生物物質(zhì)分離工程試驗(yàn)10級(jí)版本

1、生物物質(zhì)分離工程實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)須知：1、認(rèn)真預(yù)習(xí)理解每個(gè)實(shí)驗(yàn)的目的、原理、操作關(guān)鍵步驟和注意事項(xiàng)。2、按時(shí)上課，遲到20分鐘以上者建議重做實(shí)驗(yàn)； 上實(shí)驗(yàn)課時(shí)須帶實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)、 記錄本和筆等。3、分組后應(yīng)固定，不能隨意更換，不大聲喧鬧，遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則。4、實(shí)驗(yàn)前由教師講解實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)具體操作方法以及如何寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。5、每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束，每組的實(shí)驗(yàn)用具要清洗，并卻待老師檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果后，方能離開實(shí)驗(yàn)室。6、學(xué)生每次實(shí)驗(yàn)要寫出規(guī)范實(shí)驗(yàn)報(bào)告，報(bào)告數(shù)據(jù)必須如實(shí)記錄。7、教師根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作情況、打掃衛(wèi)生情況、實(shí)驗(yàn)報(bào)告及最后考核給出成績(jī)（總分100份）。（說(shuō)明：生物工程專業(yè)本課程實(shí)驗(yàn)總學(xué)時(shí)為32個(gè)，因此安排11個(gè)實(shí)驗(yàn)生物技

2、術(shù)專業(yè)本課程實(shí)驗(yàn)總學(xué)時(shí)為 16個(gè)，因此安排6個(gè)實(shí)驗(yàn)，做前6個(gè)實(shí)驗(yàn)）2012年2月實(shí)驗(yàn)一 有機(jī)溶劑萃取法中pH對(duì)表觀分配系數(shù)的影響（第一次實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?.通過(guò)實(shí)驗(yàn)，加深對(duì)表觀分配系數(shù)的理解并掌握其測(cè)定方法。22.以紅霉素為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，了解 pH在萃取工藝中的重要性。 二、實(shí)驗(yàn)原理.紅霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，呈弱堿性，在不同pH條件下，在水溶液和有機(jī)溶液中溶解度不同，故能達(dá)到不同程度的分配。表觀分配系數(shù)是指在一定溫度和壓力下，當(dāng)分配達(dá)到平衡時(shí)溶質(zhì)在萃取相和萃余相中總濃度之比，可通過(guò)實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定。對(duì)于弱電解質(zhì)，溶液的pH對(duì)表觀分配系數(shù)影響很大。一元弱堿性物質(zhì)溶液 pH對(duì)表觀分配系數(shù) K的關(guān)

3、系式見式（1-6-4 ）KoK 二0110PK jH 式中：Ko熱力學(xué)分配系數(shù)，在一定的溫度和壓力下是常數(shù) pk化合物電離平衡常數(shù)的負(fù)對(duì)數(shù)由上式可知，隨溶液 pH升高，K值增大，有利于 紅霉素萃取到有機(jī)溶劑 中。反之，K 值減小，可將紅霉素從有機(jī)相反萃取到水相。.利用紅霉素在冰醋酸中被濃鹽酸水解后，與對(duì)二甲氨基苯甲醛形成有色物質(zhì)，并在486nm波長(zhǎng)處有最大吸收值的特性，可測(cè)定其化學(xué)效價(jià)，從而計(jì)算出表現(xiàn)分配系數(shù)。三、實(shí)驗(yàn)器材與試劑（一）器材精密電子天平，60ml分液漏斗，分光光度計(jì)，恒溫水浴鍋，pH酸度計(jì)，移液管，燒杯，量筒，試管，50ml容量瓶，稱量瓶和溫度計(jì)等。（二）試劑紅霉素成品，乙酸丁酯

4、或乙酸乙酯，氯化俊，氨水，95叱醇，冰醋酸，濃鹽酸，對(duì)二甲氨基苯甲醛等。 四、操作方法（一）溶液配制.pH9.0氯化俊緩沖液：稱取NHCl固體70g,溶于蒸儲(chǔ)水中，加濃氨水 48ml,再用蒸儲(chǔ)水 稀釋至1L。.紅霉素原液：A液：稱取紅霉素成品25mg于小燒杯中，加入 2ml95%醇，溶解后，用去離子水稀釋并 定容至50ml o測(cè)pH值（用pH酸度計(jì)或精密pH試紙）。B液：稱取紅霉素成品25mg于小燒杯中，加入 2ml95%醇，溶解后，用 pH9.0氯化俊緩 沖液稀釋并定容至 50ml。測(cè)pH值（用pH酸度計(jì)或精密pH試紙）。.顯色劑：取對(duì)二甲氨基苯甲醛適量，加冰醋酸溶解使成0.5% （W/V）

