干細胞治療工作流程圖

1、干細胞治療工作流程臍帶血臨床采集流程干細胞是一種未分化的細胞，具有自我更新、分化、發(fā)育再生各種組織器 官和人體的潛在功能。臍帶血廣泛的應(yīng)用前景備受關(guān)注，臍帶血本屬于廢棄物，但是醫(yī)學技術(shù)的 進步使得它的價值得到了空前的提升。1989年，法國的魯克羅曼教授用HLA 相合的同胞臍帶血干細胞進行移植，成功地治療了一例遺傳性疾病可尼貧 血癥，之后短短的15年的時間，醫(yī)學界利用臍帶血干細胞已成功治愈和改善 了多種疾病，包括:血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、神經(jīng)和血管系統(tǒng)疾病、腦 部疾病、腫瘤、糖尿病等?，F(xiàn)在在兒童的干細胞移植方面，由于可以存在1-2 個口1人位點的不配型，免疫排斥反應(yīng)小等原因，臍帶血干細胞已成

2、為治療一些 重大疾病的有效手段。同時，干細胞的進一步開發(fā)，還可用于抗衰老、器官修 復、美容等保健領(lǐng)域。干細胞技術(shù)和臨床應(yīng)用的飛速發(fā)展，給人類的健康帶來 了新的希望和保障。但是作為采集臍帶血最主要的工作人員，我們所需要的操 作是非常簡單的，但是對于術(shù)中操作之外，我們還是會遇到以下的問題。解決 這些問題，我們才能放心的采集，存儲，備用。但是真正合法，安全，便捷的 讓臍帶血的干細胞移植到有需要的患者體，需要按以下流程操作： 臍帶血采集條件： 以初產(chǎn)婦、年齡在45歲以或35歲以經(jīng)產(chǎn)婦，身體健康者為宜。臍帶血安全流程1、傳染病檢查：孕婦在產(chǎn)前要做好身體檢查。這些檢查包括:肝功能是否 正常，有無梅毒螺旋體

3、，艾滋病病毒(HIV )、乙型肝炎病毒(HBV )、丙型肝炎 病毒(HCV)等病原體檢測。如果其中有一樣是陽性的話，就不要再進行采集了。2、采集和儲存的無菌觀念：在自然分娩的情況下，一定要注意消毒。被 厭氧菌和需氧菌污染，檢測為陽性時都不能儲存和使用。在臍血被采集后，應(yīng) 該盡快保存在2-8的恒溫箱中，并遠離輻射源，不要讓X射線照到。這樣的臍 帶血經(jīng)科學實驗證實，放置24小時或在-23以下48小時，其中的干細胞的活 性是沒有明顯影響的，但最長不應(yīng)該超過72小時。采集流程何種方法采集臍帶血更好些呢？ Solves5等證實了剖宮產(chǎn)情況下，以下兩 種采集方法體采集法對得到的臍帶血除血細胞比容及血小板外

4、，其他各項沒有 明顯不同。體采集法：產(chǎn)婦施行常規(guī)的子宮橫切術(shù)，將胎兒取出后，立即用兩把止血 鉗夾住臍帶，將其與胎兒分離，然后用碘酒和70%酒精消毒臍帶，做臍靜脈穿 刺后，臍帶血通過重力的作用流人含抗凝劑的無菌采集袋，采集完將其放入4 冰箱中保存。體外采集法：同樣對產(chǎn)婦行子宮橫切術(shù)，待胎盤自然或人工剝離后，立即 將其置于采集區(qū)，胎盤取出與進行采集之間時間盡可能縮短，將胎盤放在一個 中間有孔的可供臍帶自然垂下的采集臺上，對臍帶進行嚴格消毒后行臍靜脈穿 刺，血液在重力的作用下流人采集袋中，將其放人4冰箱保存。臍帶血貯存因為臍血的采集、運輸、儲存和應(yīng)用事實上有別于一般血液，國際上通行的管理法規(guī)都將血液

5、和組織細胞分別管理，而我國目前的法規(guī)對臍血干細胞庫 只簡單歸屬血液管理，嚴重阻礙了干細胞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。首先，來源不一樣， 臍帶血是產(chǎn)婦和新生兒血循環(huán)以外的胎盤和臍帶中的血液，一直是醫(yī)院產(chǎn)科的 廢棄物，采集對產(chǎn)婦和新生兒無任何風險，然而其采集作為產(chǎn)婦生產(chǎn)過程的一 部分，只能由產(chǎn)科醫(yī)護人員進行，不可能由其他人員采集；而其應(yīng)用主要是其 中的干細胞，不會發(fā)生一般血液的公共安全問題。我們所在的手術(shù)室其實是臍 帶血采集的主要場所，手術(shù)室護士以及產(chǎn)科醫(yī)生也將是臍帶血采集主要人員， 因此對于臍帶血的采集問題還是需要有必要的認識。1、采集足月妊娠的健康產(chǎn)婦臍血，以肝素抗凝（40u/ml）,臍血采集量50 100m

