayD,etal.EvaluatinandappliatinfdenaturingHPLfrutatindetetininarfansyndre:Identifiatinf20nvelutatinsandtnvelplyrphissintheFBN1geneJ.Huutat,2002,19(4):443456.6KrkkJ,KaitilaI,LnnqvistL,et

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