5、的溶液。.紅霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，加95叱醇溶解，制成0.2mg/ml的溶液。.鹽酸-冰醋酸混合液：鹽酸、冰醋酸按體積比為2: 1的比例配成。（二）萃取法測(cè)定表觀分配系數(shù).將上述已配制好的紅霉素 A液和B液各吸取15ml于2只分液漏斗中，再分別加入15ml乙酸丁酯或乙酸乙酯，振搖 10min。.靜置片刻，使其分層，放出下層水相（萃余液），用pH酸度計(jì)或精密pH試紙分別測(cè)定其pH,并測(cè)定操作溫度。.用下述方法測(cè)定原液 A和B以及2只分液漏斗下相液（萃余液）的化學(xué)效價(jià)。.用下式計(jì)算不同 pH的表觀分配系數(shù)：原液效價(jià)萃余液效價(jià) k 一 萃余液效價(jià)（三）紅霉素的化學(xué)效價(jià)測(cè)定方法.標(biāo)準(zhǔn)

6、曲線的繪制：在移液管中分別吸取紅霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5ml分別置于試管中，加冰醋酸4.0ml ,顯色劑1.0ml ,再加鹽酸-冰醋酸混合液至總體積為10ml,搖勻，置30 C水浴鍋中保溫10min （溫度時(shí)間要準(zhǔn)確，顏色為紅色），取出，冷卻后在 486nm波長(zhǎng)下比色， 用其余的試劑作為空白比照。以吸光度值（A）為縱坐標(biāo)，吸取的樣品量（ m。為橫坐標(biāo)作圖，并線性回歸。 2.原液效價(jià)和萃余液效價(jià)的測(cè)定（1）取紅霉素A、B原液各0.5ml ,置于試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作方法，比色后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn) 曲線計(jì)算原液效價(jià)。（2）另取溶劑萃取系統(tǒng)中的二個(gè)萃余相若干ml,同上操作，比色后根

7、據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算原液效價(jià)。參考值A(chǔ)萃余相取1.5-2.0ml , B萃余相取3ml左右。.測(cè)定A、B兩種萃取系統(tǒng)中萃余液的 pH.（如果pH計(jì)不穩(wěn)定，改為精密的pH試紙）五、結(jié)果分析與討論 （試驗(yàn)報(bào)告上要預(yù)留空間，等理論課學(xué)過(guò)后再補(bǔ)上）.計(jì)算不同平衡pH時(shí)的表觀分配系數(shù) K和紅霉素的真分配系數(shù) K0.根據(jù)紅霉素的理化性質(zhì)，分析pH影響其表觀分配系數(shù) K值的原因。實(shí)驗(yàn)二 雙水相萃取系統(tǒng)的相圖制作（第一次實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笳莆沼脻狳c(diǎn)法制作雙水相系統(tǒng)相圖的方法，加深對(duì)相圖的認(rèn)識(shí)。二、實(shí)驗(yàn)原理兩水相形成的條件和定量關(guān)系可用相圖來(lái)表示，相圖是研究雙相萃取的基礎(chǔ)。相圖是一條雙節(jié)線，當(dāng)成相組分的配比取在

8、曲線下方時(shí)，系統(tǒng)為均勻的單相，混合后溶液澄清透明， 稱為均相區(qū)；在曲線的上方時(shí)，能自動(dòng)分成兩相，稱為兩相區(qū)；若配比取在曲線上，則混合 后，溶液恰好從澄清變?yōu)榛鞚?。三、?shí)驗(yàn)試劑和器材：（NH4） 2SO4溶液、PEG400、蒸儲(chǔ)水、漩渦振蕩器 （或大試管）、微量滴管裝置（或帶 刻度滴管，滴定記錄滴數(shù)，換算成體積）、電子天平、微量注射器、大試管、移液管等四、實(shí)驗(yàn)步驟1、精確配置43.00% （g/ml）的（NH4）2 SO4溶液，測(cè)定其密度為1.172 g/ml。2、精確稱取PEG400液體0.700g加入干燥的試管 中，按表格第1號(hào)數(shù)據(jù)，用移液管加入0.5ml蒸儲(chǔ)水（水的密度按1g/ml計(jì)算），

9、再緩慢滴加已配制好的（NH4）2 SO4溶液，并 不斷在混合器上混合，觀察溶液的澄清程度，直至試管內(nèi)溶液開始出現(xiàn)混濁為止（呈霧狀，不是沉淀），記錄（NH4） 2 SO4溶液的加入量（ml）,并根據(jù)密度值求出重量（g）。（注意要緩慢滴加，不要滴過(guò)，否則又要重新稱量）3、然后，按下表的第 2號(hào)數(shù)據(jù)加水，使其澄清，繼續(xù)向試管滴加，使其再次達(dá)到混濁，如 此按下表3、4?我復(fù)操作。4、計(jì)算每次達(dá)到混濁時(shí) PEG在系統(tǒng)總量中的百分含量（%），以PEG的重量百分比濃度為縱坐標(biāo)，以（NH4） 2 SO4的重量百分比濃度為橫坐標(biāo)作圖，即得到一條雙節(jié)線的相圖。（按下表數(shù)據(jù)加入、記錄和計(jì)算）序數(shù)加水量（g）力口（

