SD大鼠脊髓中NT3及其受體TrkC的原位分布

1、SD大鼠脊髓中NT-3及其受體TrkC的原位漫衍錢東翔張洪鈿羅鵬郭煒王智堅李珺秦玲莎【摘要】目的通過免疫組化染色的要領(lǐng)研究成年sd大鼠脊髓中nt-3及其受體trk的原位漫衍和亞細胞定位，探究內(nèi)源性nt-3的作用機制。要領(lǐng)以康健成年sd大鼠為實行動物，取脊髓各節(jié)段的活動神經(jīng)元構(gòu)造標(biāo)本作免疫組化染色，以相識nt-3及trk的原位漫衍和亞細胞定位。效果不雅察到差異強度的nt-3及trk免疫陽性產(chǎn)物普及漫衍于大鼠脊髓的活動神經(jīng)元、中心神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞。nt-3定位于胞漿和胞核，胞核染色顯著，強于胞漿和神經(jīng)纖維。trk重要定位于陽性細胞的胞漿內(nèi)，少少出如今樹突或神經(jīng)末梢上。結(jié)論nt-3及trk在成年sd

2、大鼠脊髓的活動神經(jīng)元有差異性表達，提示二者均到場了大鼠脊髓神經(jīng)細胞的生理成效，但在差異地區(qū)又發(fā)揮著差異的作用?！娟P(guān)鍵字】神謀劃養(yǎng)因子nt-3trk免疫構(gòu)造化學(xué)漫衍神謀劃養(yǎng)因子neurtrphifatrs,ntfs是能促進神經(jīng)元存活，誘導(dǎo)其分化，并對神經(jīng)體系的發(fā)育及成效的維持起作用的一類多肽1。至今，已創(chuàng)造的ntfs不下20余種。nt-3是迄今為止創(chuàng)造的，在動物發(fā)育歷程中表達最強的神謀劃養(yǎng)因子2。ntfs的成員不但可促進神經(jīng)細胞存活，刺激軸突生長，調(diào)治突軸可塑性和神經(jīng)通報，在神經(jīng)細胞的生長、發(fā)育、分化及成效維持中發(fā)揮作用，并且可以促進損傷神經(jīng)元的修復(fù)和再生，從而減輕腦或脊髓損傷后繼發(fā)性損害的程度

3、，因此在神經(jīng)損傷修復(fù)歷程中起著緊張作用3-6。以是，各國神經(jīng)科學(xué)家在這一范疇普及地開展研究。即便云云，在體內(nèi)，內(nèi)源性的nt-3在差異種類的神經(jīng)細胞發(fā)揮怎樣的生理作用及其作用形式如今尚不明晰。絕大多數(shù)是ntfs到場神經(jīng)構(gòu)造損傷的相干性研究，比方應(yīng)用外源性ntfs促進神經(jīng)成效修復(fù)等，而要澄清ntfs在ns差異部位、差異神經(jīng)元群間的轉(zhuǎn)運形式和作用機制，必需深化相識ntfs卵白在ns的地區(qū)漫衍和亞細胞定位。本實行擬通過免疫組化染色的要領(lǐng)研究成年sd大鼠脊髓活動神經(jīng)元中nt-3的原位漫衍和亞細胞定位，探究內(nèi)源性nt-3的作用機制。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1實行動物實行用sd大鼠，體重200220克，微生物品級為

4、spf級，均為雌性，豢養(yǎng)溫度2024，正常飲食，自由飲水。購自廣東省醫(yī)學(xué)實行動物中心，經(jīng)廣東省實行動物監(jiān)測所查驗檢疫切合實行動物尺度，允許證號為：sxk(粵)20220002粵監(jiān)證字2022a020。1.2實行試劑兔抗nt-3多克隆抗體illipre，效價1:1000、鼠抗trk單克隆抗體illipre，效價1:3000、sp三步法試劑合、濃縮型dab試劑合、熒光二抗試劑、免疫組化通例試劑等。1.3免疫組化取材將待取材大鼠過量麻醉，用4%多聚甲醛心內(nèi)灌注結(jié)實，取雙側(cè)頸髓、胸髓、腰髓三個部位的各兩末節(jié)段脊髓構(gòu)造。后結(jié)實后作梯度濃度蔗糖脫水，再作一連切片制作標(biāo)本玻片，用nt-3及trk抗體行免疫構(gòu)