6、l,采集后2h進行分離純化處理。2、胎兒分娩后立即抽取臍血,經(jīng)抗凝,2-8冰箱保存。骨髓采集流程接受干細胞治療的病人在術(shù)前應(yīng)加強營養(yǎng)，改善體質(zhì)。簽署知情同意書， 干細胞治療志愿書，手術(shù)同意書，及相關(guān)法律文書。對病人進行生命體征的觀 測，有發(fā)熱和炎癥患者需要待炎癥控制后再進行移植治療，女性病人避開月經(jīng) 期。全身衰竭，嚴重肝腎功能損害的病人不宜進行自體骨髓干細胞移植治療。 此外，根據(jù)移植途徑的不同給病人做好相應(yīng)的術(shù)前處理。1： 術(shù)前心理疏導，消除患者緊情緒。重組人粒細胞刺激因子每天注射一支（皮下注射），打1-2天；病人身體狀態(tài) 好，可不用做動員。2：術(shù)前準備普通骨穿針2個，10ml注射器20個，在

7、采集骨髓前將每個注射器 中加入1ml肝素（抗凝），一次性采血袋或準備一個200ml以上容量的瓶子， 術(shù)前消好毒，上蓋橡膠蓋或者軟木蓋，以便插針頭，方便采集的骨髓往瓶中注 入。術(shù)前30min行常規(guī)劑量頭孢二代抗菌。3：骨髓采集一般為24個點的采集，在兩個點不能夠采集好的情況下，采 集最大4個點。4：將采集好的骨髓或臍帶血用醫(yī)用紗布包裹，送分離。送病人回病房。5：將分離好的干細胞用生理鹽水稀釋成4-5ml干細胞懸液備用。6：術(shù)后進行48小時體溫監(jiān)測。適應(yīng)癥理論上干細胞能夠治療一切細胞損傷性疾病。目前已經(jīng)使用中聯(lián)達生物有 限公司產(chǎn)品應(yīng)用技術(shù)成熟、療效可靠、安全性高的疾病主要有：肝炎肝硬化、 潰瘍性結(jié)

8、腸炎、糖尿病足、閉塞性脈管炎下肢壞死、神經(jīng)損傷性疾病、老年癡 呆癥、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、帕金森氏病、糖尿病等禁忌癥一切非細胞損傷性疾??；血液??；肝腎功能嚴重不足；發(fā)燒病人；有嚴重 出血傾向病人；孕婦或哺乳期女性；合并大量腹腔、肺部或其他系統(tǒng)嚴重感染； 心、肺、腎等重要臟器功能不全/衰竭不能配合治療；過敏體質(zhì)等其他嚴重情 況影響治療等?？剖疫\作流程選擇病例一術(shù)前準備（術(shù)前相關(guān)檢查、談話記錄、知情同意書，干細胞來 源選擇臍帶血、骨髓血）標準收費臍帶血通知婦產(chǎn)科或廠家-治療前兩日通知細胞分離室 骨髓血不能在細胞分離室采則通知手 術(shù)室（術(shù)前一日通知）f 需介入的通知介入科（術(shù)前一日通知）或再次通知

9、手術(shù)室治療當日；進行骨髓血、臍帶血采集f送細胞分離室分離f分離時間 3小時左右結(jié)束f干細胞送治療室（介入科或手術(shù)室治療）f病人送回病 房。神經(jīng)系統(tǒng)病變適應(yīng)癥腦外傷、腦外傷后遺癥腦梗塞、腦出血脊髓損傷性截癱急性期末（一周）腦發(fā)育不全、腦萎縮老年性癡呆、智力低下、帕金森病腦癱、長期昏迷、植物生存狀態(tài)肌萎縮側(cè)索硬化癥運動神經(jīng)元病治療方法經(jīng)頸動脈介入干細胞移植1、選擇符合適應(yīng)癥患者，排除心、肺、肝、腎等臟器重大疾患。2、行頭部磁共振、血、尿常規(guī)，凝血功能，輸血四項，乙肝三系，生化全套，胸部DR、4 電圖等，排除手術(shù)禁忌。3、采用骨髓或臍帶血分離純化（負收集混合法）收集干細胞，總數(shù)需2X106/L。4、