10、nh4）2 SO4溶液的量（記錄滴數(shù)，按0.040.05ml/滴換算）（ml）純（NH4） 2 SO4的累計(jì)量（g）溶液累計(jì)總量（水十硫酸鏤+ PEG）（g）PEG的重量百分比濃度（NH4） 2SO4的重量百分比濃度10.520.130.140.150.160.170.180.1（一般到第5次以后就較難觀察，少數(shù)組可滴至第8次，但至少要加5次）五、結(jié)果分析與討論簡(jiǎn)述相圖的特點(diǎn)和作用?實(shí)驗(yàn)三 雙水相萃取系統(tǒng)中高聚物和鹽對(duì)相體積比的影響（第二次實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?、了解雙水相系統(tǒng)形成的機(jī)理及常用的雙水相系統(tǒng)。2、掌握雙水相系統(tǒng)中相比的測(cè)定方法。3、鞏固離心機(jī)的操作方法及注意事項(xiàng)。二、實(shí)驗(yàn)原理

11、雙水相系統(tǒng)通常是由水溶性的兩種聚合物組成或一種水溶性聚合物與一種鹽組成，與一般分離純化技術(shù)相比，雙水相技術(shù)具有處理容量大、能耗低、易連續(xù)化操作和工程放大等優(yōu) 點(diǎn)，在蛋白質(zhì)、酶、核酸等生物大分子的分離純化等方面受到廣泛重視，是一種有發(fā)展?jié)摿Φ囊子诠I(yè)化應(yīng)用的生物分離技術(shù)。常用的雙水相系統(tǒng)有：聚乙二醇（ PEG） /葡聚糖（DEXTRAN ）、PEG/磷酸鹽、PEG/硫酸錢 等。分成兩相后， 上下相體積比稱為相比，相比增加，上相和下相相對(duì)組成的差別就增大， 這將會(huì)極大地影響產(chǎn)物如酶在兩相中的分配系數(shù)，使酶富集于上相。三、實(shí)驗(yàn)試劑和器材：(NH4)2 SO4固體、PEG400液體、PEG4000固體

12、、糖化酶濾液 (濃度為5%10%均可)、蒸播水、帶刻度離心管、電子天平(或臺(tái)秤)、臺(tái)式離心機(jī)等四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、在四只10ml刻度離心管中， 用電子天平準(zhǔn)確稱取 以下藥品到每個(gè)離心管中。(NH4) 2 SO4 固體 1.30g, PEG400 液體 2.00g(NH4) 2 SO4 固體 1.30g, PEG4000 固體 2.00g(NH4) 2 SO4 固體 1.50g, PEG400 液體 1.80g(NH4) 2 SO4 固體 1.10g, PEG4000 固體 2.20g先把PEG4000固體稱好后碾碎再加到離心管中，這樣比較好溶解。2、然后再用移液管分別在上述四只試管中各加入糖化酶

13、上清液 0.5ml,然后加水，直到總量為8.00g。3、旋緊試管口，用力振搖數(shù)分鐘，使(NH4)2 SO4或PEG4000固體完全溶解，并使兩相充分混合，以使酶在兩相中的分配達(dá)到平衡。4、用臺(tái)式離心機(jī) 3000車t/分鐘離心分離10 min后，應(yīng)觀察到明顯兩相。(注意離心前對(duì)角 線上的離心管一定要先平衡，若不平衡，可在套管中滴加少量水；再者，離心機(jī)轉(zhuǎn)速在啟動(dòng)前打到零擋，啟動(dòng)后再慢慢加速到3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心機(jī)停止轉(zhuǎn)動(dòng)前不能打開離心機(jī)的5、分別讀出上、下相體積，并求出四個(gè)相體積比R值(即R1、R2、R3、R4)。四只離心管的上下相糖化酶的含量的測(cè)定，由實(shí)驗(yàn)四、五來(lái)完成。五、結(jié)果分析與討論1、簡(jiǎn)

14、述雙水相系統(tǒng)的主要應(yīng)用？2、相比對(duì)分配系數(shù)有何影響？實(shí)驗(yàn)四雙水相萃取系統(tǒng)中相體積比對(duì)蛋白質(zhì)分配系數(shù)的影響(第二次實(shí)驗(yàn))一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅?、掌握蛋白質(zhì)在雙水相系統(tǒng)中分配系數(shù)的測(cè)定方法。2、了解蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)的顯色反應(yīng)原理及應(yīng)用。3、進(jìn)一步鞏固可見分光光度計(jì)的操作及制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、實(shí)驗(yàn)原理：雙水相萃取技術(shù)是分離純化蛋白質(zhì)混合物等生物大分子的有效方法。利用生物物質(zhì)在兩相中不同的分配，可以實(shí)現(xiàn)它們的分離； 生物大分子在雙水相中上相和下相的濃度比被定義 為分配系數(shù)(K = G/Cb)；分配行為受聚合物分子大小、成相濃度、 PH、無(wú)機(jī)鹽種類等因素5影響。考馬斯亮藍(lán)與蛋白質(zhì)可結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物，在

