固體發(fā)酵技術(shù)

1、固體發(fā)酵（曲盤發(fā)酵）技術(shù)（一）消毒：發(fā)酵前需對(duì)發(fā)酵房進(jìn)行甲醛熏蒸12小時(shí)，使用前開排氣扇將 殘余的氣味排凈，開啟紫外燈照20分鐘。曲盤用0.2%高錳酸鉀浸泡1-2小時(shí)后 擦干備用。（二）固體培養(yǎng)基滅菌:將配置好的固體料調(diào)節(jié)PH和水分后裝入小布袋中（裝 料多少依曲盤大小而定）121C滅菌1小時(shí)（濕滅），同時(shí)將曲盤布（底部一墊布、 頂部 蓋布或報(bào)紙）、載玻片一同滅菌。（三）接種：用培養(yǎng)1824小時(shí)的搖瓶或種子罐菌液接菌，接種量一般為10% 左右；也可用純的固體（一級(jí)）菌劑接種，接種量為35%。接種時(shí)先用墊布鋪 在曲盤底部同時(shí)覆蓋曲盤4個(gè)邊框，然后將拌勻菌液的物料裝入曲盤，一般厚度 為68cm，插入

2、滅菌載玻片4-5片，裝完后在曲料上再蓋一層滅菌蓋布或報(bào) 紙，送入曲架。最好在曲架的上、中、下層隨機(jī)選取3個(gè)曲盤在料中插入溫度計(jì)， 用于每天定時(shí)觀測(cè)。（四）發(fā)酵條件的調(diào)控溫度：滅菌物料最好是“搶溫”接種（滅菌后的料溫降至5C左右），接 種后的料溫在3035C。曲房溫度設(shè)在30-32C。接種后5小時(shí)左右由于微生物的 繁殖產(chǎn)熱、料溫開始逐漸升高（有的細(xì)菌在8小時(shí)左右即升至3540C，放線菌在 710小時(shí)開始升溫、20個(gè)小時(shí)左右升至3645C，可持續(xù)2036小時(shí)）。當(dāng)料溫 升至35C以上時(shí)，應(yīng)降低環(huán)境溫度 使料溫不超過35C （高溫放線菌例外）有利 于菌體（或菌絲）的增殖。菌體繁殖到一定階段，或物料中

3、的有效養(yǎng)分大量消耗后， 物料即開始自動(dòng)降溫:從升溫到降溫將持續(xù)4050個(gè)小時(shí)），料溫降溫接近環(huán)境溫 度同時(shí)鏡檢孢子比例90%以上即可停止發(fā)酵。為了提高孢子（或分生孢子）分化 成熟比例，發(fā)酵后期可適當(dāng)提高曲房環(huán)境溫度，可升溫至3335C?？諝鉂穸龋?36小時(shí)相對(duì)溫度80%左右3660小時(shí)相對(duì)溫度60%左右6072小時(shí)相對(duì)溫度40%左右7296小時(shí)相對(duì)溫度30%左右物料水分：036小時(shí)4045%3060小時(shí)3540%6072小時(shí)3035%7296小時(shí)2025%通氣：對(duì)好氧微生物來說是十分重要的（一般通過窗式新風(fēng)換氣機(jī)或房 間內(nèi)預(yù)留的壓縮空氣管道實(shí)現(xiàn)通氣、增氧）。036小時(shí) V環(huán)境：料=0.2：13

4、660小時(shí) V環(huán)境：料=1 : 16072小時(shí) V環(huán)境：料=1：1或0.8：17236小時(shí) V環(huán)境：料=0.5：1菌種、溫度、濕度、料溫、料水分、通氣等諸因素相互作用達(dá)到一定的平 衡才能使微生物正常生長(zhǎng)發(fā)育。否則將限制微生物的生長(zhǎng)及形態(tài)、產(chǎn)物的變化。形態(tài)觀察：一般在12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)分別取 插在料中的載玻片（復(fù)紅染色后）鏡檢，先用低倍鏡觀察群體形態(tài)及數(shù)量，再用 油鏡觀察菌體（或菌絲）、孢子（或分生孢子）形態(tài)及菌種發(fā)育階段。例如放線 菌分為四個(gè)階段：營(yíng)養(yǎng)菌絲一一氣生菌絲一一孢子絲一一分生孢子。芽孢桿菌分 為：營(yíng)養(yǎng)體一-孢囊期一-囊孢子一-孢子脫落、成熟四階段。后3個(gè)

5、階段有時(shí) 會(huì)同時(shí)出現(xiàn)，這就要看彼此間所占的比例而定。烘干：孢子（或分生孢子）成熟后，應(yīng)及時(shí)低溫（4555C ）烘干，以 免孢子遇水萌發(fā)，不利于菌劑成品的保藏。一般要求含水低于1013%。收獲、包裝。此項(xiàng)技術(shù)的關(guān)鍵是：（1）菌種純、無雜菌污染（做好接種前菌液的鏡檢把關(guān)）；（2）物料要細(xì)（6080目），滅菌要徹底（接種時(shí)取樣放入提前制備好的 肉湯液中、培養(yǎng)24-48小時(shí)驗(yàn)證）；（3）通氣要求10萬級(jí)空氣凈化度；（4）空氣濕度控制好，相對(duì)濕度90%的時(shí)間較長(zhǎng)易污染霉菌；（5）通過埋片觀察，及時(shí)調(diào)整發(fā)酵條件；（6）菌劑要及時(shí)烘干。當(dāng)前主要問題:1）原料太粗、細(xì)度不夠、不利于滅菌徹底及微生物的利用、最終影響菌數(shù)的 提高；2）原料粉碎后如原配方太粘，可加入20-25%的谷殼粉或花生殼粉；3）曲盤底部、4框及頂部-裝料后暴露于空