10、患者轉(zhuǎn)移至介入室，常規(guī)經(jīng)右腹股溝穿刺放置導管鞘，用5F多功能造影管分別行雙側(cè) 頸動脈及椎基底動脈造影，排除腦血管畸形等疾病，并經(jīng)雙側(cè)頸動脈注入充分稀釋后干細 胞懸液4一5山1,續(xù)推2ml生理鹽水。5、術(shù)后配合單唾液酸四己神經(jīng)節(jié)苷脂注射液等營養(yǎng)神經(jīng)治療。6、采用美國功能獨立性評測評分對患者術(shù)前、術(shù)后3個月、6個月進行評定。主要評價 6 個方面的能力：生活自理能力，括約肌控制能力，活動能力，行動能力，理解交流能力， 社會認識能力。腰穿注射干細胞移植術(shù)前心理疏導，消除患者緊情緒?；颊邆?cè)臥，“抱膝凸腰”打開腰椎間隙。選擇L3 4間隙為穿刺點，術(shù)野消毒鋪巾。穿刺成功后引出腦脊液2-3山1。取干細胞濃度2

11、X106/L的提取液4ml緩慢推注至蛛網(wǎng)膜下腔，續(xù)推2ml生理鹽水。留針35min觀查病人，正常后拔針，無菌紗布覆蓋穿刺點，術(shù)后去枕平臥6小時。立體定向移植采用立體定向技術(shù)定位病變部位，在局麻狀態(tài)下，顱骨鉆孔，插入穿刺針，應(yīng)用微量 泵將事先準備的干細胞緩慢注入靶點。腦室引流管注入靜脈滴注用生理鹽水稀釋至100ml 一小時緩慢靜脈滴入肝病科酒精性肝硬化失代償期 丙肝后肝硬化失代償期 自身免疫性肝病 急性重型肝炎肝炎后肝硬化合并肝癌適應(yīng)癥：肝炎后肝硬化失代償期原發(fā)性膽汁淤積性肝硬化不明原因性肝硬化失代償期藥物性肝病慢性重型肝炎重癥肝炎合并肝癌治療方法肝固有動脈介入：在DSA下經(jīng)股動脈穿刺插管，置管

12、于肝固有動脈進行造 影，觀察肝血管情況及有無占位性病變。將待用的細胞懸液10-15ml于10-15 分鐘經(jīng)肝固有動脈或左右肝動脈緩慢注入;術(shù)畢拔管,穿刺點加壓包扎后返回 病房，穿刺側(cè)下肢制動6h。分泌科適應(yīng)癥：I型糖尿病II型糖尿病糖尿病足治療方法1型糖尿病采用環(huán)磷酰胺+兔抗胸腺細胞球蛋白方案預處理，兩日將分離好的干細胞 稀釋至100ml靜脈回輸或在DSA引導下經(jīng)股動脈穿刺插管置管于胰背動脈將 干細胞懸液10ml緩慢注入。11型糖尿病在DSA引導下經(jīng)股動脈穿刺插管置管于胰背動脈將干細胞懸液10ml緩慢注 入。1型、11型觀察治療前后胰島素注射劑量、HbA1c、平胰島功能、等變化。 糖尿病足將分

13、離好的干細胞用生理鹽水稀釋至60ml /腿干細胞懸液備用。消毒、鋪巾，雙下肢貼皮膚保護膜。將干細胞懸液注射到患者缺血的下肢。 從上向下順序注射，每個點注射約1ml,注射深度在1.52。山之間，相鄰的最 大間距離為11.5cm。注射完畢后，注射點用無菌敷料包扎。血管外科閉塞性脈管炎治療方法：將分離好的干細胞用生理鹽水稀釋至60ml/腿干細胞懸液備 用。消毒、鋪巾，雙下肢貼皮膚保護膜。將干細胞懸液注射到患者缺血的下肢。從上向下順序注射，每個點注射約1ml,注射深度在1.52。山之間，相鄰的最 大間距離為11.5cm。注射完畢后，注射點用無菌敷料包扎。骨科股骨頭壞死干細胞治療方法：方法一：用臍帶血或

14、在局麻下穿刺髂骨，取出自體骨髓150mL，獲得干細 胞懸液約1020 mL,于獲得干細胞后12 h先行股骨頭髓芯減壓，然后再行 動脈灌注，灌注完成后選擇旋股側(cè)動脈注射入部分干細胞懸液后拔除導管及鞘 管,隨后用特制刮勺伸入環(huán)鋸搔刮壞死區(qū)后,再將剩余干細胞懸液注射入環(huán)鋸, 由環(huán)鋸填入大粗隆處正常松質(zhì)骨及少量明膠海綿（或生物膠）以防止干細胞漏 出,拔除環(huán)鋸,皮膚縫合。方法二：在DSA引導下行股動脈穿刺，將導管超選插入旋股動脈、旋股外 動脈及閉孔動脈，將獲得的干細胞懸液10ml20ml緩慢注入動脈。術(shù)后采用髖關(guān)節(jié)Harris評分及影像學（主要為MRI）情況評定療效合骨不連治療方法：乂線透視下將1枚骨穿