15、595nm有最大光吸收，并且在低濃度時(shí)，吸光值與蛋白質(zhì)濃度服從比爾定律。三、實(shí)驗(yàn)試劑和器材：牛血清蛋白溶液、考馬斯亮藍(lán)染色液（G-250）、蒸儲(chǔ)水、相體積比實(shí)驗(yàn)中分離得到的上下相、可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、移液管、試管及試管架等 四、實(shí)驗(yàn)步驟：（1）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：取6支試管，用移液管分別準(zhǔn)確加入 牛血清蛋白溶液（120仙g /ml）體積為0.00、0.20、 0.40、0.60、0.80、1.00ml,然后均用蒸儲(chǔ)水稀釋至1.00ml。再分別加入5.00ml考馬斯亮藍(lán)染色液，混勻。于25c 1 C的恒溫水浴鍋中保溫 10min （為防止試管歪倒或混淆，可把水浴鍋蓋子打開，將試管同試管架一起水

16、?。?。冷卻后，于595nm進(jìn)行測(cè)定吸光彳1,以裝有 1.0ml蒸儲(chǔ)水的試管為對(duì)照。然后，以以試管中中蛋白質(zhì)總量（pg）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的吸光值（OD595nm）為縱坐標(biāo)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。（注意所得6點(diǎn)至少應(yīng)有3點(diǎn)在同一直線上，否則標(biāo)準(zhǔn)曲線不可用，應(yīng) 參照其他組線性較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算）（2）樣品測(cè)定：（若顏色太深，一般要重新取樣品再做）上相溶液：用吸管吸取上相液Xml ,蒸儲(chǔ)水定容至1.00ml,按（1）法測(cè)定吸光值。下相溶液：用吸管慢慢插入離心管底部，吸取下相液Yml ,蒸儲(chǔ)水定容至1.00ml,按（1）法測(cè)定吸光值。（以上樣品取的 ml,往往要根據(jù)具體情況來(lái)調(diào)整。參考值：1、3只刻度離心

17、管，上相取 0.1ml,下相取0.4 ml, 2、4只刻度離心管，上相取 0.3ml,下相取0.3 ml）可按下表操作:1 （作為 對(duì)照）2345678牛血清蛋白溶 液0.000.200.400.600.801.00（取上相液Xml ）（取下相液Yml ）蒸儲(chǔ)水1.000.800.600.400.200.001-X1-Y考馬斯亮藍(lán)染色液5.005.005.005.005.005.005.005.0025 C 土 1 C的恒溫水浴鍋中保溫 10min蛋白質(zhì)總量（g）需計(jì)算0據(jù)OD值在標(biāo) 準(zhǔn)曲線上查據(jù)OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查595nm吸光值0五、結(jié)果分析與討論1、相比和分配系數(shù)如何影響蛋白質(zhì)的收率？2

18、、要想獲得準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)注意哪些問(wèn)題?3、PEG分子量如何影響蛋白質(zhì)的分配系數(shù)？實(shí)驗(yàn)六 離子交換樹脂的預(yù)處理及總交換容量的測(cè)定（第三次實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?、通過(guò)實(shí)驗(yàn)加深對(duì)離子交換樹脂的重要性能之一一總交換容量的認(rèn)識(shí)。2、掌握離子交換樹脂的作用原理。3、學(xué)會(huì)離子交換樹脂的預(yù)處理方法。4、熟悉靜態(tài)法、動(dòng)態(tài)法測(cè)定離子交換樹脂總交換容量的操作方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理交換容量是離子交換樹脂質(zhì)量的重要標(biāo)志，本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的是離子交換樹脂的總交換量也叫最大或極限交換量，它是指樹脂經(jīng)過(guò)100C /105 c干燥至恒重后，每克或水中每mL樹脂具有的可交換離子的總數(shù)，單位為mol/克（干樹脂）或mL （濕樹脂）即

19、（ mol/g或mL）氫型陽(yáng)離子交換樹脂與堿作用時(shí)RH 十一 RN a +H 2 O離子交換樹脂交換量最簡(jiǎn)單的測(cè)定方法是酸堿滴定法。 生成水，為一不可逆反應(yīng)、故可用于靜態(tài)法測(cè)定交換容量。陰離子交換樹脂不能采用類似的方法測(cè)定，應(yīng)用氯型樹脂，當(dāng)它與N 生成N aC l,這一反應(yīng)為可逆反應(yīng)，故宜采用動(dòng)態(tài)法測(cè)定樹脂交換容量。R （= NHCl ） 2+Na2sO4 = r （ = NH） 2 sO4 + 2NaCl根據(jù)滴定流出液中 Cl 一含量來(lái)測(cè)定其總交換容量。三、試劑與器材1、試齊1J： 5%N aOH、5%H Cl、0.1MNaC l 標(biāo)準(zhǔn)溶?夜、1 MH Cl 標(biāo)準(zhǔn)溶?夜、1 MNa2s 04