5、造化學(xué)染色。2效果2.1nt-3在sd大鼠脊髓中的漫衍及亞細胞定位圖1nt-3在正常成年sd大鼠脊髓腹角陽性活動神經(jīng)元的免疫組化染色2002.2trk在sd大鼠脊髓中的漫衍及亞細胞定位在正常的脊髓中，trk的免疫陽性產(chǎn)物被檢測到在活動神經(jīng)元和中心神經(jīng)元中均有表達。trk的亞細胞定位重要是位于陽性細胞的胞漿內(nèi)，少少出如今樹突或神經(jīng)末梢上圖2。在白質(zhì)內(nèi)被gfap標(biāo)識表記標(biāo)幟的星型膠質(zhì)細胞也同樣可見trk抗體的陽性表達。圖2trk在正常成年sd大鼠脊髓前角活動神經(jīng)元的免疫組化染色3003討論在本研究中，我們不雅察到nt-3及其受體trk均在脊髓腹角活動神經(jīng)元有所表達，說明正常環(huán)境下提示二者有協(xié)同維持

6、神經(jīng)元存活的作用。nt-3陽性免疫產(chǎn)物見于脊髓背角板層的lissauers束，提示nt-3可由脊神經(jīng)的假單極神經(jīng)元合成，通過軸突轉(zhuǎn)運，運送到脊髓背角板層以維持板層內(nèi)感覺神經(jīng)元的存活。在中心管四周的larke核larkenuleus，n可見nt-3強陽性染色的神經(jīng)元，nvikva等7創(chuàng)造大鼠頸髓損傷后，固然larke核神經(jīng)元同時表達trk和trkb受體，但僅有nt-3具有神經(jīng)庇護活性：即鞘內(nèi)注射nt-3后，larke核神經(jīng)元的存活率從60升高到91%，而團結(jié)運用bdnf和nt-3后，nt-3對n的庇護作用那么不復(fù)存在，表白：外源性的nt-3對larke核有精良的庇護作用，我們的研究在體內(nèi)更進一步

7、證明了這一效果。nt-3和trk在正常脊髓細胞的亞細胞定位有所差異。nt-3免疫陽性產(chǎn)物重要漫衍于核內(nèi)，胞漿和突起的染色相對較淺，以大活動神經(jīng)元為主，特殊是、板層染色顯著。在灰質(zhì)背角的板層，可見毛刷狀的nt-3免疫陽性神經(jīng)元，但染色較弱。在中心管四周的larke核可見nt-3強陽性染色的神經(jīng)元。而trk在活動神經(jīng)元和中心神經(jīng)元中均有表達，trk的亞細胞定位重要是位于陽性細胞的胞漿內(nèi)，少少出如今樹突或神經(jīng)末梢上。在白質(zhì)內(nèi)被gfap標(biāo)識表記標(biāo)幟的星型膠質(zhì)細胞也同樣可見trk抗體的陽性表達。nt-3的受體有兩類，膜受體和核受體，前者位于細胞膜，后者位于細胞核，核受體的存在為nt-3進入核內(nèi)發(fā)揮作用提

8、供了大概。顧玲等人8的研究表白：trk的免疫陽性反響物可見于脊髓灰質(zhì)腹角的活動神經(jīng)元，罷了有研究創(chuàng)造脊髓活動神經(jīng)元和其靶構(gòu)造均表達nt-3rna9，10，團結(jié)我們對nt-3卵白表達的研究，提示腹角活動神經(jīng)元可自主合成nt-3，但也可通過攝取方法得到nt-3，并且nt-3在脊髓前角活動細胞大概存在自排泄旁排泄的作用形式。在脊髓背角，淺層陽性細胞少見，但板層可見trk陽性染色顯著深于其他層。我們也在背角板層創(chuàng)造nt-3陽性膨體，進而提示，板層是nt-3的作用位點，trk大概與這些部位的nt-3發(fā)揮作用有關(guān)。參考文獻1levi-ntalinir.thenervegrthfatr:thirty-fiv

9、eyearslater.siene,1987,237:1154-l164.2aisnpierrep,bellusil,friedanb,etal.nt-3,bdnfandngfinthedevelpingratnervussyste:parallelasellasreipralpatternsfexpressin.neurn,1990,5:501-509.3sharahs.pst-trauatiappliatinfbrain-derivedneurntrphifatrandglia-derivedneurtrphifatrntheratspinalrdenhanesneurprtetinand

10、iprvestrfuntin.ataneurhirsuppl，2022，96:329-34.4shuskyjs,tbiasa,tul,etal.delayedtransplantatinffibrblastsgenetiallydifiedtseretebdnfandnt-3intaspinalrdinjurysiteisassiatedithliitedreveryffuntin.expneurl，2022，184(1):114-30.5hungks,tsaish,leet,etal.genetransferfinsulin-likegrthfatr-iprvidingneurprtetinafterspinalrdinjuryinrats.jneursurgspine，2022，6(1):35-46.7nvikvaln,nvikvln,kellerthj,etal.bdnfablishesthesurvivaleffetfnt-3i