15、針準確穿入骨不連部位，并用針尖輕 輕剝離骨不連部位的瘢痕組織及硬化骨質(zhì)；用注射器抽取已制備并稀釋好 的干細胞加壓注入骨不連部位的髓腔、骨折斷端之間的纖維瘢痕中及其表 面；每例不少于3個注射點，每點注射610ml,保證干細胞在骨不連處 均勻分布,局部稍加壓包扎。注射量根據(jù)骨折部位而定,肱骨及脛骨中上 段注射20 ml,脛骨下段骨折注射2030 ml。術(shù)后根據(jù)固定的堅固程度，輔助使用外固定46周。注射1個月后復查x線片，如有硬化邊緣清晰，無新生骨形 成，無骨小梁通過骨折縫隙，骨不連間隙無明顯縮小，患處壓痛減輕不明顯者， 再次注射1次。可多次注射，每次注射間隔均為1個月左右。消化科適應(yīng)癥：潰瘍性結(jié)腸

16、炎治療方法：首先確定潰瘍面的位置，潰瘍面在腸系膜上動脈以上的，在DSA經(jīng) 股動脈插管至腸系膜上動脈，緩慢將干細胞懸液注入。潰瘍面在腸系膜上動脈 以下的，經(jīng)股動脈插管至腸系膜下動脈，緩慢將干細胞懸液注入。克羅恩病治療方法：大劑量化療兩日，第三日將獲得的干細胞懸液用生理鹽水稀釋至 100ml，采用大號針頭經(jīng)靜脈回輸干細胞。心科適應(yīng)癥：心肌梗死擴型心肌病心力衰竭治療方法：在進行灌注前給病人做6分鐘步行測試并記錄數(shù)據(jù)，記錄病人EF值及腦鈉值。將分離好的干細胞稀釋成10ml干細胞懸液備用在手術(shù)室備除顫器。由股動脈插管到冠狀動脈的前降支，分別將干細胞緩慢（10min以上） 注射到前降支遠端、中端、近端。治

17、療前后常規(guī)使用其他治療心肌病藥物。腎科適應(yīng)癥：慢性腎臟病狼瘡性腎炎IGA腎病治療方法：在DSA引導下經(jīng)股動脈插管至雙腎動脈，將獲得的干細胞懸液 20ml緩慢注入，每腎10ml。術(shù)后監(jiān)測患者的生命體征。泌尿外科、婦產(chǎn)科適應(yīng)病種：壓力性尿失禁勃起功能障礙使用方法：壓力性尿失禁：尿道粘膜下和括約肌注射法：將干細胞懸液稀釋至 1。一山匕在超聲波三維顯示下，用10mm的針將干細胞懸液經(jīng)尿道周圍注射 至尿道黏膜下及周圍的尿道括約肌，深度至膀胱頸為止，行四個方位尿道粘膜 下和括約肌點狀注射，每點0.5-1ml。整個植入手術(shù)約2 0分鐘，注射干細胞 治療女性患者的療效較男性好,有效率分別為90%和72%。一般

18、在接受注射34 周后有充分顯效,且療效似乎是長期的。勃起功能障礙：陰莖海綿體注射法、在腰麻下將干細胞懸液稀釋至6ml, 用注射器抽取在陰莖神經(jīng)根部周圍及陰莖海綿體四個方位行12個點狀注射法， 每點0.5ml。腫瘤科、血液科適應(yīng)病種：腫瘤放、化療后支持治療，增強造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)修復；肝癌介入栓塞合并干細胞治療；移植途徑：1、靜脈滴注：在大劑量化療方案兩日后將臍帶血干細胞懸液稀釋到100ml 生理鹽水中用大號針頭緩慢輸入。2、肝癌介入栓塞合并干細胞治療；在DSA下經(jīng)股動脈穿刺插管，行肝癌 介入栓塞后將待用的細胞懸液10-15ml于1015分鐘經(jīng)肝固有動脈或左右肝動 脈緩慢注入;術(shù)畢拔管，穿刺點加壓包扎后返回病房，穿刺側(cè)下肢制動6h。風濕免疫科適應(yīng)癥：系統(tǒng)性紅斑狼瘡類風濕性關(guān)節(jié)炎多發(fā)性硬化系統(tǒng)性硬化癥治療方法；患者進入層流病房，兩日大劑量的化療，第三日將獲得的干細胞懸 液用生理鹽水稀釋至100ml，采用大號針頭經(jīng)靜脈回輸干細胞。呼吸科適應(yīng)癥：肺動脈高壓肺纖維化移植途徑：上肢靜脈輸入法：用生理鹽水將干細胞懸液稀釋至100ml緩慢輸入。