20、溶液、甲基橙指示劑、K 2CrO4指標(biāo)劑、蒸儲(chǔ)水、0.1MAgNO3標(biāo)準(zhǔn)溶液、732陽(yáng)離子交 換樹脂、717陰離子交換樹脂、330弱堿環(huán)氧系陰離子交換樹脂。2、器材：恒流泵、層析柱、滴定管、精密天平、烘箱、容量瓶、三角瓶 四、操作方法1、離子交換樹脂預(yù)處理（ 老師已經(jīng)做了）分別稱取2 g 732, 717樹脂，加水倒入層析柱中，流加 50mL 5 % NaOH溶液，流速1 滴/秒，結(jié)束后滴加 100mL去離子水，流速可大一些，結(jié)束后再流加 50mL 5 %H Cl溶液, 流速1滴/秒，最后流加 100mL去離子水，如此重復(fù)三次。2、靜態(tài)法測(cè)定732 #離子交換樹脂交換量（1）精確稱取處理好并抽

21、干的氫型陽(yáng)離子樹脂732# 1克，60c下烘干至恒重，按下式計(jì)算含水量W1 - w2w% =w-100%其中：W1-烘干前樹脂量W2-烘干后樹脂量W1（2）另取處理好的樹脂1克放入三角瓶中，吸取 40 mL 0.1M NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液加入樹脂 中，放置24 hrs （實(shí)際放置2hrs左右）、要求樹脂全部浸入溶液中， 然后用吸管分別取出10 mL放入二只三角瓶中，以甲基橙12滴作指示劑，用0.1M HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定溶液由無(wú)色變?yōu)榧t色（剛好至磚紅色，約7 mL左右）為滴定終點(diǎn)，取兩次滴定的平均值， 按下式計(jì)算732 樹脂交換總量。50N1 -5N2V2總交換容量（mol/克干樹脂）=G（1-W）

22、其中：G濕樹脂總量（克）W一樹脂含水量50-0.1M NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ 實(shí)際40mL） N10.1MNaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液的摩爾濃度 N2-0.1M HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液的摩爾濃度5一總交換溶液體積/取樣檢測(cè)溶液體積的倍數(shù)（ 實(shí)際為4倍）V20.1MHCl標(biāo)準(zhǔn)溶液白用量（mL）3、動(dòng)態(tài)法測(cè)定717 #離子交換樹脂交換量（1 ）精確稱取處理好的并抽干的氯型陰離子樹脂717# 1克，105c下烘干至恒重，按下式計(jì)算含水量（W）（2）另取1克樹脂，加水裝入柱中，裝柱時(shí)應(yīng)注意不應(yīng)使樹脂層中有氣泡存在，然后通入1 N Na?SO4溶液進(jìn)行交換，用250mL三角瓶收集流出液， 流速約為80滴/min ,直到

23、氯離 子全部交換下來(lái)為止，量出流出液的總體積（要參加計(jì)算），然后吸取25mL流出液，用0.1M AgNO3溶液滴定（約1-3 mL）,以K2CrO4為指示劑，溶液由淡黃色變?yōu)榧t色為滴定終點(diǎn)， 取兩次滴定平均值。（當(dāng)流出液為 200ml左右時(shí)，接一滴流出液在黑色比色板上，加一滴 AgNO3,看是否出現(xiàn)有白色沉淀，若有沉淀，則繼續(xù)交換，若無(wú)，則表示交換完全，停止 交換） 計(jì)算：10NV總交換容量（mol/克干樹脂）=G（I -W）其中：V AgNO3用量（mL）NAgNO 3當(dāng)量濃度G濕樹脂重（g）W樹脂含水量（%）10流出液總體積/滴定用流出液體積 25 mL （視具體情況而定，不一定是10倍）

24、330弱堿環(huán)氧系陰離子交換樹脂的 總交換容量的測(cè)定方法同步驟（2）。（NazSO4溶液約 150 mL）五、結(jié)果分析與討論1、陰離子交換樹脂為什么一般采用氯型樹脂并用動(dòng)態(tài)法測(cè)定其總交換容量2、兩種方法中，HCl、AgNO3標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)起的作用是什么？寫出方程式？3、717和330樹脂總交換容量的測(cè)定方法有什么不同嗎？實(shí)驗(yàn)七大網(wǎng)格吸附樹脂吸附等溫線的制作（第三次實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵? 了解大孔吸附樹脂吸附的原理。.學(xué)會(huì)吸附等溫線的制作。二、實(shí)驗(yàn)原理固體從溶液中的吸附，是溶質(zhì)和溶劑分子爭(zhēng)奪表面的凈結(jié)果，即在固液界面上總是被溶質(zhì)和溶劑兩種分子占滿。 如果不考慮溶劑的吸附， 當(dāng)固體吸附劑與溶液中的溶

25、質(zhì)達(dá)到平衡 時(shí)，其吸附量 m應(yīng)與溶液中溶質(zhì)的濃度和溫度有關(guān)。當(dāng)溫度一定時(shí)吸附量只和濃度有關(guān)，m=f（c）,這個(gè)函數(shù)關(guān)系稱為吸附等溫線。吸附等溫線表示平衡吸附量，并可用來(lái)推斷吸附劑結(jié) 構(gòu)、吸附熱和其他理化特性。本實(shí)驗(yàn)采取XAD大孔樹脂對(duì)水溶液中苯酚的吸附行為來(lái)繪制吸附等溫線。三、試劑與器材試劑：苯酚、去離子水、XAD大孔樹脂儀器：1L容量瓶一個(gè)、250ml容量瓶5個(gè)、250ml錐形瓶5個(gè)、紫外及可見分光光度計(jì)、搖床四、操作方法.大孔樹脂的預(yù)處理（老師已處理）將新購(gòu)的大孔樹脂放在燒杯中，加入足量的水，使其溶漲至體積不在增加為止，然后倒入內(nèi)有少許水的交換柱，使管內(nèi)樹脂量不超過(guò)管長(zhǎng)的1/2以上，水在柱

26、內(nèi)的高度沒(méi)過(guò)樹脂。裝好柱后，先緩慢地讓水從柱的底部流入反洗，并逐漸加速，使樹脂全部移動(dòng)，直至樹脂內(nèi)的氣泡全部趕出，同時(shí)懸浮不潔 物、破碎及過(guò)小顆粒從管頂逸出為止。然后再用甲醇或 95%乙醇或丙酮浸泡 24h后再上柱用95%乙醇沖洗，直至無(wú)色并澄清后，再用水洗至無(wú)醇味即 可，也可將樹脂與有機(jī)溶劑一起在水浴上回流，直到洗滌液加水混合后不呈白色渾濁為止， 最后用水洗掉所用的有機(jī)溶劑，備用。.苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立準(zhǔn)確稱取1g苯酚置于1L容量瓶中，用去離子水定容。以其為母液再配制濃度分別為、10、20、30、40、50mg/L的苯酚水溶液 250ml。用紫外及可見分光光度計(jì)在 270nm處檢測(cè) 溶液的吸光

27、度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。.取5個(gè)250ml的錐形瓶，分別加入干燥的XAD樹脂0.25g,然后分別加入質(zhì)量濃度為10、20、30、40、50mg/L的苯酚溶液各 100ml。以150r/min的振蕩速度在 25c下振蕩24h（實(shí)際0.5 hr）以上（或用手搖瓶 0.5 hr以上）。.振蕩完以后分別取樣，在 270nm處檢測(cè)苯酚的殘留濃度。平衡吸附量用下面公式計(jì)算：m=(C0-Ct)V/M式中：m為平衡吸附量，mg/g ; C0為溶液的初始濃度，mg/L ; Ct為吸附平衡后溶液的 濃度，mg/L; V為溶液的體積，L; M為樹脂的重量，g。.以溶液的初始濃度 G為橫坐

28、標(biāo)，平衡吸附量為縱坐標(biāo)作吸附等溫線。五、結(jié)果分析與討論.說(shuō)明大孔吸附樹脂的吸附原理?.操作過(guò)程中應(yīng)注意的問(wèn)題？ 本實(shí)驗(yàn)用樹脂含水量測(cè)定：732 型：40% 330 型：32% 717 型：39.8%;大孔吸附樹脂：24.6%實(shí)驗(yàn)八雞蛋清溶菌酶的分離與純化（第四次實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?TOC o 1-5 h z 掌握從蛋清制備溶菌酶的原理和方法（等電點(diǎn)沉淀和鹽析法）。二、實(shí)驗(yàn)原理溶菌酶存在于植物（植物漿）及動(dòng)物（蛋清、白血球、淚液、脾臟及鼻粘膜處）組織中。 蛋清取材方便，溶菌酶含量豐富（可達(dá)0.3%）,實(shí)驗(yàn)室及生產(chǎn)中均以蛋清為材料提取溶菌酶。 溶菌酶作用于粘多糖，使其糖昔鍵水解，因此可溶解以

29、粘多糖為主要成分的細(xì)菌細(xì)胞壁，起到殺菌的作用。pl為10.8-11.3由于蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低，所以蛋白質(zhì)的沉降在等電點(diǎn)附近最為顯著。若控制溶液的pH在等電點(diǎn)附近，并增加鹽的離子強(qiáng)度，使蛋白質(zhì)處于沉降前的“臨界狀態(tài)”，在適當(dāng)?shù)臏囟认?，靜置若干時(shí)間，蛋白質(zhì)會(huì)以結(jié)晶的形式從溶液中析出。加入晶種，能控制晶體的形狀、大小和均勻度，若結(jié)晶液濃度太低而結(jié)晶發(fā)生困難時(shí)，可適當(dāng)加入些晶種， 能使結(jié)晶順利進(jìn)行。 三、實(shí)驗(yàn)試劑和器材：（1）試劑：新鮮蛋清的pH值大于8才能提取溶菌酶新鮮蛋清、NaCl、1M的NaOH溶液、1M的鹽酸、五氧化二磷、丙酮、3%醋酸溶菌酶晶種（5%的無(wú)定形溶菌酶溶液 10ml,加入

30、NaCl為0.5g,再用1M的NaOH溶液 調(diào)pH至9.510.0, 4c靜置56天，溶菌酶即結(jié)晶出來(lái)）等（2）器材：組織搗碎機(jī)（或電動(dòng)攪拌機(jī)）、紗布、大燒杯、玻璃棒、冰箱、 pH試紙、真空干燥器、 多用循環(huán)水真空泵、布氏漏斗等四、實(shí)驗(yàn)步驟1、生產(chǎn)工藝路線：析晶Nacl bTaOH曲一。堿化的蛋清液溶菌醉晶種4七預(yù)處理鮮蛋蛋清液過(guò)濾攪拌重結(jié)晶干燥1器陛言”菌酶液40%溶苗酶晶種 晶體丙酮色。5真空了成品PH9.510 02、操作方法：（3人一組，每人1個(gè)雞蛋，分離蛋清和蛋黃備用，3個(gè)蛋清和蛋黃分別倒入已稱重的燒杯，再稱出 蛋清和蛋黃的總重量，蛋清要用量筒量出體積）分離蛋清和蛋黃：將蛋清與蛋黃分

31、開，除去臍帶塊。并稱蛋清質(zhì)量 W和量其體積V。攪拌蛋清：新鮮蛋清收集后用組織搗碎機(jī)（或電動(dòng)攪拌機(jī)）緩慢攪拌5min （以不起大泡泡為度，避免酶受剪切力作用被破壞），或直接用玻棒輕輕攪拌半小時(shí)左右（，10 再用紗布過(guò)濾，取濾液備用。不做 ）加NaCl:每小組按20ml蛋清液：1g NaCl的比例加入 NaCl固體（注意NaCl要研磨碎，一點(diǎn)點(diǎn)加，邊加邊緩慢攪拌，要防止局部鹽濃度過(guò)高導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性），攪拌至完全溶解。調(diào)pH值：NaCl完全溶解后，逐滴加入 1mol/L的NaOH （一定要緩慢并均勻，邊加邊緩慢攪拌，防止局部過(guò)堿，蛋白質(zhì)變性），調(diào)溶液pH為9.5-10.00 （用pH酸度計(jì)或精密pH

32、試紙調(diào)）加晶種：在堿化的蛋清液中，滴加少量溶菌酶晶種，置于4c冰箱中，靜置一周左右，觀察溶菌酶結(jié)晶的出現(xiàn)。（因溶菌酶濃度太低晶體不容易析出，每個(gè)小組寫好標(biāo)記再放入冰箱，以免混淆）。必要時(shí)可重結(jié)晶：一周后，離心收集溶菌酶粗品，離心機(jī)轉(zhuǎn)速4000rpm/min ,離心10min。收集溶菌酶粗品，稱重（用于計(jì)算濕溶菌酶粗品的得率）。（溶菌酶粗品用3%的醋酸調(diào)溶液pH至ij 4 4.5,晶體溶解后再4000rpm/min ,離心10min,除去不溶 物，得上清液。按上述方法再加入NaCl,并用1mol/L的NaOH調(diào)溶液pH為9.5 10.0后，于4c冰箱中，靜置一周，進(jìn)行重結(jié)晶。此部分省略）（布氏漏

33、斗抽濾收集結(jié)晶，冷丙酮洗滌晶體除去多余水分，在P2O5的真空干燥器中進(jìn)行真空干燥（干燥器中可放一盆石蠟屑，以便吸收除去剩余的丙酮），干燥后得到溶菌酶的結(jié)晶成品，稱重，計(jì)算得率。）此步驟省略五、結(jié)果分析與討論：1、在堿化的溶菌酶液中為什么要加入晶種？如何制得溶菌酶晶種？2、總結(jié)本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)？實(shí)驗(yàn)九 蛋黃中卵磷脂的分離純化和定性鑒定（第四次實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?、了解卵磷脂的性質(zhì)。2、學(xué)習(xí)提取卵磷脂粗品的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理機(jī)體的各種組織和細(xì)胞均含卵磷脂。在蛋黃（約10%）、神經(jīng)、精液、腦髓、骨髓、腎上腺、心臟、蘑菇和酵母等組織內(nèi)含量很高。卵磷脂分子中具有親水基團(tuán)和疏水基團(tuán)，卵磷脂

34、具有降低表面張力的作用；卵磷脂被譽(yù)為與蛋白質(zhì)、維生素并列的第三營(yíng)養(yǎng)素”，蛋黃卵磷脂可將膽固醇乳化為極細(xì)的顆粒，這種微細(xì)的乳化膽固醇顆粒可透過(guò)血管壁被組織利用， 而不會(huì)使血漿中的膽固醇增加，可作為藥物用于動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的綜合治療。純卵磷脂（即磷脂酰膽堿）為白色蠟狀塊，不溶于水，易溶于醇、氯仿、乙醍和二硫化碳中，但不溶于丙酮，利用后一性質(zhì)可與中性脂肪分離。11非極性尾CHQCORiR/DCOCHcrt/CH3CHj J0CHnCH= - N、CHm極性頭三、實(shí)驗(yàn)試劑和器材（1）試劑： 新鮮蛋黃、95%乙醇、10%的NaOH溶液、丙酮、乙醛（2）器材： 磁力攪拌機(jī)（或玻棒）、減壓真空濃縮裝置、恒

35、溫水浴鍋、冰箱、多用循環(huán)水 真空泵、布氏漏斗、玻璃漏斗、玻璃棒、小燒杯等 四、實(shí)驗(yàn)步驟1、制備工藝路線:洗滌1.比替抽提乙醛濃縮人-枷蛋黃95 %乙醇抽提液冗淀物去雜、乙酷1干燥 乙酶 , 抽提物丙酮,成品2、操作方法： 抽提：按照實(shí)驗(yàn)八剩下的蛋黃（3個(gè)）的質(zhì)量，加入 2倍質(zhì)量的預(yù)熱至 35C40c的95%乙醇，可按體積、密度計(jì)算（不需很精確）（注意一定要緩慢的加入，邊加邊緩慢攪拌， 否則會(huì)出現(xiàn)沉淀得不到抽提液），加入乙醇后，不斷攪拌10-12小時(shí)（由于時(shí)間關(guān)系，具體 實(shí)驗(yàn)時(shí)改為1.52小時(shí)），離心得上清液（4000r/min , 5分鐘）。 濃縮：將上述上清液減壓真空濃縮或 沸水浴蒸發(fā)，（要

36、做好標(biāo)記，注意要防止盛有抽提液 的瓶子歪倒在水浴鍋，造成浪費(fèi)）至原體積的1/6左右。去雜：在攪拌下加入濃縮后等體積的乙醛（要緩慢），不斷攪拌并放置2小時(shí)（由于時(shí)間關(guān)系，具體實(shí)驗(yàn)時(shí)改為 10分鐘），使不溶物沉淀完全。過(guò)濾除去雜質(zhì)，收集上清液（乙醍澄 清液）。注意事項(xiàng)同步驟（1）。（由于時(shí)間關(guān)系，該步驟省略）沉淀卵磷脂：在急速攪拌下加入與上清等體積的預(yù)冷丙酮（丙酮在冰箱里），即開始出現(xiàn)卵磷脂沉淀，用滴管吸取，做鑒定。（抽濾，收集并再用丙酮洗滌，揮發(fā)去乙醍丙酮?dú)堃?，真空干燥得塊狀成品。不做 ） 定性鑒定卵磷脂：取制品少量置于試管中，加入 20%的NaOH溶液約2ml,于沸水浴煮 沸，卵磷脂分解生成膽

37、堿， 膽堿在堿的作用下， 形成三甲胺。注意：三甲胺有明顯的魚腥味五、結(jié)果分析與討論：5、第一步為什么要用預(yù)熱至 35C40c的95%乙醇抽提產(chǎn)品？6、濃縮是為了去水還是去醇？為什么要濃縮？12實(shí)驗(yàn)十、十一蘋果中多酚類物質(zhì)的分離提取及其定量檢測(cè)（第五次實(shí)驗(yàn)）-一設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解蘋果多酚類物質(zhì)的性質(zhì)及作用2、熟悉蘋果多酚的提取及鑒定方法二、實(shí)驗(yàn)原理性質(zhì)：蘋果多酚粉末呈黃褐色或淡褐色，其水溶液呈黃褐色，有微弱的苦味和澀味。多酚類物質(zhì)易溶于乙醇、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑，蘋果多酚同時(shí)還具有優(yōu)良的耐熱性和耐酸性，在pHfc210、溫度為100c條件下，蘋果多酚的分解率很低，易于保存。提取：多酚類物質(zhì)在乙醇、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑中都有較高的溶解度，綜合考慮試劑毒性及成本等，最常用的方法是用乙醇作為溶劑浸提。 有機(jī)溶劑法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、 操作方便和成 本低廉等優(yōu)點(diǎn)，（最佳提取工藝為：乙醇濃度60%提取時(shí)間為120min,溫度為60C,料液比 1 ： 6,提取一次，最大提取率為3.80mg /g